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黑曲霉液态发酵制备没食子酸的工艺研究

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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ１ ． １ ． １ 菌株
实验室保藏。 １ ． １ ． ２ 培养基
黑 曲霉 Ｂ ０ ２ ０ １ （ Ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ ｎ ｉ ｇ ｅ ｒ ） ， 由笔 者所在
斜面培养基 ： 察 氏培养基 ； 液态基础培养基 ：
蔗糖 ２ ． ０ ｇ ， Ｎ ａ Ｎ Ｏ ３ ０ ． ２ ｇ ， Ｋ ２ Ｈ Ｐ Ｏ ４・ ３ Ｈ ２ Ｏ ０ ． １ ｇ ， Ｋ Ｃ １ ０ ． ０ ５ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ ２ ０ ０ ． ０ ５ ｇ ， Ｆ ｅ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ ２ ０ ０ ． ０ ０ １ ｇ ， 溶于 １ ０ ０ ｍＬ蒸
作者简介 ： 熊 进（ １ ９ ８ ９ 一） ， 男， 硕士研究生 ， 研究方向为制药与发酵
工 艺 。 Ｅ—ｍ ａ ｉ ｌ ： ５ ９ １ ５ ３ ８ ０ ５ ９ ＠ｑ ｑ ． Ｃ ｏ ｎ。 ｒ
馏水 中， ｐ Ｈ值 自然。 １ ． １ ． ３ 主要 试剂 五倍子 ， 购于贵州省遵义市余 庆县 ； 单 宁
酸。此过程不需要将 酶从菌体 中分 离 ， 将 酶的生成 与五倍子 单宁酸转化没食子酸的过程相耦合 ， 简化 了没食子 酸的生物
色针状结 晶… ， 化 学性 质活 泼 ， 能形 成 多种 酯 类、 酰 卤和 酰
胺， 可 以通过氧化耦合反应制得鞣花酸、 脱氢二鞣花 酸等联苯
型化合物 ， 是一种 重要 的精 细化学 品 ， 广泛 应用于矿产 、 化 工、 农业、 食品 、 制药 等行业 。 目前 ， 没 食子 酸 的制备 方法 可分 为化学法与生物法 ， 工业 上没食子 酸主要是 由化 学法经
摘要 ： 采用 高效液 相色谱测定黑 曲霉 Ｂ ０ ２ ０ １ 制备 的没食 子酸 ， 对底物添加方式、 底物浓度 、 转化方式及 转化 条件 等 因素进行研究 。最终确定较佳工艺条件为 ： 用五倍子直接作 为产 酶的诱导 物及 转化底物 ， 底物分 ４次添加 ， 每次 间隔 １ ２ ｈ ， 最终总浓 度达 ６ ％， 转 化过程中搅拌 速度优化 为 ２ ０ ０ ｒ ／ ａｉ ｒ ｎ ， 温度为 ３ ５℃ ， 没食子酸 浓度 可达到 ３ ９ ． ７ ８ ｍ ｓ ／ ｍ Ｌ ， 转 化率达最大值 ７ ３ ． ０ ５ ％ 。在对菌丝重复转化试验过程 中补加营养物质及调节 ｐ Ｈ值均能提高转化产物浓度。
中， 利用菌体内的单 宁酶将之转化 为没食子 酸。当转化趋 于
平衡后 ， 分离 菌丝体并 洗涤 ， 可反 复转化五 倍子制备 没食子
收稿 日期 ： ２ ０ １ ５—０ ３— ０ ２ 基金项 目： 国家“ ８ ６ ３ ” 计 划（ 编号 ： ２ ０ １ ４ Ａ Ａ ０ ２ １ ８ ０ ２ ） 。
酸或碱水解五倍子制得 ， 其工艺存在 对环境污染严重、 副反应
转化过程 。与酶法转化相 比， 此方法转化 底物浓度 有很大倍
数的提高 ， 产物浓度也有很大提高。同时 ， 分 光光 度法与高效 液相色谱法相 比， 测定没食 子酸是前者 由于单宁酸 和没食子
酸结构相近 ， 最大吸收峰波长也较近产 生累加效应 ， 因此产生
琦， 潘迎捷 ， 汪昭月 ， 等． 原生质体单核化技术在香菇 育种 中
通信作者 ： 吴鑫颖 ， 硕士， 副 教授 ， 研 究方 向为酶 工程 及 发酵 工艺 ，
的干扰 比较大 ， 实 际测 量值 会偏 大。本试 验通过对 底物添加 方式、 底物浓度 、 转化方式及转化 条件等因素进行研究 ， 以提
多、 杂质含量较 高等 问题 。而生物法 因具 有反应条件 相对温
和、 对设备要求低 、 副产物较少 、 对环境友好 以及 后续提纯工 艺较 为简单等诸多优点 ， 近年来受到 国内外相关学者 的广泛 关 注 。 。五倍子富含 单宁酸 ， 研究表 明单 宁酸诱导 黑曲霉
液态 发酵产胞 内单宁酶 ， 单宁酶可 高效 、 专一 、 定向裂解单宁 酸分子 ， 生成没 食子 酸 ； 故 直接 将 五倍子 投入 发酵 系统
高没食 子酸相对于五倍子 中单 宁酸的转化率 ， 为生 物法制备
没食子 酸的工业化应用奠定基础 。
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 试 验 材 料 与仪 器
黑 曲霉液态发酵制备没食子酸 的工 艺研究
熊 进 ，何顺 荣 ，吴鑫 颖 ， 邱 树毅 ． 一 ，简 辉 ． 一 ，马 威
（ １ ． 贵州大学酿酒与食 品工程学 院， 贵州贵阳 ５ ５ ０ ０ ２ ５ ； ２ ． 贵州省发酵工程 与生物制药重点实验室 ， 贵州贵阳 ５ ５ ０ ０ ２ ５ ）
关键词 ： 黑曲霉 ； 液态发酵 ； 五倍子 ； 生物转化 ； 没食子酸 ； Ｓ Ｅ 艺优化
中图分类号 ： Ｔ Ｑ ９ ２ ０ ． １ 文献标志码 ： Ａ 文章编 号 ： １ ０ ０ ２—１ ３ ０ ２ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ５— ０ ２ ５ ０— ０ ４
没食子酸 （ ｇ ａ ｌ ｌ ｉ ｃ ａ ｃ ｉ ｄ ， Ｇ Ａ） 又名五倍子酸 ， 为 白色 或淡黄
－．—
—
２ ５ ０－ － — —
江苏农业科学
２ ０ １ ５年第 ４ ３卷第 ５期
熊 进， 何顺荣 ， 吴鑫颖， 等．黑 曲零液态发酵制备没食子酸 的工艺研 ［ Ｊ ］ ．江苏农业科 学， ２ ０ １ ５ ， ４ ３ （ ５ ） ： ２ ５ ０ — ２ ５ ３
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ ５ ８ ８ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２—１ ３ ０ ２ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ５ ． ０ ８ ３
酸ｃ ， Ｈ ： ０ ， 分 析纯 ， 购于 天津福 晨化 学试 剂 厂 ； 没食 子 酸 Ｃ ， Ｈ ０ ・ Ｈ ０， 分析纯 ， 购于贵州迪 大生物有 限公 司 ， 其他 化 学试剂均为国产分析 纯。
［ ６ ］ 姜 心， 陈 伟， 周 波 ， 等．纤 维素 酶活测 定影 响 因素的研 究

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利用黑曲霉单宁酶酶法制取没食子酸的研究

利用黑曲霉单宁酶酶法制取没食子酸的研究

天然产物研究与开发NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEVELOPM ENT Vo1.14 No.2收稿日期:2001 11 07 修回日期:2002 01 09利用黑曲霉单宁酶酶法制取没食子酸的研究杨亚力2杨维力1刘成君2杨顺楷1*(1 中国科学院成都生物研究所 成都 610041;2 四川大学生命科学学院 成都 610064)摘 要 利用已有的10株高单宁酶活性的菌株为起始菌,经活化分离选择,借助 级发酵培养程序、生物转化、结合T L C 分析进行筛选实验。

最后选出具有高单宁酶活性的1号和50号菌株,开展了没食子酸(GA)克量级生物转化法制备实验,结果表明,本酶法工艺是可行的,在发酵液中GA 的浓度分别达到20.6mg/ml 和21 3mg/ml,产品产率(以从五倍子提取的单宁酸计)达到41 2%和42 6%,具有潜在的工业开发价值。

关键词 黑曲霉(A spergillus niger );酶法制备;没食子酸(GA);五倍子单宁GA 是一种重要的化工原料,用途广,用量大,现已成为市场畅销产品。

它可以用于医药工业,例如用GA 可制备3,4,5 三甲氧基苯甲醛(TMB),是合成抗菌磺胺增效剂三甲氧基苄胺嘧啶(T MP)的关键原料[1]。

GA 又是食品、化妆品和饲料的抗氧剂,近年来还用作半导体感光树脂的原料,其脱羧产品 焦性没食子酸也已广泛用作电影胶片的显影剂、红外照相的热敏剂、苯乙烯和聚苯乙烯的阻聚剂等[2]。

目前,几乎所有的GA 都是由五倍子单宁经化学法以硫酸水解得到的[3],但该方法存在着污染环境严重,对设备条件要求高,对低品位的五倍子原料如倍花等不能利用等许多问题。

而微生物酶法则有助于解决上述弊端,因此,建立酶法制取GA 的新工艺具有!绿色∀化学化工加工新工艺的重要意义。

现本文报告该新工艺的实验研究结果。

1 材料与方法1 1 材料1 1 1 试剂:五倍子产自四川省古蔺县;硅胶GF 254为青岛海洋化工厂产品;GA 由遵义二化厂生产(含量不低于98 5%,分析纯);CGA688大孔吸附树脂为晨光化工研究院生产;其它试剂均为国产分析纯试剂。

利用黑曲霉发酵麦麸制备阿魏酸_肌醇和低聚糖的研究

利用黑曲霉发酵麦麸制备阿魏酸_肌醇和低聚糖的研究

收稿日期:2001-10-24作者简介:欧仕益(1963-),男,博士,副教授,主要从事麦麸膳食纤维的研究。

粮油深加工及食品利用黑曲霉发酵麦麸制备阿魏酸、肌醇和低聚糖的研究欧仕益,陈喜德,符莉,邓斯亮,包惠燕,李爱军,杨爱华(暨南大学,广东广州 510632)摘 要:本实验对利用黑曲霉发酵麦麸制备阿魏酸、肌醇和低聚糖进行了初步研究。

结果表明,黑曲霉能部分释放麦麸膳食纤维上所束缚的阿魏酸,并将多糖和植酸分别水解成低聚糖和肌醇。

其中固体培养法比液体培养法能释放出更多的阿魏酸、低聚糖和肌醇。

不过,由于黑曲酶在释放这些物质的同时又将它们作为营养源,因此,利用黑曲霉直接发酵麦麸生产这三种物质是不经济的,而利用它们产生的酶来生产阿魏酸、肌醇和低聚糖可能是更好的选择。

关键词:麦麸;黑曲霉;阿魏酸;肌醇;低聚糖中图分类号:TS210.2 文献标识码:A 文章编号:1003-6202(2003)05-0031-02Study on the Preparation of Ferulic Acid,Inositol and Monosaccharides by Fermenting Wheat Bran with Aspergillus niger ABSTRACT:Aspergillus niger was used to ferment wheat bran for producing ferulic acid,inositol and monosaccharides.T he resul ts showed that the bound ferulic acid in wheat bran was partly released and inositol and monosaccharides were produced by the fermentation with As-pergillus n pared with liquid fermen tation,more ferulic acid,inosi tol and monosaccharides were produced.However,it is a cost method if wheat bran was directly fermented by A spergillus niger as Aspergillus niger would deplete these subs tances during its growth.Alterna-ti vely,using the multi enzymes produced by Aspergillus niger seemed to be a sound choise.KEY WORDS:wheat bran;Asp e rgillus nige r;ferulic acid;i nosi tol;monosaccharides麦麸主要由膳食纤维组成,并含有4%~5%的植酸和0 4%~1 0%与之相结合的阿魏酸[1,2]。

黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究

黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究

第14卷第3期武汉科技学院学报Vo1.14No.3 2001年9月JOURNAL OF WUHAN INS TITUTE OF SCIE NCE AND TECHNOLOGY Sep.2001黑曲霉植酸酶液体发酵工艺研究王亚林严建芳(武汉工业学院生物与化学工程系武汉430022)摘要研究了黑曲霉液体培养生产植酸酶的发酵工艺,研究了培养基碳源、诱导物、表面活性剂等因素对产酶的影响,对发酵时间、p H变化规律等进行了研究和分析。

关键词植酸酶黑曲霉发酵X中图分类号Q815;Q814.9植酸酶作为一种饲料和食品添加剂,在国内外已开始得到广泛应用,特别是由于其在改善环境方面的作用,更是受到人们的极大关注。

植酸酶主要存在于植物及微生物中,由于在微生物中含量较高而具有较大的开发价值。

目前,美国、荷兰和丹麦等国已先后运用发酵法生产植酸酶,我国也已在进行这方面的研究开发。

可以预计,植酸酶制剂将有良好的市场前景。

1材料与方法1.1菌种黑曲霉(Aspergillus niger)W S201,武汉工业学院微生物室保存。

1.2培养基1.2.1种子培养基:豆芽汁蔗糖培养基。

1.2.2摇瓶发酵培养基(%):葡萄糖3.0,淀粉7.0,NH4NO30.5,蛋白胨0.2,CaCl20.2,MgSO4# 7H2O0.05,KCl0.05,MnSO4.4;H2O0.03,pH值5.5。

1.3培养方法配制培养基时适当加热、摇动或搅拌,使淀粉溶解成液态或胶状,121e灭菌20min。

在30?1e下摇床培养3~5d(转速220~250r/min)。

1.4植酸酶的测定植酸酶活力的定义:37e,pH5.5条件下每分钟从植酸钠中释放出1L mol无机磷所需的酶为1u。

酶活测定方法:取0.1ml含酶液加至一洁净试管中;加入0.9ml反应液,反应液为含0.5%植酸钠的乙酸-乙酸钠缓冲液(pH5.5),在37e恒温反应30min;加入1ml10%三氯醋酸终止反应;加入2ml显色液,摇匀后静置15~30min显色,显色液由1%钼酸铵50ml与3.66X收稿日期:2001-06-26作者简介:王亚林,男,副教授,在读博士生;研究方向:发酵工程、生化工程32武汉科技学院学报2001年g FeSO4#7H2O混合配制。

黑曲霉液态发酵陈化稻米生产柠檬酸的研究

黑曲霉液态发酵陈化稻米生产柠檬酸的研究

黑曲霉液态发酵陈化稻米生产柠檬酸的研究周建新;彭雪霁;姚明兰;尚慧颖;朱晓倩;王晓静【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2008(029)009【摘要】研究了接种量、发酵温度与时间、氮源等因素对以陈化稻米为原料,黑曲霉液态发酵法生产柠檬酸的影响,并优化了工艺.结果表明,陈化稻米粉碎后,经α-淀粉酶液化得到合适的发酵培养基,液态发酵柠檬酸的优化工艺为:初始培养基pH值为4、加1%氯化铵、接种量1%、发酵温度34℃、发酵时间96h,产酸率最高可达到13.1%.本研究为可陈化稻米的深度开发提供途径.【总页数】3页(P370-372)【作者】周建新;彭雪霁;姚明兰;尚慧颖;朱晓倩;王晓静【作者单位】南京财经大学,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,江苏,南京,210003;南京财经大学,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,江苏,南京,210003;南京财经大学,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,江苏,南京,210003;南京财经大学,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,江苏,南京,210003;南京财经大学,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,江苏,南京,210003;南京财经大学,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,江苏,南京,210003【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6【相关文献】1.黑曲霉液态发酵制备没食子酸的工艺研究 [J], 熊进;何顺荣;吴鑫颖;邱树毅;简辉;马威2.黑曲霉IN7-31产糖化酶的液态发酵参数与技术优化研究 [J], 贺莹;吕利华;张婵;赵良启3.黑曲霉产糖化酶液态发酵条件研究 [J], 孙继祥4.黑曲霉液态发酵产糖化酶条件的研究 [J], 梁绍勋;梁金辉;蒋军;王录5.产β-葡聚糖酶的黑曲霉液态发酵优化的研究 [J], 阚劲松;吴克;张洁;蔡敬民;潘仁瑞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。