人参皂苷 研究 实验经典.ppt

人参中提取次生代谢产物人参皂苷实验设计
人参皂苷是人参的主要有效成分，具有多种药理活性，如抗炎、抗氧化、免疫调节等作用。

设计人参皂苷实验时，可以从以下几个方面考虑：
1. 实验目的：明确研究对象和目的，例如探究人参皂苷对某种疾病的治疗效果、研究人参皂苷的药理机制等。

2. 实验设计：确定实验的基本设计，包括实验组和对照组的设置、不同剂量和时间的选择等。

可以考虑采用动物模型或细胞模型进行实验，也可以考虑临床试验。

3. 人参皂苷提取方法：选择合适的人参皂苷提取方法，常见的方法包括超声波提取、酶法提取、水提取与醇提取等。

提取过程中要注意操作规范，确保提取效果。

4. 实验指标：选择适当的指标来评价人参皂苷的药理活性，可以包括生物化学指标、细胞指标或临床指标。

例如，可以测定某种疾病模型动物的生化指标变化、细胞增殖程度以及临床患者的疗效评估等。

5. 统计分析：对实验数据进行统计分析，根据实验设计选择合适的统计方法，如方差分析、t检验等，确定实验结果的可靠性和显著性。

需要注意的是，在设计实验过程中，应遵循伦理原则和实验规范，确保实验的科学性和可信度。

实验结果对于科学研究和临床应用有重要意义，但前提是确保人参皂苷的提取与应用符合相关法律法规和伦理规定。

高效液相色谱法测定人参超微粉中人参皂苷的含量皂苷类是人参的主要成分和药效成分，采用高效液相色谱法可准确测定人参中各皂苷类成分，本文主要介绍采用液相色谱测定在超微粉碎技术下得到不同粒度的粉末中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量。

标签：高效液相色谱法，人参，人参皂昔本品为五加科植物人参Pana：c ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。

它具有大补元气，补脾益肺，生津养血，安神益智等之功效。

临床用于体虚欲脱，肺虚气喘，肢冷脉微，脾虚食少，口渴少津，内热消渴，气血不足等[1]。

皂苷类成分是人参的主要活性物质和药效成分，因此提高它的提取率就可增强其生物利用率，以下将介绍同一批次的人参，在样品经过振动磨型超微粉碎机粉碎后得到不同粒度的粉体的皂苷含量进行测量[2]。

1 实验仪器与材料1.1 实验仪器AEL-200电子天平（沈阳龙腾电子称量仪器有限公司），AB204-N精密分析天平（METTLER TOLEDO），Agilent 1260型HPLC（Agilent Technologies），TKCD-1006超声波清洗仪（南昌科昌达超声波设备厂），Heal Force final Filter 超纯水機（上海浦东分析仪器设备厂），HH-4数显恒温水浴锅（常州国华电器有限公司），SQW-25系列超微粉碎机（山东济南三清易辰）。

1.2 实验材料人参皂苷标准品Rb1，Re，Rg1：中国药品生物制品检定所；乙腈（HPLC）。

1.3 样品制备同一批次人参（吉林省长白山）：人参粗粉（过40目筛）；人参样品经过超微振动磨型得到粒径分别为76.006～86.348 μm、29.963～30.025 μm、25.088～25.488 μm、22.163 μm。

1.4 对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rg1对照品适量，精密称定，加甲醇定容；分别精密量取上述对照品溶液各1 mL，置于同一10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

人参皂苷是五加科草本药用植物人参、西洋参等的主要有效成份。

至今为止,人们已从人参植物中至少分离出40多种人参皂苷单体。

按人参皂苷在薄层色谱中Rf值的大小,由小到大命名为R0,Ra1, Ra2, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, Rd, Re, Rf, Rg1, Rg2,Rh1等。

按皂苷元的不同,人参皂苷可分为达玛烷型和齐墩果型皂苷(R0, Rh3)两种。

其中根据糖基在苷元上连接位置的不同,达玛烷型皂苷又分为原人参二醇型和原人参三醇型皂苷。

其代表分别为Rb1和Rg1。

其中二醇型和三醇型皂苷占人参皂苷的大多数,被认为是人参的最主要活性成分。

随着社会老龄化步伐的加快和现代生活水平的提高,人们在极力寻找开发天然抗衰老药物的同时,人参皂苷的抗衰老作用也受到了越来越多学者的重视,关于人参皂苷抗衰老作用机制的研究也不断深入。

抗氧化作用：正常代谢过程所产生的自由基如果能很快被机体防御系统所清除,不会造成危害,如不能完全被清除,则会使生物大分子遭到损伤,导致人体衰老。

已有结果表明,人参皂苷既可抑制自由基的产生,也可直接对抗自由基对组织及细胞的损伤作用,或直接清除自由基,还可增强机体本身抗氧化系统的功能,从多个环节阻断自由基的损伤作用。

张嘉麟等对老年鼠血液中抗氧化酶活力影响研究表明人参皂苷Rb1, Rg1均能显著提高超氧化物歧化酶(SOD )和过氧化氢酶(CAT)活力,增强了机体防御毒性氧自由基损伤的能力,具有抗衰老的作用。

调节神经系统大脑记忆能力的减退,是衰老的早期表现症状之一。

实验已证实神经递质及其受体的变化与脑功能的衰老密切相关,具体表现就是学习和记忆功能障碍。

早期研究发现人参皂苷Rb1能促进递质的释放,薛箭飞等首先证明了人参皂苷Rb1促进递质释放的机制与其上调突触蛋白磷酸化水平有关,并证实了Rb1的作用机制是通过PKA细胞信号转导途径而完成的。

Cheng等认为乙酰胆碱(Ach)是人体大脑中重要的神经递质传递者,缺少Ach ,会导致学习和记忆能力的损伤。

实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。

其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。

人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。

人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。

经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。

人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。

到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。

根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型-A 型，②人参三醇型-B型，③齐墩果酸型-C型。

A型和B型皂苷均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。

B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。

C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolic acid)。

[目的要求]1.通过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分离和检识方法。

2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。

[实验原理]人参的主要成分为人参皂苷，总皂苷含量约4％，人参皂苷大多数是白色无定形粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。

人参皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。

三七丹参片中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量测定发表时间：2018-10-17T13:50:23.250Z 来源：《医药前沿》2018年9月第26期作者：黄跃伟[导读] 所建立的方法简便、准确、重复性好，可用于三七丹参片中的人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1含量测定。

（贵州德良方药业股份有限公司贵州兴义 562409）【摘要】目的：建立三七丹参片中人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1的含量测定方法。

方法：高效液相色谱法；色谱柱为AgiLent HypersiL C18柱(4.0×250mm，5μm)，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱，流速1ml/min，柱温25℃, 检测波长为203nm。

结果：人参皂苷Rg1进样量为0.1152～0.96mg/ml，与峰面积呈良好线性关系(R2=0.9995)，平均回收率为100.68%，平均峰面积(RSD)为2.77%，人参皂苷Rb1进样量为99.96～833μg/ml，与峰面积呈良好线性关系(R2=0.9996)，平均回收率为97.17%，平均峰面积(RSD)为1.98%，三七皂苷R1进样量为22.32～186μg/ml，与峰面积呈良好线性关系(R2=0.9997)，平均回收率为99.82%，平均峰面积(RSD)为1.87%。

结论：所建立的方法简便、准确、重复性好，可用于三七丹参片中的人参皂苷Rg1、Rb1和三七皂苷R1含量测定。

【关键词】三七丹参片；色谱法，液相；人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1【中图分类号】R285 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2018）26-0345-03三七丹参片系由三七和丹参两味中药经提取加工制成的片剂，具有活血化瘀，理气止痛的功效，长期服用有预防和治疗冠心病、心绞痛的作用[1]。

三七丹参片采取高效液相色谱法分别检测人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量，通过计算两成份总量来控制产品的含量[2]。

人参皂苷药理作用探究进展人参是五加科人参属植物人参(panax ginserg C.A.Meyer)的干燥根。

人参亦称黄精、神草、地精,“人参味苦,大补元气,止渴生津,调营养卫”,是东北三宝之一。

随着研究的深入,发现其含有多种化学成分,如人参皂苷、多糖、生物碱、挥发油、氨基酸、脂肪酸等,诸多的化学成分决定其生物活性和药理作用范畴。

如抗肿瘤、抗衰老、提高机体的免疫力、降糖降脂、增加血管新生等作用。

本文主要对人参皂苷的药理作用进行探讨,现综述如下。

1 抗肿瘤作用肿瘤是一种人类自身细胞的异常增生,其发展主要是局部浸润和转移。

人参皂苷Rg3具有显著的抗肿瘤活性,对肿瘤细胞具有一定的抑制作用。

并且能够增强肿瘤化疗患者外周血淋巴细胞的免疫功能。

人参皂苷Rg3抗肿瘤的作用机制是诱导细胞凋亡、抑制癌细胞侵袭和转移、抑制肿瘤血管生成、调节免疫功能、逆转肿瘤多药耐药性。

华海清等研究人参皂苷Rg3对人类肝癌细胞在裸鼠体内生长和转移抑制作用和相关机制,结果表明,人参皂苷Rg3对裸鼠肝癌高转移模型LCI-D20具有抑制肝癌细胞生长和转移的作用,其机制可能与调节nm23和CD44的表达有关。

人参皂苷Rh2能够1抑制肿瘤细胞的生长,有效增强单核巨噬细胞的吞噬功能,诱导肿瘤细胞的凋亡,并且诱导凋亡与抑制细胞增殖呈正相关。

Rh2的HK细胞诱导肿瘤细胞分化。

另外,Rh2能通过提高机体免疫力降低放化疗毒性,减小放化疗痛苦。

金岩等对人参皂苷Rb1、Rg1联合5-氟脲嘧啶对地塞米松诱导的S180荷瘤小鼠脾淋巴细胞凋亡的影响分析显示,人参皂苷Rb1能够显著提高自然杀伤(NK)细胞功能和肿瘤坏死因子(TNF)-α含量,并可拮抗5-氟脲嘧啶的抑制作用(P,0.05)。

2 中枢神经系统作用人参能够调节中枢神经系统,改善大脑的兴奋与抑制作用,使之趋于平衡。

人参皂苷Rg1能够改善记忆的全过程,Rb1则只改善记忆获得与再现而元改善记忆巩固的作用。

Rb1能够提高脑内乙酰胆碱的含量,拮抗钙超载以及抑制tau蛋白的过度磷酸化,能够治疗阿尔茨海默病(AD),其治疗机制主要与促进β淀粉样蛋白(Aβ)形成的β-分泌酶和γ-分泌酶、蛋白磷酶2A活性,抗氧化及消除自由基等有关。

人参皂苷测定及其药理作用的研究概况摘要：人参(P anax g inseng C. A. M eyer) 为五加科人参属植物, 具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神等作用〔1〕。

现代药物学研究证明: 人参皂苷(ginsenoside) 是人参中重要的活性物质, 因此人参皂苷含量的多少评价人参内在质量的重要指标之一。

迄今为止, 人们已从人参各部位(人参根、芦头、茎叶、花、花蕾及参果) 共分离得到20 多种人参皂苷, 可分为20S2原人参二醇(p rotopanaxadiol) 类、20S2原人参三醇(p rotopanaxatriol) 类和齐墩果酸(oleanolic acid)类三类。

对于人参中人参皂苷的含量测定, 国内外研究的都比较多, 常用的测定方法主要有: 高效液相色谱法、薄层扫描法、分光光度法及重量法等。

本文主要讨论这些方法测定的结果, 即不同采收期和不同年限的人参中人参皂苷的含量变化, 以及人参各部位人参皂苷的含量变化等, 以期为综合利用人参资源, 扩大人参药用部位, 合理进行人工种植和炮制提供一定参考。

关键词：人参皂苷人参总皂苷八种主要皂苷含量测定药理作用1、人参总皂苷的测定1.1 样品的制备取人参粉（40目）1g，置50ml磨口圆底烧瓶中，精密加入甲醇25ml与沸石少许，摇匀，称重，放置过夜后于水浴中保持微沸回流6小时，添加甲醇至原重离心分离，精密吸取上清液5或10ml（视含量而定），挥去甲醇，将提取物残渣仔细移入1ml容量瓶中，容器用少量甲醇洗涤，洗液合并，精密稀释至刻度。

1.2 总皂苷的测定用微量注射器吸取上述样品溶液10至20μl（视皂苷含量而定），在硅胶薄层上点成线状，用氯仿-甲醇-水（70:55:10）展开，依溶剂达到顶端，将板取出，使溶剂然全挥去，置碘蒸气中数秒，待色点刚显出，立即取出，画出斑点位置，用冷风将碘完全吹尽，用小刀将色点刮入10ml磨口带塞试管中，精密加入5%香荚醛-冰醋酸溶液0.2ml与高氯酸0.8ml，混匀，密塞置60℃水浴中加热15分钟，立即冷却，精密加入冰醋酸5ml，摇匀，离心，取上清液在波长560nm处比色测定，同时取与色点同样大小的空白硅胶加显色剂显色，作为空白对照。

稀有人参皂苷生物转化技术研究进展人参皂苷结构组成及药理活性的研究表明，稀有人参皂苷相比于原型人参皂苷具有药理作用活性更高，吸收利用能力更强的优势，如稀有人参皂苷Rg3、C-K、Rh4等，但含量极低，且几乎没有天然产物的存在，野生山参和红参也只存在极少量，所以如何转化高活性作用强效的稀有人参皂苷成为当下热门研究对象。

1 酶法生物转化技术1.1 糖苷酶转化李有海等[1]通过β-糖苷酶和人参茎叶总皂苷发生水解反应后得到的水解产物经过分离纯化后，通过波谱鉴定出一个未有相关报道的新的人参皂苷元（20（S）-达玛烷-3β，6α，12β，20，25-五醇）。

崔莹莹[2]首先应用多种糖苷酶分别进行多组合发生催化反应，分离纯化得到稀有人参单体皂苷Rc、Rb2和Rb3，转化率分别为49.50%、40.00%、47.10%，又以CobgllA和Bglpc28作为单独或组合的催化剂，对Rc、Rb2以及Rb3进行转化，实验数据显示此方法可作为制备六种高纯度的稀有人参皂苷（C-Mc、C-O、C-Mx、C-Mx1、C-Mc1以及C-Y）的方法。

彭婕等[3]采用人参皂苷Ⅰ型酶（来自A.nigerg.848菌），在水解PPD型皂苷中得到4条转化机理：①Rb1→Rd→F2、C-K②Rb1、Rd→F2→C-K③Rb2、Rc→C-O、C-Mc1④C-O、C-Mc1→C-Y、C-Mc→C-K，该实验还为低成本制备稀有皂苷C-K、F2、C-Mc和Rh2提供科学理论基础。

刘春莹[4]利用人参皂苷Ⅰ型酶（从A.nigerg.848菌和g.48菌获得），并以这两种不同来源的人参皂苷Ⅰ型酶对西洋参PPD型皂苷进行水解反应，水解产物分离纯化后得到F2、C-Mc、C-Y和C-K，并表明从A.nigerg.848菌获得的人参皂苷Ⅰ型酶催化活性更强，理论转化率分别为69.50%、43.70%、42.40%和69.50%；李冠亨等[5]利用人参皂苷Ⅲ型酶（从基因克隆的E.coliC41菌获得）对人参皂苷Rc定向转化制备C-Mc，产物纯度90%，得率为58.33%。

第一章综述1.1 人参皂苷的简介人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。

其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。

人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。

人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。

经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。

人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有40余种；在人参中的含量在4%左右。

其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为Rg3与Rh2。

众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。

人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。

将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。

Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。

目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。

1.2 人参皂苷成分人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。

到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。

Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。