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![【小初高学习]2017-2018学年高中生物 第一章 无茵操作技术实践 第一节 微生物的培养和应用素](https://img.taocdn.com/s1/m/af059a3db52acfc789ebc9fa.png)
教育精品学习资源教育精品学习资源微生物的培养与应用——微生物培养基的类型由于各种所需要的营养不同，所以培养基的种类很多。
据估计目前约有数千种不同的培养基，这些培养基可根据所含成分、物理状态、以及不同的使用目的等而分成若干类型。
1.按照培养基的成分来分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基和半合成培养基三类。
(1)合成培养基。
合成培养基的各种成分完全是已知的各种化学物质。
这种培养基的化学成分清楚，组成成分精确，重复性强，但价格较贵，而且微生物在这类培养基中生长较慢。
如高氏一号合成培养基、察氏（Czapek）培养基等。
(2)天然培养基。
由天然物质制成，如蒸熟的马铃薯和普通牛肉汤，前者用于培养霉菌，后者用于培养细菌。
这类培养基的化学成分很不恒定，也难以确定，但配制方便，营养丰富，所以常被采用。
(3)半合成培养基。
在天然有机物的基础上适当加入已知成分的无机盐类，或在合成培养基的基础上添加某些天然成分，如培养霉菌用的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。
这类培养基能更有效地满足微生物对营养物质的需要。
2.按照培养基的物理状态分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。
(1)固体培养基。
是在培养基中加入凝固剂，有琼脂、明胶、硅胶等。
固体培养基常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存等方面。
(2)液体培养基。
液体培养基中不加任何凝固剂。
这种培养基的成分均匀，微生物能充分接触和利用培养基中的养料，适于作生理等研究，由于发酵率高，操作方便，也常用于发酵工业。
(3)半固体培养基。
是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈半固体状态。
可用于观察细菌的运动、鉴定菌种和测定噬菌体的效价等方面。
3.按照微生物的种类分培养基按微生物的种类可分为细菌培养基、放线菌培养基、酵母菌培养基和霉菌培养基等四类。
常用的细菌培养基有营养肉汤和营养琼脂培养基；常用的放线菌培养基为高氏1号培养基；常用的酵母菌培养基有马铃薯蔗糖培养基和麦芽汁培养基；常用的霉菌培养基有马铃薯蔗糖培养基、豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）琼脂培养基和察氏培养基等。
第1课时培养基的配制和灭菌[学习导航] 1.阅读教材P4、P7内容，掌握培养基的作用、营养成分、种类及制备。
2.阅读教材P5、P9内容，区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。
[重难点击] 1.掌握制备培养基的原理。
2.区分消毒和灭菌。
一、培养基在实验室条件下进行科学研究或在工业生产上大规模制造微生物产品都需要用到培养基。
1.概念：是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定和保存各种微生物。
2.成分(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源、微量元素和无机盐等，有时候还需要加入特殊的营养物质。
(2)判断下面培养基的各种成分能提供的营养物质类别3.分类：不同种类微生物的生长繁殖对营养的要求不同，通过选择不同的培养基，人为控制培养基的pH、碳源、氮源、渗透压等条件，使选择的培养基利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他微生物的生存，可以达到分离、培养不同微生物的目的。
(1)根据物理状态分为液体培养基和固体培养基，主要区别是后者加入了凝固剂琼脂。
(2)用途①液体培养基：用于各种生理、代谢研究和获得大量菌体；用于发酵工业生产。
②固体培养基：应用于微生物的分离、纯化、培养、保存和鉴定等。
另外，一些由天然固体基质制成的培养基也属于固体培养基。
1.培养基的成分与作用(1)试根据微生物的同化作用类型将微生物进行分类。
答案分为自养型微生物和异养型微生物。
(2)试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点。
2.牛肉膏蛋白胨培养基(1)牛肉膏蛋白胨培养基中提供碳源和氮源的物质各是什么？ 答案 牛肉膏和蛋白胨都可以为微生物提供碳源和氮源。
(2)牛肉膏蛋白胨培养基中主要提供碳源和主要提供氮源的物质各是什么？ 答案 主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。
1.下列关于培养基的说法正确的是( ) A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C.除水以外的无机物只能提供无机盐 D.无机氮源不可能提供能量 答案 A解析 根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如NH 4HCO 3，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如NH 3可以为硝化细菌提供能量。
选修一专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养（第1课时）教学设计学习目标：1、了解有关培养基的基础知识2、进行无菌技术的操作3、进行微生物的培养教学方法：讲授法、讨论法、直观演示法、任务驱动法、自主学习法、练习法等引课：师：（PPT展示两幅学生熟悉的綦江农民版画）在开始今天的学习之前，邀请同学们欣赏两幅画，并发问：同学们认识这些画吗？生:綦江版画师：（展示两幅培养基上培养的微生物）请大家继续欣赏，这又是什么画？学生仔细观察后生1：是细菌画，微生物画生2：是培养基画……师：大家都说的很好，这两幅画是不同的微生物在培养基生长繁殖而形成的画。
这两幅画跟咱们的綦江版画营养色彩鲜艳，栩栩如生。
老师给它们取名为“菌绣”。
如何在实验室条件培养获得这样的菌绣呢？让我们一起走进今天的学习——微生物的实验室培养。
一、了解微生物1、概念2、类群3、特点师：如何在实验室条件“养活”如此微小的微生物呢？事实1：绿色植物是自养型生物，提供一定的光照和土壤条件能生存。
事实2：动物是异养型生物，需提供有机物才能生存。
微生物的代谢类型是什么呢？实验室要提供怎样的条件供其生长？事实3：微生物无处不在，无孔不入。
如何保证在实验室培养纯净的某种微生物？二、基础知识课前自主学习检测（一）-----培养基1、培养基是_________________________________________________________。
2、按照物理性质分，培养基分为____________和___________________。
两者的区别在于是否加入______________。
3、培养基中一般含有满足微生物生长所需的营养物质，包括_____________________，此外培养基还需要满足微生物生长对__________________的要求。
（教师请一个学生阐述什么是碳源和氮源，并引导学生举例哪些我们学习过的物质可以做碳源和氮源，为后面的实验设计做准备。
第1单元课题名称《培养基的配制与灭菌》总课时数2第（1）课时教材及学情分析教材分析：本节《培养基的配制与灭菌》是北师大教材第1章第1节的内容，正确掌握培养基的配制方法，是从事微生物学实验工作的重要基础。
用于培养微生物的培养基种类很多，配方也各有差异，但一般培养基的配制程序大致相同，例如：器皿的准备、培养基的配制与分装、棉塞的制作、培养基的灭菌，斜面与平板的制作以及培养基的无菌检查等基本环节大致相同。
因此，本节的学习对后续微生物的培养、分离、鉴定和保存的学习有着不可忽视的重要作用。
学情分析：高二学生已知微生物的基础知识较少，用于培养微生物的培养基在学生脑海中就是一个抽象的概念，而高压蒸汽灭菌法和超净工作台倒平板等无菌操作技术更是学生未听闻的。
这就需要教师在本节课多提供学生较多的直观材料和视频，帮助学生掌握培养基的配制流程和灭菌技术，为微生物的后续学习打下基础。
教学目标1.掌握培养基配制的一般原则和步骤。
2.掌握常见消毒和灭菌的方法（如：高压蒸汽灭菌法、超净工作台倒平板）。
教学重点1.培养基配制的一般原则和步骤。
2.高压蒸汽灭菌法、超净工作台倒平板。
教学难点高压蒸汽灭菌法、超净工作台倒平板。
教法学法PPT、自主学习、合作探究教学资源及课前准备（1）本实验相关的操作视频和图片（2）学生课上练习的用具：锥形瓶、试管、培养皿若干、报纸、棉花、棉线教学环节教学过程设计引入：（一）培养基1、培养基的营养成分2、培养基微生物在我们生活中无处不在，在实验室条件下培养微生物都需要用到培养基。
那么，什么是培养基呢？如何制备培养基？引入《培养基的制备与灭菌》的学习。
（一）培养基定义：培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质，用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物。
师强调：人工配制、适合微生物生长、繁殖1、培养基的营养成分：水、碳源、氮源、微量元素、无机盐（学生作答）2、培养基的种类：的种类（二）无菌技术（三）操作步骤：①根据物理性质分：固体培养基、液体培养基（是否添加琼脂）②根据化学成分分：合成培养基——成分明确，常用于分类，鉴定天然培养基——成分不明确，常用于工业生产（如牛肉膏、蛋白胨等）师：介绍培养基有不同的划分标准，举例本实验配制的牛肉膏蛋白胨培养基（添加琼脂）属于天然、固定培养基。
《课题1微生物的实验室培养第1课时》教学设计一、教材分析1.教材内容分析本节是普通高中生物选修1生物技术实践专题2《微生物的培养与应用》课题1《微生物的实验室培养》的内容。
是学生在学习了“传统发酵技术的应用”，了解到微生物在我们生活中有广泛应用之后，将要学习的一个内容。
本专题要求学生能够掌握培养基、消毒灭菌等有关微生物培养的基础知识；掌握培养基的制备、高压蒸汽灭菌和倒平板操作、平板划线法、平板划线操作和稀释涂布平板法等基本操作技术；并可以运用相关技术解决生产生活中有关微生物计数、微生物的分离与培养等实际问题。
在这个专题的3个课题中，《课题1微生物的实验室培养》介绍了最基本的微生物技术，是开展其他两个课题的基础。
学生只有掌握了课题1的内容，才能完成本专题中其他课题的学习。
根据对教材的分析确定了如下的教学目标和教学重难点【知识目标】1、学生能够描述出培养基的一般成分、种类及用途。
2、能够区别解释消毒和灭菌的不同之处。
3、学生能够列出实验室常用的消毒和灭菌方法。
4、写出培养基制作的一般的步骤。
【能力目标】1、让学生能够对培养基的配制、倒平板等进行具体的实际操作。
2、学会在生活或实验室使用不同的消毒和灭菌方法。
【情感、态度与价值观目标】1、让学生关注生活中与微生物有关的信息，并形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。
2、让学生养成良好的生活习惯。
二、学情分析高二的学生，在之前的学习中并没有学习微生物的基础知识，因此，已知微生物的基础知识较少，对微生物的培养技术则更是不了解的。
在上本节课之前，学生已经学习了传统发酵技术，并了解到微生物与我们的生产生活息息相关。
但是，由于微生物是微小的，在平时的生活中是观察不到，因此在学生的脑海里微生物只是一个较为抽象的概念。
这就需要教师在这节课上首先提供给学生较多的直观材料，帮助其对微生物基础知识的掌握。
在学生掌握了微生物相关的基础知识后，再进一步学习微生物实验室培养的知识。
第 1 课时大肠杆菌的培育和分别考试要求知识内容考试属性及要求考情解读1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培育基进行细菌培育的操作。
大肠杆菌的培育加试 2.进行大肠杆菌的分别，用固体平面培育基和分别进行细菌的画线培育。
3.说明大肠杆菌培育的条件和实验原理。
一、微生物培育的基本条件1.微生物基础知识(1)微生物的特色：构造简单，形体细小。
往常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞构造。
体内一般不含叶绿素，不可以进行光合作用。
(2)细菌的外形与大小①外形分类②大小：单细胞不分枝的原核微生物，细胞细小而透明。
往常用适合染料染色后，再显微镜察看。
(3)细菌的生殖：细菌以分裂的方式生殖，分裂速度很快，约20 分钟分裂一次。
(4)菌落①观点：单个或少量细菌在固体培育基上大批生殖时，就会形成一个肉眼可见的，拥有必定形态构造的子细胞集体，叫做菌落。
(如图 )②作用：细菌的菌落特色因种而异，菌落是判定菌种的重要依照。
2.培育基的种类(1)按物理性质分类种类能否含凝结剂用途固体培育基是主要用于微生物的分别与判定等液体培育基否主要用于扩大培育或工业生产(2)按培育基的用途分类种类制备方法用途选择培育基加入某种化学物质从众多的微生物中分别所需微生物鉴识培育基加入某种试剂鉴识不同种类的微生物3.无菌技术(1)含义：无菌技术不单能防备实验室的培育物被其余外来微生物污染，保持微生物的纯培育，并且在分别、转接时亦能防备其余微生物污染。
(2)无菌操作①对实验空间、操作台可用紫外线或酒精消毒，操作者的手用酒精消毒。
②实验用的培育器皿和培育基一般用高压蒸汽灭菌法灭菌，接种环用灼烧方法灭菌。
③为防止四周环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰邻近进行。
④实验操作时应防止已经灭菌办理的资料器具与四周的物件相接触。
1.联合所学知识，达成以下图横线上大肠杆菌的构造名称，而后思虑：(1)大肠杆菌与酵母菌对比，在构造上最主要的差别是什么？答案大肠杆菌是原核生物，与酵母菌对比，最主要的差别是没有由核被膜包被的细胞核。
科目生物公开课类别对外公开课执教者黄珍授课班级高二10授课地点授课日期课题培养基的配制和灭菌教学目标了解有关培养基的基础知识，进行无菌技术的操作，进行微生物的培养重点、难点重点：无菌技术的操作难点：无菌技术的操作教学模式、程序启发式教学辅助手段多媒体教学内容、过程，板书引入：复习：(2011江苏)下列与果酒、果醋和腐乳制作相关的叙述，正确的是A．腐乳制作所需要的适宜温度最高B．果醋发酵包括无氧发酵和有氧发酵C．使用的菌种分别是酵母菌、醋酸菌、乳酸菌D．使用的菌种都具有细胞壁、核糖体、DNA和RNA过渡：工业化生产：发酵质量高，需要做到需要获得优良菌种，保持菌种的纯度防止杂菌污染，获得纯净的培养物一、培养基1、概念——按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质2、种类：固体培养基（加琼脂）和液体培养基3、基本成分：思考：（1）从构成细胞的最多的四种元素是哪些？由此推测培养基应含哪些基本成分？水、无机盐、氮源、碳源（2）分析下面4类物质主要提供什么？二、无菌培养技术阅读课本：P15-161、消毒与灭菌的区别？常用方法？2、判断下列各项是否需要消毒或灭菌。
如需要，选择合适方法。
（1）牛奶（2）游泳池（3）实验操作者的双手（4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶（5）培养细菌用的培养皿教学内容、过程，板书（6）无菌水（7）牛肉膏蛋白胨培养基（8）接种环、接种针（9）接种室三、实验操作——大肠杆菌的纯化培养思考：1、配制牛肉膏蛋白胨固体培养基，左边的配方缺少了什么？2、制备100ml牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是A.计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B.计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C.计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D.计算、称量、灭菌、溶化、倒平板3、如果需要对培养基进行调pH在灭菌前还是灭菌后？过渡：某同学操作不当使大肠杆菌中混有多种微生物，通过什么方法纯化大肠杆菌呢三、纯化细菌——在培养基上，将细菌分散或稀释成单个细胞，使其长成单个菌落◇接种方法：①平板划线法②稀释涂布平板法板书：一、培养基1、概念2、类型3、基本成分二、无菌技术1、目的2、消毒和灭菌的对比三、纯合细菌①平板划线法②稀释涂布平板法课外作业练习册对应练习教学反思讲解需精炼注：本表于公开课后一周内交科组长。
第一章无菌操作技术实践知识系统建立必背要语1.细菌培养基的配制过程：配制培养基→调理pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
2.消毒和灭菌的实质不一样：前者只杀死绝大多半微生物，后者则杀死所有的微生物。
3.微生物的接种方法有穿刺接种、斜面接种、涂布平板接种和平板划线接种。
4.用涂布平板法形成的细菌菌落往常仅在平板表面生长，而混淆平板法形成的细菌菌落出此刻平板表面及内部。
5.微生物分别的原理是供给有益于目的菌株生长的条件，同时克制或阻挡其余微生物生长。
方法是使用选择培养基。
6.统计菌落数目的方法可分为活菌计数法和显微镜直接计数法。
前者的原理是涂布平板法接种，一个菌落代表一个单细胞；后者的原理是利用血球计数板，在显微镜下计数。
7.植物组织培养的基本过程：外植体脱分化再分化分化――→愈伤组织――→胚状体――→试管苗。
8.生长素、细胞分裂素是启动生长、细胞分裂、脱分化、再分化的重点激素。
进行组织培养时要装备三种培养基，分别是愈伤组织形成培养基、引诱生根培养基和引诱生芽培养基。
9.天竺葵的组织培养过程：准备(器具准备、试剂准备)→配制培养基→灭菌→取材与接种→察看与记录→转接培养。
规律方法整合整合一微生物的纯培养技术与无菌操作技术1.微生物的纯培养技术(1)自然环境中的微生物是混淆在一同的，所以分别获取纯培养物的基根源理：第一采纳必定方法将单个的细胞与其余细胞分别开，从而供给细胞适合的营养和条件，使其生长成为可见的集体。
(2)微生物的分别主要采纳稀释的方法，而固体培养基能够使分别的细胞固着于必定的地点，与其余的细胞分别，从而生长成为一个单细胞根源的集体即纯培养物。
①平板划线法：将适合的无菌培养基倒入无菌培养皿中，冷却后制备成平板。
平板划线法中细胞的分别和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和挪动过程中，产生的单个细胞在培养基表面生长的后辈就是纯培养物。
②涂布平板法：该法用在将细胞接种到培养基以前，经过液体稀释的方法分别细胞，最常用的液体稀释方法为10倍系列稀释，跟着稀释程度的增大，单位体积中的微生物细胞数目减少，细胞得以分别。
第1课时培养基的配制和灭菌[学习导航] 1.阅读教材P4、P7内容，掌握培养基的作用、营养成分、种类及制备。
2.阅读教材P5、P9内容，区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。
[重难点击] 1.掌握制备培养基的原理。
2.区分消毒和灭菌。
一、培养基在实验室条件下进行科学研究或在工业生产上大规模制造微生物产品都需要用到培养基。
1.概念：是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定和保存各种微生物。
2.成分(1)培养基一般都含有水、碳源、氮源、微量元素和无机盐等，有时候还需要加入特殊的营养物质。
(2)判断下面培养基的各种成分能提供的营养物质类别3.分类：不同种类微生物的生长繁殖对营养的要求不同，通过选择不同的培养基，人为控制培养基的pH、碳源、氮源、渗透压等条件，使选择的培养基利于某类或某种微生物的生长，而不利于其他微生物的生存，可以达到分离、培养不同微生物的目的。
(1)根据物理状态分为液体培养基和固体培养基，主要区别是后者加入了凝固剂琼脂。
(2)用途①液体培养基：用于各种生理、代谢研究和获得大量菌体；用于发酵工业生产。
②固体培养基：应用于微生物的分离、纯化、培养、保存和鉴定等。
另外，一些由天然固体基质制成的培养基也属于固体培养基。
1.培养基的成分与作用(1)试根据微生物的同化作用类型将微生物进行分类。
答案分为自养型微生物和异养型微生物。
(2)试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点。
2.牛肉膏蛋白胨培养基(1)牛肉膏蛋白胨培养基中提供碳源和氮源的物质各是什么？ 答案 牛肉膏和蛋白胨都可以为微生物提供碳源和氮源。
(2)牛肉膏蛋白胨培养基中主要提供碳源和主要提供氮源的物质各是什么？ 答案 主要提供碳源的是牛肉膏，主要提供氮源的是蛋白胨。
1.下列关于培养基的说法正确的是( ) A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B.培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C.除水以外的无机物只能提供无机盐 D.无机氮源不可能提供能量 答案 A解析 根据培养基的物理性质，可分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基，在液体培养基中加入不同量的凝固剂如琼脂可形成半固体或固体培养基；除水以外的无机物如NH 4HCO 3，既可以是碳源，也可以是氮源，不仅仅提供无机盐；无机氮源有时也能提供能量，如NH 3可以为硝化细菌提供能量。
方法链接 培养基的种类2.下列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是( )A.①③B.②①C.②④D.③①答案 D解析在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。
高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。
一题多变(1)表格中的蛋白胨主要为微生物提供何种营养成分？答案主要为微生物提供碳源、氮源和维生素。
(2)乳糖和蔗糖在培养基中的作用是什么？答案可以为微生物提供碳源和能源。
(3)如果用培养基培养某种自养微生物，则该配方中的哪种物质可以去除？答案乳糖和蔗糖。
题后总结有关培养基营养物质的四点提醒(1)培养不同的微生物所需要的营养物质可能不同①自养型微生物的培养基主要以无机营养为主。
②异养型微生物的培养基主要以有机营养为主。
(2)对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源、能源。
(3)微生物需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。
(4)微生物需要量最大的是碳源。
能合成含碳有机物的是自养型，反之则为异养型。
二、灭菌由于配制培养基的各类营养物质和容器等含有多种不同的微生物。
配制好的培养基必须立即灭菌，及时杀灭培养基中的微生物，同时防止微生物大量繁殖造成的培养基营养成分的改变。
常用的培养基灭菌方法是高压蒸汽灭菌，其原理是高压蒸汽属于湿热蒸汽，穿透力大，蒸汽由气态变为液态时能放出大量的热，可以迅速提高温度；灭菌时还需要一定的压力来达到高温的要求。
1.“无菌操作”与人们的生活休戚相关，无时无处不在。
在日常生活、生产实践、自身健康防护中，有哪些“无菌操作”的例子？答案日常生活、生产实践、自身健康防护中“无菌操作”的例子分别有：(1)被褥、鞋袜要常晒；肉制品储存时用盐腌等。
(2)家畜阉割后，要在其伤口处涂抹一些酒精或白酒；初冬杨树树干涂刷生石灰水等。
(3)打针时，注射部位要用酒精棉球擦洗，一般要在其伤口处涂抹一些碘酒。
2.消毒和灭菌的原理是什么？消毒和灭菌都能杀死所有的微生物吗？是否适用于所有的生物和物品？答案(1)都是使微生物的蛋白质变性，借此杀死微生物。
(2)灭菌可杀死处理材料中的全部微生物(包括芽孢和孢子)，而消毒仅能杀死物体表面或内部的部分微生物(一般不包括芽孢和孢子)。
(3)不是，无菌技术既要考虑效果，又要考虑操作对象的承受能力。
例如，活体生物材料、操作者的双手等只能消毒，而不能灭菌。
3.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？答案还能有效避免污染环境以及操作者自身被微生物感染。
4.无论是接种微生物还是制备培养基中的倒平板，都要在酒精灯火焰附近进行，请简述理由。
答案在酒精灯火焰附近进行接种或倒平板，目的是造成一个无菌环境，避免操作过程中受到杂菌的污染。
3.高温灭菌的原理是( )A.每种微生物生长的最适温度是一定的B.微生物对于高温环境不适应C.高温破坏了微生物细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动D.高温降低了环境中氧的浓度答案 C解析高温的致死作用主要是使微生物的蛋白质和核酸等重要生物大分子物质发生不可逆转的变性。
4.培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是( )①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线消毒⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A.⑤③②①④⑥B.①②③④⑤⑥C.⑥②③④①⑤D.③④②①⑥⑤答案 A解析培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，常用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；对空气可用紫外线消毒；为了不破坏牛奶的营养成分，可采用巴氏消毒法对其进行消毒。
一题多变(1)接种环灼烧灭菌后为什么不能立即接触菌液？答案因为刚刚灼烧后的接种环温度较高，马上接触菌液会将菌种杀死。
(2)选择无菌操作方法的依据除了无菌操作的目的外还有什么？答案还要依据无菌操作的对象。
特别提醒(1)酒精消毒液中酒精浓度对效果的影响：70%的酒精杀菌效果最好。
原因是浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快而凝固成一层保护膜，酒精不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱。
(2)无菌技术措施的选择原则①考虑效果：灭菌的效果比消毒要好。
②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒的方法，而不能采用灭菌的方法。
三、培养基配制的实验操作不同种类微生物需要的培养基不同，但各种培养基配制的步骤是基本相同的，配制完成后还要严格灭菌。
1.实验原理不同种类微生物生长繁殖对营养的要求不同，要根据微生物的需求来配制合适的培养基，并控制好培养基的pH、碳源、氮源、渗透压等条件。
2.实验步骤——以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例(1)配制计算↓称量：3 g牛肉膏、10 g蛋白胨、5 gNaCl、20 g琼脂↓溶化↓调节pH(2)分装、加塞和包扎①分装：趁热分装到洁净试管内或锥形瓶中。
②加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水。
③包扎：外包牛皮纸，且挂标签。
(3)高压蒸汽灭菌注入开水：与底架平齐↓放待灭菌物品：竖放于灭菌桶中，不能太满↓加盖密封：排气软管插入排气槽，同时旋紧相对的两个螺栓↓排冷空气：打开排气阀，排除锅内冷空气↓高压灭菌：关上排气阀，压力升至100 kPa，温度为121 ℃，维持15～30 min ↓取出灭菌物品：断电后，压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，取出灭菌物品(4)摆斜面或倒平板取出培养基，待培养基冷却至50 ℃～60 ℃，制成斜面(图1)或平板(图2)后备用。
1.培养基灭菌后，需要冷却至50 ℃～60 ℃左右时，才能倒平板的原因是什么？你用什么办法来估计培养基的温度？答案琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃～60 ℃则会烫手，低于50 ℃～60 ℃时若不及时操作，琼脂会凝固。
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2.分析下图，回答(1)、(2)问题：(1)为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答案通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
(2)从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？答案平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
3.怎样判断制备的培养基是否合格、成功，是否受到污染？答案未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后，如果无菌落生长，说明培养基制备成功、合格，未受到污染。
5.某学校开展大肠杆菌培养活动，首先对实验室进行清扫和消毒处理，然后准备各种原料和用具。
请回答下列问题：(1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋白胨固体培养基所需的原料：。
(2)微生物在生长过程中对各种成分需求量不同，配制培养基时各成分要有合适的。
在烧杯中加入琼脂后要不停，防止。
(3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入中灭菌。
灭菌完毕后拔掉电源，待压力表的压力自然降到0时，将试管取出。
如果棉塞上沾有培养基，此试管应。
答案(1)牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂(2)比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂(3)高压蒸汽灭菌锅废弃6.制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基时，关于倒平板的具体描述正确的是( )①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指完全打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A.①③④⑤B.④⑤⑥C.③⑤D.①②④⑥问题导析(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃～60 ℃左右时才能倒平板，原因是琼脂在44 ℃以下凝固。
(2)倒平板的过程要在酒精灯火焰附近进行。
答案 C解析琼脂是一种多糖，在98 ℃以上可熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃～60 ℃则会烫手，低于50 ℃～60 ℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。
无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。
