小鼠胰岛素Insulin说明书
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胰岛素说明书胰岛素是一种由胰腺分泌的激素,对于调节血糖水平起着至关重要的作用。
当人体自身的胰岛素分泌不足或无法正常发挥作用时,就可能需要外源性胰岛素来控制血糖。
以下是关于胰岛素的详细说明。
一、胰岛素的种类1、短效胰岛素也称为常规胰岛素,起效时间约为30 分钟,作用高峰在1 3 小时,持续时间约 5 8 小时。
通常在餐前 30 分钟左右注射。
2、中效胰岛素起效时间约 2 4 小时,作用高峰在 4 12 小时,持续时间约 12 18小时。
3、长效胰岛素起效时间较慢,一般在 3 4 小时,但作用持续时间长,可达 20 24小时甚至更久。
4、预混胰岛素是将短效和中效胰岛素按照一定比例混合而成,如30/70、50/50 等。
预混胰岛素的起效时间和作用持续时间因具体比例而有所不同。
二、胰岛素的作用机制胰岛素的主要作用是促进细胞摄取葡萄糖,并将其转化为能量或储存为糖原和脂肪。
它还能抑制肝脏葡萄糖的生成,从而降低血糖水平。
三、适用人群1、 1 型糖尿病患者由于自身免疫或其他原因,导致胰岛β细胞被破坏,几乎不能分泌胰岛素,必须依赖外源性胰岛素来维持生命。
2、 2 型糖尿病患者在口服降糖药效果不佳、出现糖尿病并发症、处于妊娠期等情况下,也可能需要使用胰岛素治疗。
四、使用方法1、注射部位常用的注射部位包括腹部、大腿外侧、上臂外侧和臀部外上侧。
每次注射应选择不同的部位,以防止局部脂肪萎缩或增生。
2、注射步骤(1)洗手,准备好胰岛素注射器或胰岛素笔、胰岛素以及消毒用品。
(2)用酒精棉球消毒注射部位。
(3)将胰岛素笔或注射器调整到所需的剂量。
(4)以 90 度或 45 度角快速进针,缓慢推注胰岛素。
(5)注射完毕后,保持针头在皮下停留数秒,以确保胰岛素完全注射。
五、剂量调整胰岛素的剂量应根据血糖监测结果、饮食、运动等因素进行调整。
一般来说,初始剂量会由医生根据患者的体重、病情等因素确定,之后患者需要密切监测血糖,根据血糖变化在医生的指导下逐渐调整剂量。
胰岛素注射液说明书【药品名称】通用名:胰岛素注射液英文名:Insulin Injection汉语拼音:Yidaosu Zhusheye【成份】1. 本品主要成分为:胰岛素(猪或牛)的灭菌水溶液。
每l00ml中含甘油l.4-1.8g与苯酚0.25g。
2. 辅料:甘油、苯酚、注射用水。
【性状】本品为无色或几乎无色的澄明液体。
【适应症】1.Ⅰ型糖尿病。
2.Ⅱ型糖尿病有严重感染、外伤、大手术等严重应激情况,以及合并心、脑血管并发症、肾脏或视网膜病变等。
3.糖尿病酮症酸中毒、高血糖非酮症性高渗性昏迷。
4.长病程Ⅱ型糖尿病血浆胰岛素水平确实较低,经合理饮食、体力活动和口服降糖药治疗控制不满意者,Ⅱ型糖尿病具有口服降糖药禁忌,如妊娠、哺乳等。
5.成年或老年糖尿病病人发病急、体重显著减轻伴明显消瘦。
6.妊娠糖尿病。
7.继发于严重胰腺疾病的糖尿病。
8.对严重营养不良、消瘦、顽固性妊娠呕吐、肝硬变初期可同时静脉摘注葡萄糖和小剂量胰岛素,以促进组织利用葡萄糖。
【规格】l0ml:400单位。
【用法用量】l.皮下注射一般每日三次,餐前15-30分钟注射,必要时睡前加注一次小量。
剂量根据病情、血糖、尿糖由小剂量(视体重等因素每次2-4单位)开始,逐步调整。
Ⅰ型糖尿病患者每日胰岛素需用总量多介于每公斤体重0.5-1单位,根据血糖监测结果调整。
Ⅱ型糖尿病患者每日需用总量变化较大,在无急性并发症情况下,敏感者每日仅需5-l0单位,一般约20单位,肥胖、对胰岛素敏感性较差者需要量可明显增加。
在有急性并发症(感染、创伤、手术等)情况,对Ⅰ型及Ⅱ型糖糖尿病患者,应每4-6小时注射一次,剂量根据病情变化及血糖监测结果调整。
2.静脉注射主要用于糖尿病酮症酸中毒、高血糖高渗性昏迷的治疗。
可静脉持续滴入每小时成人4-6单位,小儿按每小时体重0.1单位/kg,根据血糖变化调整剂量;也可首次静注l0单位加肌内注射4-6单位,根据血糖变化调整。
病情较重者,可先静脉注射10单位,继之以静脉滴注,当血糖下降到13.9mmol/L(250mg/ml)以下时,胰岛素剂量及注射频率随之减少。
一、实验目的1. 了解胰岛素对血糖调节的作用;2. 掌握胰岛素兴奋实验的基本操作;3. 分析胰岛素兴奋实验的结果,探讨胰岛素对血糖调节的影响。
二、实验原理胰岛素是由胰岛β细胞分泌的一种激素,具有降低血糖的作用。
胰岛素兴奋实验通过给动物注射一定量的胰岛素,观察动物血糖变化及临床症状,以了解胰岛素对血糖调节的影响。
三、实验材料1. 实验动物:小鼠;2. 胰岛素;3. 胰岛素注射器;4. 血糖仪;5. 生理盐水;6. 实验记录表。
四、实验方法1. 实验动物准备:选取健康小鼠若干只,随机分为实验组和对照组。
2. 实验分组:实验组小鼠按体重给予一定量的胰岛素,对照组小鼠给予等量的生理盐水。
3. 血糖测定:在实验前后,分别用血糖仪测定实验组和对照组小鼠的血糖水平。
4. 观察记录:观察实验组和对照组小鼠在实验过程中的行为变化,如精神状态、活动能力、呼吸频率等。
5. 数据分析:对实验数据进行分析,比较实验组和对照组小鼠血糖变化及临床症状的差异。
五、实验结果1. 实验组小鼠在注射胰岛素后,血糖水平显著降低,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。
2. 实验组小鼠在血糖降低过程中出现精神萎靡、活动能力下降、呼吸频率加快等临床症状。
3. 对照组小鼠血糖水平无明显变化,临床症状不明显。
六、实验分析1. 胰岛素兴奋实验结果表明,胰岛素具有降低血糖的作用。
2. 实验组小鼠在注射胰岛素后,血糖水平显著降低,可能与胰岛素促进组织细胞摄取、利用、储存葡萄糖有关。
3. 实验组小鼠在血糖降低过程中出现临床症状,提示胰岛素兴奋实验对动物具有一定的应激作用。
七、实验结论1. 胰岛素兴奋实验成功证明了胰岛素具有降低血糖的作用。
2. 实验组小鼠在注射胰岛素后,血糖水平显著降低,并出现临床症状,提示胰岛素兴奋实验对动物具有一定的应激作用。
3. 本实验为胰岛素在临床治疗中的应用提供了理论依据。
八、实验讨论1. 胰岛素兴奋实验在动物实验中具有较高的可靠性,但实验结果可能受到动物个体差异、实验操作等因素的影响。
胰岛素注射液说明书【药品名称】通用名:胰岛素注射液英文名:Insulin Injection汉语拼音:Yidaosu Zhusheye【成份】1. 本品主要成分为:胰岛素(猪或牛)的灭菌水溶液。
每l00ml中含甘油l.4-1.8g与苯酚0.25g。
2. 辅料:甘油、苯酚、注射用水。
【性状】本品为无色或几乎无色的澄明液体。
【适应症】1.Ⅰ型糖尿病。
2.Ⅱ型糖尿病有严重感染、外伤、大手术等严重应激情况,以及合并心、脑血管并发症、肾脏或视网膜病变等。
3.糖尿病酮症酸中毒、高血糖非酮症性高渗性昏迷。
4.长病程Ⅱ型糖尿病血浆胰岛素水平确实较低,经合理饮食、体力活动和口服降糖药治疗控制不满意者,Ⅱ型糖尿病具有口服降糖药禁忌,如妊娠、哺乳等。
5.成年或老年糖尿病病人发病急、体重显著减轻伴明显消瘦。
6.妊娠糖尿病。
7.继发于严重胰腺疾病的糖尿病。
8.对严重营养不良、消瘦、顽固性妊娠呕吐、肝硬变初期可同时静脉摘注葡萄糖和小剂量胰岛素,以促进组织利用葡萄糖。
【规格】l0ml:400单位。
【用法用量】l.皮下注射一般每日三次,餐前15-30分钟注射,必要时睡前加注一次小量。
剂量根据病情、血糖、尿糖由小剂量(视体重等因素每次2-4单位)开始,逐步调整。
Ⅰ型糖尿病患者每日胰岛素需用总量多介于每公斤体重0.5-1单位,根据血糖监测结果调整。
Ⅱ型糖尿病患者每日需用总量变化较大,在无急性并发症情况下,敏感者每日仅需5-l0单位,一般约20单位,肥胖、对胰岛素敏感性较差者需要量可明显增加。
在有急性并发症(感染、创伤、手术等)情况,对Ⅰ型及Ⅱ型糖糖尿病患者,应每4-6小时注射一次,剂量根据病情变化及血糖监测结果调整。
2.静脉注射主要用于糖尿病酮症酸中毒、高血糖高渗性昏迷的治疗。
可静脉持续滴入每小时成人4-6单位,小儿按每小时体重0.1单位/kg,根据血糖变化调整剂量;也可首次静注l0单位加肌内注射4-6单位,根据血糖变化调整。
病情较重者,可先静脉注射10单位,继之以静脉滴注,当血糖下降到13.9mmol/L(250mg/ml)以下时,胰岛素剂量及注射频率随之减少。
胰岛素科技名词定义中文名称:胰岛素英文名称:insulin定义:胰腺朗格汉斯小岛所分泌的蛋白质激素。
由A、B链组成,共含51个氨基酸残基。
能增强细胞对葡萄糖的摄取利用,对蛋白质及脂质代谢有促进合成的作用。
所属学科:生物化学与分子生物学(一级学科);激素与维生素(二级学科)本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。
胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素,也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。
目录胰岛β细胞中储备胰岛素约200U,每天分泌约40U。
空腹时,血浆胰岛素浓度是5~15μU/mL。
进餐后血浆胰岛素水平可增加5~10倍。
编辑本段体内胰岛素的生物合成速度体内胰岛素的分泌主要受以下因素影响:刺激胰岛素分泌血浆葡萄糖浓度血浆葡萄糖浓度是影响胰岛素分泌的最重要因素。
口服或静脉注射葡萄糖后,胰岛素释放呈两相反应。
早期快速相,门静脉血浆中胰岛素在2分钟内即达到最高值,随即迅速下降;延迟缓慢相,10分钟后血浆胰岛素水平又逐渐上升,一直延续1小时以上。
早期快速相显示葡萄糖促使储存的胰岛素释放,延迟缓慢相显示胰岛素的合成和胰岛素原转变的胰岛素。
进食含蛋白质较多的食物进食含蛋白质较多的食物后,血液中氨基酸浓度升高,胰岛素分泌也增加。
精氨酸、赖氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸均有较强的刺激胰岛素分泌的作用。
进餐后胃肠道激素增加进餐后胃肠道激素增加可促进胰岛素分泌如胃泌素、胰泌素、胃抑肽、肠血管活性肽都刺激胰岛素分泌。
自由神经功能状态可影响胰岛素分泌迷走神经兴奋时促进胰岛素分泌;交感神经兴奋时则抑制胰岛素分泌。
胰岛素是与C肽以相等分子分泌进入血液的。
临床上使用胰岛素治疗的病人,血清中存在胰岛素抗体,影响放射免疫方法测定血胰岛素水平,在这种情况下可通过测定血浆C肽水平,来了解内源性胰岛素分泌状态。
编辑本段胰岛素的结构不同种族动物(人、牛、羊、猪等)的胰岛素功能大体相同,成分稍有差异。
【药物名称】中文通用名称:正规胰岛素英文通用名称:Regular Insulin其他名称:中性胰岛素、中性正规胰岛素、猪胰岛素、Cp Pork Insulin、Iletin ⅡPork、Neutral Insulin、Neutral Regular Insulin。
【临床应用】1.用于1型糖尿病或继发于严重胰腺疾病的糖尿病。
2.用于以下情况的糖尿病:(1)合并严重应激情况(如感染、创伤、手术、急性心肌梗死、脑血管意外等)或消耗性疾病(如肺结核)的患者。
(2)糖尿病急性并发症(如酮症酸中毒、高渗性昏迷等)或慢性并发症(如心脑血管并发症、肾脏或视网膜病变等)进展迅速、病情恶化。
(3)病程长的2型糖尿病,经合理饮食、体力活动和口服降糖药治疗不满意或失效者,以及具有口服降糖药禁忌者(如妊娠、哺乳等)。
(4)成年或老年糖尿病起病急、体重显著减轻且伴明显消瘦者。
(5)肝、肾功能不全的糖尿病患者。
3.可用于严重营养不良、顽固性妊娠呕吐、肝硬化初期的患者(可同时静脉滴注葡萄糖和小剂量胰岛素,以促进组织对葡萄糖的利用)。
4.尚可用于纠正细胞内缺钾。
此外,胰岛素休克疗法(现已少用)曾用于精神病治疗。
【药理】1.药效学胰岛素按作用时间可分为速效、短效、中效和长效胰岛素,按种属来源可分为猪、牛、人胰岛素,其中以牛胰岛素的抗原性最强,人胰岛素的抗原性最弱。
本药为短效的猪或牛胰岛素制剂,不含任何可延缓胰岛素吸收的物质。
胰岛素对碳水化合物、蛋白质、脂肪的代谢和贮存等多方面起作用,具体为:(1)促进肌肉、脂肪组织对葡萄糖的主动转运,吸收的葡萄糖进而代谢、产生能量,或以糖原、甘油二酯的形式贮存。
(2)促进肝摄取葡萄糖并转变为糖原。
(3)抑制肝糖原分解及糖原异生,减少肝输出葡萄糖。
(4)促进多种组织对碳水化合物、蛋白质、脂肪的摄取,同时促进蛋白质的合成、抑制脂肪细胞中游离脂肪酸的释放、抑制酮体生成,从而调节物质代谢。
通过上述作用,胰岛素可使糖尿病患者血中葡萄糖来源减少、消耗增加,并在一定程度上纠正各种代谢紊乱,从而降低血糖、延缓(或防止)糖尿病慢性并发症的发生。
小鼠胰岛素受体β(ISR-β)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素受体β(ISR-β)的含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素受体β(ISR-β)水平。
用纯化的小鼠胰岛素受体β(ISR-β)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素受体β(ISR-β),再与HRP标记的胰岛素受体β(ISR-β)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的胰岛素受体β(ISR-β)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素受体β(ISR-β)浓度。
试剂盒组成:注意事项:1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
操作步骤1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
胰岛素的降血糖作用及小鼠解剖一.实验目的1. 掌握小鼠的抓取和固定方法2. 掌握小鼠的解剖方法3. 了解胰岛素的降血糖原理二.实验原理胰岛素是由胰岛β细胞所分泌的,正常人胰岛素的生理分泌分为两个部分,基础状态分泌和餐时爆发分泌。
基础状态的胰岛素全天持续分泌,餐时爆发分泌在每次进餐后出现,一个正常人每天的胰岛素分泌量共计50单位左右。
胰岛素主要作用于肝脏、肌肉和脂肪组织,调节糖、蛋白质和脂类的代谢和贮存,它是主要的合成代谢激素,在肝脏胰岛素与肝细胞上的胰岛素受体结合,通过一系列化学反应促进糖原合成和脂肪酸的合成,使葡萄糖变成糖原储存起来,抑制糖原分解和酮体生成,抑制其他物质转化成糖,从而降低了肝脏葡萄糖的输出;此外,胰岛素还可以刺激某些外周组织,特别是骨骼肌和脂肪对葡萄糖的摄取,在肌肉组织它可以使葡萄糖转化为肌糖原储存起来,以备肌肉活动利用,在脂肪组织它可以帮助合成脂肪酸储存能量。
三.实验器材及试剂小鼠一只,蛙板一块,固定针2根 ,手术剪,眼科剪,玻璃分针两根,注射器及消毒棉, 50%的葡萄糖溶液、胰岛素溶液、麻醉剂,生理盐水。
四.实验方法及步骤1. 小鼠的抓取与固定2. 探究胰岛素的降低血糖的作用:将小鼠分为2组,一组注射0.3ml的胰岛素溶液另一组注射等量的葡萄糖溶液观察两组小鼠的变化情况,分别标记为一号和二号。
3. 小鼠被毛去除4.小鼠的麻醉:左手提起并固定小鼠,使小鼠腹部朝上,鼠头略低于尾部,右手持注射器将针头在下腹部靠近腹腔白线的两侧进行穿刺,针头刺入皮肤后进针3mm左右,接着使注射器针头与皮肤呈45度角刺入腹肌,穿过腹肌进入腹膜腔。
当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。
固定针头,保持针尖不动,回抽针栓,如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。
5. 解剖: 从腹部开始,查看腹部脏器,以肝脏胃脾肾输尿管姨小肠大肠膀胱前列腺性腺顺序。
然后再看胸部,看到肺脏心脏胸腺等器官,并在直视的情况下进行了心脏的采血。
第四章药理学实验实验二十胰岛素的过量反应及其解救【实验目的】1.观察胰岛素过量导致低血糖反应及解救方法,验证胰岛素对血糖的影响。
2.练习小白鼠腹腔注射法。
【实验原理】胰岛素是由胰岛β细胞受分泌的一种蛋白质激素,其主要生理功能是调节代谢。
胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素,同时又促进糖原、脂肪、蛋白质的合成。
给小白鼠注射大量胰岛素之后,可导致血糖降低,引起低血糖性休克,发生精神不安、惊阙等现象。
【实验器材】普通天平或电子秤、1ml注射器、大烧杯、小鼠笼。
【实验药品】酸性生理盐水、50%葡萄糖注射液、胰岛素溶液(2U/ml)。
【实验动物】小白鼠。
【实验方法】1.取小白鼠3只,编号为甲乙丙并进行标记,称重,甲、乙为实验组,丙为对照组。
2.给实验组甲、乙两只小白鼠腹腔注射2U/ml胰岛素溶液0.1ml/10g,给对照组小白鼠注射酸性生理盐水0.1ml/10g。
3.将两组小白鼠都放在30~37℃环境中,记下时间,注意观察并比较两组小白鼠的神态、姿势及活动情况。
当实验组小白鼠出现明显反应时,给甲鼠注射50%葡萄糖注射液0.1ml/10g进行解救,乙鼠不进行解救处理。
4.比较甲、乙、丙鼠的活动情况,进行记录并分析结果。
【实验结果】将上述结果记录于表4-20-1中,并进行分析。
表4-20-1 实验结果鼠号体重(g)药物及剂量(ml)用药后反应2U/ml胰岛素溶液0.1ml/10g甲50%葡萄糖注射液0.1ml/10g乙2U/ml胰岛素溶液0.1ml/10g丙酸性生理盐水0.1ml/10g【注意事项】1.小白鼠在实验前18~24小时禁食。
2.酸性生理盐水配置:将10ml0.1mol/LHCl加入300ml生理盐水中,调节其pH值在2.5~3.5。
3.2U/ml胰岛素溶液配置:宜使用普通胰岛素,因普通胰岛素显效快实验现象明显;并应使用酸性生理盐水进行稀释至所需浓度,因胰岛素在酸性环境下才有效应。
4.实验温度:夏季可为室温,冬季最好将注射胰岛素的小白鼠放在30~37℃环境中保温,因温度过低,反应出现较慢。
小鼠胰岛细胞小鼠胰岛细胞产品说明:为使能尽快开展实验,派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期,且每次发货为汇合率达到70%的细胞,收到细胞后即可开展实验。
派瑞金提供的小鼠胰岛细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。
研发的小鼠胰岛细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。
同时,派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。
注意事项:1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。
3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。
培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。
4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态。
5. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。
小鼠胰岛细胞产品简介:1、产品名称:小鼠胰岛细胞(Mouse pancreatic islet cells)2、组织来源:小鼠胰岛3、产品规格:5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠胰岛细胞简介:胰岛细胞作为糖尿病新药的细胞筛选模型需保持其结构完整、生理功能稳定和足够长的存活时间。
本公司生产的大鼠胰岛细胞采用混合酶消化而来,胰岛素分泌实验证明获得较高纯度和活力的胰岛细胞,细胞总量约为5×105cells/瓶,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
小鼠胰岛细胞培养基信息:1)培养基类型:DMEM高糖2)添加因子:FBS、Penicillin、Streptomycin 等小鼠胰岛细胞使用方法:细胞培1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
小鼠胰岛素(Insulin)说明书 小鼠胰岛素(Insulin)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)含量。 试剂盒组成: 样本处理及要求: 1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。 2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后, 离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程 中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS稀释细胞悬液,细胞 浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS,用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为12 mIU/L, mIU/L , mIU/L, mIU/L, mIU/L)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。 计算: 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释 倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。 (此图仅供参考) 试剂盒性能: 1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为以上。 2.批内与批见应分别小于9%和11% 检测范围: mIU/L -15 mIU/L 保存条件及有效期: 1.试剂盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6个月 Mouse Insulin Drug Names Generic Name:Mouse Insulin ELISA Kit. Purpose This kit allows for the determination of Insulin concentrations in Mouse serum, tissue and other biological fluids. Principle of the assay T he kit assay Mouse Insulin level in the sample, use Purified Mouse Insulin antibody to coat microtiter plate wells, make solid-phase antibody, then add Insulin to wells, Combined Insulin antibody which With HRP labeled, become antibody - antigen - enzyme-antibody complex, after washing Completely, Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed, reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of 450 nm. The concentration of Mouse Insulin in the samples is then determined by comparing the . of the samples to the standard curve. Materials provided with the kit Specimen requirements coagulation at room temperature 10-20 mins,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. suited EDTA, citrate or heparinized plasma as an anticoagulant,mix 10-20 mins ,centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it. culture supernatant-detect secretory components, collect sue a sterile container, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 remove supernatant,detect the composition of cells, Dilut cell suspension with PBS Cell concentration reached 1 million / ml, repeated freeze-thaw cycles, damage cells and release of intracellular components, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 remove supernatant, If precipitation appeared, Centrifugal again. samples- After cutting samples, check the weight,add PBS Rapidly frozen with liquid nitrogen, maintain samples at 2-8℃ after melting,add PBS, Homogenized by hand or Grinders, centrifugation 20-min at the speed of 2000-3000 remove supernatant. as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant literature, and should be experiment as soon as possible after the extraction. If it can’t, specimen can be kept in -20 ℃ to preserve, Avoid repeated freeze-thaw cycles. ’t detect the sample which contain NaN3, because NaN3 inhibits HRP active. Assay procedure