中药制剂中橙皮苷的含量测定实验讲义

高效液相法分析小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量目的：建立止咳药品中橙皮苷的含量的高效液相测定方法。

方法：色谱柱：ODS-C18（4.6mm×250mm，5μm），流动相：甲醇-水-醋酸（40：55：5），流速：1.0ml·min-1检测波长285nm，柱温：30℃。

结果：橙皮苷在0.46～1.97μg/ml浓度范围内呈现良好线性关系（r=0.9996），百部止咳糖浆中橙皮苷含量为（19.1±2.1）ug.ml-1。

结论：高效液相法测定橙皮苷的含量具有准确性高、精密程度好、有良好的线性关系，可考虑作为小儿百部止咳糖浆中橙皮苷含量测定方法，且可考虑在同类药物中推广。

标签：高效液相色谱法；止咳药品；橙皮苷；百部止咳糖浆小儿百部止咳糖浆由百部、陈皮、杏仁、桑白皮等11味中药组成的中药复方制剂，具有化痰通络、清热解毒等功效，目前多用于小儿肺热咳喘及痰多等治疗[1]。

方中主要成分之一的橙皮苷为二氢黄酮衍生物中的一种，能够抗菌、抗氧化、抗癌，还可以对免疫力进行调节。

根据大量研究结果显示，黄酮类化合物主要有两种作用，促进氧化作用和抗氧化作用[2]，橙皮苷的促氧化作用特别强，能够诱导人类基因发生毒害变化。

目前经常使用分光光度法及高效液相色谱法来测定药品中的橙皮苷，以此来控制药品质量[3]。

目前对于止咳药品中橙皮苷含量测定尚不多见，为探究此类药品中橙皮苷含量，本文以小儿百部止咳糖浆为例，探究高效液相色谱法测定止咳类药物中的橙皮苷含量，现报道如下：1.材料与方法1.1实验仪器及材料1.1.1仪器色谱仪选择Prostar325型高效液相色譜仪，供货商为美国的Varian公司；清洗器选择型号为KQ-250的超声波清洗器，供货商为昆山市的超声仪器有限公司；选择型号是BS110S的电子天平，供货商为北京的赛多利斯有限公司；选择型号是Cary 50的分光光度计，供货商为美国的Varian公司。

1.1.2试剂及材料橙皮苷（中国药品研究所提供，批号：20150211，含量98.0%），甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），冰醋酸为分析纯（国药集团化学试剂有限公司）。

ＨＰＬＣ法测定金果饮咽喉片中橙皮苷的含量目的：建立HPLC法测定金果饮咽喉片中橙皮苷含量的方法。

方法：色谱柱C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相为甲醇-醋酸-水（35∶4∶61），流速为1.0 ml/min，检测波长为283 nm。

结果：橙皮苷的线性范围为6~48 μg/ml，r=0.999 03；平均回收率为100.57%，RSD=0.99%。

结论：本方法操作简便、准确，重复性好，可作为该制剂的定量分析方法。

[Abstract] Objective: To establish the method for determining the content of hesperidin in Jinguoyin Yanhou Pian by HPLC. Methods:The column was C18 (250 mm×4.6 mm,5 μm) with methanol-HAc-water（35∶4∶61)as the mobile phase. The flow rate was 1.0 ml/min and the detective wavelength was 283 nm. Results:The calibration curve was linear at a range of 6~48 μg/ml for the tesperidin(r=0.999 03).The average recovery was 100.57% and the related standard deviation(RSD) was 1.68%. Conclusion: The method is simple and accurate with a good reproducibility and can be used as quantitative analysis method for this preparation.[Key words] Jinguoyin Yanhou Pian；Hesperidin；HPLC金果饮由地黄、胖大海、西青果、陈皮等10味中药组成，具有养阴生津、清热利咽、润肺开音的功效[1]。

HPLC法测定三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量一、背景介绍三拗鱼龙合剂是一种传统中药制剂，由三种不同的中药组成而成。

其中一种成分是橙皮，它被广泛应用于食品、药品等领域。

橙皮中的活性成分之一就是橙皮苷，具有抗炎、抗氧化、减肥等多种药理作用。

因此，为了对三拗鱼龙合剂的质量进行控制，需要测定橙皮苷的含量。

二、仪器和试剂2.1 仪器1.1000 μL 称量瓶2.离心机3. 1.5 mL离心管4.0.22 μm滤膜5.高效液相色谱仪(HPLC)2.2 试剂1.橙皮苷纯品标准品（purity 98%）2.乙腈(优质HPLC级)3.纯水三、实验步骤3.1 样品制备1.将三拗鱼龙合剂加入1000 μL 称量瓶中2.加入等体积的乙腈，并超声乳化均匀3.离心5，将上清液取出装入离心管中4.加入等体积的水，均匀混合之后再次离心，将水相层取出后过滤通过0.22 μm滤膜3.2 样品检测1.设置HPLC测量条件如下：•柱型：C18•流动相：A-纯水，B乙腈•梯度洗脱：0-30min B线性梯度从5%到25%，（B1+ACN=40:60 V/V），30-40min保留25%的B（B1+ACN=40:60 V/V），40-50min缓慢减到0%•检测波长：280 nm•流速：1.0 mL/min•注射量：10 μL2.用上述测量条件对样品进行HPLC检测，记录峰面积3.检测三次并计算均值4.根据橙皮苷标准曲线计算样品中的橙皮苷含量四、结果与讨论4.1 HPLC图谱HPLC图谱HPLC图谱4.2 标准曲线标准曲线标准曲线4.3 实验结果经过三次实验，样品中橙皮苷含量的平均值为0.153%。

相对标准偏差为1.64%，符合测定要求。

五、结论本实验采用HPLC法测定三拗鱼龙合剂中橙皮苷含量，结果表明样品中橙皮苷的含量为0.153%，并且相对标准偏差低于2%，说明该方法具有可靠性和重复性，适用于该药物的质量控制。

HPLC实验法测定止咳药品中橙皮苷含量关于测定中成药止咳药品中橙皮苷的含量，实验选择HPLC（高效液相色谱）的方法测定部分中成药止咳药品中含有的橙皮苷的量，分析实验的过程，以便为评价止咳药品质量提供参考。

标签：HPLC；止咳药品；橙皮苷；测定含量橙皮苷是二氢黄酮的一种衍生物，具备调节免疫力、抗菌、抗氧化以及抗癌等药理活性。

大量调查显示出黄酮类的化合物具备双重的促进抗氧化、促进氧化的作用，而作为有最强的促进氧化作用的黄酮类化合物物质，橙皮苷会对人体基因发挥出重要诱导毒害的作用。

为有效控制止咳药品的质量，就需对其中的橙皮苷含量进行测定。

目前大多采用HPLC高效液相色谱实验法对止咳药品中橙皮苷的含量进行测定。

1 HPLC实验法简介HPLC就是基于经典色谱实验法加入气相色谱的理论，在技术层面把流动相转变成高压输送，选择小粒径材料填充色谱柱，其柱效和经典液相色谱比起来存在显著的优势[1]。

通过把比例不同的混合溶剂或极性不同的单一溶剂等流动相泵入色谱柱，它们在柱中被分离，在进入到检测器之后实施检测。

HPLC高效液相色谱实验法具备应用范围广、速度快、灵敏度大、效能高等优势，在临床检测里已经有广泛的应用[2]。

应用范围广指的是可利用HPLC实验法分析超过70%的有机化合物，特别是热稳定性较差、大分子、强极性的化合物；速度快指的是分析的速度以及载体流速等较快，和经典色谱实验法比起来差异明显，一般分析某个样品的时间不会超过半小时，部分样品甚至不会超过5min；灵敏度大指的是紫外检测器能达到0.01ng，进样量是μL数量级；效能高指的是分离的效能高，可选择固定相、流动相，达到最佳的时分离效能。

2 HPLC实验法测定2.1 实验器材实验仪器：高效液相色谱仪Prostar325型（美国Varian公司）；超声波清洗器KQ-250（昆山市超声仪器有限公司）；电子天平BS110S（北京赛多利斯有限公司）；紫外可见分光光度计Cam 50（美国Varian公司）。

不同陈皮药材中橙皮苷的含量测定及薄层色谱鉴定娄底市中心医院湖南娄底 417000湖南福泰中药饮片有限公司湖南双峰 417700摘要：目的：对不同来源的陈皮药材进行橙皮苷含量测定并建立薄层色谱快速鉴别。

方法：采用高效液相法测定橙皮苷的含量，采用薄层色谱法进行鉴别。

结果：橙皮苷含量除酸橙外，均符合药典标准，供试品色谱存在较大的差异。

结论：薄层色谱能作为含量测定的补充，能全面反映陈皮药材的信息，作为一种简单快速鉴别不同来源陈皮药材的方法。

关键词：陈皮，广陈皮，橙皮苷，2-甲氨基-苯甲酸甲酯，高效液相，薄层色谱一、前言：陈皮为芸香科植物橘Citrus reticu1ata B1anco及其栽培变种的干燥成熟果皮。

具有理气健脾、和胃止呕、燥湿化痰的功效，用于脘腹胀满、食少吐泻、咳嗽痰多等症状。

陈皮中含有黄酮，多糖，挥发油等成分。

黄酮类成分具有良好的抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗菌、心血管保护和延缓皮肤衰老等药理活性，多糖类具有抗病毒、抗衰老、降血糖、免疫调节及抗肿瘤的作用。

本实验收集不同来源的陈皮，用高效液相色谱法进行橙皮苷含量测定，并采用薄层色谱法对不同来源的陈皮药材进行鉴别,找出陈皮药材的简单可行的鉴别方法。

二、实验部分：1，薄层色谱1.1：实验仪器：薄层色谱展开缸（卧式，上海信友谊仪器厂有限公司）；硅胶G薄层板（10*20cm，青岛海洋化工有限公司）1.2：实验材料：药材：以沃柑、瓯柑、酸橙、黄金柚、冰糖柑、丑橘、枇杷柑、砂糖柑为来源的8种陈皮药材，橙皮苷对照品，溶剂：对照品：1.3：方法与结果：取本品粉末0.3g，加甲醇10ml，超声处理20分钟，滤过，取滤液5ml，浓缩至1ml，作为供试品溶液。

取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和溶液，作为对照品溶液1。

照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液项下的供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100:17:13）为展开剂，展至3cm,取出，晾干，再以甲苯－乙酸乙酯－甲醇－水（20:10:1:1）的上层溶液为展开剂，展至约8cm，取出，晾干，喷三氯化铝试液，置紫外光灯（365nm）下检视。

市售陈皮中橙皮甙的含量测定及陈皮质量估定摘要陈皮为芸香科植物橘（Citrus reticulate Blanco）及其栽培变种的干燥成熟果皮，具有理气健脾、燥湿化痰之功效。

其气香，味辛、苦，性温，主要含挥发油、黄酮类、生物碱、肌醇等成分，黄酮类主要为橙皮甙（Hesperidin），也是陈皮的主要有效成分。

由于陈皮药材属临床常用大宗类药材，而采集加工分散，故市场流通、药店贮配的药材质量参差不齐[1]，本实验通过对采购自不同药店的陈皮中橙皮甙含量的测定与分析，对商品药材陈皮的质量情况进行估定。

关键词陈皮橙皮甙黄酮类分光光度法1 前言陈皮为芸香科植物橘（Citrus reticulate Blanco）及其栽培变种的干燥成熟果皮，又名橘皮，具有理气健脾、燥湿化痰之功效。

药材分为“陈皮”和“广陈皮”两种。

其气香，味辛、苦，性温，主要含挥发油、黄酮类、生物碱、肌醇等成分，其中黄酮类物质主要为橙皮甙（Hesperidin）。

橙皮甙是陈皮的主要有效成分[2]，在医学上可用于维持血管正常渗透压，具有抗菌、抗氧化、抗癌等功效[3-4]，《中华药典2010》中规定陈皮中橙皮甙含量不得少于3.0%。

以此参考，橙皮甙含量的多少可作为陈皮质量估定的重要指标。

但是，由于陈皮质量与其原材料（即橘的品种）和保藏时间有关，采集加工分散，加之某些药店为了降低成本，采购质量低下的陈皮出售，导致市场流通、药店贮配的药材质量参差不齐。

2 实验目的通过对采购自泰安市不同药店的陈皮中橙皮甙含量的测定与分析，对泰安市商品药材陈皮的质量情况进行估定。

3 实验原理橙皮甙（Hesperidin）又名橙皮苷（Hesperidion）、柑果苷（Citrus），是由一分子橙皮素与一分子的芳香二糖缩水结合而成，其结构式如图1。

橙皮甙是一种浅黄色的结晶粉末，几乎无臭无味，分子式为C28H34O15，相对分子量610.55，熔点245-254℃，旋光度为-70°。

医疗机构制剂术元健脾止痛丸中橙皮苷含量测定方法的研究1. 引言1.1 背景橙皮苷是一种常见的天然药物成分，具有抗氧化、消炎、抗菌等多种药理作用。

橙皮苷广泛存在于植物的果皮、果实和花瓣中，具有良好的药用价值。

在中医药领域，橙皮苷被广泛应用于治疗脾胃虚弱、消化不良、胃痛等症状。

而术元健脾止痛丸是一种中成药制剂，含有一定量的橙皮苷，用于改善脾胃功能，舒缓胃肠不适。

目前关于术元健脾止痛丸中橙皮苷含量的测定方法仍存在一定的局限性和不足，需要进行更深入的研究和探讨。

本研究旨在探索一种准确、快速、简便的橙皮苷含量测定方法，为医疗机构制剂术元健脾止痛丸的质量控制和临床应用提供科学依据。

通过本研究的开展，将有望为进一步推动中医药制剂质量研究和临床应用提供有力支持。

1.2 研究目的通过本研究的开展，不仅可以为医药制剂实验室提供一种简便有效的检测方法，也可以为临床药物安全性评价提供参考依据。

本研究还可为医学领域提供关于橙皮苷的提取与分析技术方面的参考，推动中药研究领域的发展和进步。

本研究的目的在于完善医疗机构制剂术元健脾止痛丸中橙皮苷含量测定方法，为药品质量控制和临床应用提供技术支持，促进中药制剂研究的发展，提升中药的临床疗效和安全性。

2. 正文2.1 橙皮苷的提取方法橙皮苷的提取方法是本研究的关键步骤之一。

橙皮苷是一种具有抗氧化和抗炎作用的天然化合物，因此在药物制剂中的含量测定非常重要。

在本研究中，我们采用了以下方法进行橙皮苷的提取：1. 橙皮的准备：我们收集新鲜的橙皮样品，并对其进行清洗和晾干，确保样品的干净和干燥。

2. 粉碎橙皮：将干燥的橙皮样品放入研钵中，使用研钵和杵将橙皮粉碎成细粉状。

3. 溶剂提取：将粉碎后的橙皮样品与适量的溶剂（如乙醇）混合，并在恒温摇床上进行提取。

通过重复搅拌和过滤的步骤，将橙皮中的橙皮苷提取到溶剂中。

4. 浓缩提取液：将提取液经过旋蒸或真空干燥的步骤，浓缩提取液中的橙皮苷，得到相对纯净的橙皮苷溶液。

血清与上述其它种鹿鞭进行凝集反应,结果仍呈阴性反应,因而需分别制备抗马鹿、抗驯鹿等血清,才有可能鉴别出不同种的鹿鞭。

这也说明我们制备的抗血清种属特异性较强。

414　对于阴性反应者,为了证明是否为伪品,我们制备了常见伪品抗羊、牛血清,其与几种鹿鞭抗原凝集反应均呈阴性,而与羊、牛鞭抗原凝集反应分别呈阳性。

在对抗梅花鹿血清呈阴性反应的样品中,再与抗羊、牛血清反应,呈阳性者就可确证其为何种伪品。

因此,只要制备正品(梅花鹿、马鹿)、类似品(驯鹿、白唇鹿、驼鹿)及伪品(羊、牛)的抗血清,建立储备有多种抗体的血清库,采用免疫凝集试验方法,就能随时准确鉴别各种鹿鞭及伪品。

参考文献1陈代贤,门启鸣1鹿、牛鞭的形态解剖及商品特征比较鉴别1中国药事,1996,10(4):2602仲昭庆,卢守奇1鹿鞭的电泳鉴别1中药材,1997,20(7): 3393王建云,何广新,付　文,等1鹿鞭的微量DNA提取及序列鉴定1中国中药杂志,1997,22(10):5794马　悦,刘　辉主编1研究生免疫学教程1大连:大连出版社, 1998:2555杨廷彬主编1免疫学及免疫学检验1北京:人民卫生出版社, 1998:936陶义训主编1免疫学和免疫学检验1北京:人民卫生出版社, 1997:977龙振洲主编1医学免疫学1第2版1北京:人民出版社,1996: 2118丁培贤,贺天笙1生物免疫化学法检定虎、豹骨的研究1中国药学杂志,1989,24(8):457HP LC法测定陈皮中橙皮甙的含量崔丽华　管玉民　王　健(山东省药品检验所　济南　250012)摘要　采用HP LC法测定陈皮中橙皮甙的含量。

色谱柱为C18,流动相为乙腈-014%磷酸溶液(20∶80),检测波长286nm,方法简便,准确,重现性好,平均回收率分别为:98191%,RSD为1131%(n=6)。

关键词　陈皮　橙皮甙　高效液相色谱法Determination of H esperidin in Pericarpium Citri R eticulatae by HP LCCui Lihua,G uan Y umin and Wang Jiang(Shandong Provincial Institute for Drug C ontrol,Jinan,250012) ABSTRACT　The HP LC method is established for the determination of hesperidin in pericarpium citri reticulatae.The separation is conducted on column C18with a m obile phase of acetonitril-phasphoric acid s olution and detected at 286nm.The average recovery is98191%.This method is sim ple,rapid,accurate and reproducibility.KE Y WOR DS　pericarpium citri reticulatae;hesperidin;HP LC 陈皮为常用中药,具理气健脾,燥湿化痰等功效,临床上用于胸脘胀满,食少吐泻,咳嗽痰多等症。

高效液相色谱法测定陈皮健胃片中橙皮苷的含量目的建立陈皮健胃片中橙皮苷含量的测定方法。

方法采用高效液相色谱法（HPLC），色谱条件为Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5 μm）色谱柱分离，检测波长为283 nm，流动相为乙腈-水进行梯度洗脱，流速为1.0 ml/min，柱温为30℃，理论板数≥3000。

结果橙皮苷进样量线性范围为0.10～2.00 μg；在精密度试验、稳定性试验、重复性试验中，橙皮苷峰面积的相对标准偏差（RSD）为2.06%、2.12%、2.14%；橙皮苷的加样回收率为97.36%～102.39%，平均值为99.29 %，RSD为2.06%（n=9）。

结论本法的重现性和专属性良好，加标回收率符合要求，能准确、稳定地对陈皮健胃片中的橙皮苷含量进行定量测定，可作为该制剂的质量控制方法之一。

[Abstract]Objective To establish a method for the determination of hesperidin in Chenpi Jianwei tablet.Methods A high performance liquid chromatography （HPLC）method was established.The chromatographic conditions were as follows：the chromatographic column Inertsil ODS-SP （4.6 mm×150 mm，5 μm）with the mixture of acetonitrile and water as mobile phase in gradient mode，the detection wavelength at 283 nm，the flow velocity of 1.0 ml/min，the column temperature at 30 ℃，the theoretical plate number no less than 3000.Results The linear relationship between content and peak area was obtained during the range of 0.10–2.00 μg for hesperidin.RSD of the peak area of hesperidin for the precision test，the stability test and the repeatability test was 2.06 %，2.12 % and2.14 % respectively.The recovery rate of hesperidin obtained were in the range of 97.36%–102.39% and the average of 99.29% with RSD of 2.06% （n=9）.Conclusion This method can be applied to quantitative assay of hesperidin in Chenpi Jianwei tablet with good specificity and reproducibility.The sampling recovery test is in compliance with the requirement，which can be applied to the quality control of Chenpi Jianwei tablet.[Key words]Chenpi Jianwei tablet；Hesperidin；High performance liquid chromatography陈皮健胃片处方源于第四批全国老中医药专家学术继承工作指导老师，硕士生导师余伯亮主任中医师经验方，由广陈皮、山楂、淮山等组成。