青霉素钾盐

青霉素钾盐生产工艺操作过程中稳定性研究及分析作者：陈正平来源：《中国化工贸易·中旬刊》2018年第10期摘要：目的：探究青霉素钾盐生产工艺与操作方式对药品稳定性的影响。

方法：将青霉素钾盐水溶液通过室温与冷藏两组不同的方式进行降解，并对其不同放置时间中产生的共沸结晶进行分析，同时为了对青霉素钾盐水溶液的化学稳定性进行探究，需要做好其中共沸实验收率的计算工作。

结果：相同放置时间内和室温条件下，青霉素钾盐水溶液共沸收率会产生较大的降低幅度。

而在冷藏条件下，青霉素钾盐水溶液共沸结晶收率虽然也会随时间的增长而降低，但降低数值较少，变化不明显。

结论：研究人员在对青霉素钾盐水溶液的化学稳定性进行探究过程中发现，青霉素钾盐水溶液的稳定性更易受到温度的影响，并且还会随着放置时间的持续增长而加快其降解的速率，最终导致青霉素钾盐收率的持续降低。

因此青霉素钾盐生产中稳定性与青霉素钾盐水溶液有着紧密的联系。

关键词：青霉素钾盐;青霉素钾盐水溶液;稳定性我国在进行青霉素钾盐的制作时，在当前的技术条件下主要是通过发酵工艺的方式进行制作的。

而在进行青霉素钾盐的制作时，需要对绿芽乙酸丁酯物质进行发酵，进而在这其中提取相应的物质，并且经过成盐、共沸结晶等工作的进行，最终促使青霉素钾盐的完成，拥有着较高的质量[1]。

但是在对这种药物进行制作期间，如果在这过程中出现了药品生产稳定性方面的问题，就会影响青霉素钾盐的收率。

而这其中，化学性质稳定性的最大影响因素为青霉素钾盐水溶液。

因此本文主要对青霉素钾盐水溶液降解速度与青霉素钾盐收率间的关系进行了深入的探究，从而通过这种方式，为提高青霉素钾盐生产工艺操作过程中的稳定性提供更多的帮助。

1 试验部分1.1 仪器与试剂研究人员在对青霉素钾盐生产工艺操作过程中的稳定性进行探究的过程中，为了保证所进行的研究工作拥有更高的质量，需要将日本SHMADZU公司研制的SPD10AVPuv- VISDETECTOR检测系统，LC-10Atvp压力源系统这些高效液相色谱系统运用到相应的工作之中，同时在进行色谱柱的选择时，需要使用Thermo，ODS-ZHYPERSIL150×4.6mm。

青霉素V钾片临床应用分析青霉素V是青霉素G的苯氧甲基衍生物，青霉素V钾是青霉素V的钾盐，本品通过抑制对青霉素敏感的细菌细胞壁粘肽的合成而实现杀菌作用，由于本品对葡萄球菌，链球菌，肺炎球菌有高度敏感性，临床疗效显著，而倍受广大医患的青睐，但不少人就青霉素V钾片是否会因起过敏反应，口服前是否应做皮试，其安全性如何提出质疑。

下面就青霉素V钾临床应用分析做以下阐述。

1 青霉素V钾的安全性分析青霉素V钾片耐胃酸作用明显，不易被胃酸所破坏，主要在十二指肠吸收。

从五十年代起青霉素V钾片应用于临床经过数十万病例的观察，其过敏反应发生率为1／10万，国产口服青霉素发展比较晚，从1984年经华北制药厂研制成功，投放临床，通过数家大医院临床免皮试观察，结果表明：其不良反生发生率为0.13%，没有1例出现过敏性休克的报道。

针对青霉素V钾片过敏问题也展开一系列的分析研究，得出结论：青霉素V钾片过敏反应发生率与该产品纯度有着密切的关系。

青霉素本身并不是引发过敏反应的过敏原因，其真正的过敏原是制剂中含有杂质如：青霉素噻唑蛋白，青霉素噻唑多肽，青霉素聚合物等高分子杂质。

通过控制青霉素制剂生产过程中杂质的含量，可使其不良反应发生显著降低，当青霉素V钾片中杂质的含量低于0.2%时，无过敏性休克的发生。

随着医药工业企业的GMP认证和达标，制剂生产工艺要求越来越科学越来越严格，杂质的含量呈下降趋势，相应的不良反应发生率真也越来越小。

其安全性也得到了确认。

口服青霉素V钾完全可以免皮试。

2 青霉素V钾不良反应分析尽管青霉素V钾片发生不良反应的机率显低于注射青霉素G，但也有不良反应发生的报道。

下面就青霉素制剂时遇到下面情况做出相应的处理。

（1）消化道反应：少数病人服药后会出现恶心，呕吐，腹泻等胃肠道反应。

（2）过敏反应：少数病人可能发生，主要表现为皮疹，如荨麻诊。

（3）其它：血清样反应，喉头水肿，发热和嗜酸性粒细胞增多的服道。

3 口服青霉素V钾应注意的事项(1）用药前必需严格掌握适应证，杜绝滥用此药。

青霉素工业钾盐主要工艺流程(1)青霉素工业钾盐工艺流程图醋酸丁酯萃取活性炭脱色青霉素滤液──────→一次BA提取液─────→无盐水水洗碳酸钾溶液抽提压滤BA───────→水洗BA───────→共沸结晶双锥干燥钾盐抽提液──────→青霉素钾盐──────→工业钾盐(2)青霉素钠盐流程图醋酸丁酯萃取活性炭脱色青霉素滤液──────→一次BA提取液─────→无盐水水洗碳酸钾溶液抽提压滤BA───────→水洗BA───────→共沸结晶树脂交换钾盐抽提液──────→青霉素钾盐──────→青霉素钠盐无菌过滤、共沸结晶过滤、洗涤、干燥溶液─────────→钠盐结晶液────────→青霉素钠盐成品(3)6-APA工艺流程图去离子水硼酸────────────┬───────────↓┌─────────┐│缓冲液配制│└────┬────┘├──────────────┐青霉素G钾盐│纯化水洗罐│──────────┐│┌────────│↓↓↓│┌─────────┐││青霉素G、K溶解││└────┬────┘││预打缓冲液泡酶││←─────────────┘↓┌─────────┐│裂解│└────┬────┘↓┌─────────┐│结晶│└────┬────┘↓┌─────────┐│离心、洗涤│└────┬────┘↓┌─────────┐│真空干燥│└────┬────┘↓┌─────────┐│成品│└─────────┘(4)7-ACA生产工艺流程图┌────┐┌────┐┌─────┐┌────┐┌─────┐│二氯甲烷││头C锌盐││N,N-甲基苯││二氯甲烷││三甲基氯硅│└─┬──┘└─┬──┘└──┬──┘└──┬─┘└──┬──┘└──────┴───┬───┴───────┴──────┘↓┌────┐│酯化反应│└─┬──┘┌────┐│┌────┤五氯化磷│↓↓└────┘┌────┐│氯化反应│└─┬──┘┌────┐│┌────┤甲醇│↓↓└────┘┌────┐│醚化反应│└─┬──┘┌────┐│┌────┤去离子水│↓↓└────┘┌────┐│水解反应│└─┬──┘├────────┐↓↓┌────┐┌─────┐│水相││有机相回收│└─┬──┘└─────┘│┌─────┐│┌────┤303#活性炭│↓↓└─────┘┌─────┐│脱色、过滤│└─┬───┘┌───────────┐│┌────┤甲醇、亚硫酸氢钠、氨水│↓↓└───────────┘┌─────┐│结晶│└─┬───┘┌───────┐│┌────┤去离子水、丙酮│↓↓└───────┘┌─────┐│离心、洗涤│└─┬───┘↓┌─────┐│干燥│└─┬───┘┌────┐│┌────┤包材清洁│↓↓└────┘┌─────┐│颗粒│└─┬───┘↓┌─────┐│包装│└─┬───┘↓┌─────┐│入库│└─────┘(5)7-ADCA：氧化物流程┌───────┐│青霉素钾盐溶解│└───┬───┘↓┌───────┐│氧化反应│└───┬───┘↓┌───────┐│结晶│└───┬───┘↓┌───────┐│离心、洗涤│└───┬───┘↓┌───────┐│干燥│└───┬───┘↓┌───────┐│成品│└───────┘头G酸制备流程┌───────┐│蒸馏│└───┬───┘↓┌───────┐│硅烷化反应│└───┬───┘↓┌───────┐│重排反应│└───┬───┘↓┌───────┐│水解反应│└───┬───┘↓┌───────┐│结晶│└───┬───┘↓┌───────┐│离心洗涤│└───┬───┘↓┌───────┐│干燥│└───┬───┘↓┌───────┐│成品│└───────┘7-ADCA制备流程┌───────┐│头G酸溶解│└───┬───┘↓┌───────┐│裂解│└───┬───┘↓┌───────┐│萃取│└───┬───┘↓┌───────┐│结晶│└───┬───┘↓┌───────┐│离心洗涤│└───┬───┘↓┌───────┐│干燥│└───┬───┘↓┌───────┐│成品│└───────┘主要产品所需的主要生产设备（1）公司“九五”期间建设和引进的设备主要用于千吨青霉素、双加工程项目,引进设备总价值近4000万美元,其投资大、技术含量高,原料药及头孢、制剂系列产品用生产设备使用年限均在12年以上,均为国内外先进水平。

青霉素类药物对处于繁殖期细菌作用强，而对已合成细胞壁、处于静止期者作用弱——属于繁殖期杀菌剂。

主要用于：G+、G-球菌及某些G-杆菌感染。

注意：多数G-杆菌无效！有效的是——【前后联系TANG】氨基糖苷类。

（二）典型不良反应1.过敏反应——严重过敏反应在各种药物中居首位，与剂量无关。

过敏性休克、血清病型反应。

溶血性贫血、白细胞计数减少、药疹、荨麻疹、接触性皮炎、哮喘发作等。

2.吉海反应（赫氏反应）治疗梅毒、钩端螺旋体病时，致症状（寒战、咽痛、心率加快）加剧——病原体死亡所致。

3.其他①大剂量应用——脑脊液药物浓度过高——青霉素脑病（肌肉阵挛、抽搐、昏迷等）。

②大量应用青霉素类钠盐——高钠血症——心力衰竭。

③大量应用青霉素类钾盐——高钾血症、钾中毒反应。

④长期、大剂量用药——菌群失调，出现二重感染（由念珠菌或耐药菌引起）。

⑤肌内注射区——周围神经炎。

（三）禁忌证有青霉素类药物过敏史，或青霉素皮试阳性者。

（四）药物相互作用1.与氨基糖苷类混合后，两者抗菌活性明显减弱——两药不能置于同一容器内给药。

2.可增强华法林的抗凝作用。

3.丙磺舒、阿司匹林、吲哚美辛、保泰松和磺胺类——减少青霉素类的肾小管分泌而延长其血浆半衰期。

二、用药监护（―）用药前必须询问过敏史并作皮试选用250-500U/ml的青霉素溶液皮内注射0.05～0.1ml做所有青霉素类药的皮肤敏感试验。

【关于皮试——强调几个注意点】（1）无论何种给药途径（口服、肌内或静脉注射）都须做。

（2）20min后，观察皮试结果，阳性反应者禁用。

必须使用者经脱敏后应用，随时做好急救准备。

（3）过敏性休克一旦发生，必须就地抢救，即给患者皮下注射肾上腺素，吸氧，应用血管活性药、糖皮质激素等抗休克治疗。

（二）根据PK/PD参数制定合理给药方案属于时间依赖型抗菌药物，其抗菌活性与细菌接触药物的时间长短密切相关，而与血浆峰浓度关系较小——不需要轰轰烈烈，平平淡淡的维持即可【TANG】；血浆药物浓度低于MIC（最小抑菌浓度）时，细菌很快生长，当达到MIC时增加药物浓度并不能增加疗效——因此首要地是延长高于MIC的持续维持时间。

青霉素钾质量标准制定人: 日期: 审核人: 日期: 批准人: 批准日期:生效日期: 河北新世纪药业有限公司青霉素钾Qingmeisujia Benzylpenicillin PotassiumC 16H17KN2O4S 372.49本品为(2S,5R,6R)-3,3-二甲基-6-(2-苯乙酰氨基)-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3.2.0]庚烷-2-甲酸钾盐。

按无水物计算，含青霉素按C16H17KN2O4S计算，不得少于96.0%。

[性状]本品为白色结晶性粉末；无臭或微有特异性臭；有引湿性；遇酸、碱或氧化剂等即迅速失效，水溶液在室温放置易失效。

本品在水中极易溶解，在乙醇中略溶，在脂肪油或液状石蜡中不溶。

[鉴别]（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

（2）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。

（3）本品显钾盐的火焰反应（附录20页）[检查] 吸收度取本品，加水制成每1ml中含1.88mg的溶液，照紫外-可见分光光度法（附录23页）测定，在280nm的波长测定吸光度，不得大于0.10；在264nm的波长处有最大吸收，吸收度应为0.80-0.88。

结晶性取本品少量，依法检查（附录86页），应符合规定。

酸碱度取本品，加水制成每1ml中含30mg的溶液，依法测定（附录51 页），PH值应为5.0～7.5。

溶液的澄清度与颜色取本品5份，各0.3g分别加水5ml使溶解，溶液应澄清无色；如显浑浊，与1号浊度标准液（附录83页）比较，均不得更浓；如显色，与黄色或黄绿色1号标准比色液（附录79页，第一法）比较，均不得更深。

水分取本品，照水分测定法（附录69页，第一法A）测定，含水分不得过0.5%。

青霉素聚合物照分子排阻色谱法（附录41页）测定。

色谱条件与系统适用性试验用葡聚糖凝胶G-10(40～120μm )为填充剂，玻璃柱内径1.3～1.6cm，柱高度30～40cm。

青霉素钾盐分解青霉素钾盐是一种常用的抗生素，广泛应用于临床医疗中。

本文将从青霉素钾盐的定义、药理作用、适应症、用法用量、不良反应等方面进行介绍，以帮助读者更好地了解和运用这一药物。

一、青霉素钾盐的定义青霉素钾盐，又称青霉素钾盐注射液，是一种由青霉菌属产生的抗生素。

它的化学名称为青霉素G钾盐，分子式为C16H17KN2O4S，分子量为372.48。

青霉素钾盐呈白色或类白色结晶性粉末，可溶于水，不溶于有机溶剂。

二、青霉素钾盐的药理作用青霉素钾盐具有广谱抗菌作用，对革兰阳性菌和部分革兰阴性菌具有抑制和杀灭作用。

它通过抑制细菌细胞壁的合成，阻断其生长和繁殖，从而达到抗菌的效果。

三、青霉素钾盐的适应症青霉素钾盐适用于多种感染症，如肺炎、扁桃体炎、中耳炎、皮肤软组织感染等。

对于革兰阳性球菌感染，如链球菌感染、葡萄球菌感染等，青霉素钾盐是一种常用的一线治疗药物。

四、青霉素钾盐的用法用量青霉素钾盐通常以静脉注射的方式给药。

具体的剂量需要根据患者的体重、感染类型和感染程度进行调整。

一般情况下，成人每次用量为2-4克，每日2-4次，儿童的用量相应减少。

五、青霉素钾盐的不良反应青霉素钾盐使用过程中可能会出现一些不良反应，包括过敏反应、胃肠道反应、肝功能异常等。

过敏反应可能表现为皮肤瘙痒、荨麻疹、发热、血管神经性水肿等症状，严重时可导致过敏性休克。

胃肠道反应主要表现为恶心、呕吐、腹泻等。

此外，青霉素钾盐还可能对肝功能产生一定影响，患者在使用过程中应定期检查肝功能。

六、青霉素钾盐的注意事项在使用青霉素钾盐时，需要注意以下几点。

首先，对于过敏体质的患者，应慎重使用青霉素钾盐，必要时应进行皮肤过敏试验。

其次，青霉素钾盐与某些药物存在相互作用，如普萘洛尔、新霉素B等，应避免同时使用。

另外，青霉素钾盐对肾功能有一定影响，患者在使用期间应定期监测肾功能指标。

青霉素钾盐作为一种常用的抗生素，具有广谱抗菌作用，适用于多种感染症。

在使用过程中，需要注意剂量的调整、不良反应的监测以及与其他药物的相互作用。

青霉素生产工艺摘要：青霉素是人类最早发现的一种极其重要的抗生素,其杀伤革兰氏阳性细菌的神奇功效在二战中挽救了众多士兵的生命。

它的发现对药物学乃至整个人类发展的重要意义。

本文将对青霉素的生产工艺及其提取进行深入的讲解。

关键词：青霉素生产工艺发酵提取一、青霉素的生物学特性青霉素类抗生素是β-内酰胺类中1种,在分类上属于A类，酶的活性位点上有丝氨酸，又称活性位点丝氨酸酶，其作用机制是水解β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺环，使抗生素失去活性。

由于β-内酰胺类作用于细菌的细胞壁,而人类只有细胞膜无细胞壁,故对人类的毒性较小,除能引起严重的过敏反应外,在一般用量下,其毒性不甚明显,但它不能耐受耐药菌株(如耐药金葡)所产生的酶,易被其破坏,且其抗菌谱较窄,主要对革兰氏阳性菌有效。

青霉素G有钾盐、钠盐之分,钾盐不仅不能直接静注,静脉滴注时,也要仔细计算钾离子量,以免注入人体形成高血钾而抑制心脏功能,造成死亡。

二、青霉素的发酵青霉素的发酵生产的一般工艺流程：青霉素生产菌不同，发酵工业也有区别。

丝状菌的青霉素发酵工艺流程：沙土管→斜面母瓶（孢子培养，25℃，6～7d）→大米孢子斜面（孢子培养，25℃，6～7d）→种子罐（种子培养，25℃，40～45h）→繁殖罐（种子培养，25℃，13～15h）→发酵罐（发酵，26℃，6～7d）→放罐球状菌的青霉素发酵工艺流程：冷冻管→斜面母瓶（孢子培养，25℃，6～8d）→大米孢子斜面（孢子培养，25℃，8～10d）→种子罐（种子培养，28℃，50～60h）→发酵罐（发酵，26℃，6～7d）→放罐青霉素的分批发酵分为菌丝生长和产物合成两个阶段，进入合成阶段的必要条件是降低菌丝的生长速率。

影响青霉素发酵产率的因素有环境和生理因素两个方面，前者包括温度、PH、培养基种类及浓度、溶解氧饱和度等；后者包括菌体浓度、菌体生长速率、菌丝形态等。

菌体生长和青霉素合成最适温度并不相同，一般前阶段略高于后阶段。

青霉素的生产工艺摘要：青霉素是人类最早发现的抗生素，也是一种重要的抗生素，在目前制药工业中有着极其重要的地位。

其杀伤革兰氏阳性菌的功效几乎人人都领教过。

通过多年的研究与完善，青霉素相关药品已能用于治疗肺炎、脑膜炎、心内膜炎等病，它不仅增强了人类治疗传染性疾病的能力，而且对研究药物学和优化生产工艺对人类的健康有重要意义。

关键词：青霉素提取生产1 青霉素概述青霉素（Benzylpenicillin / Penicillin）又被称为青霉素G、peillin G、盘尼西林、配尼西林、青霉素钠、苄青霉素钠、青霉素钾、苄青霉素钾。

青霉素是抗菌素的一种，是指从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是第一种能够治疗人类疾病的抗生素。

青霉素类抗生素是β-内酰胺类中一大类抗生素的总称。

青霉素是一个典型的利用生物工程技术生产的产品，生产工艺涉及配料、发酵、过滤、提取、结晶、干燥等重要的单元操作。

1.1 青霉素简介1.1.1 名称与化学结构式中文名：青霉素英文名：Benzylpenicillin / Penicillin化学名：1-乙氧甲酰乙氧6-〔D(-)-2-氨基-2-乙酰氨基〕青霉烷酸盐酸盐分子式：C16H18N3O4S?HCl分子量：384.51.1.2 性状与理化性质青霉素为白色结晶性粉末、无臭，有吸湿性，易溶于水、水溶液易失效，不耐热。

对革兰氏阳性菌作用强，对阴性菌作用弱，对真菌无作用2 青霉素生产工艺2.1 青霉素生产工艺流程概述青霉素生产工艺主要分为：发酵、过滤、萃取、脱色、结晶。

其生产工艺流程，如图2.1：冷冻干燥孢子琼脂斜面米孢子种子罐发酵罐过滤醋酸丁酯提取脱水脱色结晶洗涤晶体工业盐菌丝综合利用图2.1青霉素的生产工艺流程简图2.2 发酵工艺流程2.2.1 生产孢子的制备将沙土保藏的孢子用甘油、葡萄糖、蛋白胨组成的培养基进行斜面培养，经传代活化。

青霉素共沸结晶分离技术青霉素钾工业盐生产过程大体由发酵、提取（包括过滤、萃取、脱色、碱化）及精制（包括结晶、过滤、洗涤、干燥）三步组成。

共沸结晶工艺：下图为较完整的青霉素共沸结晶工艺。

利用青霉素在酸性条件下易溶于有机溶媒、在中性条件下易溶于水的性质，在生产过程中调节pH值，把青霉素从发酵液提取到醋酸丁酯中，先进行提取液的水洗，再经加入活性炭、冷冻、脱色、脱水后，在进行压滤，无菌过滤，将提取液中的杂质滤除，得到结晶液。

再将青霉素的醋酸丁酯提取液输入结晶罐内进行共沸结晶。

结晶分为反应，蒸发两个阶段。

反应剂KOAc已经加入结晶罐内，即与青霉素游离酸生产青霉素钾盐。

青霉素钾盐溶于水而不溶于醋酸丁酯，因此生成的青霉素钾盐在水中达到饱和后，就会有细小的青霉素钾盐晶核析出，反应完成后，为了使溶于水的青霉素钾盐结晶出来、开始真空蒸发过程，在此阶段水与醋酸丁酯，乙醇形成三元共沸物不断馏出，随之青霉素钾盐不断析出，晶核逐渐长大，形成晶粒。

再通过真空加压抽滤得到粗晶，再通过丁醇，醋酸乙酯的洗涤得到湿晶，最后通过干燥等步骤得到成品。

此过程还需注意控制升温速度。

工艺路线此工艺为较完整的青霉素共沸结晶过程。

共沸结晶分离出来的青霉素晶体大，质量好，共沸结晶终点水分低，收率高。

工艺路线短，设备少。

青霉素质量的好坏与晶形的控制好坏有很大关系。

另外，影响晶形主要有两方面的因素：1、溶液的过饱和度大小，它直接影响着晶核形成的大小，并对以后晶体成长起确定性作用，此工艺中，出晶前丁醇补加时机直接影响了溶液过饱和度大小。

2、搅拌速度，搅拌过快会有磨损，搅拌过慢会结成晶簇，容易使母液包藏在晶粒间而使以后洗涤发生困难，这样也会使产品纯度降低。

共沸蒸馏过程：在720毫米汞柱真空条件下，25摄氏度左右乙醇与水成二元共沸物馏出，30摄氏度左右乙醇、醋酸丁酯、水呈三元共沸物馏出，至35摄氏度左右为醋酸丁酯、水二元共沸物馏出，当气相温度上升到38到40摄氏度时，醋酸丁酯中水分可降低至0.6%，即可停止蒸馏。

4I 2+2Na 2S 2O 32HClNaOH实验十六 青霉素G 钾盐水溶液的稳定性试验一、实验目的1． 初步了解用化学动力学测定药物稳定性的方法；2． 掌握恒温加速实验预测药物制剂贮存期或有效期的方法(经典恒温法)。

二、实验原理青霉素G 钾盐在水中迅速破坏，残余未被破坏的青霉素G 钾盐可用碘量法测定。

即先经碱处理，生成青霉酸，后者可被碘氧化，过量的碘则用硫代硫酸钠溶液回滴。

反应方程式如下：随着青霉素G 钾盐溶液放置时间的增长，主药分解越来越多，残余未破坏的青霉素G 钾盐越来越少，故碘液消耗量也相应减少，根据碘液消耗量（mL 数）的对数对时间作图，得到一条直线，表明青霉素G 钾盐溶液的破坏为一级反应，因为这个反应与pH 有关，故实际上是一个伪一级反应。

一级反应的速度方程式如下：设C 为t 时间尚未分解的青霉素G 钾的浓度；Co 为初浓度；K 为反应速度常数；则三、实验操作步骤：精密称取青霉素G 钾盐约70mg ，置100mL 容量瓶中，用pH4的缓冲液（枸橼酸－磷酸氢二钠缓冲液）定容，将此容量瓶置恒温水浴中，立即用5mL 移液管移取该溶液2份，每份8HI5mL，分别置于两个碘量瓶中(一份为检品，另一份为空白)，并同时以该时刻为零时刻记录取样时间，以后每隔一定时间取样一次，方法和数量同上。

每次取样后，立即按下法进行含量测定：向盛有5mL检液的碘量瓶中（为检品）加入1mol/L的氢氧化钠溶液5mL，放置15分钟，使充分反应后，加入1mol/L的盐酸溶液5mL，醋酸缓冲液（pH4.5）10mL，摇匀，精密加入0.01mol/L碘液10mL，在暗处放置15分钟，立即用0.01mol/L硫代硫酸钠溶液回滴，以淀粉液为指示剂，至蓝色消失，消耗硫代硫酸钠溶液的量记录为b。

向盛有5mL检液的另一个碘量瓶中（为空白）加pH4.5醋酸缓冲溶液10mL，精密加入0.01mol/L碘液10mL，放置1分钟，用0.01mol/L硫代硫酸钠溶液回滴，消耗硫代硫酸钠溶液的量记录为a。