关于微生物纯培养的分离方法课件

④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物，便于大量保藏，菌种存活 时间长，是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中，预冻后保存在液氮超低 温冰箱中（ -196℃）。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
实验二微生物的分离纯化_图文_图文.ppt
内容提要
• 分离 • 纯化 • 形态观察
（1）接种
• 半固体培养基：穿刺接种 • 液体培养基接种 • 普通琼脂培养基：涂布平板，平板划线接种，斜
面划线接种 • 浅盘固体接种
划线接种注意要点
• 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
（4）菌种保藏
• 最常见的保藏方法：斜面 • 细菌的保藏：甘油保藏 • 真菌的保藏：石蜡油保藏、孢子保藏
菌种保藏的方法
菌 种 保 藏 方 法

连续在培养基上（内）移种
生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上（内）移种
固体斜面
湿法 半固体琼脂柱
真菌分离
• 利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落 分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是 利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此 限制真菌的迁涉生长。
• 一般采用PDA培养基 • 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分
离。 • 有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分
离培养时应加以考虑。
（2）纯化
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l 、2天。
3、培养基的生物物理学参数，如pH及盐分也应 调节到与试样的生态系统参数值相近。

平板划线法
斜线法 曲线法 方格法 放射法 四格法
平板划线法
斜线法：
用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板 培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培 养皿70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却 后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用 同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线 和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。
琼脂固体 培养基
(1882年)
很多细菌不能
在土豆上生长
明胶高温易溶化
不能37°C培养
一直沿用至今
微生物纯培养分离技术
纯培养物分离方法
固体培养基分离
涂布平板法 平板划线法 平板倾注法 稀释摇管法
液体培养基分离
单细胞（孢子）分离 选择培养分离
涂布平板法
1、少量样品加到平板中央（1mL） 2、玻璃三角涂棒浸入酒精 3、沾有酒精的涂棒在火焰上灼烧后使其冷却 4、无菌涂棒将样品均匀涂布琼脂培养基表面，适当条件下培养
Technology
Erko Stackebrandt, DSMZ, Braunschweig, Germany
微生物菌种鉴定技术
1923(1)、1925(2)、1930(3)、1934(4)、1939(5)、1948(6)、1957(7)、1974(8)、 1994(9)
伯杰氏鉴定细菌学手册
Bergey's Manogy
产生新的问题：将有越来越多的分类单元不能只以表型 特征进行鉴别，必须结合基因型测定才能鉴定。
微生物菌种鉴定技术
表征（表型）特征
形态特征 生理和代谢特征 生态特征
遗传（基因型）特征
蛋白质比较 核酸碱基组成 核酸序列
分子标尺
多相鉴定技术

富集培养
选择培养基分离
目的菌验证
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涂布棒
弹簧接种枪
1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.接种锄 5.接种铲 6. 接种匙 7.接种刀 8.接种刀 9.剪刀 10.钢钩 11. 镊子 12.弹簧接种枪 13.接种、枪（日本式） 25
接种工具
接种环的灭菌
接种环烧红
接种环稍冷却
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挑选单个菌落
划线
是否会认为老师的教学方法需要改进？ • 你所经历的课堂，是讲座式还是讨论式？ • 教师的教鞭 • “不怕太阳晒，也不怕那风雨狂，只怕先生骂我
笨，没有学问无颜见爹娘 ……” • “太阳当空照，花儿对我笑，小鸟说早早早……”
4
微生物纯种分离的原理和方法
微生物样品
分散成单个微生物
某种方法
培养
单菌落
多种混杂
27
13
2、稀释涂布分离法
涂布平板法 稀释倒平板法
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采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比
三、单细胞挑取法
个体较小的微生物需采用显微操作仪
五、小滴分离法
较大的微生物可使用毛细管提取
第五单元 微生物分离纯化及鉴定技术
模块一 微生物纯培养的分离方法
1
微生物纯种分离 ❖ 将多种混杂微生物，经某种技术或方法 分离成纯种的过程
纯培养（pure culture）
❖ 将在实验室条件下从一个细胞或一种 细胞群繁殖得到的后代称为纯培养。
2
精品资料
• 你怎么称呼老师？ • 如果老师最后没有总结一节课的重点的难点，你

37℃ 培养
目的菌优势 非目的菌
选择培养基平板 （含牛奶或酪蛋 白唯一C、N源）
目的菌落 菌落周围有透明 蛋白水解圈
例一：分离筛选蛋白酶产生细菌
文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
例一：分离 筛选蛋白酶 产生细菌
含牛奶选择培养基目的菌生长平板
营养选择因子：牛奶或酪蛋白 只允许分解利用蛋白质的目的菌生长，淘汰非目的菌 长出的目的菌并不一定是同种细菌，但皆产蛋白酶
三、单细胞（单孢子）分离
采用显微分离法从混杂群体中直接分离单 个细胞或单个个体进行培养以得到纯培养， 称为单细胞（单孢子）分离法。
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❖ 营养琼脂平板上不能形成菌落 ❖ 分离难度与细胞或个体的大小成反比 个体较小的微生物需采用显微操作仪 较大的微生物可使用毛细管提取
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
选择培养基
只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其 他微生物生长的培养基
1、利用选择培养基进行直接分离 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
土壤 选择培养基 单细胞 直接分离
❖ 用固体培养基分离、培养
微
❖ 用液体培养基分离、培养
生 物
❖ 单孢子分离
分
❖ 选择培养分离
离 方
❖ 二元培养物分离、培养
法
❖ 无菌技术
微生物的保藏技术
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微生物纯种分离