植物可溶性糖检测

管号
0
1
2
345
100mg/L葡萄糖标准液（mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
水（mL）
2 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
蔗糖含量（μg）
0 20 40 60 80 100
（2）在每支试管中立即加入蒽酮乙酸乙酯试剂0.5mL和
5mL浓硫酸，用玻棒混匀，沸水浴中准确保温1min取
目的：掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 仪器 分光光度计、水浴锅； 天平、试管架、容量瓶、试管、滤纸、漏斗。 试剂 100mg/L葡萄糖标准液；浓硫酸；蒽酮乙酸乙酯试剂 材料：白兰叶片
实验步骤
1. 葡萄糖标准曲线的制作（1组同学做，数据共享）
（1）取6支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄 糖溶液：
出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。以标准蔗
糖含量作横坐标，以吸光值作纵坐标作标准曲线。
实验步骤
2. 植物样品中可溶性糖的提取（其他组做，数据共享） 将植物叶片剪碎混匀，准确称取0.3g3份，加入研钵中，
再加入2-3mL水和少量石英砂，研磨后转入试管中，用 水再洗涤2次，均转入试管中。将试管置于沸水浴中提取 30min，提取液过滤至25mL容量瓶，反复冲洗试管及 残渣，定容至刻度。 3. 显色测定（同上）： 吸取0.5mL提取液于试管中，加水1.5mL，蒽酮乙酸乙酯 试剂0.5mL和5mL浓硫酸，混匀，沸水浴中准确保温 1min取出，自然冷却至室温，在630nm波长下比色。
注意一切与浓硫酸操作有关的安全 ！！！不要吝啬用水和卫生纸！！ ！
作业
得出实验结果后，根据标准曲线算出的含糖量 ，写于实验报告上。（之前问题）
0204060810水ml1816141210蔗糖含量g20406080100实验步骤植物样品中可溶性糖的提取其他组做数据共享将植物叶片剪碎混匀准确称取03g3份加入研钵中再加入23ml水和少量石英砂研磨后转入试管中用水再洗涤2次均转入试管中

植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。

在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。

该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

实验用品721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸试剂：活性炭，酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。

稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。

实验步骤1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。

在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。

2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。

从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。

按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。

试剂（ml) 管号1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.980%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g)可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100%可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。

版本：A4 修改日期：2024.01.05植物可溶性糖检测试剂盒(苯酚比色法)产品简介：植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖，植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质、性状，常以糖含量作为重要指标，植物为了适应逆境条件如干旱、低温等条件会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化，测定植物体内可溶性糖的方法有：蒽酮比色法、3,5-二硝基水杨酸比色法、苯酚比色法、斐林试剂比色法等化学方法。

Leagene 植物可溶性糖检测试剂盒(苯酚比色法)检测原理是还原糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糖醛或羟甲基糠醛，生成物可与苯酚反应生成橙红色化合物，在一定范围内颜色的深浅与还原糖的含量成正比，在485nm 处有最大吸收峰。

本法可以测定甲基化糖、戊糖(木糖、核糖、阿拉伯糖)、和多聚糖的测定，方法简单、试剂便宜、灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色可稳定160min 以上。

该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：自备材料：1、 蒸馏水、浓硫酸2、 电子天平、剪刀、研钵或匀浆器、水浴锅或电磁炉、分光光度计、比色杯3、 50ml 烧杯或三角瓶、容量瓶、20ml 刻度试管或10ml 螺旋盖离心管操作步骤(仅供参考)：1、 可溶性糖的提取：①称取新鲜的植物样品(干样品亦可)0.5~1g ，剪碎，加入蒸馏水约3ml 匀浆，转移至刻度试管中，用12ml 蒸馏水冲洗研磨器2~3次，洗出液也转移至该容器。

②塑料薄膜封口，于沸水浴中提取，待冷却后过滤，将滤液转入50ml 容量瓶。

③收集残渣再次匀浆、加水提取、合并滤液，定容。

2、 配制苯酚工作液：取1份苯酚溶液(10×)，再加入9份蒸馏水，混匀即可，现用现配。

3、 稀释蔗糖标准：取1ml 蔗糖标准溶液(10mg/ml)加入100ml 容量瓶中，用蒸馏水定容编号名称TC0673 50T Storage试剂(A): 蔗糖标准溶液(10mg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): 苯酚溶液(10×) 6mlRT 避光 使用说明书1份至刻度，即为蔗糖标准(100ug/ml)；取干净离心管或试管，按下表操作，依次获得系列质量的蔗糖标准。

植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的果树作物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。

对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。

因此，可溶性糖的定量讨论对果树的品质育种具有重要意义。

一、试材及用具1．试材新奇或冷冻的植物材料2．仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器；试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。

二、原理本试验的主要原理：在加热条件下，用还原糖溶液滴定肯定量的费林试剂时，将费林试剂中的二价铜还原为一价铜，以亚甲基蓝为指示剂，稍过量的还原糖马上使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。

通过试验，学习并把握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。

三、方法步骤（一）试剂配制1．费林试剂甲：称取硫酸铜（CuSO45H2O，分析纯）34.6g溶于水中，稀释至500mL，过滤，贮于棕色瓶内。

2．费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠（KNaC4O6H44H2O，分析纯）138g溶于水中，稀释至500mL，用石棉垫漏斗抽滤。

3．转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖（分析纯）用水溶解后转入1000mL容量瓶中，加入6mol/L HCl（分析纯）10mL，加水至100mL。

在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容（此为酸化的1%转化糖液，可保存3～4个月）。

测定时，取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中，加入甲基红指示剂一滴，用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/mL转化糖标准溶液。

4．亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝（分析纯）溶于10mL水中。

5．乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)22H2O，分析纯]溶于水中，加冰乙酸3mL稀释至100mL。