徽生物的固定化及其对土集中菲、花的降解

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溶液用甲 醇稀释 1 0 0倍( 溶液 2 ) ,从该溶液中吸取 l O m L稀释至 I O O m L则为
I O O O n g / g ; 从溶液2 中吸取5 m L 稀 释至I O O m L 则为5 0 0 n g / g ;从 溶 液2 中 吸取 2 . 5 m L 稀释至 1 0 0 m L 则为2 5 0 n g / g ; 从 溶液2 中 吸取0 . 5 m L 稀释至1 0 0 m L 则为 5 0 n g / g 。 通 过上述操作即 配成1 0 0 0 n g / g , 5 0 0 n g / g , 2 5 0 n g / g , 5 0 n g / g 的 系列浓度
各1 0 0 p p m的 混 合 液, 用 水 定 容 至I L , p H 7 . 8 , 1 . 0 1 3 2 5 X l 0 5 P a , 灭 菌3 0 分 钟。
2 . 2 . 2 真,降 解培养羞 ( P / g L ' ' ) 葡萄搪2 0 , 土豆2 0 0 , 加入菲 和花各 1 0 0 p p m浓度的混 合液, 用水定 容至 1 L , p H自 然,1 . 0 1 3 2 5 X 1 0 ' P a , 灭 菌3 0 分钟。
水:亚氟二次重蒸水 ( 使用前过 0 . 4 5 u的玻璃纤维膜) 甲醇:色谱纯 ( 使用前过 0 . 4 5 “的玻璃纤维膜) 比例:甲醇:水= 9 0 : 1 0
流速 :0 . 8 m L / m i n
2 . 7 . 2菲和花的 色讼条件 色 谱柱: 2 5 0 ( i d ) * 0 . 5 u 1 R P - C 1 8 烷基硅胶柱
中国科学院沈阳应用生态研究所硕士学位论文
第二部分 徽生物的固定化及其对土集中菲、花的降解 第一章 固定化徽生物蔺种的筛选与鉴定
1引言 菌种是固定化技术的关键性问题之一,菌种的优劣直接影响着其对污染物
的降解,国内外学者针对不同的用途选用不同的菌种。目 前,在有机污染物降
解方面, 所采用的菌种主要有混合菌、 优势菌,如假单胞菌( ( P s e u d o m o n a s s p . ) ,
菲和花的降解率相对较高.在此基础上,对这四种菌进行了再一次筛选,得出
最佳降 解菌为x j 8 , 其对菲和花在7 2 小时内降解率分别为8 7 . 8 2 % 和4 9 . 2 2 %. 3 . 2真蔺对非、花的降 解 如图1 - 2 所示, 可以 得出z j I , z j 3 降解率相对其它菌要高出 许多,接下来对
0 进样量:2 u L 测定时间:1 0 m i n 测定波长:菲 2 5 0 n m ; 花2 4 0 m n
实验以菲和花混合标准液为外标,用保留时间法直接对照定量计算菲和花
的含量。
3结果和讨论 3 . 1细,对菲、花的降解
根据图1 - 1 可以 得出, 在预选的6 株细菌中, x j 1 , x j 8 , x j 1 1 , x j 1 6 对
( B a c i l l u s s p . ) 等共 6 株菌。 2 . 2主要培养羞
2 . 2 . 1 细 蔺降 解培养 羞( P / g L ' 1 )
葡萄 糖2 0 , 酵母膏3 , N H 4 N 0 3 1 1 M 9 S O 4 . 7 H 2 0 0 . 2 , K C L 0 . 2 , 加入菲和花
氯甲 烷萃取两次, 萃取后的有机相也都移入K D浓缩器中。 将装有有机相的K D 浓缩器置于 5 5 ℃的水浴中浓缩至 1 m L 左右, 再用氮气吹干, 用甲醇定容至 1 m L
移入液相色谱进样瓶.
配 制I O O O n g / g , 5 0 0 n g / g , 2 5 0 n g / g , 5 0 n g / g菲 和花的 混 合待 测 水 样, 用上 述方
法对其进行萃取,萃取后的样品利用高效液相色谱测定.通过测定结果计算水
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样中多环芳烃的回收率。 水样中菲和花的平均回收率分别为 7 8 . 6 2 % 和8 1 . 7 8 %0
2 . 7菲花的高效液相色谱( H P L C ) 侧定条件 2 . 7 . 1高效液相色谱( H P L C ) 的流动相
第二部分 微生物的固定化及其对土壤中菲、花的降解
2 0 % 土豆汁培养基的制备:土豆去皮后洗净,称取 2 0 0 g切成小块,加 I L
水沸腾 2 0 m i n ,滤去土豆块,冷却后加入其它药品补足至 1 L .
2 . 3徽生物的鉴定
细菌见参考文献[ [ 1 2 1 ] , 真菌见参考文献[ 1 2 2 ] e 2 . 4主要的化学试剂和仪器 二氯甲 烷,沈阳经济技术开发区,分析纯:甲醇,山东省禹王实业总公司
标准的溶液.
2 . 6水样中菲、花的分析方法 水样中菲和花的分析是采用二氯甲 烷萃取法。将采集到的水样称重后移入 1 0 0 m L的分液漏斗中,加入 l O m L 二氯甲 烷手动振荡 5 m i n 后静止 3 m i n ,溶液
分层后将位于下层的有机相移入 K D浓缩器中,重复上述操作,再用 5 m L的二
化工厂,色谱纯。 菲和花均为德国F l u k a 公司产品,菲纯度为 9 0 . 6 %,花纯度为 9 7 %.
惠 普1 0 9 0 - 1 1 高效液相色 谱仪, 配 有二极管阵列检测器 ( D A D ) ; 恒 温摇床。
2 . 5多环芳 经标准液的制各 分别 称取O . l g 的菲和花, 用甲 醇定 容至l 0 0 m L ( 溶液 1 ) , 从中 准确吸取 1 m L
这两 株菌进行再一次降 解比 较实 验, 结果表明, z j 1 的降 解效 果最好, 在2 1 6 小
时内, 对菲的降解达9 3 . 3 2 %,对花的降解达 9 6 . 2 9 %a
驯化活性污泥等。
本论文所采用的菌种是从石油污染土壤中分离出来的优势菌,对有机和方法
2 . 1 供试蔺株
本实 验室提供, 真菌有: 毛 霉( M u c o r s p . ) , 镰刀菌 ( F u s a r i u m s p . ) , 小 克银 汉( C u n n i n g h a m e l l a s p . ) , 青 霉 ( P e n i c i l l i u m s p . ) ,曲 霉 ( A s p e r g i l l u s s p . ) 共5 株菌; 细菌有:动胶杆菌 汤 o g l o e a s p . ) ,黄杆菌 ( F l a v o b a c t e r i u m s p . ) ,芽抱杆菌