固氮菌、解磷菌的分离筛选

磷尾矿表层土壤解磷菌的筛选及鉴定以磷尾矿表层土壤解磷菌的筛选及鉴定为标题磷尾矿是一种由矿石加工过程中产生的固体废弃物，它含有大量的磷，对环境造成潜在的污染风险。

为了解决磷尾矿的环境问题，许多研究致力于开发高效的磷尾矿治理方法。

其中一种方法是利用微生物，特别是解磷菌，来降低磷尾矿的环境风险。

本文将介绍磷尾矿表层土壤解磷菌的筛选及鉴定方法。

磷尾矿表层土壤是指位于磷尾矿表面的一层土壤，其与磷尾矿之间的相互作用对磷的迁移和转化起着重要作用。

为了筛选出具有高效解磷能力的菌株，首先需要采集磷尾矿表层土壤样品。

样品的采集要遵循科学规范，避免污染和样品损失。

采集后的土壤样品需要在实验室中进行处理。

处理土壤样品的第一步是制备培养基。

培养基的制备需要考虑到解磷菌的生长需求，通常包括碳源、氮源、磷源和微量元素等。

常用的培养基有PDA培养基、液体培养基等。

制备好的培养基需经过高温高压灭菌处理，以防止杂菌的污染。

接下来是土壤样品的处理和菌株的筛选。

将土壤样品进行稀释，制备成一系列不同浓度的悬浮液。

然后将这些悬浮液分别接种到含有固体培养基的培养皿中。

在培养过程中，可以通过观察培养皿的菌落形态和颜色等特征来初步筛选具有解磷能力的菌株。

初步筛选后，需要对菌株进行鉴定。

常用的鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性分析和分子生物学鉴定等。

形态学观察是通过显微镜观察菌落形态、细胞形态和芽孢形态等特征来鉴定菌株。

生理生化特性分析包括利用不同的生化试剂对菌株进行反应，比如碳源利用试验、氮源利用试验等。

分子生物学鉴定是通过提取菌株的DNA，利用PCR扩增和测序技术来鉴定菌株的亲缘关系。

通过以上的筛选和鉴定方法，可以得到具有高效解磷能力的菌株。

这些菌株可以应用于磷尾矿治理中，通过与磷尾矿表层土壤的相互作用来降低磷的迁移和转化，减少磷的环境风险。

此外，这些菌株还可以用于生物修复等其他领域。

总结起来，磷尾矿表层土壤解磷菌的筛选及鉴定是一项重要的研究工作。

植物固氮菌的筛选和鉴定技术植物固氮菌是一种能够将空气中的氮气转化为可供植物使用的氨的微生物。

它们是农业生产和生态环境中的重要成分，能够大幅度减少化肥的使用，提高作物产量，改善土壤环境。

因此，对植物固氮菌的筛选和鉴定技术的研究非常重要。

一、植物固氮菌的筛选植物固氮菌的筛选技术可以分为两类：直接筛选和间接筛选。

直接筛选是指根据植物中常见的固氮菌的特征(如罗德菌、艰难菌等)，利用分离富集技术，直接从土壤或根际中分离和筛选固氮菌。

这种方法简单易行，但它的筛选能力比较有限。

间接筛选则是以作物生长促进、氢气释放等作为固氮菌筛选的指标，通过对具备这些特征的细菌进行分离富集和筛选，如何同时兼顾作物生长和氮固氮的效果对筛选提出了更高的要求。

目前，常用的筛选技术包括荧光快速测量、Si膜过滤技术、PCR技术、微生物组培技术等。

荧光快速测量技术是一种常见的筛选方法。

通过荧光探针（如Acridine Orange, SYBR Green I）所发出的荧光信号，能够快速检测出生长在土壤和根际环境中的植物固氮菌，这些菌具有特有的荧光特征。

这种方法适用于样本量较少的情况下，但也存在着对设备要求高等问题。

Si膜过滤技术则是一种利用Si膜实现细菌分离、鉴定的技术。

通过先将样本在Si膜上培养，然后将培养基滴在Si膜中心，并让Si膜在培养基中浸透一定时间。

接下来，将Si膜转移到一盘培养基中进行进一步的培养，即可快速筛选出该环境下的植物固氮菌。

这种技术不仅能很好地保留样本的特征，还可以落实样本归档和保留的规范要求。

微生物组培技术则是一种基于微生物的分生技术，将固氮菌纯化分离后分别接种到富含养分的固定培养基中，经过培养后，细菌以生长点的形式展示出来。

这种技术的特点是检测灵敏度高，需要专门的设备和技术。

二、植物固氮菌的鉴定鉴定植物固氮菌的主要依据是形态学、生理学与分子生物学。

形态学鉴定主要包括形态学特征的摄影、显微镜观察和染色体及孢子的研究等。

植物固氮菌菌种筛选及其应用植物固氮菌是一种可以固定大气氮的细菌，这种细菌可以和许多植物建立共生关系，为植物提供固氮服务，同时也可以促进植物的生长和免疫系统的功能。

因此，植物固氮菌的选育和应用具有广泛的应用前景。

一、植物固氮菌的筛选为了从细菌中选出能够固氮并与植物形成共生关系的菌株，必须进行严格的筛选。

目前，常用的筛选方法包括以下几种：1、土壤样品筛选法：这种方法适用于从自然环境中筛选具有固氮能力的细菌。

首先从土壤中取样，然后通过培养来寻找具有固氮能力的细菌。

2、植物根系筛选法：这种方法适用于从植物根系中筛选具有固氮能力的细菌。

首先从植物根系中取样，然后通过培养来寻找具有固氮能力的细菌。

3、分子筛选法：这种方法适用于从分子水平上筛选具有固氮基因的细菌。

通过分子生物学技术，可以检测出具有固氮基因的菌株。

通过以上的筛选方法，可以获得具有固氮能力的细菌。

但是，在进行实际应用之前，还需要对这些细菌进行进一步的鉴定和优化。

二、植物固氮菌的应用植物固氮菌具有广泛的应用前景。

以下是植物固氮菌的几个常见的应用领域：1、农业领域：植物固氮菌可以与许多农作物建立共生关系，为作物提供固氮服务。

在农业生产中广泛应用的菌种包括大豆根瘤菌、豌豆根瘤菌等。

2、生态修复领域：植物固氮菌可以帮助植物生长，并提高植物的抗逆能力，从而促进生态修复。

例如，在荒漠化地区种植沙生植物，可以通过与固氮菌的共生来提高沙生植物的生长速度和适应性。

3、生物肥料领域：植物固氮菌可以作为纯菌肥料，用于改良土壤和提高作物产量。

这种肥料可以减少人工施肥的使用，从而减少土地污染和环境压力。

此外，植物固氮菌还被广泛应用于生态保育、饲料添加剂等领域。

三、植物固氮菌的未来展望未来，植物固氮菌的研究方向将主要包括以下几个方面：1、新菌种的发现和筛选。

为了更好地适应各种环境和作物，需要不断地发现和筛选具有特殊性能的新菌株。

2、生物技术手段的应用。

近年来，生物技术手段的日益完善，为植物固氮菌的研究提供了新的思路和方法。

解磷、固氮、产吲哚乙酸微生物菌株的筛选及其对植物的促生效果王奎萍;郑颖;褚光耀;牛冬冬【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2013(029)006【摘要】通过对1 539株分离自水稻田、庐山、辣椒田和番茄田4种土壤环境的细菌菌株进行解磷、固氮、产吲哚乙酸菌株活性的平板分析,筛选得到具有代表性活性菌株276株.对这些菌株进行了2次温室促生试验,选择具有代表性的134株菌株,分析了这些解磷、固氮、产吲哚乙酸菌株各个因素与促生的相关性,及菌株来源地与促生结果间的相关性,并对18株温室试验效果比较好的菌株进行了定殖力测定和大田试验.研究发现,解磷、固氮、产吲哚乙酸活性与植物促生效果间存在明显的正相关,解磷、固氮活性对植物的影响要大于产吲哚乙酸(IAA)活性对植物的影响;不同来源地点所筛选得到的菌株对不同植物的促生效果不同,来源于番茄田的菌株对植物的促生效果要优于其他3种土壤来源的菌株.优势菌株12LY101、12LY027、R112.11具有较高的定殖能力和对作物的促生效果.【总页数】8页(P1352-1359)【作者】王奎萍;郑颖;褚光耀;牛冬冬【作者单位】南京农业大学植物保护学院,江苏南京210095;扬州市职业大学园林园艺学院,江苏扬州225009;南京农业大学植物保护学院,江苏南京210095;南京农业大学植物保护学院,江苏南京210095;南京农业大学植物保护学院,江苏南京210095【正文语种】中文【中图分类】S144【相关文献】1.红壤中产吲哚乙酸并具解磷作用的促生菌筛选鉴定及促生效果研究 [J], 郑文波;申飞;闫小梅;张舒玄;孙波;胡锋;李辉信2.一株固氮解磷菌的筛选鉴定及其对花生的促生作用研究 [J], 姜瑛;吴越;王国文;徐文思;张振;徐莉;胡锋;李辉信3.稻田土壤固氮菌株的分离筛选及促生潜力 [J], 靳海洋;王慧;张燕辉;胡天龙;林志斌;刘本娟;蔺兴武;谢祖彬4.植物根际促生菌(PGPR)解磷菌的筛选及其对番茄促生作用的研究 [J], 贺字典;高玉峰;王燕;李翠霞;高歆瑶;张志浩5.三株产吲哚乙酸根际促生芽孢杆菌的筛选鉴定及其促生作用 [J], 李福艳;刘晓玉;颜静婷;蔡燕飞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

生物固氮菌的分离筛选与应用研究生物固氮是一种供应植物氮素源的重要途径，常见于土壤和根际中的一些细菌和蓝藻。

其中，生物固氮菌是固氮最为有效的一类生物。

它们能够将气态氮转化为植物能够利用的形式，提供植物的营养需求，从而促进植物的生长和发育。

因此，生物固氮菌的分离筛选和应用研究在农业生产中具有广阔的发展前景。

生物固氮菌的分离筛选是其应用研究的基础。

通常，采用土壤酸溶法、膜滤法、全白化法等方法进行分离筛选。

其中，土壤酸溶法是一种常用的分离方法。

将土壤样品放入酸性溶液中，使固氮菌在条件下释放出胞内固氮酶，从而使其在测定器中升高，然后通过对菌液进行稀释，最后计算出菌落总数和固氮菌含量。

膜滤法则是一种比较快速和方便的分离方法，对于筛选出的固氮菌进行进一步的鉴定和筛选。

全白化法则是一种比较精确的分离方法，它能够筛选出胞内固氮酶高效的菌株，但也相应需要更长的时间和更复杂的条件。

生物固氮菌分离筛选出的菌株需要进行一系列的确认鉴定。

在生物固氮菌应用的过程中，常用的鉴定方法是通过细菌形态、生理生化特性和基因测序等多种方式进行鉴定。

其中基因测序是最为准确和可靠的一种方法，它能够从分子水平上确定分离菌株的亲缘关系和物种分类。

此外，对固氮菌对于环境因素的适应性和生物活性也要进行评估。

生物固氮菌在农业生产中有着广泛的应用前景。

固氮菌可以有效地提高农作物的产量和品质，降低农业生产过程中对化肥的用量，达到环保和节能的目标。

同时，生物固氮菌还可以提高土壤的养分含量，改善其物理性质和化学特性，从而提高土壤综合质量，实现土壤修复和保护的目标。

因此，生物固氮菌已经成为现代农业生产中的重要组成部分。

生物固氮菌的应用也面临着一些挑战和难题。

受到环境影响和栽培管理等多种因素的影响，生物固氮菌的固氮效率和生物活性可能会有所下降。

此外，不同固氮菌株之间的固氮能力和菌液中其他微生物的干扰也需要进一步研究。

针对这些问题，需要在生物固氮菌的筛选和应用中进行更多的基础研究。

土壤中解磷细菌的分离与纯化摘要：磷细菌是存在于自然界，主要是土壤中的一类溶解(dissolve)磷酸化合物(phosphate compound)能力较强的细菌的总称。

通过磷细菌的作用，可使土壤中不能被植物利用的磷化物转变成可被利用的可溶性磷化物。

故又称溶磷细菌。

主要有两类，一类称为有机磷细菌，主要作用是分解有机磷化物如核酸、磷脂等；另一类称为无机磷细菌，主要作用是分解无机磷化物，如磷酸钙、磷灰石等。

磷细菌主要是通过产生各种酶类或酸类而发挥作用的。

可用它制成细菌肥料，实践证明，对小麦、甘薯、大豆、水稻等多种农作物，以及苹果、桃等果树具有一定增产效果。

农业上常用的菌有解磷巨大芽孢杆菌（Bacillusmegatherium var．phosphaticum），俗称为“大芽孢”磷细菌，此外，还有其他芽孢杆菌和无色杆菌（Achromobacter）、假单胞菌（Pseudomonas）等。

我们此次试验目的是从土壤中分离出无机解磷细菌，观察解磷细菌的细胞形态，并进行生理生化鉴定，进一步熟悉掌握微生物实验的基本技能。

关键词：土壤解磷细菌无机磷细菌含磷培养基分离提纯生理生化反应实验目的1）掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术。

2）学习并掌握分离纯化无机解磷细菌的基本方法。

3）巩固和贯通所学的无菌技术、纯培养技术、保藏技术、显微技术、……等微生物操作技术。

4）学习通过微生物的形态特征、生理生化反应来鉴别解磷细菌与其他微生物的异同。

试验原理1）菌种来源：由于各种微生物对营养物质需求不同，在不同地方采样对选取所要的微生物含量和其它杂菌含量的多少直接有关。

所以要选择无机磷含量较高的土壤中采样。

2）培养基的选取：为了使所要的无机解磷细菌能生长，其它微生物生长受到一定的抑制，要用选择培养基。

还要把解磷菌与其他微生物相区别，还要用鉴别培养基。

为了达到即是选择培养基又是鉴别培养基，选取以磷酸钙为唯一磷源的培养基。

解磷解钾微生物筛选解磷解钾微生物的筛选与初步鉴定微生物是土壤肥力的核心，土壤中的微生物不仅数量巨大，而且种类极多。

许多微生物对土壤氮、磷和钾等养分的转化和供给起非常重要的作用。

氮、磷和钾均是作物生长发育必需的大量元素。

根瘤菌可以与豆科植物共生固氮, 在生物固氮中占有重要的地位。

溶磷菌、硅酸盐细菌(又名钾细菌)能够分解土壤中的固定态磷、固定态钾转化为作物可以直接吸收利用的有效磷、有效钾。

因此，高效的解磷、解钾菌株对于提高土壤肥力具有非常重要的作用。

一、实验目的1、从各类土样中筛选高效的解磷解钾菌株2、熟悉菌株筛选、分离纯化、鉴定等具体操作流程二、实验原理分别配制以磷酸钙、钾长石为唯一磷源或钾源的筛选培养基，在该培养基上，只有能分解利用磷酸钙、钾长石的菌株才能够生长。

因为磷酸钙、钾长石不能溶解于培养基，故在固体培养基平板上表现为浑浊，若菌株能够利用磷酸钙、钾长石，则在培养基中形成以菌落为中心的透明圈，因此可以通过是否产生透明圈来筛选目的菌株。

分别筛选细菌和真菌。

为筛选到真菌，采用在培养基中加入链霉素方法来抑制细菌生长。

三、材料和方法1、材料各处取得的土样；培养基种类如下（g/l）：（1）牛肉膏蛋白胨培养基：（2）解磷菌株筛选培养基：无机磷固体培养基：葡萄糖l0 g，(NH4)2SO4g，酵母粉g，MgSO4·7H2O g，氯化钠，氯化钾g，FeSO4·7H2O g，MnSO4·7H2O g，Ca3(PO4)2 2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH ，ll5℃灭菌20 min。

（3）钾长石固体培养基：蔗糖 5 g，葡萄糖 5 g，(NH4)2SO4g，酵母粉g，MgSO4·7H2O g，磷酸氢二钠 2 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·7H2O 0.03 g，钾长石2 g，琼脂粉18 g，蒸馏水1000 mL，pH ，ll5℃灭菌20 min。

一、培养基1、无机磷发酵培养基:葡萄糖10 g,(NH4)2SO4 0.5g , MgSO4·H2O 0.3g , NaCI 0.3 g , KCl 0.3 g , FeSO4·7 H2O 0.03 g , MnSO4 H2O 0.03 g，磷矿粉5g，调节pH到7.0--7.2,蒸馏水1 000 mL.磷矿粉与其他药品分开灭菌后混合.2、无机磷固体培养基:无机磷发酵培养基中加人琼脂粉18--20 g，用于斜面保藏及平板培养.3、种子液培养基:无机磷发酵培养基中磷矿粉用0.5 g K2HPO4替代.二、耐低温解磷菌筛选方法1、初筛在0和10℃时各取样品5g，放入250 mL锥形瓶中，加95 mL 无菌水和玻璃珠，150r/min，室温振荡30 min，制备成母液。

采用梯度稀释法，将母液稀释至10-7-10-1倍，并分别用无菌移液枪取0.2 mL 接种于无机磷培养基平板中，涂布均匀，待接种液被培养基吸收后，倒置培养于对应温度的恒温恒湿培养箱中，进行低温培养，周期为5 d.以相同浓度接种液培养的菌落数、菌落直径及其周围出现溶磷圈大小作为判断解磷强弱的指标.筛选得到的耐低温解磷菌，经纯化后斜面保藏.全部操作均在无菌条件下进行.2、低温耐性锻炼将得到的菌株接种于无机磷培养基平板中，在初筛温度下培养24h后，降低1℃进行耐低温驯化，7d为1个驯化周期，每个周期结束后，培养温度再降低1℃.如降低培养温度后解磷菌仍能生长，则进行若干周期的适应性低温驯化，周期数视菌种驯化情况而定，然后进行下一阶段耐低温驯化;如果降低培养温度后菌株不能正常生长，则在原培养温度和降低温度间进行反复驯化，直到筛选出耐低温突变株.3、低温条件下解磷菌解磷能力测定分别将斜面保藏的各目的菌株活化，接种于种子培养基，0--10℃（筛选温度）培养摇床培养，120 r/min振荡48 h.菌株浓度达到108 CFU/ml后备用.设接种和不接种培养基2种处理，每种处理5个平行.接种处理中将各种子液按照5%的接种量接种于发酵培养基，培养条件同上，周期7 d.然后进行ρ（可水溶性磷)，ρ（可微生物量磷)和pH 测定。

解磷细菌的分离筛选及培养条件优化作者：郑喜清邸娜张志超纪晓贝来源：《天津农业科学》2020年第03期摘; ; 要：通过透明圈法与钼锑抗比色法，从巴彦淖尔市临河区旧气象局试验田植物根际土中分离筛选出3株解磷效果好的菌株，通过单因素试验对菌株培养条件进行了优化。

结果表明：不同碳源、氮源、温度、pH值、盐浓度等对其解磷效果存在显著差异。

PB1以木糖做碳源、硝酸铵为氮源、NaCl浓度为0.3 g·L-1、pH值为6、温度30～34 ℃、加液量为100 mL时解磷效果最显著;PB2以果糖做碳源、硝酸铵为氮源、盐浓度为0.7 g·L-1、pH值为6、温度30～34 ℃、加液量为50 mL时最显著。

PB3以葡萄糖或果糖做碳源、硝酸钠为氮源、盐浓度为0.5 g·L-1、pH值为6、温度32 ℃、加液量为100 mL时解磷效果最显著。

根据形态特征及生理生化特性，结合《常见细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏细菌鉴定手册》将3种菌株初步鉴定为：PB1为沙门氏菌、PB2为金杆菌属、PB3为芽孢杆菌属。

关键词：解磷菌;条件优化;解磷能力中图分类号：S144.9; ; ; ; ;文献标识码：A; ; ; ; ; ; DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.01.004Isolation and Screening of Phosphate-solubilizing Strains and Optimization of Culture ConditionsZHENG Xiqing， DI Na，ZHANG Zhichao， JI Xiaobei（Agriculture Department， Hetao College， Bayannaoer， Inner Mongolia 015000， China）Abstract： Through transparent circle method and molybdenum antimony colorimetric method，3 strains with good phosphorus-solubilizing effect were isolated and screened from the rhizosphere soil of; plants， in the experimental field of Linhe District of Bayannaoer City. The culture condition of strain was optimized by single factor test.The results showed that different carbon sources，nitrogen sources， temperature， pH and salt concentration had significant differences in their phosphorus removal effects. When PB1 used xylose as carbon source， ammonium nitrate as nitrogen source， NaCl concentration was 0.3 g·L-1， pH was 6， temperature was 30～34℃， and liquid dosage was 100 mL， the phosphorus removal effect was the most significant. PB2 was most significant when fructose was used as carbon source， ammonium nitrate was used as nitrogen source， salt concentration was 0.7 g·L-1， pH was 6， temperature was 30～34 ℃， and liquid dosage was 50 mL. When PB3 used glucose or fructose as carbon source， sodium nitrate as nitrogen source， salt concentration was 0.5 g·L-1， pH is 6， temperature was 32 ℃， and liquid dosage was 100 mL， the phosphorus removal effect was the most significant. According to the morphological characteristics and physiological and biochemical characteristics， combined with the Manual for Identification of Common Bacterial Systems and Berger's Manual for Identification of Bacteria， the three strains were preliminarily identified as： PB1 was Salmonella， PB2 was Bacillus genus， and PB3 was Bacillus.Key words： Phosphate solubilizing Bacteria;medium optimization; phosphate dissol- ving ability磷是植物生長所必需的矿质元素，在植物生长、发育等生命活动中起着积极的作用。