怀化医专《微生物学检验》教案编号:３
第八章细菌形态学检查
形态学检查的目的:
①从形态上识别细菌,为细菌分类与鉴别的基础;
②了解被检标本中有无细菌;
③直接从标本中观察到某些细菌,可对少数疾病初步诊断(如结核,脑膜炎等)。
第一节显微镜(mｉcroscopｅ)
一、普通光学显微镜
原理自然光的波长为0、4um;显微镜的最大分辨率为0.2um(前者的一半);肉眼的分辨率为0.2ｍm,故放大100０倍,使0.2um放大到０.2mm。
二、暗视野显微镜
用暗视野聚光器,使反光镜反射过来的光线不能进入镜筒,视野变暗,
线从暗视野聚光器周围斜射到菌体上,由于散射作用使菌体发光。
常用于活的微生物的动力检测。
三、相差显微镜
在检查不染色标本时,由于细菌的折光性与周围环境的折光性相近,对比不明显,瞧不清细菌及其内部结构,相差显微镜利用相差板的光栅作用,使光波穿过标本中密度不同的部位时,引起位相差,显出光的强度的明暗对比。
应用于活菌的形态及某些内部结构的观察。
四、荧光显微镜
以紫外光或蓝紫光作光源,因其波长比自然光短,故分辨率比普通显微镜要高。细菌经过荧光素染色后,在荧光显微镜下,由于菌体各种结构对荧光素的溶解、吸附情况不同,因此发出不同色调与亮度的荧光。
五、电子显微镜
以强大的电子流代替光源,因电子流的波长仅为０、００5nm,(仅为可见光源的几万分之一),故其放大倍数可达1０万-100万倍,可瞧清1nm的物体。
电镜种类
透射电镜:因电子的透射作用,可观察细菌,virus内部结构,通过荧屏显示。
扫描电镜:因电子流对物体的表面进行扫描,可清楚的显露出物体的三维空间的立体结构,可用于对细菌,virus的表面结构观察。
第二节不染色细菌标本检查法
仅用于细菌动力的观察。不能观察细菌的形态与结构特征。
1.压滴法明视野法、暗视野法。
2、悬滴法
3、毛细管法:孔径0、5-1.0mm,长约6０－70ｍm毛细管,以此管轻取细菌培养物,待液体进入后,两端火焰封融。用于厌氧菌的动力观察。
注意:区别细菌的运动与布朗运动。
第三节细菌染色标本的检查
适于观察细菌的形态与某些结构。
一、染料:
大多就是人工合成的含苯环或苯的有机物。
色基:即连接在苯环上带双键的有色化学基团,它使染料带颜色,其色基越多,颜色越深。如-NＯ2(硝基)＼-N＝N－(偶氮基)
助色基:不显色,它决定了染料与被染物之间的亲与性,且有酸、碱之分,决定了染料的酸碱性:-NH2(碱性) -OH(酸性)
常用染料种类:
1、碱性染料:美兰,结晶紫,碱性复红等,常以氯化物形式存在,色基带正电,易与带负电的被染物结合着色。由于细菌PI低(2～５),因此常带负电荷,易与该类染料结合。
2、酸性染料:伊红,酸性复红,刚果红,色基带负电。细菌带负电荷不易着色,常用于细胞浆染色,很少用于细菌染色。
３、复合染料(中性染料):就是碱性染料与酸性染料的复合物,可与cell浆结合,如:伊红美兰、伊红天青。
4、单纯染料:多为偶氮化合物,亲与力低,不溶于水,而溶于脂溶剂。常用于脂肪