血型鉴定、交叉配血操作规程

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⾎型鉴定、交叉配⾎操作规程

ABO、Rh-D⾎型鉴定操作规程

1.⽬的:规范ABO、Rh-D检测的操作过程

2. 标本采集:静脉采⾎2ml抗凝⾎,避免溶⾎试剂

3. 试剂:长春博讯⽣物技术有限责任公司

4.⽅法原理

【原理】:标准⾎清中的完全抗体(lgM)抗A、抗B、和抗D能和红细胞表⾯相应的抗原在盐⽔介质中发⽣特异性的凝集反应。根据红细胞凝聚类型可鉴别出A、B、O、AB四型和RHD阴性或阳性。5. 操作:

⼀、玻⽚法(⼀般只能做正定型)

【正定型】:1、取⼀张玻⽚,⽤蜡笔或记号笔将其分为三等份,从左到右每⼀等份左上⾓标明A、B、D,

2、对应加⼊抗A和抗B抗D标准⾎清⼀滴;

3、分别加PC(患者10—15%红细胞悬液);

4、⽤洁净⽵签将试剂和红细胞充分混匀,混合物约2cm2⼤⼩;

5、轻轻地连续倾斜转动玻⽚2—5分钟,观察并记录; 【解释】:A端凝集为A型⾎;B端凝集为B型⾎;A、B 端均凝集则为AB型;A、B端均不凝集则为O型;D端凝集则为RH阳性者,⽆凝集则为RH阴性。

备注:玻⽚法可作为ABO⾎型初筛或复检;不适⽤于抗体鉴定和交叉配⾎;不适合检测ABO亚型。

⼆、试管法(盐⽔介质)

【原理】:标准的A型和B型红细胞能和受检者⾎清(⾎浆)中相应的抗体发⽣特异性结合,形成⾁眼可见的凝集反应,从⽽可推断出受检者的⾎型。

【材料】:1、标准A型和B型红细胞悬液(浓度4%,商品有售,亦可⾃⾏新鲜配制);

2、受试者⾎清或⾎清;

3、洁净康⽒试管。

【正定型】:1、取⼆⽀洁净试管分别记上抗A和抗B;

2、对应加⼊抗A和抗B⾎清1滴;

3、分别加⼊病⼈红细胞悬液1滴(浓度为2%-5%);

4、混匀,室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果

【解释】:轻摇试管,检查是否凝集,抗A、抗B管均凝集,受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集,则为O 型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B型⾎。【反定型】:1、取⼆⽀试管分别记上AC和BC;

2、分别加⼊病⼈⾎清;

3、对应加⼊A和B型试剂红细胞;

4、混匀室温放置5分钟,1000rpm离⼼1分钟,取出观察结果;【解释】:⾸先检查上清液有⽆溶⾎,然后轻摇试管,检查是否凝集,A、B管均凝集受试者为O型⾎;A、B管均不凝集则为AB型⾎;A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。3.卡式法(微柱凝胶技术)

【原理】:在含有中性胶的微柱管中相继加⼊红细胞抗体和红细胞,孵育后相应的抗原和抗体则形成免疫复合物,利⽤凝胶分⼦排阻原理在⼀定的离⼼⼒下,该复合物不能通过凝胶间隙浮于胶表⾯或悬于胶中. ⽆相应的抗原和抗体,则不能形成免疫复合物, 在⼀定的离⼼⼒下,分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。可⽤于ABO⾎型正反定型,RH⾎型检测或其它应⽤完全性抗体的⾎型检测。

【试剂】:⾎型检测卡ABO试剂红细胞

【正定型】:在含有红细胞抗体的微柱凝胶管中加⼊待检红细胞, 孵育后离⼼观察结果。分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部,凝集的红细胞不能通过凝胶间隙浮于胶表⾯或悬于胶中。

【解释】:抗A、抗B管均凝集(浮于胶表⾯或悬于胶中),受试者为AB型⾎;抗A、抗B管均不凝集(沉于微柱腔底部),则为O型⾎;抗A管凝集则为A型⾎;抗B管凝集则为B 型⾎。

【反定型】:将抗原吸附在红细胞表⾯,检测与其相应抗体发⽣的凝集反应。在ABO⾎型反定型试验中,将⼈A 或B型⾎型多糖抗原经媒介化合物联结到O型红细胞上(可长期保存),然后将该具有A型抗原或B型抗原红细胞分别与被检⾎清在微柱凝胶中反应,检测被检⾎清中ABO抗体.

【解释】:A、B管均凝集受试者为O型⾎(浮于胶表⾯或悬于胶中);A、B管均不凝集则为AB型⾎(沉于微柱腔底部);A管凝集则为B型⾎;B管凝集则为A型⾎。

交叉配⾎操作规程

交叉配⾎的⽬的是确保为病⼈选择合适的⾎液和测定受试者⾎清中有⽆任何不规则的抗体,防⽌输⾎后产⽣溶⾎性输⾎反应。交叉配⾎有两类即主侧交叉、次侧交叉,交叉配⾎实验的结果,主侧是绝对不可以有凝集和溶⾎现象,次侧在A或B型⼈输⼊O型⾎时,可以有凝集现象,但不可以有溶⾎现象。

⼀、盐⽔交叉配⾎实验(试管法)

【原理】:完全抗体(lgM)在盐⽔介质中能和相应的抗原发⽣免疫反应,形成⾁眼可见的凝集反应。

【试剂】:⽣理盐⽔

【⽅法】:1、⽤⽣理盐⽔将受⾎者红细胞制备2%-5%红细胞悬液;

2、从供⾎者⾎液保存袋上的辫⼦中获取少量⾎样,分离⾎清,⽣理盐⽔三洗红细胞,并⽤⽣⽣理盐⽔将供⾎者红细胞制备2%-5%的红细胞悬液;3、取洁净塑料试管2⽀,标明“主侧”“次侧”;

4、按标记“主侧”管加受⾎者⾎清2滴,加供⾎者红细胞悬液1滴。“次侧”管加供⾎者⾎清2滴,加受⾎者红细胞悬液1滴。混匀。以1000g(3400r/min)离⼼15秒,轻轻晃动试管,⾁眼观察结果

【解释】:两管⽆凝集,表明ABO⾎型配⾎相合。该法主要⽤于检出是否有ABO⾎型定型错误,⽆法检出由于免疫⽽产⽣的不完全抗体。若不能明显判定为阴性,可通过显微镜进⼀步判读,镜下⽆凝集为阴性。若在室温下操作注意冷凝集影响试验结果。

⼆、凝聚胺交叉配⾎法

【原理】:凝聚胺(Polybrene)是⼀种⼤分⼦阳离⼦物质,溶解后产⽣很多正电荷,可以中和红细胞表⾯的负电荷,使红细胞发⽣⾮特异性凝聚,然后再加⼊解凝聚液(Pesuspending)中和凝聚胺,使正常红细胞重新解聚散开,此时实验结果为阳性;若红细胞被相应的抗体结合,凝聚就不会散开,实验结果为阳性。

【材料】:1、受、供⾎者⾎清或EDTA抗凝⾎浆;

2、受、供⾎者3—5%的红细胞悬液;

3、凝聚胺试剂盒(包括低离⼦介质LIM,凝聚胺溶液,重悬液)。

【⽅法】:1、试管两⽀,分别表明主、次侧,主侧加受⾎者⾎球或⾎浆2滴,供⾎者红悬液1滴,次侧管反之;

2、⽴即以1000g离⼼,观察结果。若阴性则继续试验;若阳性则需分析原因排除⼲扰后继续后续试验。

3、各加低离⼦液(LIM)0.6ml混匀,室温放置1min。

4、再各加凝聚胺溶液2滴;⽴即以1000g离⼼1min,弃去试管中液体,轻摇试管观察红细胞凝集情况。若有凝集出现则继续操作,若没有凝集出现则该试验⽆效。5、加⼊1滴重悬液,轻摇试管,⾁眼观察结果。

【解释】1min内凝集消失为聚凝胺试验阴性,1min内凝集不消失为聚凝胺试验阳性。该法简便、快速、灵敏度⾼、价格适中,且不需特殊设备。该法除交叉配⾎外,还可⽤于⾎型鉴定,不完全抗体筛选等。⾮常适合于基层医院选⽤。加⼊重悬液后应尽快观察结果以免弱反应消失。三、卡式配⾎(微柱凝胶技术)

【原理】:微柱凝胶技术是利⽤抗原抗体反应与凝胶分了筛技术相结合的产物.通过调节葡聚糖凝胶的浓度来控制分⼦筛孔径的⼤⼩,使分⼦筛只允许游离红细胞通过,从⽽达到分离凝集红细胞和游离红细胞的⽬的。即:将红细胞和⾎清加在凝胶的上部反应,离⼼以后,凝集红细胞将受到凝胶的阻碍⽽停留在凝胶的上部或凝胶中,则证明发⽣凝集反应,可判为凝集反应阳性,反之,所有红细胞都停留在凝胶底部,证明未发⽣凝集反应,则可判为凝集反应阴性。(共⼋管)

【材料】:1、受、供⾎者⾎清或EDTA抗凝⾎浆;

2、受、供⾎者3—5%的红细胞悬液;

3、抗⼈球蛋⽩交叉配⾎卡;

○1ABD⾎型鉴定:(A B Rh三个管)

【⽅法】:1、向A、B、D三个管中滴1滴受⾎者红细胞悬液。

2、37℃孵育15分钟。

3、离⼼10分钟,判断结果。

②不规则抗体操作(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个管)

【原理】:选择已知抗体筛查细胞抗原来检测⾎清中的抗体,⽤凝胶微柱可清晰地显⽰出来。

【材料】:1、抗体筛查细胞(标准A、B、O细胞悬液)。

2、受检者⾎清;

【⽅法】:1.三管中分别加⼊抗体筛查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ细胞各50ul。

2.三管中均加⼊25ul待检样本⾎浆或⾎清

3.37℃孵育15分钟。

4.离⼼,判断结果。

【解释】:如在第⼆管中出现阳性反应,⽽第⼀管中出现阴性反应,或者与第⼆管阳性反应⽐呈明显的弱阳性反应,提⽰该待检⾎清中存在该细胞特异性抗体;如两管都出现阴性反应,提⽰该待检⾎清中不含该细胞特异性抗体。

③交叉配⾎(主次侧两个管)

【⽅法】:1.主侧管中加⼊50ul献⾎者红细胞悬液、25ul 受⾎者⾎浆或⾎清。2.次侧管中加⼊50ul受⾎者红细胞悬液、25ul献⾎者⾎浆或⾎清。

3.37℃孵育15分钟。4.离⼼10分钟,判断结果。

【解释】:主侧、次侧⾎球沉底,表明ABO⾎型为配⾎相合。