海水中叶绿素的测定

⽔质叶绿素a的测定分光光度法编制说明附件3《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》（征求意见稿）编制说明《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》标准编制组⼆○⼀五年⼋⽉项⽬名称：⽔质叶绿素a的测定分光光度法项⽬统⼀编号：939承担单位：辽宁省环境监测实验中⼼编制组主要成员：王秋丽、赵丽娟、王琳、丁振军、刘畅、徐天赐、姜永伟、秦⾬、郭杨、朱⼴钦、叶明、贺业菊标准所技术管理负责⼈：周⽻化、雷晶、张虞标准处项⽬负责⼈：张朔⽬录1项⽬背景 (1)1.1任务来源 (1)1.2⼯作过程 (1)2标准制订的必要性分析 (3)2.1叶绿素A的环境危害 (3)2.2相关环保标准和环保⼯作的需要 (4)3国内外相关分析⽅法研究 (5)3.1主要国家、地区及国际组织相关分析⽅法研究 (5)3.2国内相关分析⽅法研究 (8)4标准制订的基本原则和技术路线 (10)4.1标准制订的基本原则 (10)4.2标准制订的技术路线 (10)5⽅法研究报告 (12)5.1⽅法研究的⽬标 (12)5.2⽅法原理 (13)5.3试剂和材料 (13)5.4仪器和设备 (16)5.5样品的采集和保存 (17)5.6分析步骤 (21)5.7结果计算 (31)5.8质量保证和质量控制 (34)5.9注意事项 (34)6⽅法验证 (35)6.1⽅法验证⽅案 (35)6.2⽅法验证过程 (36)7与开题报告的差异说明 (38)8本标准实施的建议 (39)9参考⽂献 (39)《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》编制说明1项⽬背景1.1任务来源（1）2006年6⽉，根据《关于下达2006年度国家环境保护标准制订项⽬计划的通知》（环办函[2006]371号），原国家环保总局办公厅下达了制订《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》国家环保标准制修订计划，项⽬统⼀编号为：939。

（2）《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》项⽬承担单位为：辽宁省环境监测实验中⼼。

1.2 ⼯作过程1.2.1 前期调研⼯作（1）成⽴标准编制组2006年7⽉，辽宁省环境监测中⼼承接了《⽔质叶绿素a的测定分光光度法》制修订任务以后，成⽴了标准编制组。

水体浮游植物叶绿素a含量的测定实验简介叶绿素a是估算浮游植物生物量的重要指标。

浮游植物叶绿素a的测定方法较多，目前大多采用Lorenzen 提出的单色法，此法只测定叶绿素a，并对脱镁叶绿素a的干扰进行了校正。

通过实验，学习用热乙醇法对不同水体浮游植物叶绿素a含量的测定方法。

必做实验，6学时。

一、实验目的通过对不同水体叶绿素a含量的测定，了解水生生态系统浮游植物生物量的估算方法，进一步认识浮游植物在水体生态系统生产中的重要地位。

二、实验原理浮游植物的主要光合色素是叶绿素(Chlorophyll)，常见的有叶绿素a、b 和c。

叶绿素a存在于所有的浮游植物中，大约占有机物干重的1～2%，是估算浮游植物生物量的重要指标。

浮游植物叶绿素a的测定方法较多，主要有高效液相色谱法（HPLC法）、分光光度计法和荧光光度计法三种。

高效液相色谱法能精确测定各种光合色素的含量，但仪器昂贵，分析操作步骤繁琐。

荧光法具有较高的灵敏度，但需要荧光光度计等设备。

分光光度法又分为三色法和单色法两种。

过去通常采用三色法，但由于结果计算较粗，误差大，现已较少采用。

目前大多采用Lorenzen 提出的单色法，此法只测定叶绿素a，并对脱镁叶绿素a的干扰进行了校正。

根据萃取溶剂不同Lorenzen 单色法又分为丙酮法和乙醇法，我国多年来一直使用丙酮法。

近年来国际上从萃取效果、安全和保健等考虑，已逐渐改用乙醇法。

三、实验用品721型分光光度计（或同类产品）、抽滤器（47mm不锈钢或有机玻璃抽滤器）、真空泵、医用离心机、可调节控温水浴锅、温度计、冰箱、醋酸纤维滤膜（直径47mm孔径0.45微米）、90%乙醇，1mol/L盐酸、10 ml离心管，250ml玻璃三角瓶。

四、实验操作1．按浮游植物采样方法采集水样。

在抽滤器上装好醋酸纤维滤膜（或玻璃纤维滤纸）。

取合适体积水样（一般湖泊、水库取样500ml，池塘250ml）经滤膜过滤后，将带样品的滤膜向内对折，放入10 ml离心管，保存于冰箱冷冻室，若置于低温冰箱（-20℃）中，则可较长期（三个月）保存样品。

叶绿素a测定实验报告（一）实验目的及意义水体富营养化可以通过跟踪监测水中叶绿素的含量来实现，其中叶绿素a是所有叶绿素中含量最高的，因此叶绿素a的测定能示踪水体的富营养化程度。

（二）水样的采集与保存1.确定具体采样点的位置2.在采样点将采样瓶及瓶盖用待测水体的水冲洗3-5遍3.将采样瓶下放到距水面0.5-1m处采集水样2.5L4.在采样瓶中加保存试剂，每升水样中加1%碳酸镁悬浊液1mL5.将采样瓶拧上并编号6.用GPS同步定位采样点的位置（三）仪器及试剂仪器：1.分光光度计2.比色池：10mm3.过滤装置：过滤器、微孔滤膜（孔径0.45μm，直径60mm）4.研钵5.常用实验设备试剂：1.碳酸镁悬浮液：1%。

称取1.0g细粉末碳酸镁悬浮于100mL蒸馏水中。

每次使用时要充分摇匀2.乙醇溶液（四）实验原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤，叶绿素会留在滤膜上，可用乙醇溶液提取。

将提取液离心分离后，测定750、663、645、630mm的吸光度，计算叶绿素的浓度。

（五）实验步骤1.浓缩：在一定量的试样中添加0.2mL碳酸镁悬浮液，充分搅匀后，用直径60mm 的微孔滤膜吸滤.过滤器内无水分后,还要继续抽吸几分钟.如果要延时提取,可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里冷冻避光贮存。

2. 提取：将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中，加入7mL乙醇溶液至滤纸浸湿的程度,把滤膜研碎,再少量地加乙醇溶液，把滤膜完全研碎，然后用乙醇溶液将已磨碎的滤膜和乙醇溶液洗入带刻度的带塞离心管中，使离心管内提取液的总体积不超过10mL，盖上管塞，置于的暗处浸泡24h。

3.离心：将离心管放入离心机中，以4000r/min速度离心分离20min。

将上清液移入标定过的10mL具塞刻度管中，加少量乙醇于原提取液的离心管中，再次悬浮沉淀物并离心，合并上清液。

此操作重复2-3次，直至沉淀不含色素为止，最后将上清液定容至10mL。

4.测定：取上清液于10mm的比色池中，以乙醇溶液为对照溶液，读取波长750,663,645和630mm的吸光度。

海洋生物学实验浮游植物叶绿素含量的测定一、实验目的：１、通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。

２、学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素ａ的测定方法。

二、原理：见《海洋生态学》P192-194生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。

浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a 含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。

海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。

不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。

三、仪器与设备：１、分光光度计3、采水瓶4、抽滤器5、微孔滤膜6、冰箱7、离心机四、药品与试剂：丙硐、甲醛、MgCO3等。

五、实验步骤：1、采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。

2、水样处理：将所取水样分别以0.45μm微孔滤膜（叶绿素a 总量）、2μm核孔滤膜（＞2μm孔径叶绿素a含量）以及先经20μm孔径筛绢过滤后再以2μm核孔滤膜（2-20μm孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。

3、数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a 含量及占叶绿素a总量比例等数据填入测定数据表中。

附：叶绿素a含量测定方法（分光光度法）：A．检测限：0.02mg/m3。

B．方法概述：已知体积的海水以玻璃纤维过滤器过滤，用90％丙酮将色素从滤器上萃取出来，其浓度以分光光度法测定。

C．仪器和设备：１、分光光度计２、抽滤器３、电动吸引器４、采水瓶５、微孔滤膜６、离心沉淀器７、冰箱８、离心管D．取样方法和贮存：将0.5-10升海水经0.45μm微孔滤膜过滤。

实验六富营养化湖泊中藻量的测定（叶绿素法）
一、实验目的与要求
1、学习并了解水体富营养化的概念、特征及原因。

2、掌握水体中叶绿素a的提取及其与水体富营养化的关系。

二、实验原理
“叶绿素法”是生物监测浮游藻类的一种方法，叶绿素存在于所有浮游藻类中，约占有机质干重的1%-2%，是估算藻类生物量及水体富营养化的一个良好指标。

三、实验器材
分光光度计、台式离心机、冰箱、95%的乙醇等。

四、实验方法
1、藻体的收集：取湖水50-100mL（视水体中藻量而定），静置后弃上清，将10 mL 藻液置于离心管中，4000rpm离心5min。

2、提取：在离心管中加入10mL95%乙醇，置4℃冰箱放置24h。

3、测定光密度：用分光光度计在665nm和649nm波长下测定光吸收值A665和A649，用公式C=13.7×A665-5.76×A649计算叶绿素含量，单位是μg chl/mL。

以95%的乙醇溶液作空白。

4、水样中叶绿素a浓度的计算：ρa,水样=（ρa,提取液*V乙醇）/V水样
五、实验报告
以测得的叶绿素浓度为参数，评价水样的富营养化程度
注：水体富营养化指标（TSI, trophic state index）：叶绿素指标：小于10μg/L为贫营养，10μg/L-20μg/L称为中等营养，大于20μg/L为富营养。

富营养化的其他指标为总氮大于30μg/L，总磷大于20μg/L，BOD 大于10 mg/L，水中细菌总数超过10 万个/毫升及透明度指标等。

只要超过以上TSI中的任意一个参数即可判断为水体富营养化。

1。

藻类叶绿素测定1、样品浓缩取一定量的藻液放置在遮光离心管中，马上经过4500转10分钟离心后将上清液倒掉或者储存留作其他分析用。

2、色素提取在离心管中加入2-3ml90%的丙酮水溶液，用高速匀样器500r/min破碎1min。

用90%丙酮水溶液清洗匀样器转子，将所有藻细胞转移至离心管中。

3、测定将盛有萃取液的离心管放置于离心机中，在675g（相当于我们实验室所用最高转速4500转的离心机的工作转速为2000转/min）相对离心力下离心15min，或者500g（相当于我们实验室所用最高转速4500转的离心机的工作转速为1700转/min）相对离心力下离心20min。

将离心后的上清液倒入比色皿中，在分光光度计上测定萃取液在630nm，647nm，664nm和750nm波长处的吸光度。

750nm处吸光度不应超过0.005，否则应倒回离心管重新离心。

664nm处吸光度应在0.1-1.0，否则应将萃取液稀释或者更换不同光程的比色皿。

4、计算水样的叶绿素a 、b 和c 含量用下式计算:Chl-a = [ 11 .85(D664 -D750)-1 .54(D647 -D750)-0 .08(D630 -D750)] VE/(V sδ) (1)Chl-b = [ -5 .43(D664 -D750)+21 .03(D647 -D750)-2 .66(D630 -D750)] VE /(Vs δ) (2) Chl-c = [ -1 .67(D664 -D750)-7 .6(D647 -D750)+24 .52(D630 -D750)] VE/(V s δ) (3)式中V E ———离心管中萃取液的定容体积, mL ;Vs ———水样体积, L ;δ———比色皿光程, cm ;Chl-a 、Chl-b 、Chl-c 分别为水样中叶绿素a 、b 、c的浓度, μg/ L ;D630、D647、D664、D750分别为萃取液在波长630 nm、647 nm、664 nm、750 nm 处的吸光度值。

几种海藻叶绿素含量的测定与比较张栩张沂萍“吕培顶“蔡昭铃欧阳藩中国科学院化工冶金所生化工程国家实验室，北京，１０００８０辅要：对青岛近海所采集的１７种底栖海藻中叶绿素的舍量进行了分析测定和比较．结果表明，叶绿素ａ含量较高的海藁是爆藻中的孔石莼｛Ｕｌｖａｐｅｒｔｕｓａ）１．９１ｍｇ／ｇ、浒苔（ＥｍｅｒｍｏｒｐｈａＰｒｏｈｆｅｒａ）１．９０ｍｇ／ｇ和礁膜（Ｍｏｎｏｓｌｒｏｒａａｎｉｔｉｄｕｍ）１３４ｍｇ／ｇ．依旋为褐藻中的海黍干（ＳａｒｇａｓｓｕｍＫｊｅｌｌｍａｎｉａｎｕｍ）Ｏ７４ｍｇ／ｇ、鼠尾藻｛Ｓａｒｇａｓｓｕｍｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）０７２ｍｇ／ｇ，红藻中的松节藻（Ｒｈｏｄｏｒａｅｌａｃｏｎｆｅｒｖｏｉｄｅｓ）０．５９ｍｇ／ｇ、夺宽紫菜（Ｐｏｒｐｈｙｒａｙｅ：ｏｅｎｓｉｓ）Ｏ５８ｍ∥ｇ和多管藻（Ｐｏ挑ｉｐｈｏｎｉａｕｒｃｅｏｌａｔａ）０．５４ｍｇ／ｇ以及褐藻中的萱藻（Ｓｃｙｔｏｓｉｐｈｏｎｌｏｍｅｎｔａｒｉｕｓ）０５４ｍｇ／ｇ．绿藻的叶绿素组成和含量与陆地植物的叶子极为相似，两者都有叶绿素ｂ，不舍叶绿素ｃ：而且叶绿素ａ与叶绿素ｂ之比值通常为一定值（约２．９）．所有的红藻和褐藻中，部有叶绿素ｃ，却没有叶绿素ｂ，叶绿素ａ所占的比例，最大的是褐藻中的鼠尾藻（８４％）和萱藻（８３％），其嵌是虹藻中的条斑紫菜（７６％）、松节藻【７５％）、蜈蚣藻（７２％）和多管藻（７Ｉ％）．孔石莼．浒苔和礁膜可作为获得较高含量叶绿素的廉价原料．褐藻中的鼠尾藻、海黍子和萱藻以及红藻中的松节藻、务斑紫菜和多管藻是获得高纯度叶绿素ａ、而且不舍叶绿素ｂ的理想材料．１前言叶绿素作为一种天然色素，是绿色植物进行光合作用的物质基础。

早在】８１８年，Ｂｅｒｚｅｌｉｕｓ就开始了对叶绿素方面的研究。

后来，Ｓｔｏｋｅｓ用有机溶剂提取叶绿素。

１９１３年，德国的Ｗｉｌｌｓｔａｃｔｅｒ报道了有关叶绿素结构、制各方法、特点以及分离和检测，第一次详尽地阐述了叶绿素的研究成果，开创了现代叶绿素工业生产。

实验三富营养化湖中藻量的测定（叶绿素a法）一、实验目的富营养化湖由于水体受到污染，尤以氮磷为甚，致使其中的藻类旺盛生长。

此类水体中代表藻类的叶绿素a浓度常大于10微克/升。

本实验通过测定不同水体中藻类叶绿素a浓度，以考查其富营养化情况。

二、器材与用品1、分光光度计（波长选择大于750nm，精度为0.5－2nm）。

2、比色杯（1cm；4cm）。

3、台式离心机（3500r/min）4、离心管（15ml具刻度和塞子）；冰箱5、匀浆器或小研钵。

6、蔡氏滤器；滤膜（0.45微克，直径47mm）。

7、真空泵（最大压力不超过300kpa）。

8、MgCO3悬液：lg MgCO3细粉悬于100ml蒸馏水中。

9、90％的丙酮溶液：90份丙酮＋10份蒸馏水。

10、水样：两种不同污染程度的湖水水样各2L.三、方法和步骤1、按浮游植物采样方法，湖泊、水库采样500ml，池塘300ml。

采样点及采水时间同“浮游植物”。

2、清洗玻璃仪器：整个实验中所使用的玻璃仪器应全部用洗涤剂清洗干净，尤其应避免酸性条件下而引起的叶绿素a分解。

3、过滤水样；在蔡氏滤器上装好滤膜，每种测定水样取50－500ml减压过滤。

待水样剩余若干毫升之前加入0.2ml MgCO3悬液、摇匀直至抽干水样。

加入MgCO3可增进藻细胞滞留在滤膜上，同时还可防止提取过程中叶绿素a被分解。

如过滤后的载藻滤膜不能马上进行提取处理，应将其置于干燥器内，放冷（4℃）暗处保存，放置时间最多不能超过48小时。

4、提取；将滤膜放于匀浆器或小研钵内，加2－3ml90％的丙酮溶液，匀浆，以破碎藻细胞。

然后用移液管将匀浆液移入刻度离心管中，用5ml90％丙酮冲洗2次，最后向离心管中补加90％丙酮，使管内总体积为10ml。

塞紧塞子并在管子外部罩上遮光物，充分振荡，放冰箱避光提取18－24小时。

5、离心：提取完毕后，置离心管于台式离心机上3500r/min，离心10min，取出离心管，用移液管将上清液移入刻度离心管中，塞上塞子，3500r/min在离心10min。

叶绿素含量测定方法---丙酮法由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。

藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。

叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。

取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。

采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5 min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。

按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。

定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：叶绿素a含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数叶绿素b含量用以下公式进行计算：Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数叶绿素总含量用以下公式进行计算：Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。

此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。

叶绿素提取方法提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英周百成底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.一、直接浸提法：1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min （根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。

藻类叶绿素 a 的测定一、实验名称藻类叶绿素 a 的测定二、实验目的——（水）环境化学中叶绿素 a 测定意义在地表水环境的富营养化的研究中，叶绿素 a 是表征浮游植物生物量的最常用的指标之一。

同时，叶绿素 a 也是用来衡量水体水质，评价水体富营养化水平的标准之一。

三、实验原理叶绿素介绍叶绿素是植物进行光合作用的主要脂溶性色素，它在光合作用的光吸收中起核心作用。

所有光合器官中都含有叶绿素。

叶绿素 a 和 b 都溶于乙醇、乙醚、丙酮等，难溶于石油醚，有旋光，主要吸收橙红光和蓝光。

因此，这两种光对光合作用最有效。

当植物细胞死亡后，叶绿素即游离出来，游离叶绿素不很稳定，光、热、酸、碱、氧、氧化剂等都会使其分解。

在酸性条件下，叶绿素中的镁原子很容易被其他酸代替，绿色消失而变黄，叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素，加热时反应加速。

叶绿素的实验室测量方法有分光光度法、荧光法、色谱法，其中以传统的分光光度法应用最为广泛。

根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L 成正比，即： A = α ?C?L式中：α 为比例常数。

当溶液浓度以百分比浓度为单位，液层厚度为1cm 时，α 为该物质的吸光系数。

各有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和，这就是吸光度的加和性。

（1）单色法已知叶绿素 a 的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm，已知在波长663nm下，叶绿素a在该溶液中的比吸收系数分别为82.04 ，因此C A=A663/82 ，可以计算出叶绿素 a 的含量（mg/L）。

（2）三色法已知叶绿素a、b 的80％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为663nm 和645nm，且两吸收曲线相交于652nm 处。

叶绿素的测定叶绿素a的测定叶绿素是植物光合作用中的重要光和色素。

通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况。

在环境监测中，可将叶绿素a 含量作为湖泊营养化的指标之一。

1.水样的采集与保存可根据工作的需哟进行分层采样或混合采样。

湖泊、水库采样500毫升、池塘300毫升，采样量视浮游植物分布量而定，若浮游植物数量较少，也可采样1000毫升。

采样点及采样时间同浮游植物。

水样采集后应放在阴冷处，避免日光直射。

最好立即进行测定的预处理，如需经过一段时间（4--48小时）方可进行预处理，则应将水样保存在低温（0--4°）避光处。

在每升水样中加入1%碳酸镁悬浊液1毫升，以防止酸化引起色素溶解。

水样在冰冻情况下（-20°）最长可保存30天。

2.仪器设备分光光度计真空泵离心机乙酸纤维滤膜（孔径0.45微米）抽滤器组织研磨器或其他细胞破碎器碳酸镁粉末90%丙酮3.试验程序以离心或过滤浓缩水样，在抽滤器上装好乙酸纤维滤膜。

倒入一定量体积的水样进行抽滤，抽滤时负压不能过大（约为50kpa）。

水样抽完后，继续抽1--2分钟，以减少滤膜上的水分。

如需短期保存1--2天，可放入普通冰箱冷冻，如需长期保存（30天），则应放入低温箱保存（--20°）。

取出带有浮游植物的滤膜，在冰箱内低温干燥6--8小时后放入组织研磨器中，加入少量碳酸镁粉末及2--3毫升90%丙酮，充分研磨，提取叶绿素a。

用离心机（3000--4000r/min)离心10分钟。

将上清液倒入5毫升或10毫升的容量瓶中。

在用2--3毫升90%丙酮，继续研磨提取，离心10分钟，并将上清液再转入容量瓶中。

重复1--2次，用90%丙酮定容为5毫升或10毫升，摇匀。

将上清液在分光光度计上，用1厘米光程的比色皿，分别读取750nm,663nm,645nm,630nm,波长的吸光度，并以90%的丙酮做空白吸光度测定，对样品吸光度进行校正。

4.计算方法叶绿素a（mg/m3）=11.64×D663?D750?2.16×D645?D750+0.10×D630?D750·V1 V·δV-----水样体积（L）D-----吸光度V1-----提取液定容后的体积（ml）δ------比色皿光程（cm）。

如何用叶绿素测定仪测定海产品的叶绿素含量叶绿素含量对渔业的影响在海洋生态系中，鱼、虾、贝类等产量的高低与叶绿素含量的高低有密切关系，叶绿素含量高的海域，其鱼、虾、贝类等产量才会高。

不过，有些河口海域和近海水域，由于河川污染带来丰富的营养盐类，造成海带的过度生长，即通称的水质优养化（eutrophication）。

海带过度生长固然造成叶绿素含量的增高。

在这些地方养鱼不好，那些污染会进入鱼的体内，最终进入人的身体里，危害人的健康。

养鱼可以促进水体富营养化，一方面鱼类活动和摄食促进了水体营养物质的循环速度，另一方面，养鱼网箱内的投饵等使浮游植物生物量增加，两者均能促进浮游植物的光合作用。

其他研究显示养鱼处的叶绿素含量均显著高于无鱼区。

如养鱼区鱼类投饵不足，则可能引起鱼类对微型浮游植物，微微型浮游植物的摄食，从而导致养鱼区叶绿素含量偏低。

主养鱼区所养鱼类的种类、密度、对叶绿素含量也有影响，如养鱼区的养鱼密度过大，鱼类对初级生产力中的微型浮游植物和微微型浮游植物为食物，这使得养鱼区出现叶绿素含量与其他海区叶绿素含量比较偏低。

如何利用叶绿素测定仪测定海产品叶绿素含量海带，作为一种水产品，因其资源丰富，被人们广泛的食用，看似营养不多，其实不然，海带除了给人体补充盐分外，因其含有大量的叶绿素而被称为营养食物，这点可能很多人都不了解，这也不奇怪，因为很少有人去研究海带叶绿素含量，并且因为其颜色并不是绿色，更少为人关注，不过在叶绿素仪发明以后，使得人们对叶绿素测量便捷快速化，才揭开了人类对海带叶绿素的研究，下面我们了解一个海带中叶绿素含量的分析研究，更深层了解海带。

叶绿素是自然界生物光合作用的产物，它无毒可食用，所以广泛应用于食品、化装品、药物的着色，另外，在生化研究中也有非常重要的作用，故叶绿素的需要量很大，我国每年出口约1(X众。

目前叶绿素的生产，人们把精力主要集中在植物叶或以叶绿素含量较高的蚕沙上，但这要受到季节的影响，而且有些树叶含有难以分离的毒素，且陆生植物叶子中叶绿素含量约为0.3%-0.5%。

水体中叶绿素a测定方法探讨作者：刘枢来源：《农业与技术》2012年第10期摘要：水体中叶绿素a的测定方法有分光光度法、荧光法和高效液相色谱法，我国目前尚无国家标准方法。

对国内外水体中叶绿素a的测定方法进行了介绍和比较，为广大实验室分析人员进行探索性研究，建立一种操作简单、结果准确的叶绿素a测定方法提供了参考。

关键词：水体叶绿素a 测定方法中图分类号：TQ611.5 文献标识码：A叶绿素（Chlorophyll）是植物光合作用中的重要光合色素，可分為a、b、c、d四类。

叶绿素a存在于所有的浮游植物中，大约占有机干重的1%～2%，是估算浮游植物生物量的重要指标。

通过测定浮游植物叶绿素，可掌握水体的初级生产力情况和富营养化水平[5]。

在环境监测中，可将叶绿素a含量作为湖泊富营养化的指标之一[1]。

在进行国家十二五课题辽河流域水质的监测过程中，对国内外水质叶绿素a的分析方法进行了比较研究。

浮游植物叶绿素的测定方法有分光光度法、荧光法和高效液相色谱。

荧光法具有高效、灵敏的优点，高效液相色谱法可以同时测定多种色素，所得结果可以更准确地反映浮游植物生物量，但这两种方法所需仪器昂贵，操作复杂，难以作为常规的监测方法，所以常用分光光度法进行测定。

目前我国水质叶绿素a的测定尚无国家标准，分析方法均采用分光光度法，几种方法的前处理步骤大致相同。

美、日等发达国家对叶绿素a的测定已列为标准分析方法，EPA445.0采用荧光法[7]，EPA446.0采用分光光度法[8]，EPA447.0采用高效液相色谱法测定[9]。

ISO 10260：1992和日本JIS K0400-80-10标准方法同样采用的是分光光度法测定水质叶绿素a[10，11]。

1 国内标准现状目前我国叶绿素a的测定标准方法有《环境监测技术规范》、《湖泊富营养化调查规范》[6]和《水和废水监测分析方法（第四版）》[4]B类方法，均采用分光光度法进行测定，几种方法的前处理步骤大致相同。