HPLC_DAD_MS_MS法分析金银花中化学成分_白雪

HPLC法测定金银花药材含量
吴春华;胥德福;刘颖欣
【期刊名称】《黑龙江医药》
【年(卷),期】2002(15)2
【摘要】为了更加精确地测定金银花药材含量，本文采用HPLC法测定金银花药材的含量。

色谱柱为86-200-D5-C(18)(十八烷基硅烷键合硅胶)；流动相为甲醇-水-冰乙酸(20：80：1)；检测波长；324nm，本法重现性好，方法易于掌握，结果稳定。

【总页数】2页(P89-90)
【作者】吴春华;胥德福;刘颖欣
【作者单位】哈尔滨松花江药业有限公司，150056;黑龙江天宏药业有限公司;黑龙江省中药联营总公司研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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山东科学ＳＨＡＮＤＯＮＧＳＣＩＥＮＣＥ第３６卷第５期２０２３年１０月出版Ｖｏｌ.３６Ｎｏ.５Ｏｃｔ.２０２３收稿日期:２０２３￣０１￣０６基金项目:苏州市吴门医派研究专项科研基金科技项目(ＳＹＳＤ２０１８１７７)作者简介:钱桂英(１９７９ )ꎬ女ꎬ硕士ꎬ副主任中药师ꎬ研究方向为中药学ꎮTel:139****6914ꎬE￣mail:njqyy1979＠１６３.ｃｏｍ∗通信作者ꎬ金凤珠(１９６５ )ꎬ女ꎬ主任中药师ꎬ研究方向为中药植物资源鉴定ꎮＥ￣ｍａｉｌ:５４１１００８６４＠ｑｑ.ｃｏｍ超高效液相色谱－串联质谱结合化学计量学分析金银花中多组分含量钱桂英ꎬ钱云英ꎬ吴晓明ꎬ金凤珠∗(南京中医药大学常熟附属医院ꎬ江苏常熟２１５５００)摘要:建立超高效液相色谱－串联质谱同时测定金银花中９种主要成分的方法ꎮ采用负离子扫描方式ꎬ对主要成分进行化学计量学分析ꎮ色谱分离采用ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤ色谱柱ꎬ柱温３５ħꎮ流动相由甲醇和０.２％甲酸水溶液组成ꎬ结合聚类热图分析和主成分分析对金银花进行综合分析ꎮ结果表明:９个化合物峰面积与浓度之间具有良好的线性关系(Ｒ２>０.９９９１)ꎬ日内精密度(０.９６％~２.２６％)㊁日间精密度(０.５２％~３.０４％)和稳定性(０.８５％~２.１５％)均符合相对标准偏差ꎻ回收率在９６.７７％~１０１.９４％之间ꎬ相对标准偏差在２.４８％~４.０１％之间ꎻ层次聚类分析和主成分分析在内的化学计量学结果表明ꎬ不同地区的金银花活性成分含量存在明显差异ꎬ３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸为贡献最大的化合物ꎮ该研究可为进一步开展金银花有效成分及相关量效关系㊁相关产品的质量控制提供参考ꎮ关键词:金银花ꎻ超高效液相色谱－串联质谱ꎻ化学计量学ꎻ多成分ꎻ含量测定中图分类号:Ｒ２８４.１㊀㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀㊀文章编号:１００２￣４０２６(２０２３)０５￣０００１￣０８开放科学(资源服务)标志码(ＯＳＩＤ):ＡｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｉｎＬｏｎｉｃｅｒａｅｊａｐｏｎｉｃａｅｆｌｏｓｂａｓｅｄｏｎＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓＱＩＡＮＧｕｉｙｉｎｇꎬＱＩＡＮＹｕｎｙｉｎｇꎬＷＵＸｉａｏｍｉｎｇꎬＪＩＮＦｅｎｇｚｈｕ∗(ＣｈａｎｇｓｈｕＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＮａｎｊｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬＣｈａｎｇｓｈｕ２１５５００ꎬＣｈｉｎａ)ＡｂｓｔｒａｃｔʒＴｈｉｓｓｔｕｄｙａｉｍｅｄｔｏｄｅｖｉｓｅａｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙｆｏｒｔｈｅｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｎｉｎｅｐｒｉｍａｒｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＬｏｎｉｃｅｒａｅｊａｐｏｎｉｃａｅｆｌｏｓｔｈｒｏｕｇｈｕｌｔｒａ￣ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ￣ｔａｎｄｅｍｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ(ＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳ).Ｔｈｅｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｎｉｎｅｐｒｉｍａｒｙｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｖｉａｎｅｇａｔｉｖｅｉｏｎｓｃａｎｎｉｎｇ.ＦｕｒｔｈｅｒꎬｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤｃｏｌｕｍｎａｔａｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆ３５ħ.Ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｃｏｍｐｒｉｓｅｄｍｅｔｈａｎｏｌａｎｄｗａｔｅｒｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ０.２％ｆｏｒｍｉｃａｃｉｄꎬａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｃｌｕｓｔｅｒｔｈｅｒｍｏｇｒａｍａｎｄｐｒｉｎｃｉｐａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｎａｌｙｓｅｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｅｊａｐｏｎｉｃａｅｆｌｏｓ.Ｔｈｅｐｅａｋａｒｅａｓｗｉｔｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆｎｉｎｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｅｘｈｉｂｉｔｅｄａｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ(Ｒ２>０.９９９１)ꎬａｎｄｔｈｅｉｎｔｒａｄａｙ(０.９６％~２.２６％)ａｎｄｉｎｔｅｒｄａｙ(０.５２％~３.０４％)ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｓａｎｄｓｔａｂｉｌｉｔｙｖａｌｕｅｓ(０.８５％~２.１５％)ａｇｒｅｅｄｗｅｌｌｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎ(ＲＳＤ).Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｗａｓｂｅｔｗｅｅｎ９６.７７％ａｎｄ１０１.９４％ꎬａｎｄｔｈｅＲＳＤｗａｓｂｅｔｗｅｅｎ２.４８％ａｎｄ４.０１％.ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃꎬｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌｃｌｕｓｔｅｒꎬａｎｄｐｒｉｎｃｉｐａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｎａｌｙｓｅｓｒｅｖｅａｌｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｉｎｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｅＪａｐｏｎｉｃａｅＦｌｏｓｆｒｏｍｖａｒｉｏｕｓｒｅｇｉｏｎｓꎬａｎｄ３￣Ｏ￣ｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃａｃｉｄａｎｄ３ꎬ５￣ｄｉｃａｆｆｅｏｙｌｑｕｉｎｉｃａｃｉｄｗｅｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｓｔｈｅｄｏｍｉｎａｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｓ.ＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎｄｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃａｎａｌｙｓｅｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｅＪａｐｏｎｉｃａｅＦｌｏｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｈｅｒｅｉｎｍａｙｐｒｏｖｉｄｅａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎｄｉｎｎｏｖａｔｉｖｅｒｅｓｅａｒｃｈｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｏｆＬｏｎｉｃｅｒａｅＪａｐｏｎｉｃａｅＦｌｏｓａｎｄｒｅｌａｔｅｄｑｕａｎｔｉｔｙｅｆｆｅｃｔｒｅｌａｔｉｏｎｓａｓｗｅｌｌａｓｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｄｕｃｔｓ.ＫｅｙｗｏｒｄｓʒＬｏｎｉｃｅｒａｅｊａｐｏｎｉｃａｅｆｌｏｓꎻＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳꎻｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓꎻｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｎｅｎｔꎻａｓｓａｙ㊀㊀金银花是忍冬科植物忍冬ＬｏｎｉｃｅｒａｊａｐｏｎｉｃａＴｈｕｎｂ.的干燥花蕾或带初开的花ꎬ原产于中国ꎬ大约１５００年前ꎬ在现今的河南等地大量种植[１]ꎬ常用于治疗痈肿疔疮㊁咽喉麻木㊁丹毒㊁血毒毒痢㊁风热感冒㊁温热等ꎮ现代药理研究表明ꎬ金银花具有抗炎㊁抗氧化㊁保肝㊁细胞保护㊁抗菌㊁抗糖尿病和抗乙型肝炎病毒等活性ꎬ化学成分为黄酮类㊁环烯醚萜类㊁三萜皂苷㊁生物碱等[２￣４]ꎮ目前ꎬ金银花种植区主要集中在山东㊁山西㊁河南㊁河北㊁湖北㊁江西㊁广东等地ꎬ由于地理条件㊁气候等原因ꎬ每个产地的金银花主要有效成分的含量存在差异ꎬ功效也会有所不同[５￣７]ꎮ金银花中发挥抗菌和抗炎作用的主要成分是黄酮类和酚酸类物质ꎬ２０２０版«中国药典»中还规定了其指标成分为３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和木犀草素[８]ꎮ因此ꎬ有必要以酚酸类和黄酮类物质为指标ꎬ对金银花进行质量控制ꎮ目前ꎬ高效液相色谱(ＨＰＬＣ)为测定中药成分含量的常用手段ꎮ随着超高效液相色谱－串联质谱(ＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳ)的出现ꎬ其高选择性㊁高灵敏度使中药定量分析技术更加成熟并得到广泛应用[９￣１２]ꎮ金银花目前的质量控制研究重点在其化学成分的种类和含量ꎬ控制技术主要有ＨＰＬＣ法㊁ＵＰＬＣ法㊁ＵＰＬＣ￣ＭＳ联用㊁一测多评等ꎻ除了在有效成分的含量上控制ꎬ有害成分如重金属和农药残留等控制标准均有报道[１３￣１４]ꎮ在本文中ꎬ建立了ＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳ方法测定来自１０个不同地区的金银花的有效成分含量ꎬ在负离子扫描模式下ꎬ测定了９种抗菌消炎的主要成分ꎬ对１０批样品进行了化学计量学分析ꎬ以期为金银花的有效成分及相关量效关系㊁相关产品的质量控制提供参考依据ꎮ１㊀仪器与材料ＵＰＬＣ￣ＴＳＱＱＵＡＮＴＩＳ三重四极杆质谱系统(ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ)ꎬＪＡ２０３Ｈ型十万分之一电子天平(常州市幸运电子设备有限公司)ꎬＫＱ３２００ＤＥ型数控超声波清洗器(青岛精诚仪器仪表有限公司)ꎬＤＺＫＷ￣Ｃ型水浴锅(河南沃林仪器设备有限公司)ꎮＨＰＬＣ级甲醇(ＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ)ꎬＨＰＬＣ级甲酸(Ｓｉｇｍａ)ꎬ蒸馏水(杭州娃哈哈集团)ꎮ所有其他试剂均为分析纯ꎮ１０批次的金银花信息见表１ꎮ所有样品由南京中医药大学常熟附属医院主任中药师金凤珠鉴定为金银花正品ꎮ３ꎬ４￣二羟基苯甲酸(批号ＳＨ￣２１１１０２)㊁５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸(批号ＳＨ￣２１１０２１)㊁３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸(批号ＳＨ￣２２０３２１)㊁４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸(批号ＳＨ￣２２０１２２)购自上海源叶生物科技有限公司ꎮ咖啡酸(批号１１０８８５￣２０１７０３)㊁３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸(批号１１１７８２￣２０２２０８)㊁木犀草苷(批号１１１７２０￣２０２１１１)㊁芦丁(批号１０００８０￣２０２０１２)㊁４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸(批号１１１８９４￣２０２２０５)㊁标准品酸和内标氯霉素(批号１３０３０３￣２０２１１５)购自中国食品药品检定研究院ꎮ表１㊀十批金银花样品信息２㊀方法与结果２.１㊀供试品溶液制备金银花粉末过６０目筛ꎬ取粉末０.０５ｇꎬ加入１０ｍＬ甲醇ꎬ３５Ｈｚ超声提取３０ｍｉｎꎮ然后将样品以５０００ｒ/ｍｉｎ离心１５ｍｉｎꎬ取上清液ꎬ０.２２μｍ滤膜过滤ꎬ４ħ冰箱保存备用ꎮ２.２㊀对照品溶液制备９种标准品适量溶解于甲醇中制备储备液(质量浓度均为１.００ｍｇ/ｍＬ)ꎮ２.３㊀分析条件色谱条件:采用ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤ色谱柱(１００ｍｍˑ２.１ｍｍꎬ１.９μｍ)ꎬ柱温３５ħꎮ流动相由甲醇(Ａ)和０.２％甲酸水(Ｂ)组成ꎮ梯度洗脱:０~６ｍｉｎꎬ９０％~８３％Ｂꎻ６~７ｍｉｎꎬ８３％~６０％Ｂꎻ７~１２ｍｉｎꎬ６０％~５０％Ｂꎻ１２~１３ｍｉｎꎬ５０％~９０％Ｂꎻ１３~１５ｍｉｎꎬ９０％Ｂꎮ流速为０.３ｍＬ/ｍｉｎꎬ进样体积为２μＬꎮ质谱条件:所有样品均在负离子模式下进行分析ꎮ分析方法采用多反应监测的选择性反应模式(ＭＲＭ)ꎮ优化参数设置如下:鞘气３０ｋＰａꎻ辅助气１０ｋＰａꎻ吹气:０ｋＰａꎬ离子传输管温度３２５ħꎬ蒸发器温度３５０ħꎬ各组分监测条件见表２ꎮ表２㊀化合物的优化质谱条件７６４负离子１.０６１５３１０９１４５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸Ｃ１６Ｈ１８Ｏ９负离子１.１６３５３１９１１９３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸Ｃ１６Ｈ１８Ｏ９负离子２.２９３５３１９１１７咖啡酸Ｃ９Ｈ８Ｏ４负离子４.３４１７９１３５１６４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸Ｃ１６Ｈ１８Ｏ９负离子４.４６３５３１７９１６氯霉素(内标)Ｃ１１Ｈ１２Ｃｌ７Ｎ２负离子９.３７３２１２５７１０３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸Ｃ２５Ｈ２４Ｏ１２负离子４.５８５１５３５３１５木犀草苷Ｃ２１Ｈ２０Ｏ１１负离子４.６１４４８２８６２６芦丁Ｃ２７Ｈ３０Ｏ１６负离子４.７３６１０３０１３５４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸Ｃ２５Ｈ２４Ｏ１２负离子４.９３５１５３５３１８２.４㊀方法学考察２.４.１㊀专属性考察取供试品溶液㊁混合对照品溶液适量ꎬ按２.３项下色谱和质谱条件进样分析ꎬ负离子模式下采集数据ꎮ根据离子对ꎬ样品与对照品的保留时间ꎬ质谱信息保持一致ꎬ待测成分分离效果良好ꎬ无干扰ꎬ结果见图１ꎮＦｉｇ.１㊀Ｍｕｌｔｉｐｌｅｒｅａｃｔｉｏｎｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｉｏｎｉｚａｔｉｏｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ２.４.２㊀线性关系考察精密吸取混合对照品母液溶液ꎬ用溶剂稀释至不同浓度后依次进行分析ꎬ记录峰面积ꎬ以峰面积(Ｙ)为纵坐标ꎬ进样浓度(Ｘ)为横坐标ꎬ绘制标准曲线ꎬ计算回归方程ꎬ结果见表３ꎮ表３㊀回归方程㊁相关系数和线性范围５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸Ｙ＝４.１３９４Ｘ－０.０１６４０.９９９６０.００６６~７５.６３７３１.９８６.６１３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸Ｙ＝２.８５６９Ｘ－０.００９３０.９９９７０.００９５~３１２.５３５２.８８９.５８咖啡酸Ｙ＝１４.０６５０Ｘ－０.１００８０.９９９８０.００９５~１.２４６６２.８６９.５４４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸Ｙ＝３.７７６２Ｘ－０.００６６０.９９９９０.００６４~１５.５２７２１.９３６.４５３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸Ｙ＝１６.７４３０Ｘ－０.０１０９０.９９９１０.００３９~１４５.８７８４１.２０３.９９木犀草苷Ｙ＝６.８４５６Ｘ＋０.０８１９０.９９９８０.０００３~１.８１８６０.０１０.０３芦丁Ｙ＝２.４６４０Ｘ＋０.１０３５０.９９９４０.００１８~６１.４２８２０.５６１.８６４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸Ｙ＝９.１８０７Ｘ＋０.３４７７０.９９９５０.０１０６~４４.０９３０３.１８１０.６１２.４.３㊀精密度试验取同一份混合对照品溶液ꎬ１ｄ内连续进样６次ꎬ记录峰面积ꎬ测得日内精密度３ꎬ４￣二羟基苯甲酸㊁５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁咖啡酸㊁４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸㊁木犀草苷㊁芦丁及４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸相对标准偏差δＲＳＤ分别为１.７９％㊁１.９２％㊁２.１３％㊁０.９６％㊁１.９３％㊁２.２６％㊁１.９３％㊁１.６０％㊁１.９２％ꎻ每天进样３次ꎬ连续进样３ｄꎬ测定日间精密度δＲＳＤ分别为０.８５％㊁１.１０％㊁２.１２％㊁１.３７％㊁０.５２％㊁０.６３％㊁１.２９％㊁１.６６％㊁３.０４％ꎮ表明仪器精密度良好ꎮ２.４.４㊀稳定性试验取样品(Ｓ１)按２.１项下方法制备供试品溶液ꎬ室温放置ꎬ分别于０㊁２㊁４㊁８㊁１２㊁２４ｈ进行测定ꎬ３ꎬ４￣二羟基苯甲酸㊁５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁咖啡酸㊁４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸㊁木犀草苷㊁芦丁及４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸峰面积的δＲＳＤ分别为０.８５％㊁０.９０％㊁１.３２％㊁０.９７％㊁２.１５％㊁０.９８％㊁０.９６％㊁１.３０％㊁１.７４％ꎬ表明样品在２４ｈ内稳定性良好ꎮ２.４.５㊀重复性试验取样品(Ｓ１)ꎬ按２.１项下方法平行制备６份供试品溶液ꎬ以２.３项下色谱条件进行测定ꎬ得３ꎬ４￣二羟基苯甲酸㊁５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁咖啡酸㊁４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸㊁木犀草苷㊁芦丁及４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸的平均含量分别为２０.１２μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.２６％)㊁２４３１.４５μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝３.２１％)㊁２２１４６.５８μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.７１％)㊁３４.０３μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.５７％)㊁８７８.６４μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.６２％)㊁１３４７.０８μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.３９％)㊁６８.４９μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.７６％)㊁６９.４２μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝３.３２％)及２２１２.４４μｇ/ｇ(δＲＳＤ＝２.３１％)ꎬ表明重复性良好ꎮ２.４.６㊀加标回收率试验精密称取已知含量样品(Ｓ１)０.０５ｇꎬ共６份ꎬ按１００％的量各加入３ꎬ４￣二羟基苯甲酸㊁５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁咖啡酸㊁４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸㊁木犀草苷㊁芦丁及４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸对照品的混合溶液ꎬ按２.１项下方法制备供试品溶液ꎬ按２.４项下色谱条件进行测定ꎬ计算加样回收率ꎬ得３ꎬ４￣二羟基苯甲酸㊁５￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁咖啡酸㊁４￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸㊁３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸㊁木犀草苷㊁芦丁及４ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸平均回收率在９６.７７％~１０１.９４％ꎬδＲＳＤ在２.４８％~４.０１％(均低于５.０％)ꎬ表明方法的准确度符合要求ꎬ结果见ＯＳＩＤ科学数据与内容附表１ꎮ２.５㊀样品含量测定取１０批样品ꎬ按２.１项下方法制备供试品溶液ꎬ按２.３项下条件进行分析ꎬ计算含量ꎬ结果见表４ꎮ表４㊀不同来源的９种成分含量测定(ｎ＝３)Ｓ２河北２９.９７ʃ１.７１１５７７.０５ʃ５６.３０８５６８.２３ʃ３６４.８１１２２.７４ʃ２.４７４１０.１５ʃ２３.０８Ｓ３河南１０.８７ʃ０.７０７０４.０９ʃ４３.８６１４２１４.４０ʃ１２６８.２３４３.８３ʃ３.１６３０７.７７ʃ３２.４６Ｓ４湖北１０.６２ʃ０.６３４３２.８３ʃ２７.１９１５０９９.３４ʃ８００.９９４６.１５ʃ３.２３２５２.８５ʃ１８.８７Ｓ５湖南１７.１１ʃ１.７４２９７６.４０ʃ３４７.５７２４６７１.６９ʃ２７６６.４２２９.５０ʃ２.１４８２８.０２ʃ１０６.４４Ｓ６湖南９.３９ʃ０.４５８５０.２３ʃ４０.０５１２３８２.７２ʃ５３３.６３５２.１４ʃ１.７７２９２.９４ʃ２１.１４Ｓ７江西１０７.６９ʃ５.６６１０４９.７８ʃ７０.８５６７００.１９ʃ５１９.８６４６.９８ʃ２.７６２３６.３０ʃ２２.００Ｓ８山东１２.９６ʃ１.２３３９４.９４ʃ４２.５１７２３４.０４ʃ７０７.０２６３.５９ʃ５.１２１８６.６１ʃ１４.８３Ｓ９云南４２.９９ʃ１.４５６３３７.８０ʃ２２３.８７４９１４５.９６ʃ２２５８.６９６１.６３ʃ３.９５２１２７.９６ʃ９１.５６Ｓ２河北５０４７.８４ʃ２２５.４４１５.５１ʃ０.２９１９１.３９ʃ１２.３４５１４.１２ʃ２０.８９Ｓ３河南５５９７.３６ʃ５５４.３７１８５.３８ʃ９.３０７５２.２２ʃ７０.５３８９０.０５ʃ７７.６４Ｓ４湖北６４０３.７７ʃ５３０.３７２１３.５９ʃ１０.６９６４５.３３ʃ５１.２９１０３０.６８ʃ５０.４７Ｓ５湖南１４８５５.０６ʃ８６５.３８４８.５７ʃ０.１２６４.３４ʃ５.４０２１０６.２７ʃ２３８.６０Ｓ６湖南５７９６.６５ʃ２７６.０４１８０.８０ʃ５.６０４７６.８２ʃ２６.５９８１６.２５ʃ１５.４９Ｓ７江西４３４９.０２ʃ１４３.５２１４.００ʃ１.５０６９９６.２３ʃ３３７.２４４２０.４５ʃ９.９７Ｓ８山东３７１１.８０ʃ４１３.３７１３６.１３ʃ１２.０３２９９.９０ʃ２５.８９５７５.３７ʃ６２.３３Ｓ９云南２５８６６.４６ʃ１５９２.７２１３３.１７ʃ４.９９７５.５９ʃ１１.５４４１０９.７２ʃ２０４.６２Ｓ１０云南１３２４５.６８ʃ９０８.７２６７.０７ʃ８.１３９４３.７７ʃ１１０.１４１２５１.８２ʃ１６３.５５２.６㊀统计学分析以９个化合物为指标成分进行聚类分析和热图分析ꎬ结果如图２所示ꎮ结果显示１０批次样品被分成许多簇ꎬ说明即使是同一种中药ꎬ其含量在不同产地之间也存在较大差异ꎮ在热图中ꎬ可以观察到３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸是样品的主要成分ꎮ图２㊀批次间聚类分析和热图Ｆｉｇ.２㊀Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂｅｔｗｅｅｎ￣ｂａｔｃｈｃｌｕｓｔｅｒａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｈｅａｔｍａｐｓ㊀㊀主成分分析如图３所示ꎬＳ７和Ｓ９样品与其他批次样品存在显着差异ꎬ这与定量分析中Ｓ７类黄酮含量较高和Ｓ９酚酸含量较高的结果一致ꎮ此外ꎬ３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸的贡献率为９７％ꎬ３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸的贡献率为２％ꎬ３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸的累计贡献率达到９９％ꎬ表明３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸是金银花的主要成分ꎬ此结果与热图的结果一致ꎮ图３㊀主成分分析图Ｆｉｇ.３㊀Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｐｒｉｎｃｉｐａｌｃｏｍｐｏｎｅｎｔａｎａｌｙｓｉｓ３㊀讨论与结论为了获得高质量分数的样品溶液ꎬ我们进行了提取优化试验ꎮ首先ꎬ研究了９种化合物在不同溶剂中的提取效率ꎬ以最大限度地提高化合物的质量分数ꎮ用４种不同比例的甲醇溶液(甲醇体积分数分别为１００％㊁８５％㊁７０％㊁５０％)和４种不同比例的乙醇溶液(乙醇体积分数分别为１００％㊁８５％㊁７０％㊁５０％)超声提取６０ｍｉｎꎮ发现１００％甲醇作为溶剂时ꎬ９种成分的提取效率最好ꎮ其次ꎬ为了获得更好的提取效果ꎬ考察了提取时间对９种化合物提取效率的影响ꎬ进行超声提取３０㊁４５㊁６０㊁９０ｍｉｎꎬ发现提取时间对结果没有显著差异ꎬ因此ꎬ选择３０ｍｉｎ的最短提取时间ꎮ此外ꎬ我们选择了ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤ色谱柱(１００ｍｍˑ２.１ｍｍꎬ１.９μｍ)和ＷａｔｅｒｓＡｃｑｕｉｔｙＵＨＰＬＣＨＳＳＴ３色谱柱(５０ｍｍˑ２.１ｍｍꎬ１.８μｍ)ꎮ在相同柱温㊁流动相和梯度洗脱条件下ꎬＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤ色谱柱具有更好的分离效果㊁更好的峰形和更短的保留时间ꎮ因此ꎬ我们选择了ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌＧＯＬＤ色谱柱进行分离ꎮ在本研究中ꎬ建立了一种ＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳ方法ꎬ用于快速同时测定金银花中的９种化合物ꎮ经验证该方法具有良好的精密度㊁准确度㊁重复性和稳定性ꎮ以９个化合物为指标成分进行聚类分析和热图分析ꎬ结果显示１０批次样品被分成许多簇ꎬ说明即使是同一种中药ꎬ其含量在不同产地之间也存在较大差异ꎮ在热图中ꎬ可以观察到３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸是样品的主要成分ꎮ化学计量学结果表明ꎬ金银花的区域差异很大ꎬ９种化合物中３￣Ｏ￣咖啡酰奎宁酸和３ꎬ５￣二咖啡酰奎宁酸的累计贡献率达到９９％ꎮ综上所述ꎬＵＰＬＣ￣ＭＳ/ＭＳ结合化学计量学是一种简单有效的控制金银花品质的方法ꎬ该研究为金银花的可持续发展奠定了理论基础ꎬ为中药的综合开发利用提供了技术思路ꎮ参考文献:[１]李晓娅ꎬ李钦ꎬ张峰ꎬ等.金银花采收及产地初加工研究[Ｊ].时珍国医国药ꎬ２０２０ꎬ３１(１):９７￣９９.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００８￣０８０５.２０２０.０１.０３１.[２]李兰ꎬ段政ꎬ汤有宏ꎬ等.金银花总黄酮的提取工艺及其抗氧化性研究[Ｊ].酿酒ꎬ２０２２ꎬ４９(６):１３１￣１３６.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２￣８１１０.２０２２.０６.０３５.[３]郝梦超ꎬ安超娜ꎬ王乙颖ꎬ等.金银花黄酮的提取工艺及其药理活性研究进展[Ｊ].饮料工业ꎬ２０２２ꎬ２５(５):７１￣７５.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００７￣７８７１.２０２２.０５.０１７.[４]张浩ꎬ叶静ꎬ马长宏ꎬ等.不同产地金银花中酚酸类含量的测定[Ｊ].人参研究ꎬ２０２２ꎬ３４(５):２０￣２２.ＤＯＩ:１０.１９４０３/ｊ.ｃｎｋｉ.１６７１￣１５２１.２０２２.０５.００５.[５]寿璐佳ꎬ赵晨阳ꎬ颜世利ꎬ等.ＧＣ￣ＭＳ指纹图谱结合化学计量学分析不同产地金银花挥发油的成分变化[Ｊ].沈阳药科大学学报ꎬ２０２２ꎬ３９(８):９１３￣９１８.ＤＯＩ:１０.１４０６６/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｎ２１￣１３４９/ｒ.２０２１.１４０１.[６]刘艳萍ꎬ王云ꎬ贾哲ꎬ等.基于ＧＣ￣ＭＳ和多元统计方法分析不同产地金银花挥发性成分的差异[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０２２ꎬ４７(２０):５５０８￣５５１９.ＤＯＩ:１０.１９５４０/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｊｃｍｍ.２０２２０７１２.１０２.[７]刘天亮ꎬ杨林林ꎬ董诚明ꎬ等.基于化学模式识别的不同产地金银花ＨＰＬＣ指纹图谱研究[Ｊ].中草药ꎬ２０２２ꎬ５３(１５):４８３３￣４８４３.ＤＯＩ:１０.７５０１/ｊ.ｉｓｓｎ.０２５３￣２６７０.２０２２.１５.０２７.[８]国家药典委员会.中华人民共和国药典２０２０年版一部[Ｍ].北京:中国医药科技出版社ꎬ２０２０:２３０.[９]易可可ꎬ谢洁ꎬ江游ꎬ等.液相色谱－串联质谱技术在临床检验中的应用研究进展[Ｊ].质谱学报ꎬ２０２２ꎬ４３(６):８０４￣８１６.ＤＯＩ:１０.７５３８/ｚｐｘｂ.２０２１.０１４６.[１０]车爽.ＵＰＬＣ￣Ｑ￣ＴＯＦ￣ＭＳ联合ＵＮＩＦＩ技术在中药分析领域的应用进展[Ｊ].天津药学ꎬ２０２２ꎬ３４(３):６７￣７４.ＤＯＩ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００６￣５６８７.２０２２.０３.０１６.[１１]姜艳玲ꎬ李婵ꎬ赵敏.ＵＰＬＣ￣ＴＯＦ￣ＭＳ/ＭＳ在医药分析检测中的应用研究进展[Ｊ].精细化工中间体ꎬ２０２２ꎬ５２(１):１２￣１６.ＤＯＩ:１０.１９３４２/ｊ.ｃｎｋｉ.ｉｓｓｎ.１００９￣９２１２.２０２２.０１.００３.[１２]徐东升ꎬ何云娇ꎬ钟灵佼.ＵＰＬＣ￣ＱＱＱ￣ＭＳ/ＭＳ在中药分析中的应用研究进展[Ｊ].中医药临床杂志ꎬ２０２１ꎬ３３(１１):２２４７￣２２５０.ＤＯＩ:１０.１６４４８/ｊ.ｃｊｔｃｍ.２０２１.１１４９.[１３]杨志敏ꎬ朱仁愿ꎬ薛华丽ꎬ等.改良ＱｕＥＣｈＥＲＳ￣气相色谱质谱联用法测定金银花中农药残留[Ｊ].分析试验室ꎬ２０２３ꎬ４２(１):４９￣５６.ＤＯＩ:１０.１３５９５/ｊ.ｃｎｋｉ.ｉｓｓｎ１０００￣０７２０.２０２１.１２１００２.[１４]卜桐ꎬ于晓ꎬ张欣芮ꎬ等.金银花中重金属污染分析及其健康风险评估[Ｊ].中国中药杂志ꎬ２０２２ꎬ４７(３):６４３￣６５０.ＤＯＩ:１０.１９５４０/ｊ.ｃｎｋｉ.ｃｊｃｍｍ.２０２１１１０６.１０２.。

HPLC法同时测定银花感冒颗粒中8种成分
胡小祥;何艳;刘冠琼;曾凡红;刘帅
【期刊名称】《中成药》
【年(卷),期】2022(44)4
【摘要】目的建立HPLC法同时测定银花感冒颗粒(金银花、连翘、防风等)中新绿原酸、绿原酸、升麻素苷、连翘酯苷A、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、5-O-甲基维斯阿米醇苷、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、甘草酸的含量。

方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相[乙腈-甲醇(6∶4)]-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长254、327 nm。

结果 8种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 3),平均加样回收率97.59%~103.57%,RSD 1.54%~2.49%。

结论该方法简便准确,可用于银花感冒颗粒的质量控制。

【总页数】5页(P1070-1074)
【关键词】银花感冒颗粒;化学成分;HPLC
【作者】胡小祥;何艳;刘冠琼;曾凡红;刘帅
【作者单位】郴州市食品药品检验检测中心;湘南学院药学院;陕西省中医药研究院【正文语种】中文
【中图分类】R927
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金银花临床药理作用的研究进展高攀【摘要】金银花是临床上较为常用的中药,绿原酸是其主要有效成分,随着医学技术不断发展,更多的成分被提取出来,其主要功效包括清热解毒、疏散风热等,且具有抗病毒、抗菌、抗炎、抗氧化、保肝利胆、抗血小板聚集、抗肿瘤、增强免疫等药理学活性,临床应用广泛,且受到广大患者及医生的认可.本文主要针对金银花的化学成分及临床药理作用进行研究.【期刊名称】《医学信息》【年(卷),期】2018(031)023【总页数】4页(P37-40)【关键词】金银花;化学成分;药理作用【作者】高攀【作者单位】天津中医药大学第一附属医院药学部,天津 300193【正文语种】中文【中图分类】R285金银花的药用历史悠久，在3000年前已被用于疾病的防治，因其初开花时呈现白色，而后转变为黄色，故被称为金银花。

金银花又被称为忍冬花，其主要来自忍冬科植物的干燥花蕾或带初开的花，忍冬科植物主要包括忍冬、红腺忍冬、毛花柱忍冬等[1]。

金银花味甘，性寒，属肺、心、胃经，其功效多以清热解毒、疏散风热为主[2]。

金银花的适应性较强，喜阳、耐寒、耐阴，且在潮湿及干旱的地方均可生长，金银花的种植历史已超过200年，我国多分布于广东、山东、河南、河北、海南、喜马拉雅山等地，其中山东的济银花、河南的密银花道地性最强[3]。

虽然金银花属于清热类药物，但其应用范围广泛，临床上对于金银花的研究也较为重视。

基于此本文现就金银花的化学成分及临床药理作用展开以下综述。

1 金银花的化学成分1.1 有机酸类金银花中含有多种有机酸，其主要有效成分为绿原酸类化合物，主要包括绿原酸、异绿原酸、咖啡酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸等。

姜南辉[4]等在对金银花的研究中指出，咖啡酸乙酯、5-羟基-6，7，8，4＇-四甲氧基黄铜、十二烷酸乙酯均为首次从金银花中分离的化合物。

宋亚玲[5]等研究中在对金银花酚酸类进行研究时，提取出绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、3，4-二咖啡酰奎宁酸、咖啡酸、3，5-二咖啡酰奎宁酸、咖啡酸甲酯、4，5-二咖啡酰奎宁酸等8种有机酸成分，且以咖啡酸的活性最强。

研究分析金银花的药用成分及中药药理作用摘要通过查阅重点中医医学点击、所有具有代表性的关于中药金银花的医学著作，分别从中药金银花的草本考证、生物学研究、临床药理作用、化学成分研究等方面分析金银花的药用成分和临床药理作用。

金银花的主要药用成分包括黄酮类、挥发油、三萜皂类化合物、有机酸类化合物；主要药理作用包括解热、抗炎作用、止血作用、抗病毒作用、保肝利胆作用、抗菌作用，其主要功效包括清热解毒、抗炎抗菌、止血、抗病毒等，在温病发热、热毒、肿瘤等疾病中均具有良好的应用效果。

关键词中药成分分析；金银花；药用成分；临床药理金银花又名为二宝花、银花，是一种临床常见的中药植物，主要功效在于清热解毒、止血、疏风散热等，具有国宝一枝花的美称。

金银花由于具有多种药用成分和药理作用，目前许多临床药物制剂都含有金银花成分。

现如今，金银花已经成为我国重点管理的名贵药材。

本文主要探讨中药金银花的药用成分和临床药理作用。

1 材料与方法1. 1 材料包括重点中医医学点击、所有具有代表性关于中药金银花的医学著作。

1. 2 研究方法分别从中药金银花的草本考证、生物学研究、临床药理作用、化学成分研究等方面进行分析，讨论中药金银花的主要药用成分与药理作用。

2 结果金银花的主要药用成分包括黄酮类、挥发油、三萜皂类化合物、有机酸类化合物；主要药理作用包括解热、抗炎作用、止血作用、抗病毒作用、保肝利胆作用、抗菌作用。

见表1。

3 讨论3. 1 药用成分①黄酮类化合物：黄酮类化合物首次分离是由日本学者从金银花中分离出来。

厉世伟[1]将金银花及其不同提取物按一定浓度添加到用大肠杆菌滤过液制作的炎性反应细胞模型中，观察细胞形态的变化。

研究显示，金银花黄酮类致使细胞全部裂解破碎；金银花绿原酸类及其水提液组细胞生长旺盛，形态规整，与对照组基本相同。

在高浓度菌液中，金银花绿原酸类炎性反应细胞模型的细胞形态有不同程度的改变，稀疏，聚集，较对照组差，随后有圆形细胞产生，而加有金银花水提液的细胞与对照组基本相同。

高效液相色谱法同时对金银花中5种有效成分的含量测定孟晓岩;丁勇【摘要】Objective To simultaneously determine the contents of five active components in Lonicera japoni ca Thunb by HPLC method. Methods The separation of five ingredients was achieved on a Agilent Eclipse XDB-C18 column( 250 mm ×4. 6 mm,5 μm )with gradient elution using solvents of acetonitrile and 0. 4% phosphoric acid,the flow rate was 1. 0 mL/min. The detective wave length was at 350 nm,and the inpouring volume was 10 μL. Results The recovery rate was in the range of 97. 5% ~ 100. 2% ,and the compounds showed good linearity( rS=0. 999 3 )in a detection range. Conclusion The method is simple, sensitive, accurate and reproducible, it can be used to control the quality of Lonicera japonica Thunb.%目的建立HPLC法同时测定金银花中5种有效成分的含量.方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.4%的磷酸水溶液进行线性梯度洗脱,流速:1.0 mL/min,检测波长:350 nm,进样量:10μL.结果绿原酸、咖啡酸、芦丁、木犀草苷、槲皮素5个化合物在测定的范围内均表现出良好的线性关系(r≥0.999 3),回收率为97.5%～100.2%.结论该方法操作简便,分离效果好,灵敏度高,重复性好,为较全面控制金银花药材的质量提供了一种可靠的方法.【期刊名称】《实用药物与临床》【年(卷),期】2012(015)002【总页数】3页(P93-94,114)【关键词】高效液相色谱法;绿原酸;咖啡酸;芦丁;木犀草苷;槲皮素;梯度洗脱【作者】孟晓岩;丁勇【作者单位】沈阳永大制药有限公司,沈阳110027;中国医科大学药分药化教研室,沈阳110001【正文语种】中文1 仪器与方法1.1 实验仪器 Agilent-1100液相色谱仪(美国安捷伦公司，Agilent-1100系列四元泵，VWD检测器，Agilent Chemstation色谱工作站);XK96-A型快速混匀器(姜堰市新康医疗器械有限公司);DT-500型电子天平(常熟市衡器厂);AE200型电子分析天平(METTLER TOLEDO公司);SK7200H型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);0.45 μm过滤膜(国药集团化学试剂有限公司)。

HPLC法同时测定复方金银花颗粒中10种成分的含量何悦;王四旺;肖会敏【摘要】目的建立HPLC法同时测定复方金银花颗粒中10种成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素)含量的方法.方法采用HPLC法,色谱柱:Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-0.1％磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:0.8 ml/min;检测波长:320 nm;柱温:35℃;进样量:10μl.结果在上述色谱条件下,10个成分的峰具有良好的分离度;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的线性范围分别为10.20～340.06、7.19～239.81、6.12～203.84、15.00～500.00、20.16～671.85、25.19～839.67、14.61～487.14、10.52～350.66、7.32～244.01、7.61～253.82μg/ml;10个对照品的平均加样回收率均在97.67％～99.00％之间,RSD均在0.94％～1.37％之间;10批制剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、连翘酯苷B、连翘酯苷A、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的平均含量分别为0.5790、1.5235、1.0809、0.0831、0.4680、0.7396、1.9779、0.3515、0.2468、0.2566 mg/g.结论该含量测定方法简便、稳定可靠、准确,可作为复方金银花颗粒质量评价的方法.【期刊名称】《药学实践杂志》【年(卷),期】2019(037)002【总页数】6页(P177-182)【关键词】复方金银花颗粒;高效液相色谱;新绿原酸;隐绿原酸;绿原酸;连翘酯苷A;连翘酯苷B;黄芩苷【作者】何悦;王四旺;肖会敏【作者单位】陕西康城药业股份有限公司,陕西商洛 726000;空军军医大学中药和天然药物学教研室,陕西西安 710032;空军军医大学中药和天然药物学教研室,陕西西安 710032;空军军医大学中药和天然药物学教研室,陕西西安 710032;陕西含光生物科技有限公司,陕西西安 710032【正文语种】中文【中图分类】R284.1复方金银花颗粒由金银花、黄芩、连翘三味中药组成，具有清热解毒，凉血消肿之功效，用于风热感冒、咽炎、扁桃体炎、目痛、牙痛及痈肿疮疖等。

一、实验目的1. 了解金银花中有效成分的提取方法。

2. 掌握金银花中金银花素含量的测定方法。

3. 分析金银花在不同提取条件下的金银花素含量。

二、实验原理金银花中含有多种有效成分，其中金银花素是其主要有效成分之一。

金银花素具有清热解毒、抗病毒、抗菌等作用。

本实验采用高效液相色谱法（HPLC）测定金银花中金银花素含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：金银花干燥药材、甲醇、乙腈、金银花素标准品。

2. 仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、样品研磨机、离心机、容量瓶、移液管、玻璃棒等。

四、实验方法1. 标准曲线的制备（1）准确称取金银花素标准品10.0mg，置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解，定容至刻度，配制成浓度为1.0mg/mL的金银花素标准储备液。

（2）分别吸取金银花素标准储备液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL，置于5mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，配制成浓度为0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/mL的金银花素标准溶液。

（3）将标准溶液分别进样，记录峰面积，以金银花素浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品溶液的制备（1）准确称取金银花干燥药材5.0g，置于研钵中，加入适量甲醇，研磨成粉末。

（2）将粉末转移至50mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，超声提取30分钟。

（3）将提取液离心，取上清液，经0.45μm滤膜过滤，得待测样品溶液。

3. 样品测定（1）色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1.0mL/min，检测波长为280nm。

（2）取待测样品溶液，进样，记录峰面积，根据标准曲线计算样品中金银花素含量。

五、实验结果与分析1. 标准曲线以金银花素浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性方程为：y=0.0068x-0.0123，相关系数R²=0.9987。