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免疫兔制备抗体流程英文回答：Preparation of Antibodies in Immunized Rabbits.The process of producing antibodies in immunizedrabbits involves several key steps:1. Immunization: The rabbit is injected with the antigen of interest, which triggers an immune response. The antigen can be a protein, peptide, or other substance that the body recognizes as foreign.2. Antibody Production: In response to the antigen, the rabbit's immune system produces antibodies that arespecific to the antigen. These antibodies are produced by B cells, which are a type of white blood cell.3. Collection of Serum: Once the rabbit has produced a sufficient level of antibodies, blood is collected from therabbit. The serum, which contains the antibodies, is then separated from the blood cells.4. Purification of Antibodies: The serum is thenpurified to isolate the antibodies of interest. This can be done using various techniques, such as affinity chromatography or protein A/G purification.5. Characterization of Antibodies: The purified antibodies are characterized to determine their specificity, affinity, and other properties. This is important for ensuring that the antibodies are suitable for theirintended use.中文回答：免疫兔制备抗体流程。
一抗的选择检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：分析试验应用的类型l样本蛋白的结构性质l样本的种属l抗体宿主的种类l抗体的标记和检测l1.分析试验应用的类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2.样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
l 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来l3.样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
兔多克隆抗体的制备一、兔多克隆抗体1.多克隆抗体的概念抗原刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。
一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。
2.兔多克隆抗体的优点1.制备体系成熟。
2.抗兔二抗产品丰富，商业化好，适合检测。
3.制备成本相对低廉。
3.为何选择兔子4.一般流程多抗一般制备流程：完全抗原的准备→兔子的免疫→效价检测和终放→抗体亲和纯化→抗体的浓缩和保存。
二、兔多克隆抗体制备流程1.兔子的准备挑选健康的6周大小的新西兰大白兔两只（约2Kg），使其适应新的生活环境，至少稳定几天再进行首次取血.预采血（作阴性参照用）1.1 将兔子小心的放入固定的架中,使兔子平静；1.2小心剃去兔耳上的毛以使血管清晰可见(也可不剃)；1.3如果有必要,可用小棉球沾酒精涂抹血管部位,使血管膨胀；1.4用注射器从耳静脉抽取约10ml血液(约5ml血清)；1.5小心抽出针头,适当按压伤口以免流血,然后用酒精棉球消毒伤口；1.6将收集的血液置于37`C灭活30min,最后置于4`C过夜使其凝结释放血清；1.7将凝结好的血液在10000r／min离心10min；h.收集上清，即为血清。
2. 兔子的免疫2.1 注射两只兔子的抗原为1ml,抗原缓冲溶液必须不含对兔子有害的化学试剂.每只兔子初次免疫400ug抗原比较适合,也可适当减少以获得更好的结果，后续免疫每次为100ug即可。
2.2 将1ml的佛氏完全佐剂与准备好的1ml抗原充分混匀,呈乳白色；2.3 小心从笼中取出兔子，每只兔子免疫4个部位(背部和大腿根部均可),每个部位250ul,针头呈45度角插入皮下1-2cm,注射完后停留数秒以防止抗原外流。
2.4 免疫周期为20天,免疫完后7-10天取血(包括中途测试取血和最终放血),总共免疫4-5次。
1. 取2 ml 的弗氏完全佐剂加到2 ml 的溶于PBS的纯化抗原中，使之乳化。
用3 ml 注射器抽取此乳化液，接上22G注射针头，排出注射器中的气泡。
2. 将兔子敢在固定架上，用一只手抓住兔的颈背部毛皮，另一只手托住兔的后腿及臀部，将兔束紧固定以使后肢不能伸张，用70%乙醇对所要注射的区域进行清洁消毒，在后肢大腿肌肉内进针约1 cm 深，毎条大腿肌肉内最多注射0.5 ml 乳化液。
3. 四周后，用1 mg 的混溶干弗氏不完全佐剂的抗原乳化液（1：1）对兔进行肌肉内加强免疫注射，操作步骤同1和2，初次加强免疫后2周再次进行加強免疫注射。
4. 第二次加强免疫注射10天后，从兔的耳缘静脉处放血。
（1）先将兔固定在固定架上（固定紧），使其耳朵伸出，用70%乙醇洗洁消毒一侧耳朵。
（2）将兔耳置于热灯之下，用手指轻轻地拍打兔耳；1~2 min 内兔耳上的血管即会充分地充盈。
（3）用一消毒过的解剖刀的锋尖在兔耳缘静脉上迅速划一长约0.5 cm 的小口，收集兔血于50 ml 的塑料离心管中，直至伤口不再流血为止。
（4）使兔血顺管壁下落，以避免发生溶血。
5. 将兔耳擦拭干净，涂以70%乙醇，在耳朵伤口上涂一层凡士林，以减轻由乙醇产生的皮肤刺激感。
6. 将兔血在室温下静置数小时后置4 ℃过夜，用一木质的拨棒将血凝块轻轻地挑松并使之由离心管的侧壁脱落，将血洧移到合适的离心管中，5 000 g 离心10 min，去除残留的红细胞及其他碎片。
7. 每两星期进行进一步的加强免疫。
每次加强免疫后10天，可采集一次兔血，兔的两只耳朵可轮流交替进行采血。
8. 采用ELISA法或RIA法对血清中的特异性抗体进行滴度测定。
如果需要的话。
1. 按基本方案中步骤1制备免疫兔用的抗原。
2. 牢牢地抓住兔子，剃除其背毛，用70%乙酵消毒其暴露的皮肤。
用拇指和食指将需要免疫注射的区域的皮肤张开，用3 ml 注射器带24G注射针头以相对皮肤30。
HRP标记抗体原理及方法（戊二醛二步法和过碘酸钠法）酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗体和酶标记SPA 等。
酶标记物质量的好坏直接关系到免疫酶技术的成功与否，因此被称为关键的试剂。
酶标记物中最常用的是酶标记抗体，它是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成。
酶标记抗体的质量主要取决于纯度好、活性强及亲和力高的酶和抗体，其次要有良好的制备方法。
目前，高质量的酶(如辣根过氧化物酶，简称HRP)国内已有商品供应。
高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。
在制备方法上，宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便易行的方法。
(一) 酶制剂及其底物凡无毒性又能呈现有色化学反应的酶，原则上均可作为标记用。
但作为标记抗体用的酶应满足下列要求：(1)来源方便，易于纯化；(2)比活性高，性质稳定；(3)酶活性和量能用简单方法测定。
目前在免疫酶技术中常用的酶为辣根过氧化物酶(HRP)和硷性磷酸酶(AP)，其次还有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。
由于辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)比活性高，稳定，分子量小，纯酶容易制备，所以最常用。
HRP广泛分布于植物界，辣根中含量高，它是由无色的酶蛋白和棕色的铁卟啉结合而成的糖蛋白，糖含量18％。
HRP由多个同功酶组成，分子量为40,000,等电点为PH3～9,酶催化的最适PH因供氢体不同而稍有差异，但多在PH5左右。
酶溶于水和58％以下饱和度硫酸铵溶液。
HRP的辅基和酶蛋白最大吸收光谱分别为403nm和275nm，一般以OD403nm／OD275nm的比值RZ(德文ReinheitZahl)表示酶的纯度。
高纯度的酶RZ值应在3.0左右(最高可达3.4)。
RZ值越小，非酶蛋白就越多。
值得注意的是，纯度并不表示酶活性，如当酶变性后，RZ值仍可不变。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。
供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。
多抗技术对多种鱼类血清免疫球蛋白的研究王希龙;龚晖;林能锋;王凡;刘晓东;林天龙【摘要】亲和层析纯化鳜鱼血清免疫球蛋白,制备针对鳜鱼血清免疫球蛋白的兔多克隆抗体,采集常见经济鱼类血清25种,利用优球蛋白法纯化血清,通过间接ELISA 的方法筛选与兔抗鳜鱼Ig反应的鱼类血清,结合变性还原条件与非变性非还原条件下的蛋白印迹试验显示:制备的兔抗鳜鱼Ig识别鲈形目中鳜鱼、加州鲈鱼、卵形鲳鲹、尼罗罗非鱼、花鲈、红罗非鱼、青石斑鱼、大黄鱼、黑鲷、斜带髭鲷、美国红鱼,鲽形目中的牙鲆、大菱鲆,鮋形目中的褐菖鮋血清免疫球蛋白的重链与轻链.而与鲤形目中的5种鱼,鲇形目中的4种鱼,鳗鲡目中的海鳗、欧洲鳗鲡反应条带较为复杂.嗜水气单胞菌外膜蛋白免疫刺激复合物(ISCOMs)免疫尼罗罗非鱼,间接ELISA 法检测免疫组血清中的抗体,利用兔抗鳜鱼Ig多克隆抗体作为二抗,结果显示,与对照组相比,免疫组有较高的抗体水平.%Siniperca chuatsi serum Ig was purified by affinity chromatography for prepared polyclonal antibody against Siniperca chuatsi serum Ig. Twenty-five fish's sera were collected and purified the serum Ig by euglobulin precipitation. Serum Ig could react with polyclonal antibody that against Siniperca chuatsi serum Ig were screened. The polyclonal antibody could recognize Siniperca chuatsi, Micropterus salmoides, Trachinotus ovatus, Oreochromis niloticus , hateolabarax japonicus , Oreochromis sp. , Epinephelus awoara , Pseudosciaena crocea , Sebastiscus marmoratus, Sciaenops ocellatus, Sparus macrocephalus, Scophthatmus maximus, Paralichthys olivaceus , Sebastiscus marmoratus, serum Ig heavy chain and light chain. The polyclonal antibody reacted with many protein bands from purified serumof five species Cypriniformes, four species fish of Siluriformes, purified serum of Anguilla anguilla and Muraenesox cinereus. Oreochromis niloticus were immunized intraperitoneally with aeromonas hydrophilla ZN1 outer membrane proteins immune stimulating complexes (ISCOM). The antibody in the serum was detected by ELISA, the polyclonal antibody against Siniperca chuatsi from rabbit was used as second antibody. The result showed that the antibody from immunized group was higher than that from control group.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2011(026)006【总页数】6页(P919-924)【关键词】鱼类;血清;Ig;多克隆抗体;蛋白印迹【作者】王希龙;龚晖;林能锋;王凡;刘晓东;林天龙【作者单位】福建省农业科学院生物技术研究所,福建福州 350001;山东潍坊临朐实验中学,山东潍坊262600;福建省农业科学院生物技术研究所,福建福州 350001;福建省农业科学院生物技术研究所,福建福州 350001;福建省水产技术推广总站,福建福州 350003;福建省农业科学院生物技术研究所,福建福州 350001;福建省农业科学院生物技术研究所,福建福州 350001【正文语种】中文【中图分类】S917目前抗体技术广泛应用于鱼类免疫学的研究，其中最常见的是制备兔多克隆抗体。
Elisa 相关试剂的配制1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBSNaH2PO4·2H2O 0.39克Na2HPO4 1.27克NaCl 0.85克NaN3 200 mgH2O（蒸馏水）至1000ml2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4，PBSTNaCl 2.0克KH2PO4 0.2克Na2HPO4·12H2O 2.9克KCl 0.2克NaN3 0.2克H2O 至1000ml吐温（Tween）20 0.5ml4°C保存备用3、包被液（简称CB）pH9.6Na2CO3 1.59克NaHCO3 2.93克NaN3 0.2克H2O 至1000ml密封盖好，4°C存放备用4、ELISA底物液（可溶性底物）磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.00.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ml) 24.3ml0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/1000ml) 25.7mlH2O 50ml4°C存放备用5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6 Tris-HCLTris 6.05克HCL(36%) 3.15克（约2.7ml浓HCL）H2O 至1000mlDAB为3´，3´二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色5. 偶联稀释剂和稳定缓冲液HRP偶联稳定剂无论蛋白稀释度的高低，HRP-StabilPLUS 都可以提供稳定的HRP 偶联蛋白质。
该稳定剂可防止过氧化物酶活性的损失，并能维持蛋白的构造。
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抗体稀释液和强化剂抗体强化剂在免疫测定中用于稀释浓缩抗体和抗体偶联物:不含多克隆和单克隆抗体HRP 偶联抗体AP 偶联抗体荧光偶联抗体增强信号建议使用抗体强化剂以获得高信噪比结果。
兔红细胞抗体的制备与鉴定兔红细胞抗体是指兔体内产生的能够与红细胞相结合的抗体，其制备与鉴定是血清学、分子生物学等领域中重要的科研技术之一。
以下是对该技术的介绍和分析。
一、兔红细胞抗体的制备1、实验动物的选取兔是目前最常用的实验动物之一。
兔子本身性格温顺，易于饲养且不耐寒，对环境要求较高，具有较高的生殖能力，其产生的抗体种类也较为多样。
因此，选择兔子作为实验动物进行兔红细胞抗体的制备是合适的选择。
2、免疫原的选择通常情况下，在制备兔红细胞抗体之前，需要先进行抗原的选择。
抗原的选择一般需要考虑到抗原的来源、性质、纯度等因素，并需根据需要进行筛选。
目前，常用的抗原包括自身组织抗原、异种组织抗原、细菌、病毒等多种物质。
3、制备方法(a) 制备过程兔红细胞抗体的制备过程一般分为以下几个步骤：免疫动物、采集兔血清、分离红细胞以及红细胞的溶解和沉淀。
(b) 实验操作在实验操作上，需要进行兔的体重测定、抗原的准备、抗原的免疫、血清的分离和处理等步骤。
同时，也需要对实验条件进行控制，如温度、光线、通风等因素。
二、兔红细胞抗体的鉴定1、免疫层析法免疫层析法是通过在固定相上引入抗原，以检测兔血清中产生兔红细胞抗体的方法。
在这种方法中，采用的固定相一般是胶体、树脂、葡聚糖和海藻酸等。
2、凝集反应法凝集反应法是通过在试管中加入抗原，以观察血清在抗原作用下是否出现凝集的方法。
凝集反应法有多种类型，如直接凝集反应法、间接凝集反应法、红细胞凝集反应法等。
3、酶联免疫吸附试验法酶联免疫吸附试验法首先需要将抗原覆盖在微孔板或固定在固体相上，接着加入适当稀释的检测血清，再加入特异性的二抗和底物，通过检测光密度差异以确定抗体的产生情况。
三、兔红细胞抗体的应用由于兔红细胞抗体制备方法简单，操作容易，因此在许多领域中都有着广泛的应用。
兔红细胞抗体用于疾病诊断、测定血型、检测某些病原体、红细胞表面抗原等方面。
此外，兔红细胞抗体也可用于制备单克隆抗体等相关技术。
