2015-2016学年 3.2《体外受精和早期胚胎培养》课件

2.胚胎早期培养的条件
条件
实现手段
①无菌无毒 灭菌 加抗生素 定期更换培养液
②营养： 发育培养液
无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等+动物血清
③温度和pH 36.5±0.5℃ pH 7.2~7.4 合适的渗透压
④气体环境 95%空气(O2:用于细胞呼吸)，5%CO2调节pH(CO2培养箱)
早期胚胎的培养
1.胚胎早期培养的目的 精子与卵子在体外受精后，应将受精卵移入发育培养液中继续培养， 以检查受精情况和受精卵的发育能力。 2.胚胎早期培养的条件
同动物细胞培养条件基本相同，只是营养物质有所不同。 发育培养液：无机盐、有机盐、维生素、激素、氨基酸、核苷酸等+ 动物血清 （两盐、两素、两酸、一血清）
化学诱导法：将精子放在一定浓度的肝素或钙离子载体A23187溶液中， 用化学药物诱导精子获能。常用于牛、羊等家畜。
体外受精
5.卵母细胞的采集和培养 方法一：输卵管采卵(冲取卵子) 利用促性腺激素促使雌性动物排出更多的卵子，从输卵管中冲取卵子。
适合实验动物(兔、鼠)以及家畜猪、羊等。
获得的卵子可以直接与获能精子在体外受精吗？ 超数排卵
卵母细胞的采集 培养 成熟卵母细胞
精子的采集 获能处理
获能的精子
受精 受精卵
(1)卵母细胞的采集和培养 (2)精子的采集和获能 (3)受精
体外受精
4. 精子的采集和获能 （1）采集方法：假阴道法、手握法和电激法。 （2）精子的获能 培养法：将精子放入人工配制的获能液中使其获 能。常用于啮齿动物、家兔及猪等动物。
早期胚胎的培养 3.胚胎的去向 当胚胎发育到适宜的阶段时可进行受体移植或冷冻保存
胚胎冷冻保存的好处是使胚胎移植不受时 间和地点的限制，提高胚胎移植的效率。

不同动物胚胎移植时间不同
牛、羊：桑椹胚或囊胚阶段 小鼠、家兔：卵裂期或囊胚 阶段 试管婴儿：8个或16个细胞 阶段试管动物——利用精子、卵
子体外受精、胚胎培养、胚胎移植 获得的各种动物。
试管婴儿——利用精子、卵
子体外受精、胚胎培养、胚胎移植 获得的人体后代。
体外受精技术的应用：动物胚胎工厂 化生产，解决人类男性或女性不育 问题。
而出现许多人工“多胞胎”，这种技术带来的危害之一是 影响胎儿的健康发育、对孕妇的身体不利等 。 （2）在过程③中，当一个精子进入卵细胞后会激发卵子发生反应， 如透明带反应等，其意义是 防止多精入卵 。过程⑥涉及的技 术是 胚胎移。植
1999年4月23日晚9时，在广州中山医科大学第一附属医院出 生一健康女婴，她是我国首例第三代试管婴儿，父母身体健康、 婴儿的母亲7年前生下一男婴，孩子一岁后发病，最后死于脑出 血，5年后，她第二次怀孕6个月时，到医院抽羊水及脐带血诊断， 发现胎儿是男孩，而且是血友病患者，遂引产。夫妇二人最后来 到中山医科大学附属医院做试管婴儿。医生培养了7个可做活体 检查的胚胎，并抽取每个胚胎1－2个细胞进行检查后，选择了两 个胚胎进行移植。最后一个移植成功。根据资料回答下列问题：
5、下列有关胚胎工程的叙述，正确的是
A. “试管动物”的生殖方式属于无性生殖
C
B. 卵裂球时期每一个细胞的体积比受精卵大
C. 通过胚胎移植技术可充分发挥良种母畜的繁殖潜力
D. 对某一胚胎的干细胞移植，产生的动物中雄性和雌性
的概 率各占1/2
6、下列关于胚胎工程的叙述，正确的是（ B ）
A. 通过胚胎体外培养可直接获得新生儿 B. 超数排卵技术要使用一定的激素 C. 胚胎移植中的受体与供体必须都为优良品种 D. 受体母畜需要遗传性状优良的品种，供体母畜可用遗 传性状一般的品种

A、应用该技术繁育后代的过程属于无性繁殖类型
B、应用该技术繁育后代的过程属于有性繁殖类型 C、试管动物技术是利用体细胞繁育后代的技术
D、试管动物技术培育动物过程全部在体外进行
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2 、 哺乳动物体外受精的过程是 ①卵母细胞的采集 ②精子的采集
(B)
③卵母细胞的人工培养 ④精子的获能处理
⑤精子与成熟的卵子在受精溶液中共同培养
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课内小结
卵母细胞 的采集
方法一：用促性腺激素处理，使其超数排卵，从输卵 管中冲取卵子
方法二：从屠宰母畜卵巢中采集
方法三：直接从活体动物的卵巢中吸取卵母细胞
体外受精
精子的获 取
假阴道法 手握法
电刺激法 受精： 获能的精子 ＋培养成熟的卵子
完成受精
早期胚胎培养
条件： 受精卵在发育培养液中培养
3.2体外受精和早期胚胎培养
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1
目的：良种牛快速大量繁殖
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2
一、试管动物技术
♂♀
概念：
通过人工操作使
卵子和精子在体外 条件下成熟和受精， 并通过培养发育为 早期胚胎后，再经 过移植产生后代的 技术
精子采集 卵子采集 精子获能 卵子体外培养
体外受精 早期体外胚胎培养
本地牛（子宫）
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注意：卵子能直接与获能的精子在体外受精。
常用对象：实验动物如小鼠、兔，以及家畜猪、羊等
②刚屠宰母畜的卵巢中取卵或活体动物卵巢中取卵。
注意：要在体外经人工培养成熟后，才能与精子 结合完成受精。
常用对象：大家畜或大型动物，如牛等
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1、体外受精
⑵精子的采集和获能

⑵对受体的要求： ①同一物种的雌性动物
②与供体处于相同的生理状态
⑶实质：生产胚胎的供体和孕育胚胎的受体共
同繁殖后代的过程。
⑷地位：是胚胎工程的最后一道工序。 （供体：提供胚胎的个体；受体：接受胚胎的 个体；受体的条件：同种、生理状态相同)
胚胎移植的基本程序
（1）对供体、受体进行选择 供体： 遗传性能和生产性能 优秀的个体； 受体： 健康和正常繁殖能力 的个体 处理：同期发情 具体做法： 注射相关激素。
内任何一种组织细胞
3）在体外培养的条件下，ES细胞可以增殖而不发
生分化。对它可以进行冷冻保存，也可以进行遗
传改造。
3.干细胞分类
①全能干细胞：可分化为全身各种细胞，并
进一步形成机体的所有组织、器官等（胚胎
干细胞）
②多能干细胞：能分化为多种细胞或组织，
但不能发育成完整个体（如：造血干细胞）
③专能干细胞：只能分化为一种类型或功能
. .
• 能否直接从母体子宫内进行胚胎收集?为什么？ – 能。因为哺乳动物的早期胚胎形成后，在一 定时间内不会与母体子宫建立组织上的联系， 而是处于游离状态。
• 移植的胚胎能否保留供体双亲的特性? –胚胎虽然与受体有生理和组织上的联系, 但遗传特性不受受体的影响
. .
1.胚胎移植成功的标志是什么?
(2)培育出人造组织器官，用于器官移植
(3)是研究体外细胞分化的理想材料 ①ES细胞在饲养层细胞上，或在添加抑制因子 的培养液中，能维持不分化的状态；
②分化诱导因子：诱导ES细胞向不同类型的组
织细胞分化；如：牛黄酸、丁酰环腺苷酸等
实验：胚胎干细胞培养
1.培养关键：需要一种能促进胚胎干细胞的生 长大，但抑制其分化的一种培养体系。 2.培养过程：