台盼蓝染色液配制及染色方法.doc

精心整理台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（TrypanBlue)是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：CHNOS Na，分子量:960.82，可溶于水（10mg/ml)。

461443424实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：、配4台盼母：称4台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，双蒸100m 用滤纸过滤℃保存。

使用时PB稀释0.4
、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释
、染色：细胞悬液0.4台盼蓝溶液9:混合混匀。

（终浓0.04
、计数：分钟内，分别计数活细胞和死细胞
精心整理．
精心整理
活细胞拒染呈无色透明状。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，
而死细胞总数）（活细胞总数+/%6、统计细胞活力：活细胞率（）=活细胞总数×100% 注意：1.保存条件：室温保存。

有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

2.精心整理．。

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至
100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

精心整理台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（TrypanBlue)是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：CHNOS Na，分子量:960.82，可溶于水（10mg/ml)。

461443424实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：、配4台盼母：称4台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，双蒸100m 用滤纸过滤℃保存。

使用时PB稀释0.4
、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释
、染色：细胞悬液0.4台盼蓝溶液9:混合混匀。

（终浓0.04
、计数：分钟内，分别计数活细胞和死细胞
精心整理．
精心整理
活细胞拒染呈无色透明状。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，
而死细胞总数）（活细胞总数+/%6、统计细胞活力：活细胞率（）=活细胞总数×100% 注意：1.保存条件：室温保存。

有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

2.精心整理．。

台盼蓝染色操作步骤
2011／5／5来源：上海泛柯生物科技有限公司
台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。

还常用于细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，死细胞会被染成蓝色。

操作步骤：
1、制作4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml,用滤纸过滤，4度保存。

使用时，用PBS 稀释至0.4%
2、胰酶消化单壁细胞，制备单细胞悬液，并适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合均匀。

（终浓度为0.04%）
4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞盒和死细胞
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，活细胞拒染呈无色透明状
6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞数／（活细胞数＋死细胞数）×100%
PBS:磷酸缓冲液。

用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液，取100礚样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法。

一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号#07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。

或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。

例如：1/40稀释样本
加入50礚细胞悬液至950礚IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。

或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。

3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。

4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。

5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。

6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。

7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。

不要过满或不足。

8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。

分别死细胞和活细胞。

死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。

9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL
10.活细胞百分比计算方法如下：
活细胞数÷(活细胞数+死细胞数)x100 =活细胞百分比。

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：
C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水
（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：
1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4%。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和步骤
台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常
用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: ，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进
入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼
蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，
借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最
常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml，用滤
纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色操作要点以台盼蓝染色操作要点为标题，写一篇文章。

台盼蓝染色是一种常见的织物染色技术，它可以为织物赋予独特的色彩和图案，广泛应用于服装、家居用品等领域。

下面将介绍一下台盼蓝染色的操作要点，希望能对大家有所帮助。

一、准备工作在进行台盼蓝染色之前，首先需要准备好以下工具和材料：织物、台盼蓝染料、盐、搅拌棒、容器、保护手套等。

二、染色准备1. 将织物用清水浸泡一段时间，以去除表面的杂质。

2. 准备染料溶液，按照染料包上的说明，将台盼蓝染料和适量的盐溶解在热水中，搅拌均匀。

3. 将织物放入容器中，倒入染料溶液，确保织物完全浸泡在染料中。

4. 用搅拌棒轻轻搅拌织物，使染料均匀渗透。

三、染色过程1. 将染料浸泡时间控制在合适的范围内，根据织物的厚度和需要的颜色深浅来决定。

通常情况下，浸泡时间在30分钟到2小时之间。

2. 染色过程中可以根据需要进行搅拌，以保证染料均匀渗透。

3. 染色完成后，将织物取出，用清水冲洗，直到冲洗水变清为止。

这一步是为了去除多余的染料和盐分。

四、染后处理1. 将染好的织物晾干或用柔软的毛巾轻轻吸干水分。

2. 可以根据需要进行后续处理，如固色处理、熨烫等。

五、注意事项1. 染料和盐的比例要根据染色的要求来确定，不同的染料包可能有不同的比例要求，可以按照包装上的说明进行操作。

2. 在染色过程中，应佩戴好手套，以免染料对皮肤造成刺激。

3. 染料溶液应该在合适的温度范围内使用，避免过热或过冷。

4. 染色过程中要注意织物的均匀受染，避免出现色差。

六、总结通过以上的介绍，我们可以了解到台盼蓝染色的操作要点。

在进行染色之前，需要做好准备工作，如清洗织物和准备染料溶液。

染色过程中要掌握好浸泡时间和搅拌的力度，以保证染料的均匀渗透。

染色完成后，要进行充分的冲洗，去除多余的染料和盐分。

最后，根据需要进行后续处理。

在操作过程中，要注意染料和盐的比例、佩戴手套以及织物的均匀受染等事项。

通过正确的操作，我们可以获得漂亮的台盼蓝染色效果，为织物增添独特的魅力。

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝Trypan Blue 是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于
检测细胞是否存活;活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色;分子式：C34H24N6O14S4Na4,分子量: ,可溶于水10mg/ml;
实验原理：正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成
蓝色;通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡;因此,借助台盼蓝
染色可以非常简便、快速地区分活细胞和;台盼蓝是组织和中最常用的死细胞
鉴定染色方法之一;注意也有台盼蓝拒染现象;台盼蓝染色后,通过显微镜下或
显微镜下拍照后计数,就可以对细胞进行比较精确的定量;台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单;
实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加至100ml,用滤纸过滤,4℃保存;使用时用PBS稀释至 %;
2、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释;
3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀;终浓度%
4、计数：在3分钟内,分别计数活细胞和死细胞;
5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而拒染呈无色透明状;
6、统计细胞活力：活细胞率%= 活细胞总数/活细胞总数+死细胞总数×100%注意：
1.保存条件：室温保存;
2.有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作;。

台盼蓝染色实验原理和步骤This manuscript was revised on November 28, 2020台盼蓝染色实验原理台盼蓝（TrypanBlue)是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量:960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4%。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和步骤一、原理台盼蓝染色实验是利用台盼蓝（Toluidine Blue）染料与细胞或组织中的核酸结合，形成紫蓝色染色体。

台盼蓝染色的染料溶液带有酸性成分，其酸羧基在酸性条件下可与细胞核酸中的碱基形成氢键结合。

台盼蓝染料主要染色核酸，使得细胞核、细胞核周围的细胞质和一些细胞器着色，从而能够观察到细胞核结构、核仁和核膜的位置和形态，以及纤维蛋白、蛋白多肽和糖蛋白的酸性地带。

二、步骤1.组织固定：将需要染色的组织切片取出，用4%的冷醇固定液浸泡20分钟。

2. 渗透：将固定的组织切片用0.1%的Tween 20溶液处理3次，每次5分钟。

Tween 20可以增加细胞膜的通透性，有利于染料进入细胞内。

3.染色：用0.05%的台盼蓝染料溶液将组织切片浸泡5-10分钟，让染料与组织中的核酸结合形成染色体。

染色时间可以根据需要调整，一般情况下5分钟就足够。

4. 洗涤：用去离子水或者含有0.1%Tween 20的PBS缓冲液洗涤组织切片3次，每次5分钟。

这一步是为了去除多余的染料。

5.脱水：用70%、85%和95%的无水酒精将组织切片脱水，每个浓度的酒精浸泡3-5分钟。

6.透明化：将组织切片用苯酚-甲苯中透明化数小时。

透明化液一般是苯酚和甲苯的混合物，可以使组织切片变得透明，便于观察。

7.封片：将透明的组织切片取出，放到玻璃切片上，用封片胶将其封住，然后放置干燥。

8.观察：将封好的玻璃切片放在显微镜下观察，可以用不同倍数的物镜来观察不同部位的细胞和组织结构。

三、注意事项1.染色过程中注意避免阳光直射，避免光照会影响染色效果。

2.处理切片要轻柔，避免切片碎裂或变形。

3.实验操作要严格遵守安全规范，注意保护实验人员的安全。

4.封片时要避免出现气泡，以免影响观察。

综上所述，台盼蓝染色实验是一种常用的染色方法，通过与细胞核酸结合，可以使细胞和组织结构得到清晰可见。

实验步骤简单，但是在操作过程中需要注意一些细节，确保染色效果和实验安全。

台盼蓝染色实验原理和步骤蓝染是一种传统的染色技术，起源于中国，在日本也有悠久的历史。

蓝染色实验是为了研究蓝染工艺的原理和步骤，以便更好地理解和应用蓝染技术。

下面是台盼蓝染色实验的原理和步骤。

一、实验原理：蓝染是利用大蓝（天然靛蓝）的还原性能，将其氧化为淡蓝或蓝紫色，再使其还原为不溶于水的颜料沉淀物质，直接着色于织物纤维上，形成美观、持久、不退色的蓝色。

二、实验步骤：步骤一：准备材料1.织物：选择一块白色的纯棉织物，洗净晾干。

2.大蓝：购买或制作大蓝溶液。

步骤二：还原大蓝1.在小瓶中加入约10毫升的浓度为2%的氧化还原剂，如明矾溶液。

2.将少量大蓝溶液加入小瓶中，摇动均匀，待溶液变为淡黄色。

步骤三：染色1.将纯棉织物完全浸泡在还原后的大蓝溶液中，确保织物彻底湿透。

2.取出织物，轻轻拧干，不要使其过于湿润。

3.将湿润的织物悬挂在通风良好的地方，等待氧化。

步骤四：氧化1.将湿润的织物悬挂在通风良好的地方，等待氧化。

2.等待数小时，直至织物逐渐变蓝。

步骤五：固色1.取出已经氧化的织物，以冷水冲洗，以去除未结合的颜料。

2.将固色剂溶液（如明矾溶液）浸泡在蓝染织物中，以固定颜色。

3.用清水冲洗织物，直至水清澈。

步骤六：晾干将蓝染织物晾干，确保颜料完全固定在织物上。

通过以上步骤，就可以进行台盼蓝染色实验，获得漂亮的蓝色织物。

补充说明：1.在进行实验中，需要注意安全，避免溶液溅入眼睛或皮肤。

2.在进行染色过程时，要尽量保持环境洁净，以避免杂质进入织物。

3.实验中使用的材料可以根据需要进行调整和替换，以探索更多的蓝染效果。

4.实验所述的步骤是一种基本的蓝染方法，实际应用中可能包括更多的步骤和技巧。

总结：台盼蓝染色实验可以帮助我们理解蓝染工艺的原理和步骤，从而更好地应用蓝染技术。

通过实验，我们可以亲自体验到蓝染的魅力，并了解到大蓝的还原性能和氧化过程，以及固色剂在蓝染工艺中的作用。

蓝染作为一种古老的染色技术，在现代仍然具有广泛的应用和价值，通过实验的学习和实践，我们可以更好地传承和创新蓝染技术。

For personal use only in study and research; not forcommercial use台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。

For personal use only in study and research; not for commercial use.Nur für den persönlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwendet werden.Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales.толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях.以下无正文仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。

台盼蓝染色实验原理和步骤一、实验原理：台盼蓝(TAE)是一种经典的缓冲液，在DNA电泳中具有良好的缓冲性能。

而台盼蓝染料则是能够与DNA结合形成复合物，在紫外线下发出蓝色荧光。

实验通过台盼蓝染色将DNA可视化，从而测量DNA的存在和浓度。

二、实验步骤：1.准备实验材料和设备：-台盼蓝染色缓冲液(TAE缓冲液)-加载缓冲剂-DNA样品（待测样品）-DNA分子量标准品-DNA电泳仪-薄胶片-吸取器-紫外线照射器2.准备电泳槽：在电泳槽中注入足够的TAE缓冲液，以覆盖电泳槽的整个底部，然后添加加载缓冲剂到电泳槽中。

3.准备DNA样品：将待测样品和DNA分子量标准品分别加入到不同的试管中。

通常，待测样品需要经过DNA提取和纯化等预处理步骤。

4.加载样品：取一定数量的待测样品和分子量标准品，分别加入到电泳槽中的凹槽中，在同一凹槽中加入适量的台盼蓝染色缓冲液。

5.进行电泳：将电泳槽盖上，并将其连接到电泳电源上。

设置电压和时间参数，开始电泳过程。

6.取出胶片：电泳结束后，将胶片从电泳槽中取出，将其放在薄胶片上。

然后在紫外线照射器下观察胶片上的DNA带。

7.获得结果：根据DNA带的迁移距离和颜色强度，可以判断DNA的存在和浓度。

通常，DNA带的迁移距离与分子量呈反比，而颜色强度则与DNA的浓度成正比。

需要注意的是，实验过程中需要严格控制实验的环境和操作，以避免DNA污染和损伤。

总结：台盼蓝染色实验是一种常用的染色实验，可以用于检测DNA的存在和浓度。

通过将DNA样品与台盼蓝染色缓冲液混合后进行电泳，然后观察电泳胶片上的DNA带，可以得出DNA的存在和浓度。

实验准备工作较为简单，但实验过程需要严格控制环境和操作，以确保实验结果的准确性。

台盼蓝染色实验原理之蔡仲巾千创作台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，经常使用于检测细胞膜的完整性，还经常使用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不克不及够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最经常使用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，而且操纵非常简单。

实验步调：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保管。

使用时用PBS稀释至0.4%。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保管条件：室温保管。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操纵。

用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液，取100礚样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法。

一是首先用细胞培养液稀释细胞样本，然后用台盼蓝溶液(产品号#07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）。

或者直接用台盼蓝溶液稀释样本。

例如：1/40稀释样本
加入50礚细胞悬液至950礚IMDM+2% FBS (1/20 稀释)，混合，然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。

或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40)。

3. 涡悬振荡，混合稀释的细胞样本。

4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片，然后用脱脂绵擦干。

5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室。

6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本。

7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室。

不要过满或不足。

8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞。

分别死细胞和活细胞。

死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏，细胞吸收台盼蓝)，活细胞透明有折光（未染色）。

9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL
10.活细胞百分比计算方法如下：
活细胞数÷(活细胞数+死细胞数)x100 =活细胞百分比。