实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法精修订

九植物组织中可溶性糖含量的测定一．实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二．实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。

了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。

本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。

糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。

该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。

三．实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%）葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。

稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。

四．实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。

在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。

2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。

从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。

3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。

按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。

植物组织中可溶性总糖的提取及蒽酮比色定糖法——学习指南
l 学习重点 1. 学习植物样本中可溶性总糖的提取方法。

2. 掌握蒽酮比色法定糖的原理和操作。

l 知识要点
蒽酮比色定糖法：糖在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在620nm 处有最大吸收，可通过比色法进行糖的定量。

蒽酮比色法快速、简便，几乎可以测定所有的糖类物质，包括单糖、寡糖和多糖。

比色法和标准曲线制作参考《面粉中总糖和还原糖的提取及3,5-二硝基水杨酸定糖法》。

l 试剂 1. 0.1mg/ml 标准葡萄糖溶液。

2. 蒽酮试剂。

l 材料
新鲜植物叶片
l 仪器
电子天平、研钵、电磁炉、旋涡混合仪、循环水泵、抽滤瓶、紫外可见分光光度计 l 操作
l 注意事项
1. 蒽酮试剂中硫酸的浓度为80%，由于蒽酮不溶于水，因此测定样品中含水量不能多，试管应干燥无水，否则蒽酮会在测定液中析出而影响测定。

2. 蒽酮试剂
中有浓硫酸，操作时要小心，注意安全。

植物组织中可溶性糖含量的测定碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。

（二）试剂1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。

可溶性糖的测定——蒽酮比色法原理：可溶性糖与浓硫酸反应生成羟甲基糠醛，其与蒽酮生黄绿或蓝绿的糠醛衍生物，该物质在630nm(620)处有最大吸收峰，其浓度与可溶性糖的含量成正比。

试验用品：电子天平、分光光度计、恒温水浴锅、1mL，2mL，5mL 移液管各一支、容量瓶（根据需稀释倍数选择25或50mL）、10mL 刻度试管或离心管、试管架（别用胶的）、指型管（大一点的便于震荡混匀液体）、漏斗、滤纸、洗瓶试验药品：蒽酮、乙酸乙酯、分析纯蔗糖、浓硫酸（优级纯或分析纯）、蒸馏水试验样品：玉米叶（干样）标液及标曲配制：蒽酮-乙酸乙酯试剂：称取分析纯蒽酮1g溶于50mL乙酸乙酯中，贮于棕色瓶，至于黑暗中保存，如有结晶析出可加热溶解。

1%蔗糖标准液：精确称取1.000g分析纯蔗糖加少量蒸馏水溶解后转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度线；100mg/L蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL，加入100mL容量瓶，加水至刻度线。

标曲：项目管号0 1 2 3 4 5各管中蔗糖含量（ug) 0 20 40 60 80 100 100mg/L蔗糖液（ml）0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮乙酸乙酯试剂（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸（ml） 5 5 5 5 5 5 吸光度A630样品测定：称取0.05g样品于干燥的10mL刻度试管中，加蒸馏水10mL后放入水浴锅内沸水浴30min，再过滤到50mL容量瓶内混匀。

取干燥的指型管分别加入1.5mL蒸馏水、0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂、0.5mL样品溶液和5mL浓硫酸快速震荡摇匀后冷至室温比色（摇匀后反应10min左右可放入冷水中冷却）。

结果计算：可溶性糖含量=Mx×V×D×100V1×W×103Mx：标准溶液查得的糖含量（ug）V ：样品总体积（mL）V1：测定时的取用体积（mL）D ：稀释倍数（mg）103：样品重量单位由mg换算成ug的倍数。

植物组织中可溶性糖含量的测定碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。

但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。

此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。

二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。

（二）试剂1. 80 ％乙醇。

2. 葡萄糖标准溶液（ 100 μg/mL）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL）。

实验六植物水溶性总糖的提取和含量测定——蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。

3.学习分光光度计的使用。

二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在620 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 µg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。

一般样品少的情况下，采用这一方法比较适合。

三、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，超声波清洗器，电热恒温水浴锅，抽滤设备，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 µg/mL(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中。

当日配制使用。

3.材料：甜高粱，甘草四、操作步骤1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0mL，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。

自水浴沸腾起计时，准确煮沸l0 min，取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。

以标准葡萄糖含量（µg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品粉碎，105 ºC烘干至恒重，精确称取1~5 g，置于50mL三角瓶中，加沸水25mL，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50mL容量瓶中，定容至刻度，得可溶性糖的提取液。

3.稀释：吸取提取液2mL，置于另一50mL容量瓶中，以蒸馏水定容，摇匀。

4.测定：吸取1 mL已稀释的提取液于试管中，加入4.0 mL蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水替代提取液。

可溶性糖含量测定实验的改进可溶性糖含量测定在许多领域都具有重要意义，如植物生理学、食品科学、医学等。

通过对可溶性糖含量的测定，可以了解植物的生理状态、食品的品质和加工工艺，以及人体血液中血糖的水平等。

因此，对可溶性糖含量测定实验的改进就显得尤为重要。

可溶性糖含量测定主要基于糖类的水解和还原性质。

在碱性环境中，糖类可以被碘化钾氧化，同时生成可滴定的碘。

通过测定消耗的硫代硫酸钠标准溶液的体积，可以计算出可溶性糖的含量。

实验所需材料和设备包括：新鲜植物叶片、氢氧化钠、盐酸、无水乙醇、丙酮、酚酞指示剂、1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液、容量瓶、滴定管等。

样品制备：将新鲜植物叶片剪成小段，称取一定质量，加入50 mL 80%乙醇，在80℃下加热10 min，然后过滤得到提取液。

蒸馏：将提取液倒入蒸馏瓶中，加入5 mL浓盐酸，蒸馏至100 mL。

萃取：向蒸馏液中加入10 mL丙酮，用力摇动后静置分层，弃去水层。

滴定：向丙酮层中加入3滴酚酞指示剂，用1 mol/L硫代硫酸钠标准溶液滴定至粉红色。

计算：根据硫代硫酸钠标准溶液的用量和实验条件，计算可溶性糖的含量。

称取样品时要保证叶片的质量和大小基本一致，以保证实验结果的准确性。

在加入盐酸进行蒸馏时要注意安全，避免烫伤。

在萃取步骤中要保证丙酮完全覆盖水层，以确保糖类物质被完全萃取。

在滴定过程中要保证滴定管洁净，避免残留物对实验结果的影响。

每个样品需做至少3个平行实验，以保证实验结果的可靠性。

通过实验，我们得到了不同样品中可溶性糖的含量（表1）。

从表中可以看出，不同样品中可溶性糖的含量存在较大的差异。

通过对不同样品中可溶性糖含量的测定，我们可以发现不同样品之间的糖含量存在差异。

这种差异可能是由于植物生长环境、品种等因素造成的。

实验过程中也需要注意操作细节，如称样量的控制、萃取时丙酮的使用量等，这些因素都会对实验结果产生影响。

因此，需要对实验操作进行精确控制，以提高实验结果的准确性。

实验三蒽酮比色法测定可溶性糖
一、原理：糖在浓硫酸作用下可经脱水反应生成糖醛，并能进一步与蒽酮反应生成蓝绿色的糖醛衍生物，在一定浓度范围内，其颜色深浅与浓度大小成正比。

二、材料与仪器
植物叶片、分光光度计、水浴锅、漏斗、容量瓶、烧杯
三、步骤
1、取植物叶片0.15g，放入刻度试管中，加蒸馏水10ml。

2、将试管置于沸水中加热提取30min。

3、将提取液过滤，定容于25ml容量瓶。

4、取0.5ml提取液，依次加入1.5ml蒸馏水、0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液和5ml硫酸。

5、沸水浴保温1min。

6、630nm波长下，测定溶液吸光度值。

四、结果计算
可溶性糖含量（mg/g）=217.37X−3.0742∗25
w∗1000∗0.5。

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法）一、目的掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。

二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在 620 nm 处有最大吸收 . 在 10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

这一方法有很高的灵敏度，糖含量在 30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。

一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1) 分光光度计(2 ）电子顶载天平(3 ）三角瓶： 50m1 X 1（ 4 ）大试管： 9 支（ 5) 试管架，试管夹（ 6 ）漏斗，漏斗架（ 7 ）容量瓶： 50rnl X 2（ 8 ）刻度吸管： 1m1X3 ， 2m1X1 ， 5mlX1（ 9 ）水浴锅2 .试剂（ 1) 葡萄糖标准液： l00ug/ml(2 ）浓硫酸(3) 蒽酮试剂 :0.2g 蒽酮溶于 100 ml 浓 H2SO4 中当日配制使用。

3 .材料小麦分蘖节。

四、操作步骤1 .葡萄糖标准曲线的制作取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（ ml ） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8蒸馏水（ ml ） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2葡萄糖含量（ ug ）0 10 20 30 40 60 80在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。

自水浴重新煮沸起，准确煮沸 l0min 取出，用流水冷却，室温放置 10min ，在 620 nm 波长下比色。

以标准葡萄糖含量（ ug) 作横坐标，以吸光值作纵坐标，作出标准曲线。

2 .植物样品中可溶性糖的提取将小麦分蘖节剪碎至 2mm 以下，准确称取 Ig, 放入 50m1 三角瓶中，加沸水 25m1 ，在水浴中加盖煮沸10min ，冷却后过滤，滤液收集在 50m1 容量瓶中，定容至刻度。

Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法）二、原理糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。

显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。

本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。

蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。

三、材料、仪器设备及试剂1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。

2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；50ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

3.试剂及配制：蒽酮乙酸乙酯试剂：称取蒽酮2 g溶于100ml乙酸乙酯中，棕色瓶保存。

加热溶解。

每次用前检查，有结晶则微热溶解后使用。

100μg·ml－1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖1 g于烧杯加少量水溶解后，洗入100ml容量瓶中定容至刻度。

再取1ml稀释定容100ml，即100μg/ml 蔗糖标准液。

四、实验步骤1.蔗糖标准曲线制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液。

加入表中试剂后，按顺序加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯溶液，沿壁缓慢加入5ml浓硫酸，并立即摇动使混合均匀，立即沸水浴，每管准确保温1min，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在630nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。

2.样品提取称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g，放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取30min，冷却后过滤入50ml容量瓶中，再次加水10ml，沸水浴30min，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。

残渣如需继续测定淀粉，则过滤前离心，防止残渣流失。

3.糖含量测定吸取待测液0.5ml，加入试管中，再加蒸馏水1.5 ml。

实验15 植物组织中可溶性糖含量的测定一、目的学会植物组织中可溶性糖含量的测定方法，了解不同的植物组织可溶性糖含量的高低。

二、材料用具及仪器药品1.材料：水果或蔬菜2.仪器用具：分光光度计、天平、恒温水浴锅、研钵、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、试管、移液管、漏斗3.药品：乙醚、草酸钠、饱和醋酸铅标准葡萄糖母液：在电子天平上称取100mg分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水中，定容至500ml，则得每ml 含糖量为200ug的标准溶液。

蒽酮试剂：称取1g蒽酮结晶粉末，溶解于1000ml稀硫酸溶液中即得。

[稀硫酸溶液由760ml浓硫酸（比重1.84）稀释成1000ml而成]三、原理植物在个体发育的各个时期代谢活动都发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化，本实验介绍的是蒽酮比色法，糖在硫酸存在下生成糠醛，糠醛再和蒽酮作用形成蓝绿色的缩合物，其颜色的深浅代表着糖含量的高低。

H2SO4糖糠醛脱水糠醛+蒽酮蓝绿色的缩合物四、方法步骤1.标准曲线的制作。

取标准糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液各10毫升，浓度分别为每毫升含糖0、25、50、75、100、120、150、200微克。

将试管编号，依次将每管中加入1毫升上述葡萄糖标准溶液及5毫升的蒽酮试剂，震荡使之完全混合，在沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后在分光光度计波长620纳米下比色，测定各溶液的光密度，以光密度为纵坐标，糖溶液浓度为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。

2.测定样品的可溶性糖含量称取重量5g的新鲜植物叶子，于研钵中仔细研磨，研磨时加乙醚少许，直至为止，倒入烧杯中，用热水（70o C）洗涤研钵，洗涤液并入烧杯中，再加入蒸馏水约30～40ml。

将烧杯放在水浴锅上加热，保持温度70～80o C半小时，冷却后一滴一滴地加入饱和中性醋酸铅以除去混合液中的蛋白质，直至不再形成白色沉淀为止，然后将此混合物连同残渣一并洗水100ml容量瓶中，加水至刻度，充分摇荡，用漏斗过滤到三角烧瓶中，瓶中事先放有少量（约0.2——0.4g）的草酸钠粉末，以除去滤液中过量的醋酸铅，使生成草酸铅沉淀，再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。

实验十蒽酮比色法测定植物组织中总糖和可溶性糖的含量一、实验目的掌握蒽酮法测定总糖和可溶性糖含量的原理和方法。

二、实验原理蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。

酸可使糖类（如已糖基，戊醛糖及已糖醛酸）脱水生成糠醛，生成的糠醛或烃甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620nm处有最大光吸收值。

在10~100ug范围内其他颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

而对于上述特定的糖类物质，反映较稳定。

多糖和寡糖可用酸水解成单塘和蒽酮试剂反应，因此利用蒽酮法可测组织中总糖和可溶性糖。

这一种方法具有很高的灵敏度，糖含量在30ug左右时就能进行测定，所以可作为微量测糖之用。

一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。

三、仪器，试剂和材料1．仪器（1）分光光度计；（6）漏斗，漏斗架个6个（2）电子天平；（7）容量瓶：50ml2个；（3）三角瓶：50ml2个（8）移液管；（4）刻度具塞试管；10ml13支；（9）水浴锅。

（5）试管架，试管夹各2个；2．试剂（1）葡萄糖标准液：100ug/ml；（2）浓硫酸；（3）蒽酮试剂：0.2g蒽酮，溶于100ml浓流酸中，现当日配制使用。

3．材料小麦幼苗分蕖节或其植物的幼嫩组织（大白菜心）。

四、操作步骤1．葡萄糖标准曲线的制作取7支试管，按下表配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液；管号1234567葡萄糖标准液/mL00.10.20.30.40.50.6蒸馏水/mL 1.00.90.80.70.60.70.8葡萄糖含量/ug0102030405060在每支试管中，加入蒽酮试剂4.0ml，迅速浸入冰水浴中冷却。

各加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。

自水浴重新煮沸起，准确煮沸10min取出，用流水冷却，室温放置10min，在620nm波长下比色。

以标准葡萄糖含量（ug）做横坐标，以吸光值作纵坐标，做出标准曲线。

实验方案一、实验目的通过实验，掌握测定萝卜品质的方法（一）萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱； 20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡2.称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

可溶性糖含量测定(蒽酮法)实验的改进刘海英;王华华;崔长海;王曼;郭净净;文昭普;李安琪【摘要】对蒽酮比色法测定植物叶片中可溶性糖含量的几个问题进行了探索和改进.结果表明,提前1h配制80％硫酸,待其温度与室温一致时,称取蒽酮立即用于试剂配制,溶液显示正常的浅黄色；用刻度离心管提取可溶性糖并在其中定容和离心；强调多次摇匀和适度稀释.上述改进可以提高实验准确度,并简化实验操作.【期刊名称】《实验室科学》【年(卷),期】2013(016)002【总页数】2页(P19-20)【关键词】可溶性糖含量;蒽酮法;改进【作者】刘海英;王华华;崔长海;王曼;郭净净;文昭普;李安琪【作者单位】河南师范大学生命科学学院,河南新乡 453007【正文语种】中文【中图分类】S339.3糖类是奠定植物形态发生与建成的物质基础之一［1］，可溶性糖与植物的生长发育关系密切［2］。

由于可溶性糖对预防蛋白质的变性具有重要的保护作用，它的含量与植物的抗逆性正相关［3－4］。

逆境胁迫后可溶性糖含量增加，抗逆性强的农作物品种比抗逆性弱的品种在遭受逆境胁迫时，总能保持较高的可溶性糖含量，有较强的光合以及干物质合成能力，形态上表现为受害比较轻，产量相对高，可溶性糖含量常作为品种抗逆性评价指标之一［5－6］。

糖溶液可以与3，5－二硝基水杨酸共热生成棕红色化合物(3，5－二硝基水杨酸法)［7］，糖在浓硫酸作用下，经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛可与苯酚(苯酚法)或蒽酮(蒽酮法)反应［7］，分别生成橙红色和蓝绿色化合物，在一定范围内，颜色深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量。

植物体内各种单糖和麦芽糖等物质为还原糖;均属于能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖，其中前者常用3，5－二硝基水杨酸法测定，后者常用苯酚法测定［7］。

但在没有必要细致划分各种糖的情况下，用蒽酮法可以一次测定出糖总量，省去许多麻烦［7－10］。

因此，蒽酮法测定可溶性糖含量，是植物生理学常规教学实验，蒽酮试剂的配制是用80%硫酸做溶剂，配制出的溶液颜色有时黄色较浓，有时发黄绿，致使测定结果异常。

实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】实验七植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。

蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。

当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。

上述特定的糖类物质，反应较稳定。

该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。

三、材料、仪器及试剂1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵3.试剂（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD2.样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

植物组织中可溶性糖含量的测定—蒽酮比色法一、原理糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在630 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。

二、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中，贮藏于棕色瓶中（当日配置）(2) 浓硫酸3.材料：草莓新鲜果实三、实验步骤1、标准曲线的制作1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘干至恒重，精确称取1.000g。

加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。

取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。

1、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

2、可溶性糖提取称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。

分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 mL容量瓶中，用蒸馏水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。

吸取上述1.0mL提取液至10mL容量瓶中，用蒸馏水定容。