商品蛋鸡场要重视H9禽流感

肉鸡与蛋鸡H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平调查作者：李家凯郭康康刘丽娜来源：《湖北农业科学》2020年第11期摘要：为了解养殖场家禽中H5、H7、H9亚型禽流感病毒抗体水平，通过血清学调查，应用血凝抑制试验（HI）的方法，对四川内江、山东济南、河南鹤壁、江苏扬州4个定点实验观测站负责的养殖场的鸡血液样本进行禽流感病毒抗体分析，其中包含2个肉鸡场和3个蛋鸡场。

研究发现蛋鸡场通常免疫了H5、H7、H9（或H5与H9）亚型禽流感疫苗，而肉鸡场只免疫了H9亚型禽流感疫苗;蛋鸡场和肉鸡场都存在免疫禽流感疫苗后抗体水平低和无抗体产生的情况，从而导致免疫不合格或免疫失败。

以上结果表明，应加强家禽养殖场对不同亚型禽流感疫苗的免疫以及免疫后的禽流感病毒抗体水平监测，以防免疫失败，从而预防禽流感的发生和流行。

关键词：肉鸡与蛋鸡;H5、H7、H9亚型禽流感疫苗;抗体水平;免疫合格率Abstract： In order to understand the immune antibody level of H5， H7 and H9 subtypes avian influenza virus in poultry， the blood samples of four experimental observation stations in Neijiang city of Sichuan province， Jinan city of Shandong province， Hebi city of Henan province and Yangzhou city of Jiangsu province were analyzed by serological investigation and hemagglutination inhibition test（HI），including two broiler farms and three layer farms. The research found that layers were immunized with H5， H7， H9（or H5 and H9） subtypes avian influenza vaccines，while broilers were only immunized with H9 subtype avian influenza vaccine. The layer farms and broilers farms had low antibody production after the immunization of avian influenza vaccine，leading to unqualified or immune failure. It is suggested that the immunization different subtypes of avian influenza vaccine and the monitoring of avian influenza antibody levels after immunization should be strengthened to prevent the occurence and prevalence of avian influenza.Key words： broilers and laying hens; H5， H7， H9 subtypes of avian influenza vaccine; antibody level; qualified rate of immunity1994年，张泽纪等[1]首次从中国广东某鸡场发病鸡体内分离到H9N2亚型病毒。

禽流感(H9)疫苗免疫间隔期探讨李梅;赵全兴;国林;马建平;王刚;刘新喜;刁有祥【摘要】通过在不同日龄对海兰褐蛋鸡进行禽流感(H9)灭活疫苗的免疫,探讨禽流感灭活疫苗的免疫间隔期.结果表明,开产以后不管防疫2次、3次、4次禽流感灭活疫苗,抗体水平均在6log2以上,且鸡的日龄越大,免疫次数越少,免疫抗体持续期越长.因此,建议从育成到鸡群淘汰的饲养全程中,四次时机恰当、搭配合理的禽流感(H9)疫苗免疫基本上能使得95%以上产蛋期抗体维持于7log2以上.【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2011(028)005【总页数】2页(P72-73)【关键词】禽流感(H9);免疫间隔期;免疫抗体【作者】李梅;赵全兴;国林;马建平;王刚;刘新喜;刁有祥【作者单位】山东众成健康养殖工程公司,山东肥城,271600;山东众成健康养殖工程公司,山东肥城,271600;山东众成健康养殖工程公司,山东肥城,271600;山东众成健康养殖工程公司,山东肥城,271600;山东众成健康养殖工程公司,山东肥城,271600;山东众成健康养殖工程公司,山东肥城,271600;山东农业大学,山东泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】S852.52禽流感（AI）又称鸡瘟、真性鸡瘟和欧洲鸡瘟，是由A型流感病毒（AIV）引起的禽类的一种疾病综合症，鸡、火鸡以及鸭、鹅、鵪鹑和海鸥等家禽、水禽、野鸟均可感染，病禽表现为死亡、产蛋量下降、严重的呼吸道疾病、系统综合症或隐性感染等多种病型[1-2]，给养禽业造成巨大的经济损失，并严重威胁着人类公共卫生安全。

目前，当流感疫苗免疫接种和严格的生物安全措施相结合仍是预防和控制该病的主要措施。

近年来，我们对禽流感实施高密度的免疫接种，通过疫苗免疫可使鸡群得到有效保护，但是过频免疫会产生免疫抑制。

为此本试验连续采用三批海兰褐蛋鸡进行全程的AI抗体跟踪，综合分析禽流感抗体动态变化规律，探讨禽流感的免疫间隔，寻找禽流感疫苗的接种规律。

H9N2禽流感如何综合防控作者：曹世瑞来源：《兽医导刊》 2016年第8期曹世瑞/ 河北省衡水市景县畜牧水产局近期H9N2 禽流感给养殖业带了不小的波动，近两年H9 亚型禽流感的危害日趋突出，对各个地区养殖业均造成了不同程度的损失。

禽流感病毒是由正黏病毒科、流感病毒属A 型流感病毒引起的一种急性、高度接触性传染病。

禽流感成为影响当今养禽业发展的重要疾病之一。

要想减少此病的发生，只进行疫苗免疫防控远远不能满足家禽养殖的需要，只有对其病原特点、流行特点有了深入认识，才能采取合理的综合防控措施，减少或杜绝禽流感的发生。

一、当前H9N2 亚型禽流感的流行新动态、发病特点1.H9N2 亚型禽流感仍是当前养殖业中禽流感流行的主型，尤其在商品代肉鸡更加突出。

现今H9N2亚型禽流感呈全国性持续存在，严重危害我国养禽业的发展，由于受到传播途径和传染源的影响，疫源地的根除十分不易，疫情隐患长期存在；市场开放、流通频繁、检疫工作滞后等给疾病流行创造了条件。

还有其他的一些因素如：不免疫或不按免疫程序免疫；疫苗保护达不到理想效果；生物安全措施落实不到位。

2. 发病的季节性越来越不明显，且传播范围广。

一年四季均可发生，但在每年11 月至来年4、5 月发病率最高，发病日龄越来越小，15 ～ 40日龄雏鸡多发，死亡率较以前增高；传播速度快，多日龄共存大型鸡场一旦受污染，很难将其清除。

3.H9N2 亚型禽流感毒株间存在差异，呈多态性。

禽流感病毒的基因组由8 个分节段的RNA 组成，极易发生变异。

近几年分离株均为欧亚谱系A/DK/HK/Y280/97-1ike分支1.1 亚分支（田间分离株），而常见疫苗株SS 94 株、F98 株等属于A/DK/HK/Y280/97-1ike 分支中的1.2 亚分支，导致原有疫苗毒株保护力低。

4. 高发病率，临床表现多样性，死亡高低不等。

非免疫鸡群感染后发病率高，死亡率高；免疫鸡群部分鸡在免疫效果差的情况下发病，如果不继发细菌病，死亡较少。

蛋鸡禽流感的免疫程序【防疫程序】无母源抗体或母源抗体（1日龄ND和AI母源抗体≤1:32的雏鸡）：7日龄：禽流感H9颈部皮下注射（疫苗可以选择：新流H9二联或是新支流三联油苗）；15日龄：禽流感H5N1-4-5颈部皮下注射（此次必须使用禽流感单苗：国家免费的那种或是疫苗厂家专供的那种）。

母源抗体>1:32的雏鸡：15日龄：禽流感H9颈部皮下注射（疫苗可以选择：新流H9二联或是新支流三联油苗）；20日龄：禽流感H5N1-4-5颈部皮下注射（此次必须使用禽流感单苗：国家免费的那种或是疫苗厂家专供的那种）。

此次免疫原理：禽流感免疫效果要想达到很理想的抗体，需要多次接种。

科学表明，禽流感油苗需要至少3次才能产生相对理想的抗体值，此次免疫只是该疫苗的基础免疫，或是说是：免疫启动（此次免疫为下次再次免疫产生较高的抗体做好了基础），此期免疫该疫苗后，有一部分鸡产生的免疫力较弱或是有的鸡检测不到抗体。

此期间可以使用一些促进免疫力产生的药物或是维生素以及良好的环境管理等等。

此期免疫剂量不易过大，不要高于0.3ml。

43日龄：禽流感H9颈部皮下注射（疫苗可以选择：新流二联或是H9单苗，尽量不要使用新支流三联：此疫苗适应于基础免疫期）。

50日龄：禽流感H5N1-4-5（必须使用国家免费的那种或是疫苗厂家专供的那种）。

此次免疫原理是：由于20日龄之内的基础免疫（免疫启动），根据禽流感油苗的免疫学原理，相同油苗抗原在相隔3-4周即可接种达到进一步激活免疫系统的作用从而达到较高抗体的产生，由于油苗需要14天左右产生抗体，到21天左右达到坚强的免疫力，对禽流感病毒的抵抗力增强。

也就是说此次免疫禽流感后在70日龄左右，鸡群对禽流感H9与H5抵抗力相对安全系数增高，对禽流感的易感性降低（在禽流感流行季节70日龄左右的鸡群发生禽流感的比例还是很高的，在有的地区，所以禽流感的二免在50日龄之内接种是非常重要的，希望能引起大家的关注）。

流感病毒可分为甲（A型，可感染人类、禽类和哺乳动物）、乙（B型，主要感染人类）、丙（C型，主要感染人类、猪），其中甲型流感病毒是鸡禽流感病的病原，并能感染人类和其他动物。

禽流感病毒的致病力极强，是禽病中最致命的传染性疾病，鸡群感染后会出现发热，嗜睡，流泪，咳嗽，呆立，鸡冠、颈部、腹下水肿，蛋鸡产蛋下降或产畸形蛋，高致病性禽流感病死率约100%。

鉴于鸡禽流感的高致病率，养殖户必须给予重视，做好早期鉴别和防控措施，这样才能提高鸡群整体素质，严格控制禽流感疫情，保障禽类养殖效益。

1 病原特征鸡禽流感的病原微生物为禽流感病毒，是一种球形的RNA病毒，直径为100±20nm。

从病原菌分类来看，鸡禽流感病毒为A型流感病毒，按照外膜血凝素的不同可分为16种亚型，名称从H1～H16，按其神经氨酸酶可分为10个亚型，名称从N1～N10。

不同亚型的流感病毒的致病力不同，其中4种（H5、H7、H9、H10）对人类具有致病性。

禽流感病毒对环境具有较强的适应力。

①耐低温：禽流感病毒污染的饮水，若水源温度维持在22℃左右，病毒可存活96h，若降低至0℃，则可存活1个月之久，且病毒在低温、潮湿环境能维持较长时间的活力，如在冰冻组织或骨髓存活时间长达10～12个月；②耐干燥：该病毒可在低温、干燥的组织存活6～12个月，在干燥尘土中可存活2周；③不耐高温：56℃30min或60℃10min或70℃3～5min或100℃1～2min均能将禽流感病毒灭活；④不耐直射，阳光直射44±4h即可杀灭禽流感病毒；⑤不耐化学消毒试剂，禽流感病毒对碘复合物、来苏儿、氢氧化钠、过氧乙酸、福尔马林等化学试剂具有较高的敏感性，可通过规范消毒灭活。

2 流行病学2.1 易感动物对禽流感病毒最敏感的禽类为鸡、火鸡，鹅、鸭感染后其症状不典型，多为隐性感染。

除上述禽类外，鹌鹑、鸽、鸵鸟等禽类也可感染该病毒。

若鸡（旱禽）和鸭（水禽）混合饲养，容易出现家禽交叉感染现象，并易出现大面积流行。

H9N2亚型禽流感病毒分离鉴定及免疫试验许佳敏，边海霞（宁夏家禽工程技术研究中心银川750001）更好防控H9N2亚型禽流感，且做到科学免疫，免疫减负。

本研究采集疑似感染低致病禽流感鸡群病料，将其无菌处理后接种SPF 鸡胚后进行病毒分离，通过分子生物学试验对其进行病原学鉴定。

结果显示：分离鉴定出一株H9亚型禽流感病毒（AIV ）；血凝试验（HA ）效价在10～11，该病毒属于欧亚分支的BJ 亚分支。

将病毒纯化后，制备灭活疫苗免疫SPF 鸡，免疫后14d 对其进行HI 检测，结果显示其效价到达峰值为10Log2，免疫后28～35d 其平均效价在9.6Log2，至免疫后12周平均效价在7Log2。

结果说明本研究分离的病毒制备成疫苗后具有较好的免疫效果，可以作为疫苗候选株。

亚型禽流感毒株，免疫，疫苗禽流感是禽流行性感冒（avian Influenza ，AI ）的简称，是由正粘病毒科（orthomyxoviridae ）、流感病毒属（influenza virus ）、A 型流感病毒（influenza A virus ）引起的禽类疾病[1]。

国际兽医局（OIE ）将禽流感列为A 类动物疫病，我国也将其定为一类动物传染病。

H9N2禽流感病毒是低致病性亚型，在世界各地家禽群中流行。

目前，H9N2引起的禽流感在我国呈地方流行，虽然死亡率低，但感染蛋鸡出现鸡输卵管功能异常，产褪色蛋、畸形蛋、砂皮蛋、软壳蛋，鸡群产蛋率下降30%～80%，病程持续时间长的可达月余，造成严重的经济损失[2]。

该疾病可通过免疫疫苗进行抵御但是由于低致病禽流感变异速度快，不同血清型之间交叉保护有限；所以筛选、免疫对型疫苗对养殖业具有重要意义[3]。

本研究通过分子病原学及血清学分离鉴定一株H9N2流行毒株，并进行动物试验，为进一步筛选疫苗提供理论依据。

1材料与方法1.1材料1.1.1病料来源疑似发病鸡病料，采集自宁夏平罗县某商品蛋鸡养殖场。

一起肉鸡H9亚型禽流感的诊断与防控作者：熊杰伟来源：《福建畜牧兽医》 2019年第3期熊杰伟福建省军区副食品基地福州 350007摘要该文介绍一例Ｈ9亚型禽流感的发病经过、临床症状、病理变化、诊断及防治措施，并对该病的相关问题进行探讨。

关键词Ｈ9亚型禽流感诊断防控文献标识码：B 文章编号：1003-4331（2019）03-0055-02Ｈ9亚型禽流感是由Ｈ9亚型禽流感病毒导致禽类出现以呼吸道症状为主的一种传染病，是冬季肉鸡养殖中一种常见病。

该病毒的易感动物有肉鸡、蛋鸡、火鸡以及部分野禽。

2018年12月，笔者在福州郊区某肉鸡养殖场接诊一例Ｈ9亚型禽流感，采取相应措施处理后取得了较好的防控效果，现报道如下。

1 发病经过2018年12月中旬，一场冷空气后，福州市郊区某肉鸡场饲养的2 500羽90日龄贵凤鸡出现了严重的呼吸道症状，表现喘气、咳嗽、啰音。

养殖户起初怀疑是支原体病，就采用泰乐菌素、多西环素以及磺胺间甲氧嘧啶钠进行拌料治疗，但一个疗程（3 d）后鸡群的呼吸道症状不但没有改善，而且每天有5~8羽患鸡死亡。

笔者应邀去该鸡场进行实地观察和诊治。

据了解，该鸡群免疫过鸡新城疫、Ｈ5和Ｈ7亚型禽流感、传染性支气管炎、传染性法氏囊病等疫苗。

2 临床症状该鸡场位于山边，离交通干道200 m，鸡舍比较简陋，保温条件差。

现场观察鸡群呼吸道症状明显，咳嗽声较大、湿性啰音、粪便呈黄白色。

个别患鸡精神沉郁，采食量减少，仔细观察可见肉囊水肿，流泪和流鼻水。

每天死亡5~8羽。

3 病理变化剖检3羽病死鸡，可见头部和肉囊皮下水肿，鼻窦腔内有干酪样分泌物，喉头黏液多，气管充血、出血明显，气囊壁轻度浑浊，肠道呈卡他性炎症，肠内容物为黄绿色糊状物，盲肠扁桃体肿大出血，直肠黏膜充血、出血。

4 实验室检查取病死鸡头部、喉气管、肺脏、肝脏、脾脏等送福建省农业科学院畜禽疾病诊疗中心检测。

4.1 细菌学检查对鼻窦腔内容物进行涂片、染色、镜检，未检出细菌。

鸡禽流感鉴别诊断及防治措施严建梅/江苏省南通市如东县曹埠畜牧兽医站 226402摘 要：现阶段，随着人们的生活质量的不断提升，对于鸡产品的需求量越来越大，这极大的促进着鸡养殖业的快速发展。

但是，由于受到气候、环境、管理等诸多方面因素的影响，鸡禽流感的发病率呈逐年升高的趋势，降低了养殖效益，阻碍鸡养殖业的健康发展，因此做好鉴别诊治工作显得尤为重要。

基于此，本文着重对鸡禽流感鉴别诊断及防治措施进行了探讨分析。

关键词：鸡；禽流感；诊断；防治；分析鸡禽流感属于病毒性传染性疾病，其病原为A型禽流感病毒。

病鸡会出现明显的高烧、咳嗽、呼吸困难、腹泻、日渐消瘦等症状，严重影响鸡群的健康生长，因此养殖场户要密切留意。

1 鸡禽流感流行特点鸡禽流感主要是通过消化道以及呼吸道等途径传播的，健康鸡直接接触患病鸡及其粪便、尿液等等，均会导致感染发病，或者健康鸡间接接触被病鸡所污染的饲料、饮水、槽具等，也会导致发病。

在这其中，呼吸道传播几率最高，病鸡所呼出的气体中含有大量的病毒粒子，健康鸡吸入即可感染。

鸡禽流感的潜伏期是不固定的，最短为数小时，最长为21d左右。

如感染高致病性禽流感，则毒株具备更强的传染性，同时其死亡率也更高。

该病可发生于一年四季，尤其是在冬季和春季等季节发病率最高。

可发生于任何年龄、任何性别以及任何品种的鸡，发病急、传播速度快，严重危害鸡群的健康生长。

2 鸡禽流感的临床鉴别诊断分析2.1 与新城疫的鉴别 无论是禽流感还是新城疫，均会导致鸡出现羽毛动乱翅膀下垂的现象，精神状态不佳，鼻腔中出现一些分泌物，同时伴随歪头、脚肿以及呼吸困难等症状。

区别之处在于鸡禽流感的会出现胰脏出血及坏死以及脚鳞出血等现象，而新城疫则不会出现上述现象。

此外，通过对鸡的抗体变化进行监测也可以实现对禽流感和新城疫的有效鉴别与诊断。

2.2 与传染性支气管炎的鉴别 患有禽流感的鸡，会出现明显的上呼吸道炎症等现象，粪便呈青色，死亡率高于30%。

蛋鸡产蛋期疾病的综合防治措施摘要：一般蛋鸡免疫程序末次免疫为产前120日龄左右，产后免疫不重视或较混乱。

经抗体监测，鸡群220日龄后抗体开始下滑，所以应在蛋鸡220日龄时开始再度接种新城疫、禽流感h5及h9疫苗。

灭活疫苗的保护期为3～4个月，间隔3～4个月应重复免疫1次。

有条件的鸡场可定期监测免疫抗体，依据血清抗体值大小确定是否接种免疫，如果抗体值在免疫临界值5～6个孔之间，就需要接种免疫，如果在6孔以上可以不加强免疫。

关键词：免疫；蛋鸡中图分类号：s83 文献标识码：a 文章编号：1009-0118（2011）-11-0-01一、引言近年来，鸡病流行趋势日益复杂，防控难度越来越大。

生产中普遍存在着重视产蛋前期免疫而忽略产蛋期免疫的现象，开产后怕影响产蛋而不再免疫，造成抗体水平低，保护力不够，以至于发生疫情。

目前低致病性禽流感或非典型性新城疫，是困扰蛋鸡行业发展的严重障碍，所以要高度重视产蛋期防疫，重点做好这两种病的预防。

产蛋期接种疫苗首先要制定一个合理的免疫程序，其次注意接种方法，有利于减少应激。

下面介绍一例规模养殖户成功防疫的例子。

在病毒性疾病的防制中，由于没有特效的药物进行预防和治疗，制定一个科学的免疫程序显得尤为重要。

本县一规模化养殖户按县兽医站提供的免疫程序进行免疫，在周边环境疫情严峻的情况下，几年来从未发生疫情。

采用的程序是：蛋鸡开产前注射新城疫、减蛋综合征、传染性支气管炎三联疫苗，禽流感h5、h9灭活疫苗，220日龄接种新城疫、禽流感h9亚型二联灭活疫苗，每只鸡0.8～1毫升颈部皮下注射，同时用新城疫ⅳ系弱毒疫苗4倍量饮水。

1周后接种禽流感h5灭活疫苗，每只鸡0.8～1毫升。

以后每隔3个月加强免疫1次新城疫、禽流感h9二联灭活疫苗和h5疫苗，1个产蛋周期至少重复免疫3次，每2个月监测一次抗体。

实践证明，以上免疫是有效的，能有效预防疫病发生。

二、免疫程序的合理理论依据（一）新城疫保护需要体液免疫及局部免疫。

H7N9禽流感防控工作总结简介H7N9禽流感是一种由高致病性禽流感病毒〔HPAI〕引起的病毒性感染疾病。

自2024年报告首例病例以来，H7N9禽流感已经成为全球范围内关注的重要公共卫生问题。

为了有效防控禽流感的传播，各级政府、科研机构、农牧业部门以及社会各界积极开展了一系列防控工作。

本文对H7N9禽流感的防控工作进行总结和回忆。

1. H7N9禽流感的病原学和流行病学特征H7N9禽流感主要通过禽类传播，但也有报道称人际间传播。

该病毒具有高度变异性，易于发生基因突变，使其适应不同宿主。

流行病学调查显示，人类感染H7N9禽流感的主要来源是与感染的活禽接触或光临活禽市场。

了解病原学和流行病学特征对于制定有效的防控策略至关重要。

2. 防控策略与措施2.1 政府和农牧业部门的作用政府和农牧业部门在禽流感的防控工作中扮演着重要的角色。

他们应制定和执行相关法律法规，加强监测和报告制度，加强兽医效劳体系建设，提供技术指导和培训，保障禽类和禽产品的质量平安，并加强与其他监管部门的协调合作。

2.2 健全监测和预警体系及早发现和及时报告禽流感疫情对于防控工作至关重要。

应建立健全的监测和预警体系，密切监测禽类和人类的感染情况，并及时发布预警信息，以提前采取相应的防控措施。

2.3 提高兽医效劳水平兽医是禽流感防控的关键力量。

应加强对兽医的培训和教育，提高其诊断和治疗禽流感的能力。

同时，加强兽医队伍的建设，增加兽医效劳站点的数量，提高效劳能力和覆盖范围。

2.4 加强禽类养殖管理加强禽类养殖管理是防控禽流感的有效手段。

应加强养殖场的环境卫生管理，定期进行消毒和清洁，同时加强饲养管理，防止交叉感染。

此外，禽类养殖场的规模化和标准化也是防控的重要举措。

2.5 指导民众科学防护在疫情高发期，对民众进行科学防护指导至关重要。

应通过各种渠道向民众普及禽流感的知识，告知他们禽流感的传播途径及预防措施，如防止接触活禽，注意个人卫生习惯等。

3. 防控工作中的挑战与展望在禽流感的防控工作中面临一些挑战，如病毒的变异性、人际间传播的风险、对兽医效劳能力的要求等。

畜 牧 兽 医2020年第11期新农民鸡禽流感H5、H7和H9抗体水平合格率检测熊 鑫（安徽省宁国市农业农村局，安徽 宁国 242300）摘要：本试验为了检测宁国市某养殖场屠宰环节中经疫苗免疫后的鸡祖代及父母代禽流感H5、H7和H9抗体水平合格率。

通过血凝试验分别对H5、H7和H9抗原进行倍比稀释，测得四倍抗原，根据稀释倍数制备抗原稀释液。

通过血凝抑制试通过验将血清从第1孔倍比稀释到第5孔，第6孔倍比稀释到第10孔，其中每排第11孔为阳性对照，第12孔为阴性对照。

先加入抗原稀释液振荡混匀后置于在37℃充分反应，再加入1%红细胞悬液振荡混匀后置于在37℃充分反应，进行读数。

关键词：禽流感；抗体水平；血凝试验；血凝抑制试验1 试验方法1.1 样本制备①于屠宰环节随机选取某养殖场鸡祖代（80周龄）及父母代（48周龄）各50只；②通过翅静脉采集血液，于37℃放置2h；③取上清液在1800r/min条件下离心2～3min，用移液器吸取上层清液（即为血清）于新的离心管中；④进行编号标记后于-20℃保存。

1.2 制备1%鸡红细胞悬液①注射器吸取适量阿氏液，通过翅静脉采集健康公鸡血液；②于1500r/min条件下离心8～10分钟，用移液器尽可能吸净上层清液弃去；③加入生理盐水通过称量配平后，用移液器重复吹打使悬液充分混匀；④重复②③步骤3～5次；⑤离心后将上层清液弃掉，用生理盐水配成1%红细胞悬液，置于4℃保存备用。

1.3 HA试验①取1块96孔V型微量反应板水平放置于实验台，进行标记；②分别选取6排，其中每2排为重复操作，第1～12孔分别加入25μL生理盐水；③分别于相应标记的第1孔加入H5、H7和H9抗原25μL，倍比稀释至第11孔，弃去枪头内液体；④6排的每孔加入25μL生理盐水；⑤6排的每孔加入配制好的25μL 1%红细胞悬液，振荡混匀后于37℃恒温箱内反应15～20分钟；⑥观察结果，获得抗原血凝效价，制备抗原稀释液。

禽流感（avian influenza ，AI ）是由正粘病毒科、流感病毒属A 型流感病毒引起的禽类（家禽或野禽，以及部分哺乳动物）传染病[1]。

禽流感病毒血清亚型众多，抗原变异性强，宿主范围广泛，亚型间无交叉保护性，使得禽流感频繁暴发，成为养禽业的一大毁灭性疫病。

尤其是高致病性禽流感，是OIE 规定的法定报告A 类动物疫病[2]。

禽流感病毒在流行的过程中不断变异，跨越宿主屏障，H5N1亚型禽流感病毒和H7N9亚型禽流感病毒屡次暴发疫情，给养禽业和人类的生命安全带来巨大的威胁。

H9亚型禽流感病毒并未被规定为高致病性禽流感，往往被人们所忽视，从而造成了以H9亚型为主的低致病性禽流感的大范围流行和对养禽业产生持续危害。

此外，有研究显示H9N2亚型禽流感病毒在全世界范围内广泛传播的同时也以重配的方式产生新型禽流感病毒[3,4]。

目前国内外检测禽流感病毒最常用和经典的方法是鸡胚病毒分离，并且是国际贸易中指定的检测方法，但该方法技术要求高、耗费时间长，在疫情暴发时不利于病原的快速诊断和疫情控制。

以分子生物学技术为基础的荧光PCR 方法已成为病原核酸检测的主要方法，目前市场的禽流感病毒检测手段多以单重RT-PCR 为主，不能区分具体亚型，但在平时疫情检测和实施扑灭措施时对这些病毒亚型进行快速检测和定型非常重要。

本研究基于Taq-Man-MGB 荧光RT-PCR 技术建立一种禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重荧光RT-PCR 检测方法，能够在一次反应中对样本中的病毒进行快速定型，满足准确、快速的检测需求。

1材料与方法1.1质粒样品携带禽流感病毒H5亚型、H7亚型、H9亚型HA2靶基因序列片段重组质粒pUC57-AIV-H579，浓度为104copies/μL 。

1.2禽流感病毒核酸样品禽流感病毒H5亚型核酸样品15份、禽流感病毒H7亚型核酸样品15份、禽流感病毒H9亚型核酸样品15份，禽流感病毒阴性核酸样本30份，由扬州大学禽流感病毒专业实验室分离、鉴定、保存和提供。

H9n2禽流感(avian2humaninfluenzaoravianinfluenzainman/human)是由一种禽流感病毒某些亚型毒株在人群中所引起的疾病,所表现的临床症状随病毒亚型不同而异。

至今已发现的甲型流感病毒血凝素15个亚型(H1～H15)和神经氨酸酶9个亚型(N1～N9)均能从禽中分离到,但它们并不是都能引起禽流感。

目前发现能感染人的禽流感病毒有:H5N1、H9N2、H7N7、H7N2和H7N3亚型毒株。

甲型流行性感冒（H9N2）是一种禽流感的病毒，近年来从鸭及鸡只身上分离出来，有研究表明H9N2病毒已经感染到了一些猪的身上。

H9N2病毒在人类身上发现比较罕见，是一种轻微的疾病。

虽然H9N2毒性较H5N1弱，但世界卫生组织早前警告，H9N2曾导致人类死亡，也可以是引发新一轮全球流感潮的元凶，同样需密切监察。

港大研究人员称，1957年及1968年的全球流感大爆发，是由较低致病性的H2N2及H3N2流感病毒引发，因此H9N2也有机会在人类大流传，故医学界及公众除了提防H5N1，也不能忽视H9N2的威胁。

H9病毒在亚洲普遍存在，由于毒性较低，对人类健康的威胁较低，但需提防H9与其他流感病毒的“洗牌”效应，制造新流感病毒的风险。

一、流行情况（一）动物间的感染1966年HoMee从患温和呼吸道病的火鸡中分离到第一株H9N2亚型禽流感病毒，之后H9N2亚型禽流感在世界范围内迅速流行，尤其是1994～1999年在世界范围内造成了巨大的经济损失。

1994年，我国的陈伯伦、张泽纪等首次报道从鸡群中分离到H9N3亚型禽流感，随后陆续出现相关报道。

1998年秋H9N2亚型禽流感在我国发生，短短2个月内即席卷了大多数省份，因其毒力较弱，死亡率没有H5N1、H7N1高，而没有引起足够的重视。

刘红旗等研究发现H9N2亚型在中国大陆形成了一个稳定的亚系，这不仅对养禽业有巨大危害，而且严重威胁人类健康。

并且，新的研究表明，H9N2亚型部分流行株的致病力明显变异，尤其对肉仔鸡，死亡率可达到30％以上；对产蛋高峰期的蛋鸡，其产蛋下降幅度大，恢复困难。

蛋鸡禽流感H9亚型病毒的综合防治作者：殷红萍陈泳来源：《兽医导刊》 2019年第4期禽流感可以分为高致病性禽流感和低致病性禽流感,高致病性禽流感得到大家的广泛重视,防疫工作做的也比较好,每年都做抗体效价测定,使鸡群的抗体保护都在70%以上。

H9 亚型禽流感病毒就属于低致病性和低致死率的亚型禽流感病毒,该亚型病毒在我区主要发生于蛋鸡,其不会造成蛋鸡的大批死亡,但影响蛋鸡的产蛋率,病死率也有所提高,给鸡场造成不小的经济损失,博乐市某一养殖场就出现了这种病情,造成蛋鸡产蛋率一直上不去,给养殖户造成较大的经济损失,经过综合防治,疫情得到有效控制,现就我区H9 亚型禽流感的发生情况和综合防治措施做一简单的介绍。

(一)基本情况第五师某团有一个以养殖蛋鸡为主的大型养殖场,饲养量10 ~ 20万只不等(根据市场行情确定养殖量),在前几年的养殖过程中,部分鸡群会出现临近产蛋期或产蛋高峰期的鸡群有呼吸道的病症,病鸡出现呼吸困难、甩头、精神不振、食欲减退,部分有腹泻的症状,与大肠杆菌感染类似。

产蛋高峰期的蛋鸡产蛋率下降,进入产蛋期的鸡则很难达到产蛋高峰,产蛋率一般比正常水平下降约20% 左右。

大部分鸡群没有比较明显的临床症状,主要表现就是产蛋率下降或鸡群难以达到正常的产蛋高峰期,鸡蛋的破损率提高,畸形蛋、软壳蛋增多,出现较多的大型蛋和小型蛋,蛋壳变薄,蛋壳颜色变浅,易破损。

通过调整饲料配比等方式也不能提高产蛋率。

(二)病理变化对发病死亡的鸡进行解剖,主要病理变化在生殖系统,打开腹腔后可见腹腔被灰白色、干酪样物质覆盖;肠道、输卵管及内脏器官粘连在一起;卵黄之间界限不清,相互粘连在一起,输卵管有充血、出血现象,剖解开后有大量分泌物,呈现干酪样或胶冻样;有的病死鸡肛门外有大量粪便粘连,解剖后肠道粘膜有出血点或出血斑;剖解腺胃有不同程度出血斑出现;有呼吸道症状的病死鸡解剖则出现气管粘膜出血;有的出现皮下、腹腔、心冠脂肪有出血点,病情严重的鸡整个心尖部分的心外膜严重出血,内脏各脏器有不同程度的出血,部分病鸡气管粘膜可见不同程度的充血和出血斑点。