典型活细胞工作站图文介绍

活细胞高速共聚焦成像分析系统背景为适应目前对活细胞成像速度的要求，高速活细胞共聚焦显微镜应运而生，它们大大提高了成像速度，在取得高质量图像的同时，尽量保护样品，减少荧光淬灭，捕捉活细胞长时间动态变化，在生物学中得到广泛应用。

分类（根据扫描单元不同）（一）碟片式共聚焦1、高灵敏度、高分辨率的EMCCD2、YOKOGAWA CSU22/10共聚焦扫描单元3、电动载物台、快速聚焦单元4、细胞培养小室共聚焦扫描单元EMCCD电动载物台细胞培养小室分类（根据扫描单元不同）特点：1、高灵敏度2、高速成像3、低光毒性、光漂白4、多种实验技术应用分类（根据扫描单元不同）（二）点扫描式共聚焦1、PMT2、点扫描共聚焦单元3、电动载物台、快速聚焦单元4、细胞培养小室特点：高分辨率1）细胞迁移与细胞骨架2）细胞分裂与细胞周期3）细胞信号转导4）组织分化与发育5）囊泡和蛋白运输6）生理学和神经科学7）钙离子信号研究8）蛋白质与DNA相互作用9）宿主与病原体相互作用10）癌症研究11）药理研究12）生物物理研究T 细胞，绿色颗粒为HIV 病毒可以精确的跟踪需要观察的细胞记微管蛋白，红色标记染色体Determining the position of the cell division planeVol 424, 1074 -1078 (28 August 2003)T-cell engagement of dendritic cells rapidly rearranges MHC class II transportVol.418、No.6901（29 Aug.’02）细胞核囊泡和微管囊泡运输模式动物4D成像、追踪分析－－3D＋T光诱导动力学（Photokinesis）020060010001400C e l l C o u n t M itochondrial M ass-3-2-1123456400800120016002000T a crineF C C PA ce ta m in o p h e n L o g co m p o un d [礛]M i t o c h o n d r i a l M a s s 020040060080010001200140016001800200000.030.10.3131030Staurosporine [µM]C e l l n u m b e r a n d n u c l e i a r e a [-]什么是高内涵（HCA）细胞成像分析技术？高内涵细胞成像分析系统由三个部分组成：全自动高速显微成像，全自动图像分析和数据管理。

活细胞工作站使用指南1. 开机顺序：1） 分为上下两列开关：先下列按照一、三、二、四、五的顺序打开，上列依顺序由下向上打开；2） 打开激光器开关；3） 打开电脑；4） 打开气瓶，顺时针缓慢拧开，压力阀上调一小刻度即可；5） 小室加水，要用超纯水（如小瓶没水，请到各自实验室填充）；6） 选择合适的适配器（33mm 培养皿或玻片）后，将细胞放入小室，盖好小室上层小盖。

2. 打开软件。

桌面——双击Volocity ——出现 界面1） 新建文件夹（为了保证每次数据的安全性及有序性，要求每次试验都建立新的文件夹）方法：点击 Creat a new library 图标——选择新建文件夹路径（C:\Ultraview \ioz\当时月份的文件夹）——输入文件名（名称格式为 本人姓名+年月日）——点击 Creat ——进入软件界面2） 打开已有的文件夹进行数据处理点击 Open a existing library 图标——选择新建文件夹路径（C:\Ultraview \ioz\当时月份的文件夹\目标文件名）——点击 Open ——进入软件界面3. 软件界面及显微镜界面构成：2） 显微镜界面：图2：显微镜正面示意图（学生可操作的部分有两部分）：图44. UltraVIEW VoX 图像采集简要操作流程1) 将样品放入小室，盖好小室上层小盖；2) 打开软件，单击图1 第三部分中的“video preview ”图标，点击图1 第六部分中的⑦打开明场光路；3) 选择合适的物镜后在显微镜下调整样品对焦；4) 点击图2.第一部分中的“L100”将显微镜光路切换至共聚焦成像模式；5) 选择合适的激光通路6) 依次调节各路激光的激光功率，敏感度（sensitivity ）及曝光时间（exposure time ）；激光功率最大一般控制在40%左右，如果荧光较弱，敏感度可以拉的很大，但曝光时间一般最大控制在500ms 左右。

活细胞工作站-及应用案例简介(共8页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--活细胞工作站及应用案例介绍关键词：活细胞工作站、CV1000、6D 活细胞成像、3D 成像、激光共聚焦显微镜、四转盘扫描、双转盘扫描、YOKOGAWA、最长扫描时间活细胞工作站可实现在细胞水平上的定性和定量分析、活细胞图像处理、活细胞动态示踪。

在分子水平上，可做到基因定位定量表达的动态分析、蛋白质合成讲解运输和相互作用的动态研究、细胞骨架的代谢动力学测定和细胞周期各时相的动态观察等。

现在市场上有众多的活细胞工作站、激光共聚焦观察系统等，下面以Yokogawa 的CV1000 为例介绍此类型的活细胞工作站。

CV1000 活细胞动态成像系统是定位于长时间、多时相、6D 活细胞成像的一体化共聚焦系统，它整合了显微镜，共聚焦光路系统，以及活细胞工作站等诸多模块于一体，不需暗室操作并且集成了温度、湿度控制等繁琐过程。

整套安装简易，操作简单，使用方便，并且厂家携代理商提供完善的售后服务。

CV1000 使用的四转盘共聚焦扫描头，最大限度地降低了光毒性和光漂白。

CV1000 是目前唯一的能长时间对胚胎做3D 成像，然后被观察的胚胎细胞能顺利发育为健康成体小鼠的系统。

该系统的精确的温度控制系统（精确度可达℃），使得干细胞，胚胎，以及其他细胞可在稳定的温度环境中生长，精确地完成您的实验操作。

四转盘共聚焦扫描系统，以及独一无二的为转盘共聚焦优化的双针孔设计，为活细胞的观察在技术水平上提供了双保险，使得CV1000 更适合于非常适合于精确度要求极高的生命过程的观察，如癌症，发育生物学，干细胞研究等领域的长时高速6D 成像，尤其适合于肿瘤细胞的增殖和迁移，干细胞增殖和分化，iPS 细胞成像，胚胎发育，转基因细胞，细胞周期观察等领域。

此外，在活细胞观察中至关重要的温度控制，不仅可以影响活细胞在观察过程中的生长状态，还会引起Z 轴漂移。

活细胞工作站原理
活细胞工作站是一种实验设备，用于对活细胞进行研究和实验操作。

其原理主要包括以下几个方面：
1. 细胞培养：活细胞工作站提供了一个受控的环境，包括适当的培养基、温度、湿度和二氧化碳浓度等，以确保细胞在理想的条件下生长和繁殖。

2. 细胞观察：活细胞工作站通常配备了光学显微镜和相应的放大倍数，以便对细胞进行观察和记录。

用户可以观察细胞的形态、大小、运动和细胞器的定位等特征，以了解细胞的生理状态和功能。

3. 细胞操作：活细胞工作站通常配备了显微操作装置（如激光切割系统、显微注射装置、微操纵器等），以便对细胞进行操作。

例如，可以通过激光切割系统将细胞进行分离，或通过显微注射装置进行基因转染等。

4. 环境控制：活细胞工作站具有对温度、湿度和二氧化碳浓度等环境因素的控制能力，以模拟体内情况，提供一个适宜的环境给细胞生长和实验操作。

5. 数据记录和分析：活细胞工作站通常配备了图像记录系统，将观察到的细胞图像保存下来。

此外，还可利用图像处理和分析软件对细胞图像进行处理和分析，从而得到更详细的数据和结论。

通过活细胞工作站的使用，研究人员可以更加全面地了解和研究活细胞的行为、功能以及细胞内的分子机制，为细胞生物学研究提供了强大的工具和平台。

活细胞成像⼯作站-丁⾹通-你的实验室采购专家MetaMorph 活细胞成像分析系统 MM-LCI在维持细胞长时间存活过程中，必须保证在观察过程中给细胞最⼩的刺激（光毒性、光漂⽩等）和获得尽可能清晰的细胞图像。

MetaMorph活细胞系统结合多种先进技术，呵护细胞，清晰呈现。

在进⾏长时间的活细胞成像和观察中，需要保证活细胞⽣存所需最基本的温度、湿度、CO2等条件，以确保细胞正常⽣长代谢MetaMorph活细胞成像系统，在保证细胞⽣长存活的同时，能够最⼤限度的降低细胞损害，并能获得清晰的细胞多维图像，满⾜活细胞各个⽅⾯观察和研究的需要。

优化⾼效的⼯作流程能够清晰呈现细胞图像，并获得⽆偏移的分析结果。

■精准、清晰新的反卷积提供了实时的反卷积功能■充分保护活细胞降低细胞光照射，为细胞提供保护，获得细胞最真实的影像■从宏观到细节同时获得相同细胞的微观和宏观图像■从平⾯到⽴体4D浏览，获知细胞的所有结构随时间发⽣的位移变化和转移过程，获得前所未有的深层细胞信息获取准确清晰的细胞图像■精准、清晰新的反卷积提供了实时的反卷积功能■充分保护活细胞降低细胞光照射，为细胞提供保护，获得细胞最真实的影像准确、清晰充分保护细胞■灵活的光学系统MetaMorph 活细胞系统能够配合Leica 、Nikon 、Olympus 、Zeiss 显微镜，结合各品牌显微镜的成像优势，获得⽆以伦⽐的成像效果。

■3D 反卷积和实时反卷积捕获的荧光图像通过强⼤的3D 反卷积和实时反卷积提⾼⽔平和Z 轴的分辨率，获得更⾼的信噪⽐和图像质量，并能恢复由于光学系统导致的信号损失。

■⾼精度的载物台系统采⽤⾼精度回馈电路XY 载物台系统，速度快，精度⾼，最⼩步进可达20nm ，适合活细胞连续观察过程中的精确定位，⽀持多孔板、玻⽚、培养⽫等各种样品。

实时反卷积使⽤前后的图像对⽐■远红外⾃动对焦及防漂移系统能够快速聚焦找到细胞，同时对细胞⽆光毒性和光漂⽩作⽤。

德国Zeiss活细胞工作站标准操作规程部门：药学院仪器测试中心实施日期：2012年12月25日1 2 3目录：系统的组成系统组成及光路示意图实物照片说明系统的使用2.1开机顺序2.2软件的快速使用说明2.3显微镜的触摸屏控制2.4关机顺序系统的维护1系统组成及光路示意图：系统的组成激光扫描共聚焦显微镜系统主要由：电动荧光显微镜、扫描检测单元、激光器、电脑工作站及各相关附件组成。

电动荧光显微镜 扫描检测单元 激光器 电脑工作站实物照片说明：电动荧光显微镜扫描检测单元CO2培养系统控制器激光器电脑工作站2 系统的使用2.1开机顺序（1）打开稳压电源（绿色按钮）等待2分钟（电压稳定）后，再开其它开关（2）主开关[ MAIN SWITCH ]“ON”电脑系统[ SYSTEMS/PC ]“ON”扫描硬件系统[ COMPONENTS ]“ON”（3）打开[电动显微镜开关]打开[荧光灯开关]（注：具有5档光强调节旋钮）（4）Ar离子激光器主开关“ON”顺时针旋转钥匙至“—”预热等待约15分钟，将激光器[扳钮]由“Standby”扳至“Laser run”状态，即可正常使用（5）打开[电脑开关]，进入操作系统注：键盘上也具有[电脑开关]2.2 软件的快速使用说明（1）电脑开机进入操作系统界面后，双击桌面共聚焦软件ZEN图标（2）进入ZEN界面，弹出对话框：“Start System”——初始化整个系统，用于激光扫描取图、分析等。

“Image Processing”——不启动共聚焦扫描硬件，用于已存图像数据的处理、分析。

（3）软件界面：1功能界面切换：扫描取图（Acquisition）、图像处理Processing）、维护Maintain）（注：Maintain仅供Zeiss专业工程师使用）2动作按钮；3工具组（多维扫描控制）4工具详细界面；5状态栏；6视窗切换按钮；7图像切换按钮；8图像浏览/预扫描窗口；9文档浏览/处理区域；10视窗中图像处理；Start 。

活细胞工作站
活细胞工作站是一种用于细胞培养和实验操作的设备，它为科研人员提供了一
个稳定的、无菌的环境，用于细胞的培养、观察和实验操作。

活细胞工作站通常由一个带有透明前面板的封闭式工作台和一个高效的过滤系统组成，可以提供洁净的工作环境，防止细菌和微生物的污染，保护细胞的生长和实验的准确性。

在活细胞工作站中，科研人员可以进行细胞培养、细胞观察、细胞实验等操作。

首先，科研人员需要将需要处理的细胞样本放置在活细胞工作站的工作台上，然后通过工作站内部的过滤系统，将空气中的微生物和细菌过滤掉，确保工作环境的洁净。

接着，科研人员可以在工作台上进行细胞培养的操作，比如更换培养基、观察细胞的生长情况等。

此外，活细胞工作站还配备了显微镜和实验仪器的插口，方便科研人员进行细胞观察和实验操作。

活细胞工作站在细胞生物学和生物医学研究中起着非常重要的作用。

它不仅可
以提供一个洁净、稳定的工作环境，保护细胞的生长和实验的准确性，还可以减少实验中外界因素的干扰，提高实验的可靠性和准确性。

因此，活细胞工作站被广泛应用于细胞培养、细胞观察、细胞实验等领域，成为细胞生物学和生物医学研究中不可或缺的设备之一。

总的来说，活细胞工作站是一种非常重要的实验设备，它为科研人员提供了一
个洁净、稳定的工作环境，保护细胞的生长和实验的准确性，提高了细胞生物学和生物医学研究的可靠性和准确性。

在未来的研究中，活细胞工作站将继续发挥重要作用，推动细胞生物学和生物医学研究的发展。

活细胞工作站的使用及常见问题分析作者：槐玉英宋瑞龙来源：《科技视界》2020年第16期摘要活细胞工作站可为体外细胞提供生存环境并维持细胞在较长时间内的正常生长繁殖，该设备便于细胞内或细胞间物质代谢的追踪观察，现已成为生物学领域中的一种热门研究手段。

本文概述了该设备的操作方法及常见问题，供大家参考。

关键词活细胞工作站;样品制备;应用;常见问题中图分类号： Q2-33 ; ; ; ; ; ; ; ; ; ; ;文献标识码： ADOI：10.19694/ki.issn2095-2457.2020.16.085AbstractThe live cell imaging system can provide a living environment for cells in vitro and maintain the normal growth and reproduction of cells for a long time.It is convenient for tracking and observing the metabolic of intracellular or intercellular substance.It has become a popular research method in the biological field.This paper outlines the operation and common problems of the live cell imaging system.Key WordsLive cell imaging system;Sample preparation;Application;Common problems活细胞工作站是在倒置荧光显微镜基础上实现长时间、连续观察活细胞培养并能连续采集图像的成像系统，可对细胞内或细胞间的物质代谢或信息传递进行动态观察。

Leica DMI6000B活细胞工作站操作手册一、开机步骤1、打开总电源开关。

2、打开37℃加温器开关（位置在显微镜桌下方，并有温度显示），等温度升至37℃，夏天约需0.5hr，冬天约需1.5hr。

3、打开显微镜开关。

位于电脑桌右下方。

4、打开电脑显示屏幕，再打开电脑开关（位置在电脑桌下方）。

5、打开汞灯（汞灯开关在左面白色柜子的第二层，）。

6、放倒立柱，放上样品，再放正立柱（放样品前检查显微镜镜头是否下移，以免碰到镜头损坏样品）。

7、如果需用CO2，则接上CO2装置，开二氧化碳钢瓶和空气钢瓶。

8、打开红色混合器开光，并调节混合器输出二氧化碳百分比为5%或10%和流量为3（位置在左面白色柜子第一层）。

二、软件操作1、打开leica LAS AF 软件，界面如下图所示2、开始实验设置点击setup根据实验需要选择采图模式以及相应的滤光块，依次查看各个激发光的图像，通过调整焦距和曝光时间优化图像。

点击Z，可以确定多层扫描的范围确定begin位置和end位置，z spacing 确定扫面的步宽，number of Z planes 确定扫描层数。

点击T，出现time sequence builder面板，根据实验选择不同的时间参数组合情况。

点击N设置多点拍摄。

先初始化，先将透射光立柱向后倾倒，初始化后，再将立柱竖直放置。

通过xy方向的驱动移动载物台选择需要拍摄的位置，按下add，即将当前位置添加到多点拍摄序列中。

之后重复上面的操作，确定下一个拍摄点。

设置完成，点ok即可。

3、完成各项所需设置后，点击capture或start，即开始按设置程序开始获取图像。

点击image view 查看所拍摄的图片。

点击live image 可实时查看拍摄图片。

此时可在下次拍摄的空当再次调整焦距等情况点击stop，暂时停止获图。

4、整理图片1）保存实验保存Leica .lif 文件进入Acquire 面板的Experiment 中，右键点击Experiment，从弹出菜单中选中“Save Experiment “Experiment”as…”，保存lif文件到自己的文件夹中并取名。

4
Cell Observer HS 高速活細胞影像工作站 快速紀錄離子濃度螢光影像
LED光源Colibri The Lambda DG-4 Xenon light source allows
rapid switching between 4 wavelengths
Zeiss
4
培養箱系統搭配：
•小型培養系統Incubator PM S1 -- 精確的控制環境溫度，小型培養箱可快速加熱、均勻混合CO2、，並提供溼氣及物鏡加熱，也可應用於缺氧實驗應用等。

•大型培養系統Incubator PM XL –大型培養系統將所有環境干擾因素降到最低，氣體混合最均勻，濕度控制器提供活細胞培養最自然狀態，穩定性達到最高。

可搭配ApoTome與TIRF：
4
•TIRF全反射螢光顯微鏡專門應用於細胞膜表面之螢光訊號觀察。

ApoTome (left) and TIRF (right) sliders transform Cell ObserverR into a system for generating optical sections.
4。

德国Zeiss全自动活细胞工作站快速操作指南制作：蔡司光学仪器（上海）国际贸易有限公司王丹2010年4月一：本显微镜主要观察方法简介明场：适合常规镜检、病理、染色样品的观察方法。

此观察方法优点是视野亮度高、均匀，应用范围广，操作简单。

缺点是：透明标本对比度低，标本没有立体感相差：利用被检物体的光程（折射率x 厚度）差进行镜检，即利用干涉现象，将相位差变为人眼可以分辨的振幅差。

鉴定活体细胞最实用、最经济的方法荧光：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度辐射光——冷光。

即：物质吸收短波光，发射出的长波光。

荧光显微镜利用荧光光源激发样品中的荧光物质，检测激发光的情况以上各种观察方法配合活细胞孵育装置，即可完成对活细胞的各种观察要求。

活细胞孵育装置通过软件或TFT触摸屏中Incubation模块进行精细的调节。

二：显微镜各主要部件缩略图部件名称1 电源开关2 左侧照相端口3 左侧粗/微调焦旋钮4 调焦限位器5 物镜转盘6 聚光镜垂直调节器7 聚光镜对中螺丝8 聚光镜(手动/电动)9 显微镜载物台10 3孔滤片拉板(直径25 mm)11 反射光孔径光阑或FL衰减器12 反射光视场光阑13 光源管理器14 载物台XY轴调节器15 反射光转盘(电动或编码显示)16 右侧粗/微调焦旋钮17 右手控制按钮18 透射光照明器开关控制器19 反射光照明shutter开关控制器20 TFT显示器21 卤素灯电压控制器22 双目观察筒23 双目观察筒的双目筒24 目镜25 目镜调节环26 起偏器D 2个滤片支架或者3个滤片支架27 透射光视场光阑三：系统开关机：4．打开电脑及软件先关软件，然后是荧光光源、显微镜开关、电源开关！！1.打开显微镜电源总开关2.打开显微镜开关3．拍荧光时打开荧光光源三：明场观察成像操作流程1.开总电源,显微镜开关(“ON/OFF”) 孵育装置及电脑2.打开卤素灯的光闸“TL”使光线透过聚光镜穿透样品3.调节光强，光路100%转到眼睛4.聚光镜打到H 位5.反射镜转轮打到BF明场位置6.低倍（如10X倍）下观察样品，通过X/Y拉杆移动载物台至目标位置，并通过粗细调焦旋钮聚焦，然后再调至高倍7.准备拍照了，首先光路切换至相机8.打开软件，点开Live 按钮9.先曝光Exposure——对照Live结果进一步精细聚焦——调节曝光时间——如果彩色模式拍照需要做自动或互动式白平衡（White balance，Interactive）——再次曝光后——Snap成像——保存Save10.拍照完毕，先关软件，再关显微镜，孵育装置及电脑四：相差观察成像操作流程1. 开总电源,显微镜开关(“ON/OFF”) 孵育装置及电脑2. 打开卤素灯的光闸“TL”使光线透过聚光镜穿透样品3.调节光强，光路100%转到眼睛4.聚光镜根据物镜后面的Ph标注打到Ph 1/ Ph 2 或Ph3位5.反射镜转轮打到BF位6.低倍（如10X倍）下观察样品，通过X/Y拉杆移动载物台至目标位置，并通过粗细调焦旋钮聚焦，进而转到高倍，根据个人不同需求7.准备拍照了，首先光路切换至相机8.打开软件，点开Live 按钮9.先曝光Exposure——对照Live结果进一步精细聚焦——调节曝光时间——彩色模式下做白平衡——再次曝光后——Snap 成像——保存Save10.拍照完毕，先关软件，再关显微镜，孵育装置及电脑六：荧光观察成像操作流程1.开总电源,显微镜开关(“ON/OFF”)，荧光光源，孵育装置及电脑2.先按明场或相差观察方法找到阳性信号3.关闭卤素灯光闸”TL”，打开荧光灯光闸“RL”4.反射镜转轮根据标记探针的颜色打到GFP，Rhod 或DAPI5.准备拍照了，首先光路切换至相机6.打开软件，点开Live 按钮7.先曝光Exposure——对照Live结果进一步精细聚焦——调节曝光时间——Snap成像——保存Save8.拍照完毕，先关软件，再关显微镜，孵育装置及电脑七：Axiovision 软件说明7．1使用AxioVision 软件拍摄图像的时候,为了其他同学能够拍摄到比较好的图像,请严格按照以下的设定默认参数进行.不要对软件的某些关键参数进行调节.下列的图例中,红色标记的参数为推荐参数图像的分辨率拍摄区域的大小7．2活细胞时序连拍流程时序模块可用于获取一定时间内的一系列图像，如活细胞长时间的观察和拍摄，生成的图像就是一个时间序列，可用于分析随时间变化的过程。

活细胞工作站组成简介（Live Cell Station）
（1）该系统模仿活细胞的生活环境，实现细胞的长时间培养、连续观察细胞反应和进行显微操作等。

（2）系统组成：
A.显微镜（电脑控制型长寿命荧光光源；滤镜、物镜等光路自动转换设备；焦点跟踪系统；
配备PH而无DIC）
D（普通试验要求所需：黑白CCD，价格一般在10万RMB左右）
C.电脑和显示器
D.控制所有设备的软件（包括控制显微镜Time-Lapse成像；CCD摄影和部分图像处理功
能；电动扫描台等）（对于温度和气体的控制，我们考虑手动调节型）
E.显微细胞培养系统（温度控制器；气体包括二氧化碳和氧气预混控制器；适用于培养板
和培养皿放置的小腔室）
TokaiHit（日本东海希多）：
Pecon（德国）：
F.电动扫描平台（用于实时多点成像和相应对照。

步进和重复精度参数）
Märzhäuser（德国）
Ludl（美国）
G.灌流设备（蠕动泵，适用于培养皿的灌流）
美国WPI公司亦可采购国产蠕动泵
H.光学防震平台（不再报价单内）。