饲料中过瘤胃蛋白测定方法

过瘤胃蛋白的概述过瘤胃蛋白的模糊概念在20世纪60年代就已提出，直到1989年NRC首次明确提出过瘤胃蛋白质的概念，将反刍动物对蛋白质的需要量分为可降解摄入蛋白(DIP，degradedintake protein)和非降解摄入蛋白(UIP，undegraded intake protein)。

在英国的新蛋白质中将蛋白质分为降解蛋白质(RDP)和非降解蛋白质(RUP或UDP)。

瘤胃降解蛋白质(RDP)和瘤胃非降解蛋白质(RUP)是饲料粗蛋白中两个功能截然不同的组分。

饲料粗蛋白质在瘤胃中可降解部分即瘤胃降解蛋白质(RDP)，为微生物的生长和微生物蛋白质的合成提供了所需的肽、游离氨基酸和氨。

饲料粗蛋白中瘤胃非降解部分可直接进入小肠被吸收。

1.1 过瘤胃蛋白的定义所谓过瘤胃蛋白(Rumen escape protein)也称为瘤胃非降解蛋白质(RUP，Ruminally undegraded protein)，是指蛋白质饲料在瘤胃中未被微生物降解而直接进入肠道后段的部分。

过瘤胃蛋白质调控的主要目的是减少蛋白质在瘤胃的降解，提高进入小肠的氨基酸数量和质量。

1.2 过瘤胃蛋白的作用饲料粗蛋白(CP)在瘤胃中的降解是影响反刍动物瘤胃发酵和氨基酸供应的一个重要因素。

反刍动物的氨基酸需要来源于饲料蛋白质中过瘤胃部分和在瘤胃发酵过程中合成的微生物菌体蛋白以及少量的内源蛋白质，其中瘤胃非降解的蛋白质是动物吸收氨基酸的重要来源。

此外，瘤胃中饲料蛋白质降解的动力学知识，是科学配置饲粮使瘤胃微生物获得充足RDP 和宿主动物本身获得充足RUP的基础。

对于维持饲养和生产水平不高的反刍动物而言，日粮中蛋白质饲料在瘤胃中降解所合成的微生物菌体蛋白和非降解蛋白部分所提供的氨基酸就可以满足畜体生长和生产需要。

但是，快速生长犊牛和高产奶牛(尤其是泌乳初期)对氨基酸需要量很大，当能量一定，氮源充足的情况时，微生物菌体蛋白的产量相对稳定，要满足畜体的氨基酸需要，达到理想生产性能，只能通过增加过瘤胃蛋白水平来解决小肠氨基酸供应量不足的矛盾。

一、瘤胃内容物的采取采取瘤胃内容物最简便的办法是，当动物反刍时，借食团随食管逆蠕动送至口腔之际，检查人员突然打开口腔，一手抓住舌头向外拉，另一手伸入舌根部，即可将瘤胃内容物收集在手掌中。

然而这种方法仅对健康牛奏效，且每次采取的数量有限。

在临床上，常用胃管吸引法。

经口或鼻插入胃管，到达食管瘤胃口时，感到有一定的抵抗，此时再继续送入50—80cra，按上电动(或手压式)胃液吸引器，即可吸出瘤胃内容物。

也可在左肷部用消毒后的长针头，穿刺吸取瘤胃内容物。

为检验采样的数量，一般吸取100—200m1即够用。

所采胃内容物，用四层纱布过滤后，及时送化验室进行检验。

二、酸碱度的测定1.方法：可用广泛pH试纸测定，也可用酸度计测定。

2.正常值：瘤胃pH一般在6.0—7.0之间。

3.临床意义：pH在4.0—6.0时，为乳酸发酵所致，常见于过食精料引起的瘤胃酸中毒症。

pH在5.0以下时，多数微生物及纤毛虫死亡，发生严重消化障碍。

pH在8.0以上时，可认为由于蛋白质给予过多，引起消化障碍。

在前胃弛缓时，pH值也升高。

三、发酵试验1.方法，取滤过胃液50.0ml，加入葡萄糖4000mg，置于糖发酵管内(该管为一U字形管，右端有一膨大部，左端有m1刻度数)，在37℃恒温箱中放置60min以上，读取产生气体的毫升数。

2.正常值c健康牛羊的糖发酵试验，60min时气体量为1—2m1，甚至可达5—6m1。

3.临床意义：健康牛羊的瘤胃内，由于微生物的作用发酵产气，通过嗳气而排出，所产生的气体，主要为二氧化碳(占65％左右)。

在营养不良，食欲缺乏，前胃弛缓以及某些全身性发热性疾病时，瘤胃内的微生物活动减弱或停止，使糖发酵能力减低，气体的体积常在lml以下。

据测定，黄牛患前胃弛缓时，24h的发酵气体为0.5ml左右。

四、乳酸含量的测定瘤胃液乳酸的测定，应先按前述胃液乳酸的定性检查有无乳酸，需要定量时，可用比色法或气相色谱法定量，现介绍光电比色法如下。

单胃动物和反刍动物饲料蛋白质质量的评定方法下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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肉牛蛋白质饲料种类及过瘤胃蛋白技术国家科委在“九五”期间已把肉牛规模化养殖及产业化技术研究与开发列入攻关计划，其中肉牛营养与饲养技术研究是解决肉牛规模化饲养的关键。

能量和蛋白质是肉牛生长发育的两大营养，传统的肉牛饲养注意能量的供给，而忽视了蛋白质饲料的补充，解决有牛饲料蛋白质不足，并使其有效利用，具有重要的意义。

肉牛蛋白质饲料可分为植物性蛋白质饲料、动物性蛋白质饲料、非蛋白氮饲料和单细胞蛋白质饲料。

1、合理利用植物性蛋白质饲料肉牛植物性蛋白质饲料主要为饼类饲料，主要有豆饼（粕）、花生饼（粕）、棉籽饼（粕）、菜籽饼（粕）等。

豆饼（粕）含有丰富的蛋白质和优质的氨基酸，其粗蛋白质（CP）含量为42%～47%。

生大豆饼（粕）含有抗营养因子，如胰蛋白酶抑制因子、凝集素等，必须加热处理，通过加热可使抗营养因子破坏，还可使饼中蛋白质三级结构开张，疏水基团更多地暴露于蛋白质分子表面，使蛋白质溶解度降低，从而使其在瘤胃中的降解率降低。

花生饼目前猪、禽用量较小，可大量用于肉牛饲养。

对于污染的花生饼，必须进行加工处理（如焙烤、浸泡等）后方可应用。

棉籽饼由于有毒物质的存在和蛋白质生物学价值较低，猪、鸡、草食动物（如肉牛）由于瘤胃微生物的作用，对游离棉酚的耐受性较强，特别在饲喂青绿或青贮饲料时补饲棉籽饼（粕），一般不会造成中毒，因此可用棉籽饼（粕）作肉牛育肥的主要蛋白质补充饲料。

与棉籽饼（粕）一样，菜籽饼（粕）是饲喂肉牛良好的蛋白质补充饲料。

此外糟渣类如酒糟、醋糟、豆腐渣等含有丰富的蛋白质，但粗纤维含量也较高，不宜饲喂禽类，是饲喂肉牛的好饲料。

2、充分利用动物性蛋白质饲料畜产品加工副产物如肉骨粉、血粉、鱼粉、羽毛粉等都可作肉牛蛋白质饲料。

如肉骨粉含CP54%，其中50%可被瘤胃微生物降解；血粉含CP87%，其中大约20%被瘤胃微生物降解；禽类羽毛经过高温高压蒸煮后，烘干粉碎，也通过酶解或碱水解处理，使羽毛分解成易消化的蛋白质，含CP85%，其中30%被瘤胃微生物降解。

过瘤胃体外模型的测定方法一、体外-人工模拟消化液法1，人工唾液配方(MeDougall，1948)-用来模拟动物口腔，测定过瘤胃前的释放率注：MgSO4（MgC12）准确称取一定质量1.0g(精确至0.0001g)样品放入250ml碘量瓶内，每个样做三个重复，加入200ml 人工唾液，溶于少量蒸馏水中定容至1000ml)，盖紧胶塞，在39℃的恒温水浴锅内分别消化0、6和12小时(消化过程中每隔1小时振动1次)，测定溶液中产品的含量，从而求得过瘤胃产品的释放率。

（先将除CaCl2以外的物质充分溶解，再将CaCl2溶解后倒入前者溶液中。

使用前向其中通入二氧化碳，使其pH在8.2左右。

并在39℃的水中温浴30分钟。

）➢McDougall E I. Studies on ruminant saliva, 1. The composition and output of sheep’s saliva.Bilchemical Journal, 1948, 43: 99- 109.2，人工模拟瘤胃液、真胃和十二指肠消化液准确称取一定质量(精确至0.0001g)过瘤胃产品，放入50mL具塞试管底部，加入20mL人工模拟消化液(pH为6.6、5.4和2.4的缓冲溶液，分别模拟动物瘤胃、真胃和十二指肠消化道近端的消化液)，盖紧试管塞，在39℃的恒温水浴摇床内消化0、12、24、48小时，取出后冲洗、过滤，滤液定容，测定滤液中产品的含量。

计算公式:产品瘤胃释放率(W1)=A2/A l x 100%式中:A l-产品中有效成分的含量；A2-产品在pH 6.6缓冲溶液滤液中有效成分的含量。

产品小肠释放率(W2)=A3/A1 x 100%式中:A3-产品在pH 2.4缓冲溶液滤液中有效成分的含量。

产品有效释放率（%）=(l-W1) x W2x100%。

➢Papas A M,Sniffen C J,Muscato T V. Effectiveness of rumen protected methionine for delivering methionine postruminally in dairy cows [J]. J Dairy Sci, 1984a, 67: 545~552.附：人工肠液的制备磷酸氢二钾胰蛋白酶胰脂肪酶胰淀粉酶氢氧化钠6.8g 0.25g 9.375g 83.3mg 调pH注：先将磷酸氢二钾加500ml水溶解，加入胰蛋白酶、胰脂肪酶和胰淀粉酶等，再定容至1000ml，用0.1M氢氧化钠调至适宜pH（6.0-8.0）；二、体外-瘤胃液培养法1，瘤胃液的采集晨饲（6：00）后2小时，由瘤胃内采集足量瘤胃液灌入经预热达到39℃并通有CO2的保温瓶中灌满后，立即盖严瓶口迅速返回实验室，经4层纱布过滤后，持续充入CO2气体5分钟。

过瘤胃蛋白生产工艺过瘤胃蛋白生产工艺简介•过瘤胃蛋白是一种重要的生化产物，具有广泛的应用前景。

•本文将介绍过瘤胃蛋白的生产工艺及相关要点。

材料准备•胃部取样容器•消化液样品•胃液样品•高速离心机•离心管•丙酮•苯酚•盐酸•镁离子含量测定试剂盒步骤1.取样–使用胃部取样容器采集胃液样品，并将其存储在离心管中。

–使用消化液样品进行胃内容物采样，可在不同时间进行多次采样，以获取更多的蛋白质样本。

2.离心–使用高速离心机将采集到的样品进行离心，以分离固体部分和液体部分。

3.分离蛋白质–将离心后的液体部分倒入新的离心管中。

–加入适量的丙酮，使其与蛋白质结合，形成不溶性沉淀。

–使用离心技术将蛋白质沉淀离心分离，并倒出上清液。

4.净化–将蛋白质沉淀溶解在适量的盐酸中。

–加入苯酚使得杂质与蛋白质发生反应并生成不溶性沉淀。

–使用离心技术将蛋白质沉淀分离，并倒出上清液。

5.检测–使用镁离子含量测定试剂盒对蛋白质样本中的镁离子进行测定，以评估蛋白质的纯度和含量。

–根据测定结果进行必要的调整和改进。

总结•过瘤胃蛋白生产工艺是一个复杂而精细的过程，需要准备适当的材料和设备。

•通过取样、离心、分离蛋白质、净化和检测等步骤可以获得高纯度的过瘤胃蛋白。

•在生产过程中，需要持续优化工艺参数，以提高生产效率和蛋白质的品质。

以上是关于过瘤胃蛋白生产工艺的简要介绍和步骤说明。

希望对读者有所帮助。

工艺优化•在过瘤胃蛋白生产工艺中，可以采取以下措施来优化工艺，并提高蛋白质的产量和质量：1.优化取样方式–选择合适的胃部取样容器，确保样品的完整性和纯度。

–在取样过程中，注意样品的采集时间和频率，以获取更多的蛋白质样本。

2.调节离心参数–根据样品类型和离心机的规格，优化离心速度和时间，使得固体和液体部分能够充分分离。

–避免过度离心，以防止蛋白质的损失或降解。

3.选择适当的溶解剂–在分离蛋白质的过程中，选择合适的溶解剂，使蛋白质能够充分溶解，并避免其降解或聚集。

奶牛常用精饲料过瘤胃淀粉及其小肠消化率的测定近年来国内外对反刍动物过瘤胃淀粉营养进行了大量的研究。

20世纪早期，国外一些研究者认为瘤胃后段消化道对淀粉消化没有明显效果。

与此相反，另一些研究者却认为淀粉在反刍动物小肠中消化比在瘤胃中消化更具有能量优势，能量利用效率比瘤胃降解率高42%，且增加小肠瘤胃淀粉消化对产乳量和乳蛋白量有提高的效果，究其原因可能是由于增加了瘤胃的MCP而引起的。

淀粉在小肠内大约有45％～80%被吸收，可为机体提供更多的葡萄糖,说明适量的过瘤胃淀粉能给反刍动物提供大量的外源葡萄糖,可减少内源合成葡萄糖的能量损失,节约体内的生糖氨基酸，使更多的葡萄糖用于乳的合成,改善乳的组成。

本文采用尼龙袋法和小肠液冻干粉法测定奶牛常用精饲料的过瘤胃淀粉及过瘤胃淀粉在小肠内的消化率以计算这部分过瘤胃淀粉提供的可代谢的葡萄糖量，用以调控小肠可消化淀粉以提高奶牛能量利用率。

1 材料与方法1.1 试验动物和日粮选用2头带有永久性瘤胃瘘管的荷斯坦奶牛，日粮设计采用中国奶牛（2001）饲养标准，饲养水平为1.2倍的维持需要，精粗比为55：45，日喂两次，自由饮水。

基础日粮配方见表1。

1.2 试验原料及其处理将6种原料置于60～65 ℃的恒温干燥箱中烘8～12 h，经粉碎机粉碎过1 mm筛。

其营养成分见表2。

1.3 试验方法1.3.1 瘤胃尼龙袋法（参照Tamminga等（1990）推荐的方法）采用分期试验法，共进行6期，依次以尼龙袋法测定6种饲料原料在瘤胃内淀粉的动态降解率并利用Φrskov 和McDonald（1979）提出的饲料营养物质瘤胃降解模型得出了6种原料淀粉降解模型参数和降解率。

依此据Tamminga（1994）提出的公式计算过瘤胃淀粉量。

淀粉的测定采用酶解法参照任莹（2001）的硕士论文。

1.3.2 过瘤胃淀粉小肠内消化率的测定采用奶牛小肠液冻干粉法（FDI）对6种饲料原料的过瘤胃淀粉在小肠内的消化率进行测定。

饲料中过瘤胃蛋白测定方法
饲料中过瘤胃蛋白测定方法是一种用于测定饲料中过瘤胃蛋白
含量的方法。

过瘤胃是反刍动物的一个重要消化器官，其中含有大量蛋白质酶，可以分解蛋白质。

因此，过瘤胃蛋白含量是反映饲料蛋白质消化性能的重要指标之一。

目前常用的测定方法有酸洗法、NIRS法和酶学法等。

其中，酸
洗法是指将饲料样品用酸进行处理，将过瘤胃蛋白质分离出来，再用比色法测定其含量。

NIRS法是指通过近红外光谱仪对饲料样品进行
扫描，通过建立样品与过瘤胃蛋白含量的定量关系模型，进行含量测定。

酶学法则是通过添加过瘤胃蛋白酶底物和酶，利用底物被酶水解产生的氨基酸和酰胺基的比色反应来测定过瘤胃蛋白含量。

这些方法各有优缺点，应根据实际需要选择合适的方法进行测定。

同时，在测定过程中应注意操作规范，保证测定结果的准确性和可靠性。

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童荣信可以从以下一下几点判断：1.由研究文献和本文所提供的附表详细计算精料、粗料中粗蛋白在瘤胃中的降解率。

2.由牛奶中的成份亦可略概判断。

例如：牛奶中的乳脂率正常而乳蛋白和乳中的尿素氮(BUN)的百分比偏低时，则显示，日粮中的粗蛋白不足量或其粗蛋白在瘤胃中的降解率过少。

3.若牛群中，卵巢囊肿和其它卵巢异常的比例偏高时，有可能是由日粮粗蛋白过量或粗蛋白在瘤胃中的降解率过高所致。

遇到如此状况或牛奶蛋白过低和尿素氮过高时，则建议使用过瘤胃蛋白以取代部分日粮中(尤其是精料中)的蛋白质来源，如：取代部分黄豆粉，以期减少粗蛋白在瘤胃的降解过多的现象。

4.一般而言，牛奶的正常含量为：乳蛋白>3.0%，尿素氮为7~9.5%，无脂固形物>8.5%。

牛只血液中的尿素氮(BUN)的正常量应为< 20 mg/100ml。

5.日粮中营养不均衡，尤其是热能和蛋白质之间的不均衡，亦相当影响牛奶成份和质量。

Q牛群的受孕率偏低与营养的关系为何?童荣信受孕率偏低的原因很多，建议由兽医师诊断后再寻求解决之道。

1.假使牛只的干物质采食量(Dry Matter Intake，DMI)不足时，由于营养不足而使内分泌系统的激素合成量不足，因而排卵不顺或受孕后的受精卵无法在子宫内着床发育，则自然地受孕率偏低。

尤其台湾炎热的夏天里，此等情况普遍存在。

2.饲料若受霉菌的污染，亦常见配种困难的问题。

霉菌毒素对配种有非常不良的影响。

霉菌毒素的污染有可能来自于精料中的玉米、黄豆或其它谷物。

粗料中的青贮料质量或新鲜度不佳对牛只的繁殖性能有不良影响。

3.矿物质不平衡、热能和蛋白质不平衡，不只影响瘤胃发酵的功能，更可影响繁殖性能和配种问题。

Q如果粗蛋白在瘤胃中被分解的量不足时，会有什么影响?童荣信若日粮中提供的粗蛋白不足以满足瘤胃微生物发酵作用的基本需求以发挥应有功能，则终致微生物蛋白(MCP)产生量不足，致使产奶量下降，以及牛奶中蛋白质含量降低。

[精华]被你疏忽的过瘤胃蛋白被你忽略的过瘤胃蛋白2014-01-29 06:20 荷斯坦奶农俱乐部网访问量:98 [ 字号:大中小 ]童荣信博士菲尼氏营养技术国际集团CEO奶牛由日粮中所摄取的蛋白(IP)可分为三部份:在瘤胃中不被降解蛋白质，UIP;在瘤胃中可被降解蛋白质 (DIP);以及不可消化蛋白质 (IIP)。

但由于大部分日粮蛋白质在瘤胃中被降解浪费，因而饲喂更高含量蛋白质的日粮，并不是提高奶牛营养的最佳解决方法。

Q过瘤胃蛋白在奶牛营养上有什么重要性?童荣信只要是在能够满足过瘤胃微生物生长的所需粗蛋白的前提下，我们必须设法避免过多的粗蛋白在瘤胃中被分解。

过剩的粗蛋白应该令其在瘤胃不被分解，而在小肠中被消化吸收，以达到其最佳效率。

换句话说，就是先把瘤胃微生物喂饱了，使瘤胃中的纤维消化正常之后，再将过剩的粗蛋白过瘤胃。

假使过剩的粗蛋白不过瘤胃，而继续在瘤胃中被分解，则产生过多的氨气，不只使粗蛋白的利用率降低，况且过多的氨气被吸收进入血液中，易使血中尿素氮(Blood Urea Nitrogen，BUN) 过高，导致对繁殖性能之不良影响，而使配种之受孕率降低。

总之，瘤胃微生物喂饱了，发酵作用正常了，则过剩的粗蛋白势必要过瘤胃。

更且过瘤胃的粗蛋白必须在小肠中被消化吸收。

Q可不可以让日粮中所有粗蛋白都过瘤胃?童荣信不可以。

由日粮中所摄取的粗蛋白必须有一定的量在瘤胃中被微生物降解利用，才能使整个瘤胃发酵功能正常而且健康，因为瘤胃微生物也需要粗蛋白。

让瘤胃微生物发酵正常且健康是反刍动物饲养和营养上的第一步，也是最重要的一步。

必须强调的是，一定要首先让瘤胃微生物获取足量的蛋白质或氮的来源，再来考虑过瘤胃的部分。

基本的概念是，提供可利用而足量的蛋白质或氮的来源(也就是DIP的部份 )，以使瘤胃微生物产生最多量的微生物蛋白 (Microbial Crude Protein，MCP)。

一般而言，日粮中至少要有 8~9%的粗蛋白是要在瘤胃中可被降解 DIP，而被微生物利用。

反刍动物过瘤胃蛋白保护技术研究与综述名称的标记,37~C培养24小时为一代.每代培养后, 均用原抗菌药敏纸片作药敏试验,直至细菌对已耐药的中草药药物敏感性最大程度的恢复,即可停止继代培养,并记录试验结果.敏感性恢复结果见表5. 表5敏感性恢复结果注:判定标准.纸片抑菌直径小于1O毫米为低敏,纸片抑菌直径大于等于1O毫米而小于15毫米为中度敏感,纸片抑菌直径大于等于15毫米为高度敏感.3讨论试验结果表明,复方中草药方剂由于抗菌成份复杂,大肠杆菌很难对其适应,不产生耐药性,单味中草药抗菌成分少于复方,能产生一定的耐药性.中草药产生耐药性后,停药一段时间后能较快的恢复敏感性.在抑菌试验中可以看出,复方中草药比单剂中草药用量小,筛选出的大多数复方中草药药液抑菌浓度在l0原药液浓度,单味方药的抗菌浓度为l0. 原药液浓度,根据禽的消化生理特点,以口服吸收率 50%计,折算为复方制剂口服量至少为0.2/千克,单味方药口服量至少为2克/千克.中草药的副作用和残留作用小,来源丰富,价格低廉,抗菌效果稳定,能综合性调节动物机体内环境,适于在养禽中进一步广泛推广应用.反刍动物过瘤胃蛋白保护技术姜成赵小彦母立华迟玉东2(1.黑龙江省农垦总局齐齐哈尔分局161005,2.黑龙江省克山农场161621)摘要反刍动物所需营养中蛋白质来源有两个,一是通过微生物降解合成的茵体蛋白,一是过瘤胃蛋白,而日粮中绝大多数蛋白质在瘤胃内被降解浪费掉了,只有过瘤胃蛋白能够在小肠内被充分地消化吸收.因此,为了增加过瘤胃蛋白比例,提高饲料的利用率,就目前饲料蛋白的各种保护技术和效果进行了阐述.关键词反刍动物;饲料蛋白;瘤胃1加热处理保护饲料蛋白加热可导致蛋白质变性,使疏水基团更多的暴露于蛋白质分子表面,使蛋白质溶解度降低,从而降低蛋白质在瘤胃中的降解率.试验表明,大豆饼经过 144~C热处理后,其溶解度由70%降至40%,用以饲喂幼牛,增重提高达50%,其他饼粕亦有同样的效果.国外有人用全脂膨化大豆饲喂泌乳初期高产奶牛,发现饲喂处理组奶牛产奶量比不处理组的高,产奶高峰期出现却比不处理组迟,饲喂处理大豆奶牛的产奶量优势随试验进行而增加,并且处理组可明显提高乳脂率.有人干热处理豆饼发现,干热处理豆饼的瘤胃非降解氮量与处理温度呈直线相关(P&lt; 0.05),处理温度越高其饲料蛋白质在瘤胃中降解越少.与不处理豆饼相比,当处理温度为ll5?,130? 和145?时,其蛋白质在瘤胃中非降解氮分别提高 14.7%,29.7%利47.3%.加热处理是保护饼j作者简介:姜成(1964一),男f面养殖技术顾问2007.10质过瘤胃很有高级兽医师,本科.效的方法,但随处理温度,湿度,时间,压力等的不同而产生不同效果,如果处理的温度,时间,压力控制不当常伴有副作用,如蛋白质在小肠内消化率下降, 一些氨基酸遭到破坏等.2化学处理保护饲料蛋白2.1甲醛保护饲料蛋白甲醛还原性强,可使蛋白质分子的氨基,羧基, 巯基发生烷基化反应,使其溶解度降低,并在酸性条件甲醛与蛋白质反应可逆,从而使被保护蛋白质在瘤胃降解率下降在瘤胃后消化道中由于pH值降低而与甲醛分开,被蛋白酶所消化.国外有人报道用甲醛处理酪蛋白能增加产毛量和氮沉积;用甲醛处理的含硫氨基酸能增加体重和产毛量;用甲醛处理大豆粉时发现,当甲醛用量为粗蛋白的0.4%,瘤胃蛋白质降解率明显降低,而用量从0.4%增加到0.8%时, 降解率下降不明显(P&gt;0.05).研究表明,甲醛对生豆饼的处理具有明显的保护作用,当甲醛水平为研究与综述0.6%能提高进入十二指肠食糜非氨态氮,过瘤胃蛋白氮产量及氮的沉积率,而对微生物氮产量及氮在瘤胃的消化率无显着影响.研究结果表明,甲醛浓度越大对蛋白质在瘤胃中免于降解的保护性越高,但过高浓度的甲醛对蛋白质会产生过度保护以致影响蛋白质在后段消化道的消化.据报道,有人发现用2 克,千克DM甲醛处理可大幅度降低豆饼干物质和粗蛋白在瘤胃中的降解率,而基本上不影响其在真胃和小肠中的消化,如果甲醛用量超过2克,千克 DM可能会造成过保护.2.2单宁保护饲料蛋白国外有人研究认为,单宁与蛋白质的反应有两类,一类是水解反应,在真胃酸性条件下可逆,易被家畜消化利用;另一类是不可逆的缩合反应,其降低了饲料适口性,抑制酶和微生物的活性,与蛋白质形成不良的复合物,消化率降低.但对反刍动物无不良后果,反而有利于预防膨胀.有人发现,饲喂含单宁的日粮,蛋白质的消化率随日粮中单宁浓度的增加而减少.将单宁作为过瘤胃蛋白保护剂添加到不含单宁的饲料中时,加入剂量以3%为宜,单宁有酸涩味,过多的加入会降低饲草的适口性.2.3氢氧化钠保护饲料蛋白有人用氢氧化钠处理豆饼和菜籽饼,发现3%的处理水平效果最佳,使蛋白质的降解率减少了2.11, 2.37倍,并且对氨基酸的组成没有不利影响.还发现氢氧化钠处理的大豆饼使犊牛的氮沉积改善,奶牛泌乳初期产奶量显着增加,饲料效率和蛋白质利用率提高.用氢氧化钠处理豆饼饲喂公犊和泌乳母牛, 发现豆饼含氮化合物消化率提高,犊牛氮沉积增加, 泌乳母牛的产奶量,校正乳固形物产量及蛋白质利用率比喂未处理豆饼日粮的母牛高.2.4其他物质保护蛋白国外有人提出两种保护蛋白质方法:一是用锌处理豆饼,随着锌浓度的提高,处理效果也提高,但到1.5%时为最佳,继续增加锌浓度会产生副作用;另一种是非酶促褐化技术,有试验表明用此技术处理豆粕时,发现过瘤胃蛋白含量比对照组增加了2.5 倍.有人研究表明,用70%的乙醇处理豆饼,其蛋白质在瘤胃内的降解率显着低于未处理豆饼.70%的乙醇80?处理豆饼或70%乙醇热压处理豆饼比单一乙醇处理要降低6.6%.70%丙醇80?处理豆饼和70% 乙醇80?处理豆饼其蛋白质的溶解度比不处理豆饼,70%乙醇23?处理豆饼及80?热处理豆饼要低(P&lt;0.05).结果表明,丙醇和乙醇类似,对蛋白质有一定的保护作用,且丙醇比乙醇处理效果好. 3物理包被保护饲料蛋白3.1白蛋白包被保护饲料蛋白全血,乳清蛋白,卵清蛋白等富含白蛋白的物质能对蛋白质起到保护作用,白蛋白在饲料颗粒外能形成一层保护壳,防止易溶蛋白在瘤胃内的扩散溶解,从而降低了被保护的蛋白质饲料在瘤胃内的降解.国外有人用全血撒到蛋白质补充料上在100?下干燥,发现其在瘤胃内氮的消失率显着下降,随着全血用量的增加氮的消失率显着降低.有人用全血处理豆饼发现其最佳处理为每千克干物质1.5升,氮进食量和氮沉积显着增加.据报道,简单鲜血处理对大豆粉瘤胃消失率无显着影响,但当与0.6%甲醛混合使用时,可明显提高甲醛的保护效果,其中30%的鲜血与0.6%甲醛复合处理是较理想的保护措施. 3.2化合物,聚合物包被保护饲料蛋白依据瘤胃与皱胃液pH值差别,把饲料用一些在中性或弱酸性条件下不溶解而在强酸条件下能溶解或崩解的材料包裹起来.最近据欧美等国试验,用蛋氨酸涂以牛脂硬化油并掺合分解剂脱乙酰甲壳质制剂,给奶牛每头每日在饲料中添加50克,可提高产奶量4.9%,并能诱发不发情的奶牛发情,提高繁殖力.4生物学调控保护饲料蛋白利用生物学技术选择性的控制瘤胃代谢,可使饲料蛋白得以保护.国外研究人员认为,抗生素能够降低微生物分解蛋白质的活性.瘤胃素可以改变瘤胃微生物群体组成和关键酶活性而影响瘤胃发酵过,减少甲烷产生,抑制蛋白质降解,改善程,增加丙酸饲料利用率.国外有人用瘤胃素添加剂饲喂小公牛表明,瘤胃素的添加显着降低细菌氮的流量,增加小肠饲料氮量,可能是瘤胃解朊作用降低而节省饲料蛋白质..5调控瘤胃外流速度保护饲料蛋白瘤胃外流速度影响着降解率,瘤胃外流速度加快,日粮在瘤胃内停留时间短,其蛋白质降解率下降.影响外流速度的因素很多,其中日粮结构和饲养水平影响较大,尤其是日粮的精粗比,随着精粗比的升高,外流速度加快,蛋白质的降解率下降.同时家畜生理因素如粒的大小和密J科削『,'搋述J曼,叫科也有影响.丽养殖技术顾问2007.10。

瘤胃微生物蛋白测定方法
瘤胃微生物蛋白的测定方法主要包括以下几种：
1. 体内法：通过测定动物采食前后瘤胃内氨氮浓度的变化，间接计算瘤胃微生物蛋白的产量。

这种方法简单易行，但准确性相对较低。

2. 离体法：将瘤胃液取出后进行培养，测定培养过程中微生物蛋白的合成量。

离体法可以更准确地反映瘤胃微生物蛋白的合成情况，但操作较为复杂。

3. 同位素标记法：利用放射性或稳定性同位素标记饲料，追踪其在瘤胃内的代谢过程，从而确定微生物蛋白的合成量。

这种方法精度高，但成本也较高。

4. 免疫学方法：利用特异性抗体检测瘤胃微生物蛋白或其代谢产物，如酶联免疫吸附法（ELISA）等。

这种方法快速、灵敏，但需要特异性高的抗体。

5. 蛋白质组学方法：通过分析瘤胃微生物的蛋白质组成，确定微生物蛋白的含量和变化。

这种方法可以提供更全面的信息，但技术要求较高。

在实际应用中，通常会根据实验条件和研究目的选择合适的方法。

同时，为了提高测定结果的准确性，还需要注意样品的采集、处理和保存等环节。

三步法测定过瘤胃氨基酸步骤（3个样品）：（1）第一阶段：瘤胃液法称取氨基酸样品1g左右（每个样品共6个重复），放入生理盐水瓶（250ml），向每个瓶子分装40ml缓冲液和10ml瘤胃液，摇动混合，向溶液充CO2，使溶液和试管内空间全部充满CO2，然后盖上带有放气阀门的橡皮塞，将其置于水浴摇床培养（39℃），设置好摇床频率，分别于2、4、8、16、24 h，每个时间点取出3个瓶子，倾去上清液，剩余物用自来水冲洗三次，至水澄清，35°C烘干至恒重（48h），移至干燥器内15min后称重，进行剩余物中氨基酸含量（将剩余干燥固体放入15mL离心管中，在90℃（根据不同油脂，熔点不同而温度不同）水浴锅中溶解产品，待其完全溶解，快速完全吸出上层油脂，冷却后将剩余水溶液摇匀，并分装于1.5mL离心管中，待测），从而测定瘤胃降解率。

残渣中氨基酸剩余量测定方法为氨基酸自动分析仪法。

取出剩余15个瓶子中的剩余物，用自来水冲洗干净，用于下一步试验。

（2）第二阶段：胃蛋白酶法加入30 mL含有1g/L胃蛋白酶的0.1 N盐酸到瘤胃液处理过的氨基酸样品中，将其置于水浴摇床培养（39℃），培养1h。

（3）第三阶段：胰酶法加入3 mL 浓度为1 N的NaOH溶液被加入体系中用以中和pH，每个瓶子加入1.5 ml of 1 N 氢氧化钠，并加入35mL pH为7.8的胰酶磷酸缓冲液，分别于2、4、6、8、12小时，每个样品取出3个瓶子，过滤，除去滤液，剩余物用自来水冲洗三次，至水澄清，于65°C 烘干至恒重（48h），移至干燥器内15min后称重，进行剩余物中氨基酸含量测定，氨基酸剩余量测定方法为氨基酸自动分析仪法。

尼龙袋法测定包被氨基酸（3个样品）1.饲养日粮和饲养管理：选用3头安装有永久性瘘管的成母牛进行实验。

参照NRC(1996)标准，配制牛的日粮TMR，每天饲养3次，自由饮水，预试期7天，每一样品正式实验2天。

童荣信可以从以下一下几点判断：1.由研究文献和本文所提供的附表详细计算精料、粗料中粗蛋白在瘤胃中的降解率。

2.由牛奶中的成份亦可略概判断。

例如：牛奶中的乳脂率正常而乳蛋白和乳中的尿素氮(BUN)的百分比偏低时，则显示，日粮中的粗蛋白不足量或其粗蛋白在瘤胃中的降解率过少。

3.若牛群中，卵巢囊肿和其它卵巢异常的比例偏高时，有可能是由日粮粗蛋白过量或粗蛋白在瘤胃中的降解率过高所致。

遇到如此状况或牛奶蛋白过低和尿素氮过高时，则建议使用过瘤胃蛋白以取代部分日粮中(尤其是精料中)的蛋白质来源，如：取代部分黄豆粉，以期减少粗蛋白在瘤胃的降解过多的现象。

4.一般而言，牛奶的正常含量为：乳蛋白>3.0%，尿素氮为7~9.5%，无脂固形物>8.5%。

牛只血液中的尿素氮(BUN)的正常量应为< 20 mg/100ml。

5.日粮中营养不均衡，尤其是热能和蛋白质之间的不均衡，亦相当影响牛奶成份和质量。

Q牛群的受孕率偏低与营养的关系为何?童荣信受孕率偏低的原因很多，建议由兽医师诊断后再寻求解决之道。

1.假使牛只的干物质采食量(Dry Matter Intake，DMI)不足时，由于营养不足而使内分泌系统的激素合成量不足，因而排卵不顺或受孕后的受精卵无法在子宫内着床发育，则自然地受孕率偏低。

尤其台湾炎热的夏天里，此等情况普遍存在。

2.饲料若受霉菌的污染，亦常见配种困难的问题。

霉菌毒素对配种有非常不良的影响。

霉菌毒素的污染有可能来自于精料中的玉米、黄豆或其它谷物。

粗料中的青贮料质量或新鲜度不佳对牛只的繁殖性能有不良影响。

3.矿物质不平衡、热能和蛋白质不平衡，不只影响瘤胃发酵的功能，更可影响繁殖性能和配种问题。

Q如果粗蛋白在瘤胃中被分解的量不足时，会有什么影响?童荣信若日粮中提供的粗蛋白不足以满足瘤胃微生物发酵作用的基本需求以发挥应有功能，则终致微生物蛋白(MCP)产生量不足，致使产奶量下降，以及牛奶中蛋白质含量降低。