工作细胞库(WCB)制备

Q5d人用药品注册技术要求国际协调会ICH三方协调指导原则ICH指导委员会在1997年7月16日ICH进程第四阶段推荐采纳该指导原则由相应的ICH专家小组制定，按照ICH进程，已递交管理部门讨论。

在ICH进程第四阶段，最终草案被推荐给欧盟、日本和美国的管理机构采纳。

用于生物技术产品及生物制品生产的细胞基质的来源和鉴定目录1.前言 (158)1.1 目的 (158)1.2 基本原理 (158)1.3 范围 (158)2.指导原则 (159)2.1 细胞基质的来源、历史和产生 (159)2.1.1前言 (159)2.1.2细胞的起源、来源和历史 (160)2.1.3细胞基质的产生 (161)2.2 细胞库 (161)2.2.1 细胞库系统 (162)2.2.2 细胞建库的步骤 (163)2.3 细胞库鉴定和检测的一般原则 (164)2.3.1 鉴别试验 (165)2.3.1.1 后生动物细胞 (165)2.3.1.2 微生物细胞 (166)2.3.2 纯度的检测 (166)2.3.2.1 后生动物细胞 (166)2.3.2.2 微生物细胞 (167)2.3.3 细胞基质的稳定性 (168)2.3.4 细胞核学和致瘤性试验 (169)3.术语 (170)附件：原代细胞基质 (171)用于生物技术产品及生物制品生产的细胞基质的来源和鉴定1. 前言1.1 目的本指导原则的目的是对用于生产生物技术产品及生物制品的人和动物细胞系、微生物细胞系及其细胞库的制备和鉴定建立合适的标准提供指导意见。

本文件还为申请产品上市时在这些方面应申报哪些资料提出了建议。

1.2基本原理历史上，由于细胞源性的生物制品存在外来污染或出于对用于制备产品的细胞特性的担忧，引发了一些对产品质量的关切。

重组DNA (rDNA)制品的质量也与细胞基质中构建的表达载体有关。

由此，业界达成共识，认为细胞基质的特性以及与之相关的事件将影响产品的质量和安全性。

生物技术制药复习知识点第一章绪论1.生物制药的研究内容包括基因工程制药, 细胞工程制药, 酶工程制药和发酵工程制药。

2.生物技术制药, 是采用现代生物技术人为地创造一些条件, 借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。

3.生物技术药物, 是采用DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质、治疗性抗体或核酸类药物。

4.生物药物, 指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分, 甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。

5.现代生物药物四种类型: ①应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。

②基因药物, 如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。

③来自动植物和微生物的天然生物药物。

④合成与部分合成的生物药物。

6.生物药物按功能用途分为三类: 治疗药物, 预防药物和诊断药物。

7.生物技术药物的特性：分子结构复杂, 具种属特异性, 治疗针对性强、疗效高, 稳定性差, 基因稳定性, 免疫原性、重复给药会产生抗体, 体内半衰期短, 受体效应, 多效性和网络效应, 质量控制的特殊性, 生产系统的复杂性。

8.生物技术制药特征：高技术, 高投入, 长周期, 高风险, 高收益。

9.基因诊断: 指采用分子生物学的方法在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析从而对特定的疾病进行诊断。

第二章基因工程制药1.利用基因工程技术生产药品的优点: （1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等）, 为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足够数量的生理活性物质, 以便对其生理、生化和结构进行深入的研究, 从而扩大这些物质的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处, 可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物, 扩大药物筛选来源。

细胞库建立概况一、对细胞库细胞基质总的要求(一)细胞系／株历史资料1．细胞系／株来源资料应具有细胞系／株来源的相关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。

这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。

人源细胞系／株须具有细胞系／株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。

动物来源的细胞系／株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。

2．细胞系／株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系／株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。

同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测结果的相关资料。

应提供细胞培养液的详细成分。

如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的相关资料。

(二)细胞库的建立细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。

1．原材料的选择建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相关规定。

神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。

培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应符合规定(附录XIII D)。

不得使用人血清作为细胞培养液。

如需使用人血白蛋白，则须使用有批准文号的合格制品。

消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。

特别应检测胰蛋白酶来源的动物可能携带的病毒，如细小病毒等。

用于生物制品生产的培养物中不得使用青霉素或β- 内酰胺(β-Lactam)类抗生素。

2．细胞培养操作的要求细胞培养生产人员应定期检查身体。

在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物的操作；在同一工作日进行细胞操作前，不得操作或接触有感染性的微生物或动物。

生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程本规程适用于人用生物制品生产/检定用动物细胞基质，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。

细胞基质系指可用于生物制品生产/检定的所有动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。

生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。

生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。

生产的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。

一、对生产用细胞库细胞基质总的要求用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国务院药品监督管理部门批准。

（一）细胞系/株历史资料的要求1.细胞系/株来源资料应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。

这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。

人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。

动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。

如采用已建株的细胞系/株，应从具有一定资质的细胞保藏中心获取细胞，且应提供该细胞在保藏中心的详细传代过程，包括培养过程中所使用的原材料的相关信息，具有细胞来源的证明资料。

2．细胞系/株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系/株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。

同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检查结果的相关资料。

应提供细胞培养液的详细成分，如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法及质量控制、检测结果和质量保证的相关资料。

细胞库建立概况一、对细胞库细胞基质总的要求(一)细胞系／株历史资料1.细胞系／株来源资料应具有细胞系／株来源的相关资料,如细胞系／株制备机构的名称,细胞系／株来源的种属、年龄、性别与健康状况的资料。

这些资料最好从细胞来源实验室获得,也可引用正式发表文献。

人源细胞系／株须具有细胞系／株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。

动物来源的细胞系／株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。

2.细胞系／株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系／株过程的相关资料,包括所使用的物理、化学或生物学手段,就是否有外源添加序列,以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。

同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测结果的相关资料。

应提供细胞培养液的详细成分。

如使用人或动物源成分,如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其她生物学活性的物质,应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果与质量保证的相关资料。

(二)细胞库的建立细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。

1.原材料的选择建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相关规定。

神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。

培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群,其质量标准应符合规定(附录XIII D)。

不得使用人血清作为细胞培养液。

如需使用人血白蛋白,则须使用有批准文号的合格制品。

消化细胞用胰蛋白酶应进行检测,证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。

特别应检测胰蛋白酶来源的动物可能携带的病毒,如细小病毒等。

用于生物制品生产的培养物中不得使用青霉素或β- 内酰胺(β-Lactam)类抗生素。

2.细胞培养操作的要求细胞培养生产人员应定期检查身体。

在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物的操作;在同一工作日进行细胞操作前,不得操作或接触有感染性的微生物或动物。

生物技术制药复习知识点第一章绪论1.生物制药的研究内容包括基因工程制药，细胞工程制药，酶工程制药和发酵工程制药。

2.生物技术制药，是采用现代生物技术人为地创造一些条件，借助某些微生物、植物或动物来生产所需的医药品。

3.生物技术药物，是采用DNA 重组技术、单克隆抗体技术或其它生物新技术研制的蛋白质、治疗性抗体或核酸类药物。

4.生物药物，指包括生物制品在内的生物体的初级和次级代谢产物或生物体的某一组成部分，甚至整个生物体用作诊断和治疗的医药品。

5.现代生物药物四种类型：①应用DNA重组技术制造的基因重组多肽、蛋白质类治疗剂。

②基因药物，如基因治疗剂、基因疫苗、反义药物和核酶等。

③来自动植物和微生物的天然生物药物。

④合成与部分合成的生物药物。

6.生物药物按功能用途分为三类：治疗药物，预防药物和诊断药物。

7.生物技术药物的特性：分子结构复杂，具种属特异性，治疗针对性强、疗效高，稳定性差，基因稳定性，免疫原性、重复给药会产生抗体，体内半衰期短，受体效应，多效性和网络效应，质量控制的特殊性，生产系统的复杂性。

8.生物技术制药特征：高技术，高投入，长周期，高风险，高收益。

9.基因诊断：指采用分子生物学的方法在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析从而对特定的疾病进行诊断。

第二章基因工程制药1.利用基因工程技术生产药品的优点：（1）可以大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽（如胰岛素、干扰素、细胞因子等），为临床使用提供有效的保障；（2）可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；（3）利用基因工程技术可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；（4）内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；（5）利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。

2.基因工程技术就是将目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。

2020版药典通则生物制品生产检定用动物细胞基质制备及质量控制本通则适用于人用生物制品生产用动物细胞基质及检定用动物细胞，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。

细胞基质系指可用于生物制品生产的所有动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。

生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。

生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。

生产杂交瘤制品的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。

一、对生产用细胞基质总的要求用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国家药品监督管理部门批准。

（一）细胞系/株历史资料1. 细胞系/株来源资料应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。

这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。

人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别、健康状况及病原体检测结果的相关资料。

动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、供体的一般健康状况及病原体检测结果的相关资料。

如采用已建株的细胞系/株，应具有细胞来源的证明资料。

应从能够提供初始细胞历史及其溯源性书面证明材料的机构获得，且应提供该细胞在该机构的详细传代记录，包括培养过程中使用的所有原材料的详细信息，如种类、来源、批号、生产日期及有效期、制备或使用方法、质量标准及检测结果等。

2. 细胞系/株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及细胞系/株建立过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，外源插入序列，筛选细胞所进行的任何遗传操作或筛选方法、在动物体内传代过程以及细胞生长特征、培养液成分等；同时还应具有细胞鉴别、内源及外源因子检查结果的相关资料。

生物制品工艺验证生物制品（Biological Products）是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统技术或现代生物技术制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。

生物制品的生产工艺过程复杂，可以简单地分为上游（Up-stream）和下游（Down-stream）及制剂（Product）三个部分。

6.4.1生物制品的分类生物制品按其结构与功能分为疫苗类、抗体类、人血代用品、重组细胞因子、反义寡核苷酸和重组激素类。

疫苗类①病毒疫苗；②细菌疫苗；③寄生虫疫苗；④治疗性疫苗。

抗体类①多克隆抗体；②单克隆抗体；③基因工程抗体；④抗体诊断试剂。

人血代用品①血浆；②血细胞；③血清白蛋白与γ-球蛋白；④修饰血红蛋白。

重组细胞因子①干扰素；②集落刺激因子；③白细胞介素；④肿瘤坏死因子；⑤趋化因子；⑥转化生长因子⑦生长因子。

反义寡核苷酸反义寡核苷酸是人工合成的，与靶基因或mRNA某一区段互补的核酸片断，可以通过碱基互补原则结合于靶基因/mRNA上，从而封闭基因的表达。

①硫代反义寡核苷酸；②2-甲氧/乙氧基反义寡核苷核酸；③肽核酸（PNA）;④其他。

重组激素类①多肽蛋白类激素；②类固醇激素；③氨基类激素；④脂肪酸的衍生物类激素。

不同类型的生物制品所涉及的生物技术及生产工艺相当复杂，国家对生物制品的生产及质量管理要求特别严格，在生产工艺验证方面也存在着一定的难度和挑战。

生物制品的工艺验证常指与生物产品加工生产过程有关的验证活动。

本节将以单克隆抗体的生产工艺验证进行举例说明。

6.4.2单克隆抗体生产的工艺流程单克隆抗体生产工艺流程简单的可以分为上游（Up-stream）、下游（Down-stream）、制剂（Product）三个部分，如图6-4-1所示。

6.4.2.1单抗上游生产工艺简介(1)细胞库的建立单克隆抗体生产常用CHO细胞，CHO细胞是中国仓鼠卵巢（Chinese Hamster Ovary, CHO）细胞，1957年美闺科罗拉多大学Dr.Theodore T.Puck从一只成年雌性仓鼠卵巢离获得，为上皮贴壁型细胞。

20070914栏目生物制品评价>>生物制品技术审评一般原则标题重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制技术评价一般原则作者审评五部部门正文内容一、前言对于结构复杂、带有糖基化修饰基团的抗体、凝血因子、酶、激素等生物大分子，通常需要借助哺乳动物细胞才能正确表达和修饰成与预期生物活性相同的重组制品。

随着生物工程技术的进步和发展，目前这些细胞应用不断增多。

在宿主细胞选择、重组工程细胞构建以及生产细胞的培养扩增和监控过程中，不仅要关注细胞的适用性、目的产物表达生产能力，同时还应当重视伴随细胞培养产生的内源性病毒、宿主细胞残余蛋白和DNA、致肿瘤成分等潜在的风险性因素对重组产品带来的安全性影响，在早期研究阶段，同步开展库细胞、生产培养过程细胞、生产终末细胞的全面检定和控制以及病毒和/或致瘤性成分的去除/灭活工艺的验证。

（一）目的和意义经过全面检测的种子细胞是实现重组基因工程产品生产的前提和基础，使生产用种子细胞具有共同的始祖细胞，保持相同的遗传和生物学特征，在特定的培养环境和条件下持续稳定表达携带的外源目的基因；经过研究确定细胞在扩增培养和生产过程中的变化，才能够有效控制风险性因素，满足生产的持续需求，使产品质量保持一致。

本技术评价一般原则重在阐述重组制品生产用哺乳动物细胞质量控制的基本内容和相关要求，以期引导开展全面完整的细胞质量试验研究、生产细胞培养工艺验证，建立系统规范的重组工程细胞库及实现生产过程细胞质量的有效监控。

（二）适用范围本技术评价一般原则适用于生产治疗用重组制品的哺乳动物细胞，不包括细菌、酵母等重组工程菌，也不包括治疗用体细胞、疫苗生产用细胞基质、杂交瘤细胞等。

相关内容可参见国家局已颁布的指导原则和药品审评中心公布的药品技术评价一般原则，重组制品生产用哺乳动物细胞亦须符合这些已有文件的相关要求。

（三）局限性本技术评价一般原则主要结合目前对于重组工程细胞结构、功能，细胞致瘤性和内源性病毒对重组产品带来的风险及微生物污染因子的危害性共识，提出技术审评关注的重点问题和基本原则，需要结合具体细胞和实际培养控制条件考虑和选择。

生物技术制品的质量：对用于生产rDNA来源蛋白质产品的细胞的表达构建体分析Q5B现行第四版本，1995年11月30日发布Q5B文件历史旧编码历史日期新编码2005年11月Q5B指导委员会批准进入第二阶段，并公开征求意见。

1995年3月28日Q5B现行第四阶段版本Q5B指导委员会批准进入第四阶段版本，并推荐给ICH三方法规机构1995年11月30日Q5B采纳。

I.引言本文件旨在为用真核和原核细胞生产重组DNA蛋白产品的表达构建体的鉴定提供指导，内容仅限于在评价重组DNA蛋白表达构建体时各种有价值的资料，不涵盖rDNA来源医药产品的所有有关质量的内容。

表达构建体的定义为含有重组蛋白编码序列的表达载体。

为保证终产品的质量和一致性，应使用核酸技术并结合其他用于纯化重组蛋白的方法分析表达构建体片段。

鉴于这个试验仅仅是评价重组基因的编码序列，而不包括翻译的忠实性以及重组蛋白的其他特征如二级结构、三级结构和翻译后修饰，对表达构建体在核酸水平上的分析只能视为整体质量评价的一部分。

II.表达构建体分析的基本原理表达构建体分析的目的是确保产品的正确编码序列被导人到宿主细胞，并从培养到生产结束保持不变。

在活细胞中产生的重组蛋白，其基因序列可能发生突变而改变蛋白质的性质，从而对病人产生潜在的副作用。

应该说没有一种单独的试验方法能检测蛋白质所有可能发生的改变，蛋白质分析技术是用于估测蛋白质的氨基酸顺序和由于翻译后修饰如蛋白水解、糖基化、磷酸化、乙酰化等作用形成的表达蛋白质的结构特征。

因为蛋白质分析方法有时不能检测到所有重组蛋白编码序列突变造成的蛋白质结构变化，所以从核酸分析中得到的资料亦是有用的。

对于不同的产品，核酸分析和蛋白分析的相对重要性是不一样的。

核酸分析可用于验证表达构建体的编码序列和物理状态。

核酸分析的目的不是为了检测少量变异序列，而是为了能确保被表达的蛋白有正确的氨基酸顺序。

当生产细胞有多个整合的表达构建体拷贝时，并非所有的拷贝都具有转录活性，因此通过对mRNA或cDNA的分析测定转录产物本身，也许比对基因组DNA 的分析更合适。

细胞库建立概况一、对细胞库细胞基质总的要求(一)细胞系／株历史资料1．细胞系／株来源资料应具有细胞系／株来源的相关资料，如细胞系／株制备机构的名称，细胞系／株来源的种属、年龄、性别和健康状况的资料。

这些资料最好从细胞来源实验室获得，也可引用正式发表文献。

人源细胞系／株须具有细胞系／株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。

动物来源的细胞系／株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。

2．细胞系／株培养历史的资料应具有细胞分离方法、细胞体外培养过程及建立细胞系／株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进行的任何遗传操作或选择方法等。

同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检测结果的相关资料。

应提供细胞培养液的详细成分。

如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的相关资料。

(二)细胞库的建立细胞库的建立可为生物制品的生产提供已标定好的、细胞质量相同的及能持续稳定传代的细胞种子。

1．原材料的选择建立细胞库的各种类型细胞的供体均应符合细胞库细胞的检定中相关规定。

神经系统来源的细胞不得用于生物制品生产。

培养细胞用牛血清应来源于无牛脑海绵体脑病流行地区的健康牛群，其质量标准应符合规定(附录XIII D)。

不得使用人血清作为细胞培养液。

如需使用人血白蛋白，则须使用有批准文号的合格制品。

消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体或病毒污染。

特别应检测胰蛋白酶来源的动物可能携带的病毒，如细小病毒等。

用于生物制品生产的培养物中不得使用青霉素或β- 内酰胺(β-Lactam)类抗生素。

2．细胞培养操作的要求细胞培养生产人员应定期检查身体。

在生产区内不得进行非生产制品用细胞或微生物的操作；在同一工作日进行细胞操作前，不得操作或接触有感染性的微生物或动物。

工作细胞库（WCB）制备1. 根据SOP，提供工作细胞库（WCB，冻干管）制备的工艺过程与中间控制的描述资料，必要时对SOP修订或补充。

工作细胞库由主细胞库（MCB）制备。

工艺过程如下：上一年留存冻干管（主细胞库）↓制备若干斜面↓摇瓶发酵水平测定↓选定满意的斜面↓制备冻干管（今年的工作细胞库）在制备主细胞库过程中，制备的斜面在温度３４℃、湿度４０％～５０％的培养箱中培养７天。

检测发酵水平时，摇瓶于３２±１℃的摇床上培养８天。

对于选定的斜面，其化学效价应和上一年主细胞库效价的差距≤５％，并且斜面外观和其摇瓶中菌丝的形态也要符合相应的特征。

2. 参照ICH Q5D和EP中“PRODUCTS FO FERMENTATION”的要求，提供现有主细胞库鉴别、纯度和生产能力的数据，并与历史数据比较，提供由此主细胞库制备的工作细胞库的鉴别、纯度和生产能力的数据，并与主细胞库比较。

主细胞库的稳定性包括鉴别、纯度和生产能力的检测。

利用16S rRNA测定菌种的基因序列来进行MCB的鉴别。

和已知基因序列相比，如果两者相同比率≥98%，则说明MCB没有发生变异。

利用平板菌落分离来检测菌种的纯度。

如果分离平板中没有1个杂菌菌落生长，则说明MCB没有受到其它菌种的污染。

利用摇瓶发酵来检测MCB的生产能力。

将菌种接种到发酵瓶后，在32±1℃培养8天，如果与去年主细胞库效价差距≤5%，则说明MCB的生产能力是稳定的。

主细胞库以冻干管形式保存于2~6℃冰箱中，保存时间不超过3年。

在工作细胞库方面：菌种鉴别主要靠肉眼观察和显微镜观察来进行。

肉眼观察成熟单菌落，菌落具有一定的花瓣形状，边缘不规则，中间隆起，且颜色偏灰。

将菌种接种到摇瓶并且培养，用显微镜观察菌丝，发现菌丝微直，呈一定放射状，和分枝菌丝一起构成网状。

和MCB一样，利用平板菌落分离来检测WCB的纯度。

如果分离平板中没有1个杂菌菌落生长，则说明WCB没有受到其它菌种的污染。