植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定(优选.)

植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。

此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。

三、实验材料、仪器及试剂1．材料：植物组织叶片2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml 容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1．葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（O D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

2．样品中可溶性糖的提取称取1克叶片，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方式。

方式别离用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。

结论关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。

在作物的碳素营养中，作为营养物质主若是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用要紧有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸进程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各类合成进程和各类生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，因此是营养中最大体的物质，也是需要量最多的一类。

可溶性蛋白是植物体内氮素存在的要紧形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有紧密的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有专门大关系。

白菜是叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰硕，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。

芹菜属植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇定的功效。

菠菜一年生草本植物，菠菜含有丰硕的维他命A、维他命C及矿物质，它对各类贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助医治作用。

2 材料与方式植物体内可溶性糖含量的测定材料新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取—）试剂葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂仪器设备。

可溶性蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝法）一、实验原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465 nm，后者在595 nm。

在一定蛋白质浓度范围内蛋白质－色素结合物在595 nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比。

故可用于蛋白质的定量测定。

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2 min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1 h内保持稳定。

该反应非常灵敏，可测微克级蛋白质含量，所以是一种比较好的蛋白质定量法。

二、实验材料、仪器和试剂1.仪器设备分光光度计，离心机，研钵，2. 试剂(1)牛血清白蛋白配成1000 μg/mL和100 μg/mL。

(2)考马斯亮蓝G-250：称取100 mg考马斯亮蓝G-250溶于50 mL 90%乙醇中，加入85%（W/V）磷酸100 mL，最后用蒸馏水定容至1000 mL。

此溶液在常温下可放置一个月。

(3)90%乙醇(4)磷酸（85%，W/V）三、实验步骤：1.可溶性蛋白的提取称取新鲜植物样品约0.5 g置于研钵中，加入5 mL 4o C下预冷的浓度为50 mmol/L，pH 7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入10 mL离心管中，在4 o C冰箱中静置10 min，于15000 rpm/min下冷冻离心25 min，上清液即为蛋白提取液。

4 o C下保存备用。

2.标准曲线的绘制(1)0-100 μg/mL标准曲线的制作取6支试管，按下表数据配制0-100 μg/mL血清白蛋白液各1 mL。

准确吸取所配各管溶液0.1 mL，分别放入10 mL具塞试管中，加入5 mL考马斯亮蓝G-250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2 min后，在595 nm下比色，绘制标准曲线。

配制0-100 μg/mL血清白蛋白液管号 1 2 3 4 5 6100 μg/mL牛血清蛋白量(mL)蒸馏水量(mL)蛋白质含量(mg)1.00.20.80.020.40.60.040.60.40.060.80.20.081.00.10(2)0-1000 μg/mL标准曲线的制作另取6支试管，按表10-2数据配制0-1000 μg/mL牛血清白蛋白溶液各1 mL。

植物组织可溶性蛋白质的测定-考马斯亮蓝G-250法更新时间2015-5-191、目的：测定植物组织的可溶性蛋白含量，测定范围为100-1000ug/ml，高浓度需要稀释后测定。

小分子蛋白和肽的测定需要用福林酚试剂。

2、提取：用测定SOD （0.05M pH7.8磷酸缓冲液）或者POD （0.1 mol / L 磷酸缓冲液 （pH6.0）的提取液或者用水提取均可，但混匀后要放置0.5-1小时再离心，以充分提取。

单独测定时，取样品5g，加水50ml，破碎，冷藏存储，测前10000rpm离心10分钟备用，取样0.1-0.2ml测定（如果加水比较少，计算时应考虑材料水分）。

3、测定：以提取液为对照，以牛血清标准蛋白为标准，以考马斯亮蓝G-250为显色剂，显色2-30分钟内，在595nm 比色。

4、计算：可溶性蛋白含量（ug/g鲜重）=测定含量（ug）*总提取体积ml/取样体积ml/鲜重g。

5、试剂配制：5.1、牛血清白蛋白标准溶液的配制：准确称取0.100g牛血清白蛋白，溶于100mL蒸馏水中，即为1000μg／mL的原液，此液不用时应冷藏保存，可用15天。

将1000μg／mL牛血清白蛋白用提取液稀释10倍，作为工作液，浓度为100μg／mL。

5.2、考马斯亮蓝G-250蛋白显色剂：称取0.050g考马斯亮蓝G-250，溶于25mL95％乙醇中，加入85％（W／V）的磷酸50mL，最后用蒸馏水定容到500mL。

此溶液在常温下可放置1个月。

标准曲线及样品配制表 蛋白含量（μg） 100μg/ml标准蛋白（μl） 提取液 （μl） 考马斯亮蓝G-250显色剂 （ml）0 0 10002.5 20 200 80040 400 600 60 600 400 80 800 200100 1000 0样品* X（一般叶片为1000） 1000-x*注1：样品量依据显色调整，生长旺盛期小麦叶片可溶性蛋白含量一般为1mg/g数量级。

设计性实验报告题目植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称：基础生物化学实验实验学期：2011至2012学年第一学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。

结果表明：生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。

即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。

关键词可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，蒽酮法，含量测定1、材料与方法1.1 蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等1.2 糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）2.1标准曲线的绘制取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。

以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

2.2样品测定2.2.1样品提取分别秤取生菜、苹果鲜样 0.25～0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。

2.2.2 吸取样品提取液1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。

糖含量测定2.3.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

植物体内可溶性蛋白含量的测定一目的：植物体内的可溶性蛋白质含量是一个重要的生理生化指标，如在研究每一种酶的作用时常以比活力（酶活力单位/毫克蛋白质）表示酶活力的大小及酶制剂纯度，这就需要测定蛋白质含量。

本实验用Folin—酚试剂法。

二原理：Folin—酚试剂法也称Lowry法，包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。

第二步是此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸（ Folin 试剂）还原，混合物深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。

因此，可利用其650nm波长下的特定吸收进行比色测定。

此方法操作简便，灵敏度比双缩脲法高 100 倍，定量范围为 5-100μg 蛋白质。

Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，均有干扰作用。

此方法的缺点是有蛋白质的特异性影响，即不同蛋白质因络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有不同。

三植物材料、仪器设备及试剂配制：（1）植物材料：100mg/L,300mg/L,500gm/L,700mg/L.以及0mg/L铅胁迫的黄瓜叶片（2）仪器设备：分光光度计、电子天平、离心机、生化培养箱、冷凝回流装置一套、玻璃研钵、移液管或移液枪、刻度试管、普通试管、玻璃棒、洗瓶、小烧杯等。

（3）试剂的配制：1、标准蛋白质溶液：称取25mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，使最终浓度为250μg/ml。

2、Folin-酚试剂甲：是由A和B两种溶液组成的。

A 液：称取10g 碳酸钠（Na2CO3）溶液与 2g 氢氧化钠（NaOH）和0.25g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）,用去离子水溶解并定容到500ml。

B 液：称取0.5g硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶液，用去离子水溶解并定容到100ml。

每次使用前将 A 液与 B 液按 50 ∶ 1 的比例混合即成。

设计性实验报告题目植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称：基础生物化学实验实验学期：2011至2012学年第一学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。

结果表明：生菜的蛋白质含量为5.88（mg/g），糖含量为0.0739g/100g；苹果中蛋白质含量为0.2926（mg/g），糖含量为0.2126g/100g。

即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。

关键词可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，蒽酮法，含量测定1、材料与方法1.1 蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等1.2 糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）2.1标准曲线的绘制取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。

以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

蛋白质含0 20 40 60 80 100量（ug）2.2样品测定2.2.1样品提取分别秤取生菜、苹果鲜样 0.25～0.5g，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。

2.2.2 吸取样品提取液1.0ml（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。

糖含量测定2.3.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定一、目的衰老是植物在长期进化和自然选择中形成的一种生物学现象，它可以在植物的细胞、器官和整体等不同水平上表现出来。

植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶色变黄，蛋白质含量减少。

另外自由基代谢失调并在体内积累也是植物衰老的机理之一。

本实验主要是测定植物衰老过程中叶片蛋白质的变化，掌握植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白的测定原理及方法。

二、原理植物材料经Tris－HCl缓冲液研磨、离心后，可溶性蛋白质溶于上清液中，非可溶性蛋白则存在于沉淀部分。

将沉淀用碱水解，则会得到非可溶性蛋白的提取液。

蛋白质提取液与考马斯亮蓝G－250反应呈蓝色。

在一定范围内，蛋白质的含量与反应液在595nm波长的吸光度呈正比，由此可求出蛋白质的含量。

三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：植物叶片2. 仪器设备：高速冷冻离心机；分光光度计；恒温水浴；研钵（或组织捣碎机）；试管；移液管；洗耳球等；3. 试剂及配制提取液（50mmol·L－1Tris－HCl，pH7.8，含0.5 mmol·L－1MgCl2， 1 mmol·L－1EDTA，1 mmol·L－1二硫苏糖醇, 缩写：DTT）。

考马斯亮蓝溶液配制：称取考马斯亮蓝G－250 100mg，加95％乙醇50ml，和85％磷酸100ml，然后定容至1000ml。

0.15mol·L－1NaCl溶液牛血清蛋白标准母液配制:用0.15mol·L－1NaCl溶液配成100μg·ml－1牛血清蛋白标准液。

四、实验步骤1. 牛血清蛋白标准曲线的制作1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg的牛血清蛋白标准液。

加入表中试剂后，摇匀，以0号管为空白对照，在595nm波长处测定其吸光度（A）值。

1.2标准曲线绘制以牛血清蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 蛋白质的提取称取叶片0.3～0.5g，剪碎于冷冻过的研钵中加提取液3ml，加少量石英砂，在冰浴中快速研磨成匀浆，匀浆倒入离心管中，再用5ml提取液（分两次）将研钵中匀浆洗入离心管，然后在10000 r/ min，4℃条件下离心20min，上清液即为可溶性蛋白质提取液。

植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。

二、原理（一）分离提取原理在80~85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。

（二）测定原理1．蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。

蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10min后出现，而核糖在相同温度下，加热3min后出现。

此法灵敏度高，糖含量达30μg即可测定。

2．茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570nm下有最大光吸收。

在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。

3．考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595nm，在一定范围内（0~1000μg/mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。

此法快速灵敏，反应在2min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

三、实验用品（一）实验材料：植物样品。

（二）器皿：1.25mL刻度试管×8，15mL试管×20；2.10mL离心管×2；3.容量瓶：50mL×1，25mL×1；4.移液管：5mL×2；2mL×4，1mL×2，0.1mL×2；5.恒温水浴锅；6.离心机；7.电子天平；8.分光光度计。

植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告植物组织中可溶性糖含量的测定实验报告10科四谭晓东20102501024一、实验目的掌握蒽酮比色法测定可溶性糖含量的提取和方法原理；掌握分光光度计中标准曲线制作的使用程序。

二、实验原理植物组织中的糖（包括还原糖和非还原糖）可以与浓硫酸反应生成糠醛，糠醛和蒽酮反应可以生成蓝绿色络合物，在625nm处有最大光吸收值。

三、实验材料大白菜叶片与叶柄四、实验步骤1. 可溶性糖的提取大白菜叶柄和叶片各0.5g鲜重，研磨+10ml 80%乙醇80度水浴30mi n过滤后定容至25ml葡萄糖浓度020*********（ug/ml）标准匍萄糖液吸00.10.20.30.40.5取量（ml）蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.5蒽酮（ml）5混匀，沸水浴10min，冷却后在625nm下比色0.1ml提取液+0.9ml蒸馏水冷却后对照标准曲线比色五、实验结果1.葡萄糖标准曲线标准方程：y=184.6x-1.973 R=0.99402. 根据标准曲线测到，叶片的吸光度是0.249，葡萄糖浓度为43.96ug/ml，含糖量为13.82% ;叶柄的吸光度为0.276，葡萄糖浓度为49.01ug/ml，含糖量为15.41%六、分析与讨论植物体内的可溶性糖和淀粉均是光合作用产物。

可溶性糖以蔗糖为主，是植物糖类运输的主要形式，其次是葡萄糖、果糖、麦芽糖、戊糖和糖苷等。

可溶性糖在硫酸作用下生成糖醛或羟甲基糠醛化合物，糖醛或羟甲基糠醛可与蒽酮作用形成蓝绿色络合物（糖醛衍生物），在一定波长范围内，其颜色的深浅与糖含量有定量关系，在625 nm波长下的吸光值与可溶性糖含量成正比。

由于蒽酮与可溶性糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。

该实验方法简便，灵敏度高，可溶性糖含量在30卩g左右就能进行测定，所以可作为测定微量可溶性糖之用。

该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量.在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值?但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差.此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。

实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物体内碳、氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，亦可以作为鉴定其品质的重要指标，而且也有助于训练基本操作技能。

二、原理（一）分离提取原理在80-85%的乙醇中，植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质，然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。

（二）测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。

蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10 min后出现，而核糖在相同温度下，加热3 min后出现。

此法灵敏度高，糖含量达30 μg即可测定。

2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570 nm下有最大光吸收。

在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。

3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色，当与蛋白质结合后变为蓝色，后者最大光吸收在595 nm，在一定范围内（0-1000 μg /mL），其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。

此法快速灵敏，反应在2 min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

三、实验用品（一）实验材料：植物样品。

（二）器皿：1. 25 mL刻度试管⨯8 ，15 mL试管⨯20；2. 10 mL离心管⨯2；3. 容量瓶：50 mL⨯1 ，25 mL⨯1；4. 移液管：5 mL⨯2，2 mL⨯4，1 mL⨯2，0.1 mL⨯2；5. 恒温水浴锅；6. 离心机；7. 电子天平；8. 分光光度计。

植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。

方法分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。

结论关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。

在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。

它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。

由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。

可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。

白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰富，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。

芹菜属伞形科植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。

菠菜藜科一年生草本植物，菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质，它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。

2 材料与方法2.1 植物体内可溶性糖含量的测定新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g）葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂分光光度计；分析天平；恒温水浴；试管；三角瓶；移液管；剪刀；玻璃棒；滤纸；研钵样品中可溶性糖的提取：称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～1.0 g （或干样粉5～100 mg ），放入大试管中，加入15 ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。

植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法）2010-04-04 22:43:32 来源：易生物实验浏览次数：221 网友评论0 条糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

关键词：可溶性测定含量植物可溶性糖含量测定蒽酮法solublesugar新陈代谢一、目的：糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。

不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。

因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。

二、原理糖类遇浓硫酸脱水生成糖醛或其衍生物，反应如下：糠醛或羟甲基糠醛进一步与蒽酮试剂缩合产生蓝绿色物质，其在可见光区620nm波长处有最大吸收，且其光吸收值在一定范围内与糖的含量成正比关系。

此法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，并具有灵敏度高，简便快捷，适用于微量样品的测定等优点。

三、实验材料、仪器及试剂1．材料：白菜叶、柑桔2．仪器：分光光度计恒温水箱20ml具塞刻度试管（3支）漏斗100ml容量瓶刻度试管试管架剪刀研钵3．试剂：（1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。

（2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏；（3）浓硫酸四、实验方法1．葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

2．样品中可溶性糖的提取称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。

实验十一植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、实验目的：从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖淀粉氨基酸及蛋白质等多种成分，不仅对研究植物碳氮代谢，了解植物的生长发育状况有重要意义，也可以作为鉴定其品质的重要指标，另外也有助于训练基本操作技能。

二、实验原理（一) 分离提取原理在80%~85%的乙醇中，植物组织中的还原糖，蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解，而淀粉及蛋白质沉淀，再用9.2mol/L高氯酸溶解淀粉（蛋白质沉淀），最后用0.1mol/L氢氧化钠溶解蛋白质。

选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。

（二）测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理，生成糠醛，再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物，在一定范围内，其颜色深浅与碳水化合物含量呈线性关系，蒽酮反应的颜色深浅，随温度条件和加热时间而变化，葡萄糖显色高峰在100℃时，加热10min后出现，而核糖在相同温度下，加热3min出现。

此法灵敏度高，糖含量达30μg即可测定。

2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水和茚三酮作用后，产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，在570nm下有最大光吸收，在一定范围内，其颜色深浅与氨基酸的含量成正比。

3.考马斯亮蓝G-250结合法————蛋白质含量测定考马斯亮蓝G-250在游离状态时成红色，当与蛋白质结合后成青色，后者最大光吸收在595nm，在一定范围内（0~1000μg/ml），其颜色深浅与蛋白质的含量成正比，此法快速灵敏，反应在2min内即达到平衡，室温1h内颜色稳定，而且干扰物也少。

三、仪器、试剂和材料1、仪器（1）25ml刻度试管×8,15ml试管×20（2）10ml离心管×2（3）容量瓶50ml×1,25ml×1（4）移液管5ml×2,2ml×4,1ml×2,0.1ml×2（5）洗耳球（6）恒温水浴锅（7）离心机（8）电子天平（9）分光光度计2、试剂1.样品分离提取80%乙醇，9.2mol/l高氯酸，4.6mol/l高氯酸，0.1mol/l氢氧化钠，2..可溶性羰基淀粉测定（1）葡萄糖标准溶液（100μg/ml）：0.1g无水葡萄糖溶于蒸馏水中，定容至1000ml （2）硫酸蒽酮试剂：0.2g蒽酮，1g硫脲（阻氧化剂），缓缓加入100ml浓硫酸，边加边搅拌，溶解后成黄色透明溶液，处于棕色瓶中，4 冰箱中保存。

植物组织中可溶性糖含量的测定XXX,YYY,ZZZ(版权所有，仅限个人)一.实验目的1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。

2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。

二、实验原理：（一）提取：利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，用铅离子沉淀提取液中的蛋白质，用草酸钠除去多余的铅离子，过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。

（二）测定：蒽酮比色法五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

蒽酮比色法该物质在600nm处有最大吸收，在0~200µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比，可以比色测定。

该法方法简便，绝大部分的碳水化合物（五碳糖、六碳糖）都能与蒽酮反应产生颜色。

三、实验材料：大白菜Brassica campestris ssp.pekinensis四.实验步骤：1．标准曲线的绘制配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。

显色：取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分钟。

比色：测定A600nm的吸光度值。

浓度：ug/mL050100150200吸光度：a00.1950.3550.5150.689绘制标准曲线：．可溶性糖的提取：称取0.250g待测植物叶片，放入研钵中，加少许乙醚研磨成均浆，用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中，使总体积在30~ 40ml，将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质，连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中，定容，充分摇匀，用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末，除去滤液中过量的铅，使生成草酸铅沉淀再行过滤，所得透明滤液即为可溶性糖提取液。

设计性实验报告题目植物可溶性蛋白质和糖含量的测定课程名称：基础生物化学实验实验学期：2011至2012学年第一学期植物组织中可溶性蛋白质和糖含量的测定摘要本文以生菜、苹果为材料，采用考马斯亮蓝法（蛋白质）、蒽酮法（糖）、分光光度计法进行了可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定。

结果表明：生菜的蛋白质含量为（mg/g），糖含量为100g；苹果中蛋白质含量为（mg/g），糖含量为100g。

即说明：生菜中蛋白质含量高于苹果，但苹果中的糖含量更高。

关键词可溶性蛋白、可溶性糖，考马斯亮蓝G-250染色法，蒽酮法，含量测定1、材料与方法蛋白质含量测定标准蛋白质溶液、考马斯亮蓝试剂、生菜、苹果分光光度计、离心机、研钵、烧杯、电子秤、移液管、试管等糖含量测定200ug/ml标准葡萄糖、蒽酮试剂、浓硫酸、生菜、苹果试管、水浴锅、分光光度计、研钵、电子秤、移液管、量筒、试管架2、实验步骤蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝G-250染色法）标准曲线的绘制取六只试管，按下表加入试剂，摇匀，向个管加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，并放置5min左右，以0号试管为空白对照，在595nm下比色测定吸光度。

以蛋白质含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

012345标准蛋白质（ml）蒸馏水量0（ml）蛋白质含020*********量（ug）样品测定样品提取分别秤取生菜、苹果鲜样～，用5ml蒸馏水或缓冲液研磨成匀浆后，3000r/min离心10min，上清液备用。

吸取样品提取液（蛋白质含量适当稀释），放入试管中，加入5ml考马斯亮蓝试剂，摇匀，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。

糖含量测定.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。

在每管中均加入蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（O D），以标准葡萄糖含量为横坐标，光密度值为纵坐标，作出标准曲线。

植物组织中可溶性糖含量的测定—蒽酮比色法一、原理糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。

该物质在630 nm处有最大吸收，在150 µg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。

该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。

二、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓H2SO4中，贮藏于棕色瓶中（当日配置）(2) 浓硫酸3.材料：草莓新鲜果实三、实验步骤1、标准曲线的制作1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘干至恒重，精确称取1.000g。

加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。

取10mL刻度试管11支，从0~10分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。

1、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96℃沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。

2、可溶性糖提取称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。

分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 mL容量瓶中，用蒸馏水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。

吸取上述1.0mL提取液至10mL容量瓶中，用蒸馏水定容。