人(Human)甲型肝炎病毒抗原(HAVAg)ELISA试剂盒说明书
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甲肝病毒页数:7
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甲型肝炎病毒微生物学及其检验页数:26
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甲型病毒性肝炎诊断标准页数:11
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医学检验-微生物-肝炎病毒测试题页数:8
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肝炎病毒测试题页数:10
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甲型肝炎病毒检测方法研究进展页数:3
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甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法的研究及应用
甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法的研究及应用发表时间：2017-06-12T10:03:18.517Z 来源：《中国误诊学杂志》2017年第6期作者：张龙丰张玲珠[导读] 建立甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法。
1.牡丹江市第一人民医院 157011；2.黑龙江省林业职业技术学校 157011 摘要：目的：建立甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检测方法。
方法：用双抗体夹心ELISA法检测试剂对甲型肝炎灭活疫苗及效力试验参比进行检测，以检测OD值为反应指标，用生物检定双平行线法的基本原理进行统计分析，计算待检疫苗对应于效力参比品的相对效力（R 值）。
结果：样品HAAg含量与检测OD值之间具有高度的相关性，验证了4个指标全部通过了验证；用所建立的体外相对效力试验检测法对32批次甲肝灭活疫苗进行检测，结果与小鼠体内效力检测结果具有良好一致性，均能反映疫苗相对效力，两种方法检测相对效力（R值）之间无明显差别。
结论：所建立的甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力试验是一种灵敏、特异、方便、快捷的效力测定方法，可应用于甲型肝炎灭活疫苗效力检测。
关键词：甲型肝炎灭活疫苗效力；抗原检测；研究及应用Abstract：Objective：to establish a method to determine the relative potency of Inactivated Hepatitis A Vaccine in vitro. Methods：the method of double antibody sandwich ELISA kit to test Inactivated Hepatitis A Vaccine and the effect of reference for testing，to detect the OD value of reaction index，the basic principle of biological verification of parallel method for statistical analysis，the calculation to be detected corresponding to the relative effectiveness of vaccine effectiveness than ginseng the product（R）. Results：with a high degree of correlation between the HAAg content of the sample and detection OD，verified the 4 indicators all through the verification；with the established in vitro relative potency test detection method for 32 batches of inactivated hepatitis A vaccine was detected in mice results and potency testing results have good consistency，are can reflect the relative effectiveness of the vaccine，two methods for the detection of the relative potency（R）. conclusion：no obvious difference between Inactivated Hepatitis A Vaccine established in vitro The relative potency test is a sensitive，specific，convenient and rapid method for the determination of potency in Inactivated Hepatitis A VaccineKeywords：Inactivated Hepatitis A Vaccine effect；antigen detection；research and Application灭活疫苗动物体内效力检测周期一般均较长，且结果受多种因素的影响，所以WHO及国际生物制品标准化协会推荐尽量不用动物法进行生物制品质量检定。
甲肝的血清检测操作规程002
甲型肝炎病毒IgM抗体检测（HAV-IgM）操作规程文件号：WH-MY-002版本：第2版共： 3 页2009年3月1日起实施本规程每2年复审一次复审日期：2009年2月27日复审人：雷凤珠规程编写者：王莉红审批者：王金成批准日期：2009年2月28日检验科主任：雷凤珠1、检验目的：用于甲型肝炎的早期诊断。
2、检测原理：本试剂在微孔条上预包被羊抗人－IgM(u链)，配以酶标抗原（HAV-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，采用捕获法原理检测人血清(或血浆)中的甲肝IgM抗体（HAV-IgM）。
3、试剂和仪器：3.1试剂：北京万泰生物药业有限公司3.2试剂盒组成：3.3试剂稳定性：原装试剂在2－8℃避光保存，有效期6个月。
3.4仪器：3.4.1 YB-DX23D电动吸引器（上海医疗设备厂）3.4.2 TE-B型定时微量振荡器（江苏泰县）3.4.3 37℃孵箱（天津实验仪器厂）4、标本：4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管)，将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后，分离血清。
4.2样品收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。
4.3溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。
4.4用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2－8℃冰箱中保存一周。
4.5样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾带由专人按医疗垃圾处理。
5、操作5.1操作步骤：5.1.1配液：将25ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至500ml备用。
5.1.2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同），5.1.3加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。
5.1.4温育：置37℃温育20分钟。
5.1.5洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液充分洗涤5遍，用吸引器吸干。
5.1.6加酶：每孔加入酶标试剂2滴（100ul）,轻轻振荡混匀。
人肝癌抗原(PHC)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明
人肝癌抗原(PHC)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中肝癌抗原(PHC)的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肝癌抗原(PHC)水平。
用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入肝癌抗原(PHC)，再与HRP标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的肝癌抗原(PHC)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肝癌抗原(PHC)浓度。
试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片（48）2片（96）密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：90 IU/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存样本处理及要求：1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
两种国产甲型肝炎病毒抗体(抗HAV-IgM)诊断试剂检测隐性甲肝患者血清结果的比较
两种国产甲型肝炎病毒抗体（抗HAV-IgM）诊断试剂检测隐性甲肝患者血清结果的比较摘要】目的：探究两种国产甲型肝炎病毒抗体诊断试剂检测隐性甲肝患者血清结果比较，以供参考。
方法：选取2014年1月～2015年1月我中心32份甲肝阳性血清标本以1:1000稀释后，采用北京万泰抗HAV-IgM诊断试剂盒作为A试剂复查3孔，北京现代抗HAV-lgM诊断试剂盒作为B试剂复查3孔，探究其检查结果。
结果：研究可以看出，B试剂检出率与A试剂比较差异不明显，P＞0.05，差异无统计学意义。
结论：A、B试剂诊断隐性甲肝患者血清结果准确率均较高，有较高灵敏性及特异性，适用于甲型肝炎病毒抗体（抗HAV-IgM）诊断，具有较高临床诊断意义，值得推广。
【关键词】国产甲型肝炎病毒抗体；诊断试剂；检测；隐性甲肝患者血清【中图分类号】R575.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）09-0203-02甲型肝炎是世界范围内流行的一种传染性疾病，其临床症状一般为发热、腹痛、厌食等，主要通过粪口传播[1]，甲型肝炎分布状态比较散，各个地区都存在，严重影响患者生活质量。
本文研究中主要对32份被稀释过的甲肝阳性血清标本进行诊断检测。
1.资料和方法1.1 资料选取2014年1月～2015年1月我中心32份甲肝阳性血清标本以1:1000稀释后，采用北京万泰抗HAV-IgM诊断试剂盒作为A试剂复查3孔，北京现代抗HAV-lgM诊断试剂盒作为B试剂复查3孔。
32份标本均分别使用A、B两种试剂进行检测。
1.2 检查方法对32份初筛阳性血清标本以1:1000稀释后使用A试剂以及B试剂进行HAV-lgM抗体检测，采用自动酶免仪[2]进行检测，统计检测结果并对其进行有效分析。
1.3 观察指标观察A试剂以及B试剂的实验结果，即阳性以及阴性检出例数的差异性。
1.4 统计学处理本文数据均采用SPSS17.0软件进行统计学处理，当P>0.05的时候，则表示差异不具有统计学意义。
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤
甲型肝炎病毒IgM抗体操作步骤1．检验目的：检测人血清或血浆中的抗HA V-IgM。
2．检测原理：本品系用抗人-IgM（u链）包被的微孔板，配以纯甲型肝炎抗原（HA V-Ag）和酶标记的甲型肝炎病毒抗体（抗HA V-HRP）及其它试剂，采用捕获法原理，检测人血清或血浆中的抗-HA V-IgM。
34．操作：4.1 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有结晶析出应充分溶解）浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
4.2 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
4.3 加样：待测样本用生理盐水作1：1000稀释，每个样本检测孔加入稀释样本100 uL。
设阴阳对照各1孔，每孔加入100 uL，并设空白对照1孔。
4.4 温育：置37℃温育20分钟，室温平衡2分钟。
4.5 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
4.6 加抗原、酶：每孔加入抗原（HA V-Ag）30 uL、酶标记抗体50uL（1滴），充分混匀。
4.7 温育：置37℃温育20分钟。
4.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完后扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。
4.9 显色：每孔加底物A、B各50uL，轻拍混匀，置37℃暗置15分钟。
4.10 终止：每孔加终止液50uL，混匀。
4.11 测定：用酶标仪单波长450nm/630nm测定各孔OD值（用单波长测定需设定空白对照一孔，30分钟完成测定，并记录结果）。
5. 结果判定：5.1 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD均值N×2.1阴性对照OD值低于0.050←0.050计算，高于0.050按实际OD值计算。
5.2结果判定：样品OD值S/C.O.≥1者为HA V-IgM阳性样品OD值S/C.O.＜1者为HA V-IgM阴性5.3 失效：如果阳性对照OD均值小于0.05，则表明不正常的操作或试剂盒已变质损坏。
在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。
甲型肝炎病毒IgM( HAvIgM )标准操作程序SOP文件
文件编号： ABCD-SOP-01-14AB C D 医院 免疫实验室［前言］这种抗体是感染甲肝病毒（HAV ）后病人血中最早出现的一种抗体，属于HAV衣壳抗体。
［原理］Z 本试剂盒采用捕获法检测人血清或血浆中的甲肝IgM 抗体。
具有简便、快速、准确、样本不需稀释等优点，适用于甲型肝炎的早期诊断。
试剂自生产日起避光贮存于2-8℃,有效期内稳定。
［标本的收集与处理］标本为无溶血血清。
［操作步骤］1、加样：将包被板预先编号。
设空白对照1孔，阴、阳性对照各2孔。
力口阴、阳性对照血清各50ul 于相应孔内，其余各孔分别加入50ul 待测样本（不能稀释）, 轻轻振荡后封板。
2、温育：置37℃水浴箱温育30分钟。
3、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置2分钟，扣去洗涤液，重复4次，最后一次在吸水纸上拍干。
4、加酶:除空白对照孔外,每孔加入HA.Ag50ul ,酶标记物溶液50ul,轻轻振荡后封板。
5、温育：置37℃水浴箱温育30分钟。
6、洗涤：同步骤3洗涤7、显色：每孔加底物液A 1滴（50ul ）.底物液B1滴（50ul ）,轻拍混匀后,置37℃水浴15分钟，目测结果或加入终止液1滴（50ul ）用酶标仪判读。
［结果判定］1、目测法：在白色背景下观察各孔颜色，无色或极淡兰色判为阴性，呈明显 甲型肝炎病毒IgM （ HAvIgM ） 版序：abed 页码：第1页，共2页［试剂组成］1、包被板条2、阴性对照血清3、阳性对照血清4、醵标记物溶液5, HA. Ag［试剂厂家］深圳月亮湾生物工程有限公司［试剂的稳定性与贮存］ 6、底物液A 7、底物液B 8、终止液 9、浓缩洗涤液 （用蒸储水1： 20稀释后使用）文件编号：ABCD-SOP-01-14 兰色判为阳性。
AB C D医院免疫实验室版序：abed甲型肝炎病毒IgM( HAvIgM ) 页码：第2页，共2页2、酶标仪检测法(选择波长450nm)：用空白孔校零，测定各孔吸光度0D值。
甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书
甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒说明书Elecsys Anti-HAVElecsys 2010/MODULAR ANALYTICS E17011820605 100人份【名称】通用名：甲型肝炎病毒抗体电化学发光检测试剂盒英文名：Elecsys Anti-HAV汉语拼音：Jia xing gan yan bing du kang ti dian hua xue fa guang jian ce shi ji he【使用目的】用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的甲型肝炎病毒总抗体。
甲型肝炎病毒抗体检测有助于检测过去或现在的甲肝病毒感染，观察甲肝疫苗注射后的免疫反应。
电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010和MODULAR ANALYTICS E170免疫测定分析仪。
【概述】甲肝病毒是一种没有胞膜的RNA病毒。
它属于细小的核糖核酸病毒家族。
至今，仅1种人血清型和7种基因型被记述。
病毒衣壳由三种蛋白 (VP1-VP3) 组成，在病毒颗粒表面形成一个免疫决定簇结构，它被高度表达在所有基因型。
在注射疫苗后或正常感染后这个结构诱发免疫反应1。
甲型肝炎是最普通的急性病毒性肝炎，通过消化道传播。
这种肝炎不会发展成慢性肝炎，病毒也不会持续存在组织中2。
甲型肝炎病毒是引起病毒性肝炎爆发流行的最常见原因(10-20%)3。
甲型肝炎感染发作时总的甲型肝炎抗体呈阳性。
在自然感染后，抗HAV-IgG抗体能够终生存在，如果组织再次感染会对机体起到保护作用4。
现在已经有甲肝病毒疫苗和甲肝和乙肝混合疫苗5。
在注射甲肝疫苗后, 抗HAV-IgG抗体两周后就可以检测到。
在完全免疫过程中，这种保护作用可以持续很多年6。
免疫保护作用对于抗体值没有限定，但是抗HAV浓度在10-20IU/L以上对机体有保护作用。
抗HAV抗体检测用于检查甲型肝炎病毒存在或过去感染过。
同时也用于观察甲肝疫苗注射后的免疫反应。
【原理】竞争法：总检测时间18分钟。
病毒性肝炎检测
四、丁型肝炎病毒检测
（一）丁型肝炎病毒抗原测定
丁型肝炎病毒抗原（HDVAg）出现较早，但仅持续 l～2周。HDVAg与HBsAg同时阳性，表示 丁型和乙型肝炎病毒同时感染，病人可迅速发展为慢性或急性重症肝炎。
（二）丁型肝炎病毒抗体测定
1.抗-HDV IgG 阳性只能在HBsAg阳性的血清中测得，是诊断丁型肝炎的可靠指标，病愈 后仍可存在多年。
2.抗-HDV IgM 出现较早，一般持续2～20周，可用于丁型肝炎早期诊断。
（三）丁型肝炎病毒RNA测定
阳性可明确诊断为丁型肝炎。HDV与HBV重叠感染的病人易迅速发展成肝硬化或肝癌。
五、戊型肝炎病毒检测
1.抗-HEV IgM 95%的急性期病人呈阳性反应，8个月后全部消失。抗-HEV IgM的持续 时间较短，可作为急性感染的诊断指标。
(二) 乙型肝炎病毒表面抗原蛋白前S1和前S1抗体测定
前S1抗原可识别肝细胞表面特异性的病毒受体，是非常重要的传染性指标。同时血清 前S1抗原的存在与病毒复制的关系密切。作为病毒复制指标较HBeAg敏感，可以反映 HBeAg阴性乙肝病人体内的病毒活动状况，避免由于HBeAg阴性造成的误诊和漏检，对 “二对半”检测起重要的补充作用。前S1抗原阴转越早、前S1抗体阳转越早，病人病程越 短、预后越好。
Thanks
（三）HAV-RNA测定
HAV-RNA阳性对诊断特别对早期诊断具有特异性。
二、乙型肝炎病毒检测
（一）乙肝六项检测
1.HBsAg 阳性见于急性乙肝的潜伏期，发病时达高峰；如果发病后3个月不转阴，则易 发展成慢性乙型肝炎或肝硬化。携带者 HBsAg也呈阳性。
2.抗-HBs 是保护性抗体，可阻止HBV穿过细胞膜进入新的肝细胞。抗-HBs一般在发病后 3～6月才出现，可持续多年。
甲型肝炎病毒--IgM检测(ELISA法)作业指导书
甲型肝炎病毒--IgM检测(ELISA法)作业指导书1.原理本法是用抗人μ链捕获待测血清中特异性IgM，然后用HAV与特异性—IgM 抗体反应，再加酶标记抗M抗体，最后加底物显色。
2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集病人静脉血2ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。
3.标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。
4.标本运输：密封，室温运输。
5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。
6.试剂6.1 试剂名称：抗HAV—IgM检测ELISA试剂盒6.2 试剂生产厂家：xx技术研究所6.3 包装规格：48Test/Kit6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。
6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。
7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-2100C8操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。
8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。
8.4加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100μl，空下四孔准备加对照。
8.5加标本和留空白：将每份待检标本各5μl分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。
8.6加对照：在预先空下的四孔中用加样器分别加入阴性对照一孔，阳性对照三孔，每孔100μl，标好位置。
对照应在所有标本加完以后再加，以保证阈值准确性。
甲肝
1.检验目的血清抗HA V抗体IgM是HA V急性感染的标志，在感染的早期即已出现，是早期诊断甲型肝炎的依据。
感染后3个月内可维持较高滴度，6个月后逐渐消失。
2.方法原理采用ELISA架桥法，反应板的琼脂微孔包被兔抗人-IgMμ链，加入待测样本，同时加入HA V Ag、抗-HA V-HRP，当样本中有抗-HA V-IgM时，会与包被在板上的兔抗人-IgMμ链结合，并被HA V Ag捕获、再与抗-HA V-HRP联接成复合物，加入底物TMB产生显色反应，反之则无显色反应。
3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。
4.标本收集4.1 标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。
4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。
4.3 标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天（可以含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。
4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。
4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。
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上海笃玛生物科技有限公司本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）甲型肝炎病毒抗原（HAV-Ag）ELISA 检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被甲型肝炎病毒抗体（HAV-Ab）的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB 显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的甲型肝炎病毒抗原（HAV-Ag）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.37℃恒温箱操作注意事项1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
上海笃玛生物科技有限公司5.所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL 3mL 无检测抗体-HRP 10mL 5mL 无20×洗涤缓冲液25mL 15mL 按说明书进行稀释底物A 6mL 3mL 无底物B 6mL 3mL 无终止液6mL 3mL 无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、0.5、1、2、4、8μg/mL试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤1.从室温平衡20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；3.样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B 各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL，15min 内，在450nm 波长处测定各孔的OD 值。
结果判断绘制标准曲线：在Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样上海笃玛生物科技有限公司本浓度值。
试剂盒性能1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R 值，大于等于0.9900。
2.灵敏度：最低检测浓度小于0.1μg/mL。
3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5.贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6个月免责声明1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。
2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
上海笃玛生物科技有限公司FOR RESEARCH USE ONLY.NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.Human hepatitis A virus antigen (HA V-Ag)ELISA KitinstructionIntended useThis HAV-Ag ELISA kit is intended Laboratory for Research use only and is not for use in diagnostic or therapeutic procedures.The Stop Solution changes the color from blue to yellow and the intensity of the color is measured at 450nm using a spectrophotometer.In order to measure the concentration of HAV-Ag in the sample,this HAV-Ag ELISA Kit includes a set of calibration standards.The calibration standards are assayed at the same time as the samples and allow the operator to produce a standard curve of Optical Density versus HAV-Ag concentration.The concentration of HAV-Ag in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.Sample collection and storages Serum -Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30minutesbefore centrifugation for 10minutes at approximately 3000×g.Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃.Avoid repeatedfreeze-thaw cyclesPlasma -Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant.Centrifugesamples for 30minutes at 3000×g at 2-8℃within 30minutes of collection.Store samples at -20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Cell culture supernates and other biological fluids -Remove particulatesby centrifugation and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles.Note:The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis orgranule was allowed.Materials required but not supplied1.Standard microplate reader(450nm)2.Precision pipettes and Disposable pipette tips.3.37℃incubatorPrecautions上海笃玛生物科技有限公司1.Do not substitute reagents from one kit to another.Standard,conjugate andmicroplates are matched for optimal e only the reagents supplied by manufacturer.2.Do not remove microplate from the storage bag until needed.Unused stripsshould be stored at 2-8°C in their pouch with the desiccant provided.3.Mix all reagents before using.Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature (20-25°C)Materials suppliedName 96determinations48determinationsMicroelisa stripplate12*8strips 12*4strips Standard 0.3ml*6tubes0.3ml*6tubesSample Diluent 6.0ml 3.0ml HRP-Conjugate reagent 10.0ml 5.0ml 20X Wash solution 25ml 15ml Chromogen Solution A 6.0ml 3.0ml Chromogen Solution B6.0ml 3.0ml Stop Solution 6.0ml 3.0ml Closure plate membrane22User manual11Sealed bags 11Note:Standard (S0→S5)concentration was followed by:0,0.5,1,2,4,8μg/mLReagent preparation20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.Assay procedure1.Prepare all re a g e n t s before starting assay procedure.It is recommended that all Standards and Samples be added in duplicate to the Microelisa Stripplate.2.Add standard:Set Standard wells,testing sample wells.Add standard 50μl tostandard well.3.Add Sample:Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testingsample well;Blank well doesn’t add anyting.4.Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well,c over with an adhesive stripand incubate for 60minutes at 37°C.5.Aspirate each well and wash,repeating the process four times for a total of fivewashes.Wash by filling each well with Wash Solution (400μl )using a squirt bottle,manifold dispenser or plete removal of liquid at each step is essential to good performance.After the last wash,remove any remaining Wash Solution by aspirating or decanting.Invert the plate and blot it against clean paper上海笃玛生物科技有限公司towels.6.Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well.Gently mix and incubate for 15minutes at 37°C.Protect from light.7.Add 50μl Stop Solution to each well.The color in the wells should changefrom blue to yellow.If the color in the wells is green or the color change does not appear uniform,gently tap the plate to ensure thorough mixing.8.Read the Optical Density (O.D.)at 450nm using a microtiter plate readerwithin 15minutes.Calculation of results1.This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample.The standard curve is generated by plotting the average O.D.(450nm)obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y)axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X)axis.2.First,calculate the mean O.D.value for each standard and sample.All O.D.values,are subtracted by the mean value of the zero standard before result interpretation.Construct the standard curve using graph paper or statistical software.3.To determine the amount in each sample,first locate the O.D.value on theY-axis and extend a horizontal line to the standard curve.At the point of intersection,draw a vertical line to the X-axis and read the corresponding concentration.4.Any variation in operator,pipetting and washing technique,incubation time or temperature,and kit age can cause variation in result.Each user should obtain their own standard curve.5.The sensitivity by this assay is 0.1μg/mL 6.Standard curve上海笃玛生物科技有限公司Storage ：2-8℃.validity ：six months.FOR RESEARCH USE ONLY;NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!PLEASE READ THROUGHENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!。