斑点金免疫渗滤实验

抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。

抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。

亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。

亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。

抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。

带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。

在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。

抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。

免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。

免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。

半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。

当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。

载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。

载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。

单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。

多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。

胶体金与免疫渗滤斑点法临床应用胶体金与免疫渗滤斑点法是一种常用的临床检测方法，广泛应用于医学诊断、生物学研究以及生物分析等领域。

本文将介绍胶体金与免疫渗滤斑点法的原理、临床应用以及优势。

胶体金是一种纳米材料，具有良好的生物相容性和光学性质。

胶体金颗粒表面可以修饰不同的功能性分子，如抗体、DNA等。

免疫渗滤斑点法是一种通过胶体金与抗原或抗体的特异性结合来检测目标物质的方法。

通过在试验纸上形成胶体金-抗原或胶体金-抗体复合物，可以通过肉眼观察形成明显的颜色变化，从而判断目标物质的存在与否。

胶体金与免疫渗滤斑点法在临床应用中具有以下几方面的优势。

首先，该方法操作简单，不需要复杂的实验设备和技术。

只需将待测样品涂抹在试验纸上，加入胶体金-抗体复合物，待反应完成后观察颜色变化即可。

这种简单的操作流程使得该方法适用于各种临床实验室和基层医疗机构。

胶体金与免疫渗滤斑点法具有高灵敏度和特异性。

胶体金颗粒的表面修饰能力使得其可以与目标物质高效结合，从而提高检测的灵敏度。

同时，该方法还能通过选择合适的抗体或抗原对特定的目标物质进行检测，确保结果的特异性。

第三，胶体金与免疫渗滤斑点法具有快速的检测速度。

由于胶体金与抗原或抗体之间的结合是即时反应，因此整个检测过程可以在几分钟内完成。

这对于急诊诊断、迅速筛查和快速检测等场景非常有价值。

第四，胶体金与免疫渗滤斑点法还具有成本低、易于批量生产等优势。

胶体金颗粒的制备相对简单，成本较低。

同时，胶体金与免疫渗滤斑点法可以批量生产，满足大规模临床检测的需求。

胶体金与免疫渗滤斑点法在临床应用中有着广泛的应用。

例如，在感染性疾病的诊断中，可以利用该方法检测病原微生物或其相关抗体的存在。

此外，胶体金与免疫渗滤斑点法还可用于肿瘤标志物的检测、药物残留的监测以及食品安全等领域。

胶体金与免疫渗滤斑点法作为一种简单、灵敏、特异性高且具有快速检测速度的方法，在临床应用中具有广泛的应用前景。

随着纳米技术和生物技术的不断发展，相信胶体金与免疫渗滤斑点法将在临床诊断和生物分析领域发挥更大的作用。

斑点金免疫层析试验实验报告
实验目的:
1.了解斑点金技术的原理、方法和应用;
2.掌握斑点金免疫层析试验的实验步骤;
3.运用斑点金免疫层析试验技术检测目标物在样品中的存在。

实验步骤:
1.制备斑点金试剂盒：打开斑点金试剂盒，按照说明书中的步骤依次添加开封后的试剂，将其混合均匀。

2.制备样品：将需要检测的样品提取出来，如血清、尿等，在无菌条件下进行处理，得到干燥的样品。

3.样品制备：将制备好的样品与预处理好的探针混合均匀
4.加样：将处理好的样品滴加到斑点金试剂盒的样品口上。

5.等待反应：加完样品后，静置一段时间，待反应进行到一定程度后，可以开始观察。

6.结果判断：在结果显示窗口中，观察金颜色深浅和是否出现斑点，以判断目标物是否存在于样品中。

实验结果:
本次实验成功地检测出了目标物在样品中的存在。

在斑点金试剂盒的观察窗口中，出现了明显的金色反应，同时还出现了斑点，说明我们所测定的目标物在样品中的含量较高。

实验结论:
斑点金免疫层析试验是一种快速且准确的检测方法，可用于检测多种物质在生物样品中的存在。

该方法在医学、生化检测、环境污染等领域有广泛应用，具有很大的潜力和前景。

金免疫技术（斑点免疫层析试验）一、原理金免疫技术是免疫标记技术之一，金盐被还原成原子金后形成金颗粒悬浮（胶体金），这种金颗粒呈红色，并能与蛋白质等大分子物质结合，因此，可用胶体金作为标记物来检测标本中的抗原或抗体。

典型的测定方法有斑点买免疫渗滤试验和斑点免疫层析试验等。

二、材料1 、HCG金标试纸条2、妊娠尿液正常尿液三、方法（一）胶体金的制备根据不同的还原剂可以制备大小不同的胶体金颗粒。

常用来制备胶体金颗粒的方法如下。

1．枸橼酸三钠还原法（1）10nm胶体金粒的制备：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸橼酸三钠水溶液3ml，加热煮沸30min，冷却至4℃，溶液呈红色。

（2）15nm胶体金颗粒的制备：取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％枸橼酸三钠水溶液2ml，加热煮沸15min～30min，直至颜色变红。

冷却后加入0.1Mol/L K2CO30.5ml，混匀即可。

（3）15nm、18nm～20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备：取0.01％HA uCl4水溶液100ml，加热煮沸。

根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液4ml、2.5ml、1ml或0.75ml，继续煮沸约5min，出现橙红色。

这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、18～20nm、30nm和50nm。

（二）胶体金标记蛋白的制备胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。

如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。

除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。

1．待标记蛋白溶液的制备将待标记蛋白预先对0.005Mol/L pH7.0 Na Cl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100 000g4℃离心1 h，去除聚合物。

2．待标胶体金溶液的准备以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl调胶体金液的pH值。

胶体金免疫分析技术详解随着免疫分析日益广泛应用于以临床为主以及非临床领域的诊断工业，免疫分析正在向两个方向发展：一类为全自动化的免疫分析；另一类为以硝酸纤维膜为载体的快速免疫分析。

前者需要价格昂贵的全自动仪器及与仪器严格配套的各种试剂盒，目前只能在医疗及检测中心应用，虽也能较快速给出结果，但仍需一定时间，不适合远离医疗及检测中心的地区，更不能用于“患者床旁检验”和普查的需要，在酶免疫分析的基础上，主要以硝酸纤维素膜为载体的快速诊断方法迅速和广泛地发展起来。

这类方法目前在文献及市场上的命名还很不统一。

它实际上属于快速斑点免疫结合分析，主要有以下两种方法：斑点免疫渗滤分析DIFA和斑点免疫层析分析DICA。

本篇主要介绍以金作为标志物的胶体金免疫分析技术。

金标记免疫分析技术也称免疫胶体金技术，是于1971年建立的一种信号显示技术。

此技术最初用于免疫电镜检查，由胶体金颗粒标记抗原或抗体，与组织或细胞中相应的抗体或抗原相结合，在电子显微镜的检查时可起特异的示踪作用。

此后，此技术与银染技术相结合建立的免疫金银染色法，使抗原抗体特异反应信号可在光学显微镜下观察。

近10多年来，利用硝酸纤维素膜（NC）等为固相载体，以胶体金标记的抗原或抗体与特异配体的反应在膜上进行，建立了快速的金标记免疫渗滤技术和金标记免疫层析技术，并在传染病、心血管病、风湿病、自身免疫病的免疫学检测中广泛应用。

胶体金是指金微小粒子（0-100nm）分散在另一种物质中所形成的体系，通常指金以微小粒子分散在溶液中所形成的金溶胶，用此金溶胶标记蛋白质（抗原、抗体或SPA、SPG），胶体金颗粒具有高电子密度的特性，故在金标蛋白的抗原抗体结合处，显微镜下可见黑褐色颗粒；当这些标记物在相应的标记处大量聚集时，可在载体膜上呈现红色或粉红色斑点，从而用于抗原或抗体物质的半定量或定性。

与ELISA不同之处便是反应时间大大缩短，仅需要数分钟就完成了ELISA需数小时才能显示的结果。

一种可同时检测抗双链和单链DNA抗体的快速斑点免疫金渗滤试验兰小鹏;涂向东;黄俏佳;冯修高;唐玉钗;朱忠勇;周明宣;陈学香【期刊名称】《中国免疫学杂志》【年(卷),期】1999(000)005【摘要】目的:建立一种可同时检测抗双链DNA(ds-DNA)和单链DNA(ss-DNA)抗体的快速斑点免疫金渗滤试验(DIGFA).方法:将ds-DNA和ss-DNA抗原结合在同一检测盒内,采用胶体金标记和快速膜斑点渗滤技术,同时检测抗ds-DNA和ss-DNA抗体.结果:DIGFA既可同步又可区别检测两种DNA抗体,且检测ds-DNA抗体的敏感性优于酶联免疫吸附法(ELISA).结论:DIGFA简便、快速、可靠,是一种实用的DNA抗体检测方法.【总页数】1页(P214)【作者】兰小鹏;涂向东;黄俏佳;冯修高;唐玉钗;朱忠勇;周明宣;陈学香【作者单位】南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;南京军区福州总医院全军医学检验中心,福州350001;福州总医院内科,福州350001;福州总医院内科,福州350001【正文语种】中文【中图分类】R446.62【相关文献】1.利用酵母重组SSB抗原建立快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSB抗体 [J], 徐秀云;杨湘越;兰小鹏2.用快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSA抗体 [J], 吴文冰;兰小鹏;杨湘越;唐玉钗3.斑点金免疫渗滤试验同步检测抗斯氏狸殖吸虫IgM和IgG抗体的研究 [J], 陈文碧;王光西;张锡林;佘俊萍;杨兴友;湛蜀燕;刘建军4.斑点金免疫渗滤试验检测血清中抗-HAV抗体 [J], 刘瑛;高红丽;徐德忠;吴玮;闫永平;张景霞5.斑点金免疫渗滤试验快速检测抗甲型肝炎病毒IgM抗体 [J], 肖乐义;阎小君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

快速斑点免疫金渗滤法检测抗双链DNA抗体的临床应用呼金田;栗军
【期刊名称】《现代检验医学杂志》
【年(卷),期】2000(015)003
【摘要】@@ 抗双链DNA(ds-DNA)抗体是系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的一种标记性抗体,该抗体的存在易引起SLE肾炎和典型的蝶形红斑,且抗体的滴度与SLE的活动程度有关. 因此检测抗ds-DNA抗体对于SLE的诊断和病情监测具有重要意义.原有的检测方法大多需专门仪器、操作繁琐、费时,有的还出现假阳性.快速斑点免疫金渗滤法(Dot-lmmunogold f iltration,DIGFA)检测抗ds-DNA抗体简单快速、准确可靠,我们用该法检测了正常人和各类自身免疫性疾病患者共290例,现将结果报告如下:
【总页数】1页(P32)
【作者】呼金田;栗军
【作者单位】河北邯郸医专附属医院检验科,056002;河北邯郸医专附属医院检验科,056002
【正文语种】中文
【中图分类】R3
【相关文献】
1.斑点金免疫渗滤法快速检测禽肉中金霉素残留 [J], 武玉香;刘志国;韩增飞;张露;孙田
2.斑点金免疫渗滤法检测谷氨酸脱羧酶抗体及临床应用 [J], 邓德耀;韦丽华;赵金美;赵东岩;张瑛
3.利用酵母重组SSB抗原建立快速斑点免疫金渗滤法检测抗SSB抗体 [J], 徐秀云;杨湘越;兰小鹏
4.检测甲状腺微粒体抗体的斑点免疫金渗滤法的建立及临床应用 [J], 冯修高;陈凤平
5.末梢血检测抗HAV-IgM的斑点金免疫渗滤法的临床应用 [J], 米明仁;鲁美茹;马黎明;肖乐义;阎小君
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斑点xx免疫渗滤试验斑点免疫渗滤试验的基本原理是：以硝酸纤维素膜为载体，利用微孔滤膜的可滤过性，使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。

斑点免疫渗滤试验最初是从斑点ELISA基础上发展起来建立的，应用的结合物是酶标记的，称为斑点酶免疫渗滤试验。

90年代初发展了以胶体金为标记物的斑点免疫渗滤试验（dotymmunogoldfiltrationassay，DIGFA），又名滴金免疫测定法（简称滴金法）。

在滴金法中不需酶对底物的反应，更加简便、快速，在临床检验中应用日渐广泛。

（一）原理以双抗体夹心法为例。

在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。

当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。

其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。

因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示红色斑点。

（二）试剂和操作1.渗滤装置是滴金法测定中的主要试剂成分之一，由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成。

塑料小盒可以是多种形状的，盒盖的中央有一直径约0.4～0.8cm-1-的小圆孔，盒内垫放吸水垫料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒盖的中央有一直径约0.40.8cm的小圆孔，盒的垫放吸水塑料，硝酸纤维素膜片安放在正对盒的圆孔下，紧密关闭盒盖，使硝酸纤维素膜片贴紧吸水垫料。

如此即制备成一渗滤装置。

塑料小盒的形状最多见的是扁平的长方形小板，加之滴金法的整个反应过程都是在渗滤装置上进行的，因此又常称渗滤装置为滴金法反应板。

2.试剂盒组成滴金法试剂盒的三个基本试剂成分是滴金法反应板、免疫金复合和洗涤液。

为了提供质控保证，用于抗原测定的试剂盒还应包括抗原参照品，相应的检测抗体的试剂盒应有阳性对照品。

3.测定操作以双抗体夹心法为例，具体步骤如下：（1）将反应板平放于实验台上，于小孔内滴加血清标本1～2滴，待完全渗入。

（2）于小孔内滴加免疫金复合物试剂1～2滴，待完全渗入。

斑点免疫金渗滤法定量测定血清淀粉样蛋白A方法的建立及性能评估血清淀粉样蛋白Ａ（ｓｅｒｕｍａｍｙｌｏｉｄＡ，ＳＡＡ）是一类多基因编码的多态性蛋白家族，为组织淀粉样蛋白Ａ的前体物质，属急性时相反应蛋白。

已有研究表明，在细菌、真菌、病毒感染，动脉粥样硬化，心血管疾病，急性移植排斥反应，肿瘤等疾病中均可检测到血清ＳＡＡ升高，对临床诊断有较好的参考价值。

尽管如此，目前国内尚只有一种乳胶增强速率散射比浊法（ｌａｔｅｘｅｎｈａｎｃｅｄｒａｔｅｎｅｐｈｅｌｏｍｅｔｒｙ，ＬＥＲＮ）试剂经国家食品药品监督管理局（ＳｔａｔｅＦｏｏｄａｎｄＤｒｕｇＡｄｉｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ＳＦＤＡ）批准用于临床标本ＳＡＡ的检测，但由于其检测成本相对较高、需配套仪器等原因，ＳＡＡ检测尚未在临床中广泛应用。

斑点免疫金渗滤法（ｄｏｔｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄｆｉｌｔｒａｔｉｏｎａｓｓａｙ，ＤＩＧＦＡ）因其简便、快速、安全等特点在急诊医学、输血医学、现场诊断及个体自我体检等方面应用非常广泛，已经成为临床医学检验快速诊断（ｐｏｉｎｔｏｆｃａｒｅｔｅｓｔ，ＰＯＣＴ）领域中的主要检测技术。

我们建立了基于ＤＩＧＦＡ的免疫金渗滤试剂板条（ＳＡＡＤＯＴ）定量测定血清ＳＡＡ并评估其分析性能。

材料和方法一、材料１．试验材料３株抗人ＳＡＡ单克隆抗体抗ＳＡＡ１、抗ＳＡＡ２和抗ＳＡＡ３购自ＨｙＴｅｓｔ公司（芬兰）。

硝酸纤维素膜购自ＷｈａｔｍａｎＬｔｄ公司（英国）。

人血清ＳＡＡ标准品购自英国国家生物制品检定所（ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｔａｎｄａｒｄｓａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ，ＮＩＢＳＣ，ＮＩＢＳＣｃｏｄｅ：９２／６８０）［１３］，使用时稀释至相应浓度。

２．试剂和仪器ＮＬａｔｅｘＳＡＡ试剂盒为德国西门子公司产品，配套的测定仪器为ＢＮＰｒｏｓｐｅｃ特定蛋白分析仪；Ｑｐａｄ金标数码定量阅读仪（上海奥普生物医药有限公司）；ＡｖａｎｔｉＪＥ离心机（美国ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ公司）３．研究对象血清取自２０１２年４至５月瑞金医院体检中心２４０名表观健康者，其中男１２０名（年龄２１～５６岁），女１２０名（年龄２４～５８岁）。