土壤中分解尿素的细菌的分离与计数导学案
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土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
班级姓名
一、【学习目标】
1.说出培养基对微生物的选择作用
2.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌
二、【学习重点和难点】
1.学习重点：（1）菌株的筛选与统计
（2）微生物的分离和测量方法微生物的分离和测量方法
2.学习难点：微生物的分离和测量方法
三、研究思路：筛选菌株→统计菌落数目→设置对照
（记忆）阅读教材，完成筛选菌株的基础知识部分。
（一）筛选菌株
1、尿素是一种重要的氮肥，但不能直接被农作物吸收利用，只有当土壤中的细菌将尿素分解成之后，才能被植物利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成。
2、DNA多聚酶链式反应（PCR技术）是一种在体外将少量DNA大量的技术。
此项技术的自动化，必须要求使用耐高温（930C）的。
3、(两条途径)：
（1）现实生活中微生物的筛选及发现：
1966年美国的微生物学家在美国黄石公园的一个热泉中从一个耐高温的Taq 细菌并从中分离到了耐高温的。
（2）实验室中微生物的筛选：原理：人为提供有利于生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时或其他微生物生长。
4、选择培养基：在微生物学中，将允许种类的微生物生长，同时
和其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
根据这一思路，分析课本旁栏中培养基的配方，回答以下的问题：
KH2PO4
NaH2PO4
MgSO4`7H2O
葡萄糖
尿素
琼脂
①从物理性质看此培养基属于哪类
②此培养基中作为碳源、氮源的物质分别是什么
这种培养基对微生物是否有选择作用如果有，是如何进行选择的
㈡、统计菌落数目：
测定微生物的常用方法有两种：、显微镜直接计数法。
前者常用来统计样品中活菌的数目，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。
在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
思考：统计菌落的数与实际数目有何区别，为什么。
㈢.设置对照：
设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
阅读课本的实例，分析A同学的结果与其他同学不同，可能的原因是什么
如何通过设置对照、帮助A同学排除是土壤样品不同或是培养基被杂菌污染而引起的。
四、实验的设计：
包括实验方案、所需要仪器、材料、具体实施步骤及时间安排方面的设计。
讨论：请根据课本中实验流程示意图和提供的三个资料，然后完成实验设计流程。
（课后完成）
五、课堂小结：。
六、当堂检测
五、课堂检测：
1.对细菌群体生长规律测定的正确的表述是（）
A.在液体培养基上进行
B.至少接种一种细菌
C.接种一个细菌
D.及时补充消耗的营养物质
2.使用选择培养基的目的是（）
A.培养细菌
B.培养真菌
C.使需要的微生物大量繁殖
D.表现某微生物的特定性状与其他微生物加以区别
3.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分别是( )
和N2 B.葡萄糖和NH3和尿素 D.葡萄糖和尿素
4.为培养和分离出酵母菌并淘汰杂菌，常在培养基中加入（）
A.较多的氮源物质
B.较多的碳源物质
C.青霉素类药物
D.高浓度食盐
．统计菌落数目
（1）测定微生物数量的常用方法有和。
（2）稀释涂布平板法统计样品中的数目的原理
当样品的足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
为了保证结果准确，一般选择菌落数在的平板进行计数。
此外，测定微生物数量的常用方法还有直接计数。
．设置对照
设置对照的主要目的是排除实验组中对实验结果的影响，提高实验结果的。
例如为了排除培养基是否被杂菌污染了，需以培养的培养基作为空白对照。
【开拓视野1】显微镜直接计数
将待测样品与等量的已知红细胞含量的血液混匀后，涂布在载玻片上，经固定染色后，在显微镜下随机选取若干个视野进行计数，得出细菌与红细胞的比例，再根据红细胞的含量计算出单位体积内的细菌数目。
也可以用血球计数板直接统计细菌含量。
2.【合作探究】—小组讨论，得出一致结论，并展示小组讨论成果！
【思考1】、筛选菌株的培养基
KH2PO4NaHPO4MgSO4H2O 葡萄糖尿素琼脂
1.【基础知识】（记忆）
关于土壤中某样品细菌的分离与计数实验操作步骤如下：
1．取样：从肥沃、湿润的土壤中取样。
应先 3 cm 左右，再取样，将样品装入事先准备好的中。
2．制备：准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基
将菌液稀释相同的倍数，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。
3．微生物的与观察
将10g土样加入盛有90 mL无菌生理盐水的锥形瓶中(体积为250 mL)，充分摇匀，吸取上清液，转移至盛有的生理盐水的无菌大试管中，将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，并按照由107～103稀释度的顺序分别吸取进行平板涂布操作。
每个稀释度下需要3个选择培养基、1个牛肉膏蛋白胨培养基。
将涂布好的培养皿放在30℃温度下培养，及时观察和记录。
挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含
培养基的斜面中，观察能否产生如教材中图2-lO的颜色反应。
4．细菌的计数当菌落数目稳定时，选取菌落数在的平板进行计数。
在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。
统计菌落数目：1、活体计数法----稀释涂布平板法
（1）操作方法：稀释涂布平板→统计菌落数。
（2）原理：1个菌落→1个活菌。
（3）统计原则①、选30∼300 个菌落的平板统计。
②、每个稀释度取3个平板取其平均值。
〖课后学习〗
高质量按时完成作业测评
【课后反思】。
