实验一 氧化苦参碱的提取、 分离和鉴定

1 简述苦参碱、氧化苦参碱(苦参素)是苦豆子、苦参、广豆根等豆科槐属植物中生物碱的主要成份。

苦参碱(matrine)和氧化苦参碱(oxymatrine)化学分子式分别为C15H24N2O 和C 15H24N2O2,分子量分别为248 和264,是苦参型生物碱的主要活性成分,二者在一定条件下可以转化.2 苦参碱提取工艺2.1溶剂提取法苦参碱的溶剂提取法, 常用水、酸水及乙醇等作为提取溶媒, 提取方法多为浸渍、渗滚、煎煮、回流等经典方法。

孔令明等川从酸水回流提取、乙醇回流提取两大苦参总碱方法的对比中发现,乙醇回流法对苦参总碱的提取效果较好, 是一种目前较为合适的苦参总碱溶剂提取方法。

其最佳工艺参数为: 采用筛分目数20—60 目的苦参粉, 以60 % 的乙醇溶液, 料液比为1 : 2 , 回流提取2 次。

谭桂莲分别对水煎法、乙醇回流法和渗滤法提取氧化苦参碱工艺进行优选研究, 结果表明, 渗滤法所得浸提物中, 氧化苦参碱含量明显高于水煎法和乙醇回流法, 故认为渗滤法为氧化苦参碱的最佳提取方法。

2.2 离子交换法利用生物碱盐通过强酸型阳离子交换树脂柱, 使生物碱盐阳离子交换在树脂上, 而非生物碱化合物则流出柱外, 将交换后的树脂晾干, 用氨水碱化, 氯仿提取的原理。

高拴平等研究了离子交换法提取分离苦参碱的工艺和过程, 技术路线是:苦参粉→甲醇回流提取→回收溶剂→粗提物→稀硫酸溶解→脱脂→水层→除鞣→上D201型阳离子交换树脂※碱化树脂→氯仿提取→回收溶剂→脱水→丙酮→苦参碱结晶。

采用上述提取分离方法, 苦参碱的产率最高, 结晶质量最好。

张存莉等采用不同浓度的乙醇和阳离子交换树脂对苦参碱进行提取和纯化, 并对不同的苦参碱纯化工艺进行比较和研究。

结果表明, 用60%的乙醇进行提取和用阳离子交换树脂进行纯化的工艺过程生物碱收率较高, 生产成本较低, 工序较为简单, 有一定的进步性, 适宜工业化生产。

2.3 树脂吸附法吸附树脂是近10年来发展起来的一类有机高分子聚合物, 它具有物理化学稳定性高、吸附选择性独特、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和, 使用周期长、宜于构成闭路循环, 节省费用等诸多优点。

实验三苦参生物碱的提取与鉴识背景1.1苦参的化学成分苦参,又名苦骨(见《本草纲目》川)、川参(见《贵州民间方药集》、凤凰爪(见翌广西中兽医药植))、牛参(见《湖南药物志》),陶宏景谓:“叶极似槐叶,花黄色,子作荚,根味至苦恶。

”李时珍谓:“苦以味名,参以功名。

”lz]始载于((神农本草经》,列为中品。

为豆科(Leg姗z'n 口sae)植物苦参(￡叩加rafla。

escensAz't.)的干燥根。

分布于我国南北各地Is],春秋两季采挖,除去根头及小支根,洗净,干燥、或趁鲜切片,干燥。

苦参性味苦寒,归心、肝、胃、大肠、膀肤经。

功能清热燥湿、祛风杀虫、利尿通淋。

用于热痢、便血、黄疽尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、湿疮、皮肤癌痒、疥癣麻风等诸多病症。

苦参中含有多种有效成分,目前已知的主要有生物碱类、黄酮类、挥发油类化合物,还含有少量醒类、皂试类及氨基酸等其它化合物。

下面分别介绍各类化合物的主要成分。

1.LI生物碱国内外学者从苦参根、苦参茎和叶及其花【4一l0]中共分离出26种生物碱。

苦参生物碱大多数是哇诺里西咤类(quinolizidine一type),极少数为双呱陡类(dipiperidine--tyPe)。

喳诺里西陡生物碱多数为苦参碱型生物碱,另有两种金雀花碱型(eytisine一type)生物碱,两种无叶豆碱型(Sparteine一type)生物碱,一种羽扇豆碱型(lupinine一type)生物碱。

包括苦参碱(matrine),氧化苦参碱(oxymatrine),槐果碱(sophoearpine)、氧化槐果碱(N一oxysophoearpine)、异槐果碱(isosoph。

Carpine)、异苦参碱(isomatrine)、7,11一去氢苦参碱(7,11一dehydromatrine)、槐胺碱(Sophoramine)、异槐胺碱(isosophoramine)、新槐胺碱(neosophoramine)、■'3一去氢槐胺碱(■`3一dehydrosophoramine)、■`一去氢槐胺碱(■7-dehydrosophoramine)、槐醇(sophoranol),9。

中药苦参是豆科植物苦参(Sophors Flavescens Ait)的干燥根,味苦,性寒,有清热燥湿,杀虫等作用.临床上用于治疗痢病,黄胆和皮肤瘙痒症.近年还发现具有抗肿瘤,升白,抗病毒性肝炎等药理作用,苦参中主要含生物碱,此外还有黄铜类成分.一, 苦参中主要已知生物碱的结构和性质1.氧化苦参碱（oxymarrine）C12H24N2O2，白色棱晶，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，不溶于乙醚，苯。

溶点：207～208℃（不含结晶水）162～163℃（含一个结晶水）77～78℃（含多个结晶水）结晶水可在145～150℃／0。

002mmHg下除去，可于许多金属离子如Fe2＋ Cu2+ Cr3+等生成沉淀，［α］？？＋47.7℃(乙醇).2.苦参碱(matrine)C15H24N2O在轻石油醚中结晶时，由于温度等条件不同，可以得到αβδ三种结晶（溶点分别为76℃ 87℃ 84℃）和一种流体即γ型。

通常室温下结晶得到的是α型，易溶于水，甲醇，乙醇，氯仿，溶于苯，在乙醚中溶解度小。

［α］？？＋39.11[乙醇]3.脱氢苦参碱(槐果碱)（sophocarpine）C15H24N2O白色棱晶。

溶点80～81℃，易溶于甲醇乙醇氯仿，略溶于苯和乙醚，在水中溶解度小。

［α］？-29.44(乙醇)4.槐定(sophoridine)C15H24N2O白色棱晶，溶点106～108℃，为苦参碱的一种空间异构体。

二．实验目的与要求（1）通过苦参生物碱的提取掌握用渗滤法和离子交换法提取生物碱的方法。

（2）掌握沙氏提取器的使用方法。

（3）掌握氧化铝吸附薄层层离法和柱层层离法鉴定和分离生物碱的方法。

三．原理氧化苦参碱为喹诺里西汀类生物碱，叔胺氮氧化合物与酸成盐溶于水与非生物碱分开，提取的生物碱盐的阳离子部分与H+型树脂发生交换生物碱吸附在柱上，吸附有生物碱的树脂，碱化呈游离生物碱，可被氯仿等有机溶剂提取。

R-SO3-Na+ ＋ H+CL- ――>R-SO3-H+ + NaCLSO3Na + H2O生物碱四. 实验方法.1 酸水提取和离子交换（1）渗漉法取苦参碱400克,加入适量0.5%(g/v)的盐酸湿润后放置一小时，装入渗滤液的PH值及生物碱反应，使渗滤液通过离子交换脂柱，待经过树脂柱的滤液生物碱反应或微弱的反应时，停止交换，将树脂倒入烧杯中，酮蒸馏水洗涤几次，滤干，树脂放入搪瓷盘中自然晾干。

苦参生物碱的提取分离流程苦参生物碱的提取分离可有意思啦！咱先来说说苦参生物碱为啥要提取分离呢。

苦参啊，它里面含有的生物碱有好多厉害的作用。

这些生物碱可能在医药呀，或者其他一些科研领域有着特殊的价值。

比如说可能对某些疾病有治疗的潜力之类的。

那怎么把这些生物碱从苦参里弄出来呢？这就涉及到提取的过程啦。

有一种方法呢，是溶剂提取法。

就像是把苦参当成一个宝藏盒子，我们要用合适的溶剂这个钥匙去打开它，把生物碱取出来。

一般会选择乙醇这类溶剂，把苦参放进去浸泡一段时间。

这个浸泡就像是给苦参泡个舒服的澡，让生物碱慢慢地从苦参里跑到溶剂里面。

浸泡的时间得合适，太短了生物碱还没来得及出来，太长了可能又会有其他杂质跟着跑出来了。

还有就是超声提取法。

这个就更酷啦！超声就像是给苦参做了个按摩，在超声的震动下，苦参生物碱就会比较快地从苦参里被“震”到溶剂里。

这种方法速度比较快，而且相对来说提取的效率还挺高的呢。

提取出来之后，可不能就这么直接用呀，因为里面还有好多其他的东西混着呢，这就需要分离了。

分离的时候呢，可以用色谱法。

想象一下色谱法就像是一场比赛，不同的生物碱就像是不同的选手，它们在这个特殊的赛道（色谱柱）上奔跑，因为它们各自的性质不同，所以跑的速度就不一样，这样就可以把它们一个一个地分开啦。

比如说有的生物碱极性大，有的极性小，根据这个极性的差别，就能把它们很好地分开。

还有一种是利用生物碱的酸碱性来分离。

有的生物碱是碱性的，我们就可以用酸把它变成盐，然后再利用盐的性质把它和其他物质分开。

这就像是给生物碱穿上了一件特殊的衣服（变成盐），让它变得和其他东西不一样，这样就容易分开了。

在整个提取分离的过程中啊，有好多小细节得注意。

比如说温度呀，温度不合适的话，可能会影响生物碱的稳定性，它要是不稳定了，就可能在提取分离的过程中被破坏掉了。

还有就是提取和分离过程中的设备要干净卫生，要是有其他的脏东西混进去，那可就前功尽弃了。

苦参生物碱的提取分离虽然有点复杂，但就像探索一个神秘的小世界一样，每一步都充满了惊喜和挑战呢。

一种从苦参总碱中分离苦参碱和氧化苦参
碱的方法
从苦参总碱中分离苦参碱和氧化苦参碱的方法可以采用以下步骤：
1.将苦参总碱溶于乙醇中，并加入氢氧化钠溶液，使其成为碱性溶液。

2.将混合物转移到分液漏斗中，并加入适量乙醚，轻轻摇晃混合物，使其充分混合。

3.等待混合物分层，将上层的乙醚层收集到干燥的锥形瓶中。

4.将收集到的乙醚层蒸馏干燥，得到苦参碱。

5.将下层的碱性水层转移至蒸馏瓶中，并加入过量的氧化银粉，轻轻搅拌，使其充分反应。

6.将反应液中的氧化银过滤并洗涤，得到氧化苦参碱。

通过以上方法，就可以从苦参总碱中分离出苦参碱和氧化苦参碱。

需要注意的是，在实验操作中应注意安全，避免接触刺激性物质或产生有毒有害气体。

一种苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的薄层色谱鉴
别法
薄层色谱法是一种常用的中药材鉴别方法，可以用于苦参药材中苦参碱和氧化苦参碱的鉴别。

以下是该方法的步骤：
1. 准备样品：从苦参药材中取出适量样品，研磨成细粉。

2. 制备供试品溶液：取一定量的苦参药材粉末，加入适量的乙醇，超声提取30分钟，过滤得到供试品溶液。

3. 制备对照品溶液：取一定量的苦参碱和氧化苦参碱对照品，加入适量的乙醇，超声提取30分钟，过滤得到对照品溶液。

4. 点样：将供试品溶液和对照品溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，用展开剂展开。

5. 观察结果：取出薄层板，晾干后用碘化钾-碘液显色，观察是否有明显的色斑出现。

如果有，则说明样品中含有苦参碱和氧化苦参碱。

需要注意的是，在进行薄层色谱法鉴别时，要选择合适的展开剂和显色剂，以确保结果的准确性和可靠性。

同时，还需要注意实验条件的控制，如温度、湿度等，以避免影响实验结果。

实验一 氧化苦参碱的提取分离和鉴定一．实验目的与要求1. 掌握渗漉法的原理、操作与影响因素，了解离子交换树脂的结构、性质及使用方法。

2. 掌握连续回流提取法的原理、特点及仪器的使用方法。

3. 学习粗提物的纯化方法，学会分析纯化过程中所应用的原理。

4. 进一步理解对粗品进行检识的意义及方法。

5. 学习制备性薄层色谱及闪柱色谱的操作，了解色谱条件的选择方法及影响分离度的因素。

二．实验方法（一）概述中药苦参是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait)的干燥根，有清热燥湿、杀虫、利尿之功效。

苦参在临床上用于杀虫、治疗痢疾、肝炎、荨麻疹、湿疹、气管炎等。

药理实验证明苦参总生物碱有抗心律失常及抗癌活性等。

苦参中主要含生物碱和黄酮类成分。

苦参中主要生物碱有：苦参碱(1)、氧化苦参碱(2)、槐定(3)、槐果碱(4)，结构如图1。

氧化苦参碱有抗癌、抗衰老等作用。

氧化苦参碱13C-NMR 数据：68.7(C-2), 17.0(C-3), 25.9(C-4), 34.3(C-5), 66.6(C-6), 42.4(C-7), 24.4(C-8), 17.0(C-9), 69.1(C-10), 52.8(C-11), 28.3(C-12), 18.5(C-13), 32.7(C-14), 169.8(C-15),41.6(C-17)。

苦参碱 氧化苦参碱 槐定 槐果碱表11-1 主要苦参生物碱的理化性质N N O中英名称分子式性状mp(℃) 旋光溶解度苦参碱(matrine) C15H24N2O白色针状结晶76 +39.11°易溶于醇、氯仿，溶于乙醚、苯，难溶于水氧化苦参碱(oxymatrine) C15H24N2O2白色方晶207-208 +47.7°易溶于水、乙醇、甲醇、氯仿，不溶于乙醚、苯槐定(sophoridine)C15H24N2O 白色棱晶106-108槐果碱(sophocarpine)C15H22N2O 白色棱晶80-81 -29.44°同上从苦参中提取生物碱一般用水、酸水或醇提法，粗提物用树脂法或酸碱法纯化，分离方法多用氧化铝或硅胶柱层色谱。

苦参生物碱的提取与分离张婷婷制药2班101310402290 引言苦参又名苦骨、川参、凤凰爪、牛参、地槐、野槐等，为豆科多年生落叶亚灌木植物舌参根，采挖后去芦头及须根晒干切片入药，全国各地均产，功能主要为清热、燥湿、杀虫等，主治热毒血痢、肠风下血、黄疸、赤白带下、小儿肺炎、急性扁桃体炎等多种炎症和痔漏、疥癞恶疮、皮肤瘙痒、阴疮湿痒等疾病研究得知，苦参的根含有多种生物碱，如氧化苦参碱、羟基苦参碱、甲基野靛碱、臭豆碱、赝靛叶碱、脱氢苦参碱（槐果碱）等多种生物碱及黄酮类化合物因为苦参碱具有多方面的药理作用，如抗肿瘤作用、抗癌作用、抗病毒作用，所以对苦参总碱的提取与分离具有重要的意义苦参总碱的提取方法相对较多，本文中主要侧重论述苦参提取水煎法。

1 苦参碱以及其化学结构1.1 苦参碱的基本性质苦参碱系指从豆科植物苦参、苦豆子、山豆根中分离出来的生物碱，是上述3种传统中草的主要活性成分之一，是苦参类生物碱的代表.《中国药典》2010年版一部中，是以苦参碱的含量作为苦参药材的质量控制指标［1］；2005年版一部中，苦参碱的含量也是苦参药材的质量控制指标之一.1.2 苦参碱的化学结构苦参碱是白金雀儿碱的异构体，属于喹喏里西啶类衍生物，由2个喹喏里西啶环骈合而成，有2个氮原子，一个是叔胺氮，一个是酰胺氮，其分子式为C15H24N2O,分子量为245.37.苦参碱有4种形态：α-苦参碱为针状或柱状结晶，熔点为760C;β-苦参碱为斜方晶状，熔点为870 C; γ-苦参碱为液体，沸点为2230Cδ-苦参碱是柱状结晶，熔点为840 常用的是α-苦参碱,其结构见图1.苦参碱能溶于水、苯、氯仿、甲醇、乙醇，微溶于石油醚。

图一α-苦参生物碱的结构图[2]2. 苦参类生物碱的药理作用近年来发现苦参碱类生物碱在保护中枢神经系统和心血统、抗病毒、抗炎、免疫抑制及抗肿瘤等方面有重要的药理活性和应用前途［4］.2.1 苦参碱的抗肿瘤作用苦参碱类药物对于多种实验性肿瘤均有抑制作用，且多为移植性实体瘤. 苦参碱和氧化苦参碱同是苦参中抗癌有效成分，对癌细胞有直接杀伤作用. 电镜观察可见肿瘤细胞分裂呈中等抑制，瘤细胞膜和细胞质有明显改变. 此外，苦参碱类药物具有毒性低、无抑制骨髓和机体免疫功能的优点. 动物实验表明，氧化苦参碱对S -180有显著抑制作用. 日本报道它对 S -180 的治疗指数比丝霉素的治疗指数大7至8倍，临床效果类似于苦参碱. 另有发现：苦参碱对P815肿瘤细胞亦有直接毒性作用，能降低P815细胞的3H- Td R 掺入值，这从机制上可能说明苦参碱是一种直接细胞代谢抑制剂.2.1.1 对肝癌细胞的作用一定浓度的苦参碱对HepG2细胞的增生有抑制作用[5]，主要为直接杀伤作用，从而影响了HepG2细胞的代谢，使AFP 和PCN 分裂指数降低，恶性表型消失，肿瘤细胞恶性程度和侵袭力减弱，这说明苦参碱可能成为很好的抗癌药物2.1.2 对胃癌细胞的作用苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用，且在一定剂量和时间范围内呈明显的量效和时效关系, 低分化的胃癌细胞 AGT 对苦参碱更为敏感, 苦参碱对胃癌细胞株的外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关, 将苦参碱作用于胃腺癌细胞SGC-7901 48h后，胃癌细胞Bcl-2表达量显著下降,可以推断出苦参碱对胃癌细胞凋亡的诱导作用可能与其影响Bcl-2的表达有关.2.1.3 对肺癌细胞的作用实验表明，三参冲剂（主要成分为苦参碱和川芎嗪）对肿瘤细胞与内皮细胞的粘附因子有明显抑制作用，并可明显抑制CD44和CD49粘附因子的表达，从而抑制肿瘤细胞与内皮细胞的粘附，还可减轻内皮细胞的通透性，保护内皮细胞的完整性，阻断了肿瘤细胞与基质的粘附，从而减少了肿瘤转移的形成. 这主要是因为三参冲剂对Tiam-l 基因具有一定调控作用.2.2 对中枢神经系统的作用研究发现氧化苦参碱、苦参碱等具有解热镇痛等中枢抑制性作用. 氧化苦参碱能明显抑制小鼠的自主活动，与水合氯醛等中枢抑制剂有协同作用，而对苯丙胺等中枢兴奋剂则有拮抗作用.苦参碱、氧化苦参碱对化学刺激和热刺激所致小鼠的疼痛反应均有明显抑制作用. 苦参碱腹腔注射或口服均能抑制酵母菌致小鼠直肠升温作用，而此作用不能被阿托品和羟甲丙基麦角酰胺所拮抗，但可被多巴胺受体拮抗剂氟哌啶醇完全拮抗. 观察并推测苦参碱的解热功能除了对产热过程的直接作用外，还具有多巴胺能样活性.2.3 对心血管系统的作用大量研究表明，苦参碱在强心和抗心率失常方面有显著的作用. 苦参碱和氧化苦参碱均能对抗乌头碱、哇巴因、氯仿- 肾上腺素、氯化钡及冠脉结扎等诱发的动物实验性心率失常，且多为室性心率失常，并且均呈剂量依赖性的正性肌力作用. 实验证明，这几种生物碱都可显著增强离体豚鼠右心室乳头状肌收缩力. 苦参碱作为潜在的强心药，一般同时具有增强心肌收缩力、减慢心率和拮抗心率失常的有益作用. 目前临床试用苦参碱和氧化苦参碱，发现对室性期前收缩、频发性期前收缩及阵发性心动过速效果较佳，这说明苦参碱类生物碱在强心和抗心率失常方面有着广阔的前景.2.4 抗病毒、抗炎作用2.4.1 在治疗乙型肝炎中的应用中药苦参碱治疗肝炎在《本草纲目》中已有记载. 中医认为，苦参碱性寒味苦，具有清热利湿、退黄利尿、消炎解毒等作用，可治疗多种疾病. 基础实验和临床研究表明，苦参碱具有多方面的药理作用及临床功能：①抑制胶原纤维增生而具有抗纤维化作用，这可能与其阻断PDGF（血小板源生长因子）和TGF-β1（转化生长因子β1）的作用，抑制储脂细胞增生和胶原合成有关［6］，苦参碱能够保护肝细胞，尤其是膜性结构，降低丙氨酸氨基转移酶、透明质酸、层黏蛋白水平，还可增加胆汁回流，消退黄疸；②抑制网状内皮系统吞噬功能，具有免疫调控作用. 苦参碱有免疫抑制活性，可抑制巨噬细胞胞浆、胞膜的PKC（蛋白激酶c）的活性，有可能成为一种有效的PKC 抑制剂. 实验证明苦参碱体内外均可抑制TNF 和IL-6的分泌，这可能与其抑制PKC 活性有关. 由于TNF 是肝脏炎症损伤中的重要介质，而对于LPS （细菌脂多糖）诱导的小鼠血清及培养的大鼠库普弗细胞的TNF 和IL-6升高，苦参碱都有抑制作用，这有可能是其消除肝脏炎症的机制之一. 苦参碱不仅有抗炎、抗肝损伤、改善肝脏微循环、促进肝细胞再生的作用，还有助于胆红素的摄取结合与排泄，起到降酶、退黄作用，并有抑制乙肝病毒复制和免疫抑制作用20世纪80年代以来干扰素被公认为有效的抗病毒药物，但其病毒学指标中HbeAG 率约40％, 且停药后易复发. 干扰素主要通过与靶细胞膜上特异受体结合诱导靶细胞产生抗病毒蛋白，从而破坏病毒的mRNA ，抑制病毒复制，但其免疫调节作用弱. 而慢性乙型肝炎患者普遍存在免疫紊乱的情况，不利于乙型肝炎病毒的最终清除. 苦参碱注射液能提高机体免疫力，有清热利湿、利尿退黄、解毒功能，能改善病理性肝炎症状与体征. 干扰素加苦参碱注射液治疗慢性乙型肝炎能起到互补协同作用，能明显提高干扰素的治疗效果，临床无不良反应，值得推广应用. 2.4.2 在治疗病毒型心肌炎中的应用陈曙霞等发现苦参碱具有独特的抗柯萨基B 组病毒（CVB）的显著作用，体内外实验均证实病毒性心肌炎模型小鼠经苦参碱治疗后存活期明显延长，有的完全治愈，心、肝组织无病变发生，脾脏T 淋巴细胞亚群及NK 细胞活性亦改变.提示苦参碱能抑制LWB 繁殖，而且尚有免疫调节功能［8］. 实验和临床证明苦参碱类生物碱还有多种抗炎作用，其机制不详. 已有临床应用苦参碱静脉滴注治疗病毒性心肌炎的报道.3 苦参碱的提取与分离3.1 传统煎煮法对苦参的提取在苦参中苦参总碱或苦参碱及氧化苦参碱的提取方法中较为常用的有溶剂提取法和离子交换法. 笔者在实验中首先采用了传统的煎煮法：将中药苦参粗粉置适宜煎煮器中，加适量水浸没原料，充分浸泡后加热至沸，保持微沸浸出一定时间. 此法较简便，而且经煎煮后，药中的大部分成分可被不同程度地提出，因此是提取有效成分特别是药物制剂的基本方法.3.1.1 实验仪器包括电子天平、旋转蒸发器、电炉、磁力搅拌器、超声波振荡器等.3.1.2 材料苦参（购于中药市场，批号：20050715）、乙醇（AR）、乙酸乙酯（AR）、HCL（AR）、氯仿（AR）、NaOH 、大孔吸附树脂、硅胶G 、纤维素钠、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.1.3 苦参提取水煎法首先用植物粉碎机粉碎苦参，并称取苦参粉100g加水1000ml 用电炉煮沸，煎煮1.5h，过滤收集药液. 再加水800ml电炉煮沸煎煮1h，过滤收集药液. 第3次加水600ml电炉煮沸，煎煮30min,过滤收集药液. 弃药渣合并三次药液，用纱布过滤冷却，并于3 000r/ min 离心5min，得上清液，于40C 冰箱冷藏备用. 旋转蒸发仪浓缩药液至50ml左右, 并过大孔吸附树脂（5ml/min）洗脱分离，得流出液，用80%的乙醇对大孔吸附树脂进行洗（2ml/min）再将流出液与洗脱液分别用氯仿、乙酸乙酯溶液萃取3次（8h次），用硅胶薄层层析，经显色鉴定表明流出液含有黄酮、洗脱液含有生物碱. 然后再用荧光显色鉴定，并与标准品对照，发现洗脱液中得到的生物碱至少含有3种.3.1.4 苦参碱的分离方法(1)准备吸附柱. ①取20AB-8树脂用清水浸泡15min;②取中小型柱子，洗净干燥，填入玻璃纤维；③将浸泡好的树脂与水一起转入柱子内，打开阀门排出多余水分；④用80%乙醇、5%盐酸溶液浸泡树脂过夜，再排出. 再第二次将上诉溶液加入柱子，浸泡4h. ⑤用清水洗净，直到洗后溶液PH 值为5为止；⑥用蒸馏水浸泡待用.2）薄层层析. ①将5g羧甲基纤维素钠加入100ml水溶解煮沸. ②将上诉溶液与硅胶G 以3：1的体积比调匀，并于1050C 下干燥40min. ③取一个载玻片，将干燥后的稠状液体均匀涂抹于上面, 干燥待用. ④在制备好的薄层上画一条基线，于中心点样药品原液数次. ⑤生物碱的展开剂为三氯甲烷、甲醇、氨水混合液，其中三氯甲烷：甲醇：氨水=5滴：0.6滴：6滴；对黄酮的展开剂为三氯甲烷和甲醇混合液，三氯甲烷：甲醇=8.5滴：1.5滴. ⑥用碘化铋钾对生物碱显色，发现有3个有色斑点. ⑦用5%三氯化铁对黄酮显色，发现没有有色斑点.3）让原药液流过吸附柱（速度为5ml/min），再用80%乙醇洗脱（速度为5ml/min），得到2部分溶液（流出液、洗脱液）. 分别对这2部分进行薄层层析，发现都有生物碱的存在. 说明生物碱在树脂上的吸附效果不好，准备调整PH 值及树脂进行再次吸附.4）用旋转蒸发仪对洗脱液进行浓缩，再用氯仿、乙酸乙酯分别进行萃取，得2部分溶液. 再对2部分溶液进行薄层层析，发现氯仿萃取的部分有生物碱的存在，而乙酸乙酯萃取的部分其中虽然有物质的存在，但是既不是黄酮也不是生物碱，需要进一步鉴定分析.3.2 酸水回流法提取苦参碱酸水回流法也是常用于苦参中苦参碱的提取方法，本次实验中采用了HCL 无机酸作为提取剂，用于对比传统煎煮法实验. 3.2.1 仪器包括METTL ERAE 240电子天平、RICA 旋转蒸发器、EYELA COOLACE CCA-1100冷凝水循环装置、Waters 2695高效液相色谱仪3.2.2 材料苦参（购于重庆中药饮片厂）、乙醇（AR）、甲醇（HPLC）、乙腈（HPLC）、氯仿（AR）、HCL（AR）、NaOH 、苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0413-200506）、氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0402-200506）3.2.3 标准曲线的制作精密称取苦参碱对照品，以无水乙醇溶解，配制成含苦参碱0.492mg/ml 的溶液作为对照品溶液% 分别取1，5，9，13，15u以HPLC 测定峰面积［9］，每样进2针取平均值，色谱条件为：Xterra RP185um4.6x150mm柱，柱温200C，0.8ml/min,220nm,甲醇:水:三乙胺=480:520:0.4以峰面积为纵坐标，苦参碱量（)=）为横坐标，得回归方程：y=-34970.14999+1277796.646x；r=0.9999即苦参碱量在0.492到7.380ug范围内呈现良好的线性关系.3.2.4 酸水回流法提取苦参总碱选用L934,设计实验. 取苦参粉10g,按表1正交试验安排进行提取，以苦参碱得率为指标衡量提取效果. 试验流程如下：工艺液回流提取→ HCL 水溶合并回流溶液→过滤→滤液用10%NaOH调节，使PH 值为10到11 →过滤→滤液浓缩至小体积→以氯仿进行4段萃取（氯仿用量分别为用量体积的1倍、1/2倍、1/2倍、1/2倍）→合并氯仿层→蒸干→无水乙醇定容至25ml→测定苦参碱得率.4 未来展望近年来有关苦参类生物碱的药理研究工作已取得了很大进展，而临床上主要用于治疗肝炎的居多，对其他方面疾病的应用基本上还处于试验阶段. 在药物来源方面，我国以提取或提取后还原转化制备的工艺最为成熟，而合成方面虽然也有研究，但合成成本较高. 出于资源保护和经济效益考虑，由于中草药提取液苦参碱含量低，分离提纯麻烦，通过人工化学合成这类生物碱及其衍生物是非常必要的.参考文献：[1] 中华人民共和国国家药典委员会. 中国药典（Ι部）[M]北京：化学工业出版社，2000.[2] 刘文雅，刘汉清. 苦参碱的药理研究进展［J］. 中华实用中医杂志，2006（4）：473-475.[3] 刘北忠，蒋纪恺. 苦参碱与人类红血病细胞株K 562的结构特征研究［C］// 第五届西南三省一市生化学术会论文文集. 成都：［出版社不详］，1997.[4] 李弟，潘显道. 苦参碱类生物碱研究进展［J］. 医学研究通讯，2000(1)65-66.[5] 司维柯，肖元. 苦参碱对人肝癌细胞HepG2的形态影响和相关增殖因素的变化［J］. 第三军医大学学报，2000，22（6），[6] 张俊平，张珉. 苦参碱体内外抗大鼠肝纤维化的作用［J］.中国药理学报，2001,22(2),186.[7] 林文，张俊平. 苦参碱对细菌脂多糖诱导大鼠枯否细胞释放肿瘤坏死因子及白细胞介素-6的影响［J］. 药学报,1997,32(2): 186.[8] 陈曙霞. 苦参抗柯萨基B 组病毒的初步研究［J］. 上海第二医科大学学报，1991,11(2):140-142.。

苦参的提取纯化工艺研究实习生：药学院 07中药高顼指导老师：徐丽华摘要目的：通过大孔树脂分离纯化苦参中生物碱类成分（氧化苦参碱为主）的过程中树脂的筛选、吸附洗脱工艺的研究，确定提取分离纯化苦参中氧化苦参碱的工艺路线。

方法：采用正交试验和大孔树脂分离法对从苦参药材中提取氧化苦参碱的提取分离工艺进行研究。

结果：氧化苦参碱提取率85%左右，树脂柱的转移率在80%以上。

结论：14+12倍量的40% 乙醇回流提取1.5+1.5小时，为苦参的最适宜的提取方法，300g药材量上柱（对应600ml 的B大孔树脂）、pH 7、80% 乙醇洗脱氧化苦参碱的转移率最高、除杂率也很高，适合氧化苦参碱的分离纯化。

关键词：苦参；氧化苦参碱；大孔树脂；提取分离纯化AbstractPurpose：The research of Selection of resin 、Adsorption、Elution from the process of purification Alkaloids（based oxymatrine ）in flavescens by macroporous resin to determine the extraction and purification process oxymatrine line. Methods:By the way of orthogonal and macroporous resin separation Extracted from Sophora flavescens extraction process oxymatrine study.Results:Extraction rate of oxymatrine is about 85%, resin transfer rate is 80% or more. Conclusion: 14+12 times 40% ethanol refluxing 1.5+1.5 hour is the most suitable method for the extraction of Oxymatrine, 300g quantity column medicine (Corresponding 600mL B Macroporous resin )、pH7、80%Ethanol Elution Elution The maximum transfer rate, purification for oxymatrine.Keywords: Flavescens;Oxymatrine;Macroporous resin;Extraction and purification前言1 简介氧化苦参碱又名苦参素。

多叶越南槐中苦参碱与氧化苦参碱的分离鉴定及含量测定研究摘要：本文建立的检测方法，氧化苦参碱与苦参碱的定量限都是2.0ug/kg,检出限都是1.0ug/kg；氧化苦参碱回收率均为RSD=1.19%（99.8%），苦参碱回收率为RSD=0.76%（100.2%）。

表明该方法快速、简便，检出限、正确度、精密度等参数可以满足相关技术要求，在多叶越南槐氧化苦参碱、苦参碱含量测定中具有良好适用性，可以推广应用。

关键词：多叶越南槐；苦参碱；氧化苦参碱；含量测定前言：现阶段，氧化苦参碱、苦参碱检测方法涵盖滴定法、气相色谱法、比色法以及薄层色谱法等。

这些方法部分是针对生物检样、氧化苦参碱制品以及苦参碱制品，部分方法是针对植物产品，样品的前处理工作非常复杂，需要投入大量时间进行处理，不具备良好重复性，会对检测周期产生影响。

所以，研究氧化苦参碱以及苦参碱含量测定方法具有重要作用[1]。

1材料以及方法1.1试验仪器Thermo TSQ Quantan Access质谱仪，同时配备Finnigen Surveyor自动进样器与ESI电喷雾离子源。

梅特勒公司生产的XPE205天平，其感量为0.01mg。

右一仪器公司生产的DS-捣碎机。

Sigma公司生产的冷冻离心机。

新芝生物科技公司生产的SB-1000YDTA清洗机。

1.2耗材与试剂乙醇、乙腈都是色谱纯，由Merck公司制造。

氯化钠、三氯甲烷以及氨水都是分析纯，由国药集团制造。

选择Milli-Q高纯水作为实验用水，由Millipore公司制造。

石墨化炭黑，由GCB公司制造。

N-丙基乙二胺粉末，由PSA公司制造。

多叶越南槐主要采于广西各个县市，氧化苦参碱与苦参碱的对照品主要通过多叶越南槐进行提取分析。

2 方法2.1提取分离粉碎多叶越南槐，变为粗粉，之后称取9.0kg粗粉，只有将95%乙醇加入到粗粉中，进行连续回流处理，提取次数为4次，1次持续2h，滤液合并，对乙醇进行回收，同时浓缩到无纯味，获得浸膏，将适量实验水加入到浸膏中，让混悬能够均匀分散，添加硫酸将其PH值调整至3，采用氯仿萃取，备用液选择碳酸钾与酸水混悬液，PH值为11。

氧化苦参碱提取工艺的研究采用单因素试验和正交试验对从苦参药材中提取氧化苦参碱的工艺进行了研究。

试验结果表明，最适提取溶剂为乙醇溶液，最佳提取条件为：溶剂乙醇浓度为60％、料液比为1:30、温度为80℃、时间为85min，在此条件下提取氧化苦参碱得率达到6.58 mg·g－1，较优化前提高了2.8倍。

标签：苦参；氧化苦参碱；提取工艺苦参又名地槐、野槐、牛参等，为豆科槐属植物(Sophoraflavescens Ait)的干燥根，主产于我国山西、河南、河北及西北各省Ⅲ。

苦参含有多种生物碱，氧化苦参碱是其中的主要有效药用成分。

现代药理研究表明，氧化苦参碱具有抗炎、保肝、抗肿瘤、抗心律失常和免疫调节等功能。

近年来有关苦参生物碱提取的研究报道多数集中在其分析检测上，所采用的提取方法多为分析检测其含量时的前处理方法，存在着工艺路线长、步骤多、效率低、能耗物耗高等问题，缺少生产应用价值。

本研究采用单因素试验和正交试验探讨了溶剂种类、溶剂浓度、料液比、提取温度和时间对氧化苦参碱提取得率的影响，以期确定其最佳提取条件，为实际生产提供理论依据。

1仪器与材料1.1仪器UV-2000紫外可见分光光度计(尤尼柯上海仪器有限公司)，BS110S电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)，PHS-3C酸度计(上海精密科学仪器有限公司)，R201D-Ⅱ旋转蒸发仪(上海申顺生物科技有限公司)，SHB-3循环水多用真空泵(郑州杜甫仪器厂)，JY96－Ⅱ超声波仪(宁波海曙祥鑫科教仪器有限公司)，DZKW-4恒温水浴锅(北京中兴仪器厂)，回流提取装置(自制)。

1.2材料氧化苦参碱对照标准品，中国药品生物制品检定所；苦参购自南阳市张仲景中药材市场；硅胶G预制板，山东省青岛海洋化工厂；乙醇、甲醇、三氯甲烷、氨水、氢氧化钠、磷酸二氢钾、碘、溴麝香草酚蓝等均为分析纯。

2方法与结果2.1标准曲线的绘制2.1.1标准品溶液的配制精密称取干燥至恒重的氧化苦参碱标准品，以无水乙醇溶解，配制成每1mL含2.5mg的标准品溶液。

新疆苦豆子有效成分氧化苦参碱的提取分离及初步鉴定研究木合布力·阿布力孜;郭炬亮;夏福鼎·艾尔肯;吐尔孙阿衣·克力木【期刊名称】《新疆医科大学学报》【年(卷),期】2010(33)11【摘要】目的从维药苦豆子中提取分离及纯化得到氧化苦参碱,并进行初步鉴定.方法利用乙醇回流提取法和乙醇超声提取法制备氧化苦参碱粗品,利用大孔吸附树脂法分离纯化,并对制备工艺进行优化.结果乙醇回流提取的实验条件为:乙醇浓度60%,料液比(g/mL)1:15,提取时间6h.侵提温度60℃;乙醇超声提取时,乙醇浓度65%,超声提取频率28 MHz,提取时间20 min.此两种方法的提取效果较好.两种粗品分别经LSA-21吸附大孔树脂进行分离纯化,其条件为:pH值10,用不同浓度(60%、45%和30%)乙醇梯度洗脱,其中30%乙醇的洗脱率最高.结论乙醇回流法和超声提取法是制备氧化苦参碱粗品的可行途径,其中超声提取法具有节能、快速等优点,但出膏率不如乙醇回流提取法.利用LSA-21吸附大孔树脂是分离纯化氧化苦参碱的高效低成本的制备方法,与其他传统柱层析分离法比较具有明显优越性.本研究对实验室快速制备氧化苦参碱纯品提供简便工艺.【总页数】3页(P1314-1316)【作者】木合布力·阿布力孜;郭炬亮;夏福鼎·艾尔肯;吐尔孙阿衣·克力木【作者单位】新疆医科大学药学院药化有机教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院药化有机教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院药化有机教研室,新疆,乌鲁木齐,830011;新疆医科大学药学院药化有机教研室,新疆,乌鲁木齐,830011【正文语种】中文【中图分类】R473.6【相关文献】1.抗菌中草药的筛选及其有效成分的分离提取和初步鉴定 [J], 王航;孟春;石贤爱;陈东仕2.氧化苦参碱的提取分离及对小鼠的毒性研究 [J], 张宏利;贺春玲;杨清娥;杨学军;韩崇选3.家兔胃内容物乌头碱代谢产物提取分离和初步鉴定方法研究(三) [J], 郭鼎;徐晶华;王晓峰;张宏桂;李绪文;孟勤;吴广宣4.氧化苦参碱的提取分离工艺研究 [J], 崔九成;孙龑龑;佟姝丽5.中国美利奴（新疆型）绵羊进行性肺炎的研究──X M—MDV_（30）毒株的分离和初步鉴定 [J], 胡尔玛西;符子华;李淑霞;呼西且;易中;王进城;王静;胡端铭;刘彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。