精选-植物内生真菌的分离

植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌是一类与植物共生的真菌，能够在植物体内生存和繁殖。

它们对植物的
生长和健康起着重要的作用。

对于研究内生真菌的分类鉴定方法，主要有以下几种。

1. 形态鉴定法：
形态鉴定是最常用和基础的方法之一。

通过观察内生真菌的形态特征，如菌丝、子实
体等，结合专门的分类鉴定书籍或数据库，进行分类和命名。

这种方法对于那些已知的内
生真菌具有较高的精确度和准确性。

2. 生理鉴定法：
除了形态特征外，内生真菌还可根据其在培养基上表现的生理特征进行分类鉴定。

对
内生真菌的产孢能力、生长速度、培养基酸碱度等进行观察和比较，来判断其属种和亲缘
关系。

3. 分子鉴定法：
随着分子生物学技术的发展，分子鉴定法成为目前研究植物内生真菌最常用和准确的
方法之一。

通过提取内生真菌的基因组或某些特定的基因片段（如ITS序列），使用相关
的引物进行PCR扩增和测序，然后与数据库中的已知序列比对，从而确定其分类。

4. 生态学鉴定法：
内生真菌的分类鉴定也可以通过其在植物体内的生态学特征来进行。

通过观察和分析
内生真菌在植物内的分布、数量和相互作用等特征，以及内生真菌与植物共生的生态关系，来辅助进行分类鉴定。

分类鉴定植物内生真菌的方法包括形态鉴定法、生理鉴定法、分子鉴定法和生态学鉴
定法。

不同的方法可以相互结合，提高分类鉴定的准确性和可靠性。

随着科学研究的不断
发展，未来还可能出现更多的分类鉴定方法。

植物黄芪根内生真菌的分离马伟;贾艳姝;李娜;龚贺;张艳贺【摘要】An experiment was conducted to isolate endophytic fungi from healthy root of Astragalus membranaceus var. mongholi-cus under different conditions by means of surface disinfection and selection of culture medium. The morphological identification of the fungi was made. Result showed that the surface disinfection method was effective. Different numbers of endophytic fungal strains were obtained on four kinds of culture media. The morphological characteristics of the endophytic fungi observed through the microscope were analyzed. A total of 28 strains of endophytic fungi were isolated from the healthy root of A. membranaceus var. mongholicus, which belong to seven genera.%以蒙古黄芪健康植株上的块根为材料,经过表面消毒、培养基选择,在不同培养条件下分离获得内生真菌,并对其进行形态学鉴定.结果显示:表面消毒方法有效,4种培养基上分别获得不同数目的内生真菌株,显微镜下获得了内生真菌形态特征.分离获得黄芪内生真菌28株,分列在7个菌属中.【期刊名称】《东北林业大学学报》【年(卷),期】2012(040)004【总页数】3页(P62-63,116)【关键词】黄芪;内生真菌;形态鉴定【作者】马伟;贾艳姝;李娜;龚贺;张艳贺【作者单位】黑龙江中医药大学哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学哈尔滨150040;黑龙江中医药大学哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学哈尔滨 150040;黑龙江中医药大学哈尔滨 150040【正文语种】中文【中图分类】S567.2蒙古黄芪［Astragalus membranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao］为名贵中药材。

d植物内生菌分离处理方法刘明志。

南方红豆杉产紫杉醇内生真菌的分离。

热带亚热带植物学报，2011，19(4):360～364剥取红豆杉的老树皮，截成2～3 cm长的小段，去除树皮层，先用75%酒精中浸泡30 s，无菌水冲洗3次，再用0．1%升汞溶液浸泡8 min，无菌水冲洗3～5次。

用无菌滤纸吸干表面水分，用无菌解剖刀将小段切成0．5 cm左右长的小块，接种于加有100 mg L－1青霉素和链霉素的PDA固体培养基表面。

每皿放置10块，依次编号，置于25℃恒温培养箱中培养。

幼茎内生菌的分离方法同上，将幼茎切成1 cm长的小段，以伤口断面垂直接种于PDA固体培养基上培养。

红豆杉叶片内生菌的分离采用两种方法，第一种方法与树皮内生菌的分离方法类似，分离时将叶片切成2至3段，接种于PDA固体培养基上;第二种方法是将叶片消毒后用无菌研钵研磨成匀浆液，然后将研磨液倾倒于PDA固体培养基上，置于25℃恒温培养箱中培养。

1刘金花。

黄花蒿内生菌的分离与初步鉴定。

２０１１，３３（４）：２７～３０黄花蒿的根，茎，叶，叶切成1cm2,茎和叶切成1cm左右小段（两端皆有切口），将根，茎，叶一次用75%酒精浸1min，再用1%的次氯酸钙溶液浸，置于含双抗的VA培养基平板培养泡1min,用无菌水冲洗5次。

待切口处长出菌落后转至PDA培养基进行内生真菌的分离。

2宋培勇，珙桐内生细菌的分离鉴定及系统发育分析，2011, 38(1): 8?13将采集的新鲜珙桐的茎、叶和叶柄分别用流水冲洗, 风干表面水分, 剪成小块或小段,无菌水漂洗 2 次, 75%酒精浸泡 1 min, 再用 2%NaClO 溶液中浸泡 3 min, 转入 75%酒精中浸泡 30 s,接着用无菌水漂洗 3 次, 平放于 NA 平板上, 28 °C培养 2?3 d。

取最后一次漂洗液涂布 NA 平板作为对照。

内生菌分离和纯化。

将 NA 平板上组织块下或周缘长出的菌落或菌苔划线稀释分离 1-2 次直到获得纯培养3孙传伯。

植物内生真菌的分类鉴定方法植物内生真菌是指在植物体内生活并与植物形成共生状态的真菌。

它们在植物生长和发育中扮演着重要角色，可促进植物的生长和抵抗病原微生物的能力。

对植物内生真菌进行分类鉴定是研究植物与真菌相互作用的重要基础。

本文将介绍植物内生真菌的分类鉴定方法。

一、分类鉴定的样本采集和处理1. 样本采集：根据需要采集植物的根系样本，选择表现出明显病状或异常的植株，或者在不同生长时期采集不同部位的样本。

2. 样本处理：将采集的样本用刀片或消毒的剪刀从植物体上切取。

为了避免外源杂菌的污染，可以在取样前用70%酒精或漂白粉消毒，然后用无菌蒸馏水或含有保鲜剂的缓冲液清洗数次，将清洗后的样本装入无菌离心管中。

二、分类鉴定的培养方法1. 消毒：将采集的样本在无菌工作台上消毒，可以用70%酒精或漂白粉进行表面消毒，然后用无菌蒸馏水洗涤数次。

2. 培养基：选择适当的培养基进行分离培养。

一般常用的培养基有马铃薯蔗糖琼脂培养基（PDA）、玉米粉蔗糖琼脂培养基（CMD）、毛状植物根培养基等。

3. 分离培养：将处理好的样本放置在培养基上，均匀涂抹或切割后排列，然后放置在适当的温度和湿度条件下培养。

4. 培养温度和时间：一般情况下，在适宜的温度（25-28°C）和光照条件（12小时光照/12小时暗）下培养一周左右，观察是否有菌落形成。

5. 菌落转接：当菌落形成后，可以用无菌环取样，将菌落转移到新的培养基上进行纯培养。

6. 保存：可以将纯培养的菌株进行保存，可以冷冻保存或进行液氮冻存。

三、分类鉴定的鉴定方法1. 形态学鉴定：通过观察菌落的形态、色素、菌丝等形态特征，以及产孢体、分生孢子的形态特征等来进行鉴定。

可以借助显微镜观察菌丝的形态、菌落的形态、菌丝状产孢体和产生的孢子形态。

2. 分子生物学鉴定：采用PCR方法对菌株进行鉴定。

通常可以从菌落或孢子中提取菌株的DNA，然后进行PCR扩增，再通过序列分析进行鉴定。

植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌是指生活在植物体内或附近，与植物形成共生关系的一类真菌。

这些真菌可以帮助植物吸收养分、增强植物的抗病性等，对植物生长具有重要作用。

对于植物内生真菌的分类鉴定，可以采用以下几种方法：
1. 形态学鉴定法
形态学鉴定法是一种基于真菌形态特征的分类方法，主要包括菌落形态、菌丝特征、孢子形态、色素产生等方面的观察和比较。

通过对真菌的形态特征进行鉴定，可以初步确定其属种，但是这种方法需要专业的技术支持和丰富的经验，并且受到环境因素、培养条件等因素的影响。

2. 分子生物学鉴定法
随着分子生物学技术的不断发展，分子生物学鉴定方法也得到了广泛应用。

这种方法主要基于真菌的DNA序列比对和系统进化关系的分析，可以提供较为准确的分类信息。

其中，PCR扩增技术和DNA序列比对技术是常用的分子生物学鉴定方法，它们可以直接从真菌的DNA样本中扩增特定的基因片段，对其进行测序和比对，确定其系统进化关系和分类归属。

生态学鉴定法主要基于真菌所处的生态环境和宿主植物的物种信息，通过对真菌的生境和宿主植物类型的分析来确定其分类归属。

这种方法适用于野外采集样品或样品信息不全的情况，在实际应用中其准确性会受到一定局限。

4. 蛋白质分析鉴定法
蛋白质分析鉴定法是一种基于真菌蛋白质表达模式的分类方法，主要通过电泳技术对真菌种群中的蛋白质进行分离和鉴定，根据不同的蛋白质组成来确定其分类归属。

这种方法适用于对真菌菌株进行基础研究和比较分析。

总之，对于植物内生真菌的分类鉴定，需要综合运用多种方法进行确认和检验，结合形态学、分子生物学、生态学和蛋白质分析等多种技术手段，才能提高分类准确性和可靠性。

分离植物内生真菌操作流程1.材料准备：植物样本、剪刀、镊子、70%乙醇、3%次氯酸钠（本实验用4%84）、酒精灯、计时器、平板、锥形瓶，无菌水，离心管（带盖，灭菌）、打开无菌操作台灭菌30min。

（1）植物样本的采集：选取生长状态良好，不要有病斑或者枯枝烂叶，每种植物采取三株标本，要带有叶子、叶柄和枝条及其他部位，将样本名字写在小纸条上放在装标本的袋子里，采下来的标本与写有名字的纸条一同拍照，样本上有脏东西时，请用纸轻轻擦掉，若不清楚植物名字，请将整棵植物拍照留用于鉴定，并做好相关记录。

（2）制作PDA固体培养基，在无菌操作台中倒平板，每瓶250ml的培养基大概倒15个板，待其凝固后用于接种。

2.清洗：认真用清水将标本洗净，洗去标本表面的灰尘，去除枯叶，备用。

3.取样：（1）在叶片的左上、右上、左下，右下和正中五个部位进行取样，剪取5mm*5mm的叶片，如果是叶柄或枝干，则剪取5~10mm，若是比较粗的枝干或圆圆的果实之类的，总之比较大的，则将它切开，再剪取样本，样本不要剪的太大或太小。

（2）每种植物的叶子，叶柄，枝干等其他部位，每种部位接种两块板，大板每个要接种五个样本即左上、右上、左下，右下和正中，小板每个接种四个样本即左上、右上、左下，右下，计算好所要剪的样本数，尽量多剪几个，以免后面的表面灭菌中冲洗时被冲掉。

（3）若植物标本有剩余，且是没有洗过的，重新装好，放到冰箱里，备用，洗过的扔掉。

（4）每种植物标本所剪的样本放在一个50ml的离心管中，放在试管架上，并且每个离心管上要标好所对应的植物标本。

4.表面灭菌：在无菌操作台中进行（1）先向各离心管内倒入适量（10~20ml）70%乙醇，拧紧盖子，用计时器开始计时1min,每10秒钟晃动离心管几次，使其充分灭菌。

（2）1min后，拧松盖子，将乙醇倒入事先准备的锥形瓶中，注意不要将管中样本倒出，倒出的样本不要再放入其中，也不要用手碰到样本，样本不可以接触到除了离心管以外的东西。

植物内生真菌的分类鉴定方法
植物内生真菌是一类与植物共生、寄生或互惠互利关系的真菌。

对植物内生真菌进行
分类鉴定，可以根据以下几种方法进行。

形态学鉴定方法是最常用的分类鉴定方法之一。

通过观察植物内生真菌的菌丝、子实层、孢子等形态特征，确定其属种、属、科等级别。

这些形态特征包括菌丝的色素、形状
和分支方式，子实层的形状和颜色，孢子的大小、形状、壁厚和颜色等。

生理学鉴定方法也是一种常用的分类鉴定方法。

通过观察植物内生真菌在培养基上的
生长特性和代谢产物等生理特性，确定其属种、属、科等级别。

可以观察真菌在不同营养
源上的生长情况，测定其生长速率和最适生长温度等。

分子生物学鉴定方法是一种越来越常用的分类鉴定方法。

通过分离植物内生真菌的DNA，利用PCR技术扩增出特定片段（如ITS序列），然后进行测序，并与已知真菌基因序列进行比对和系统进化分析，确定其属种、属、科等级别。

分子标记的应用使得植物内生
真菌的分类鉴定更加准确和快速。

生态学鉴定方法也可以用于植物内生真菌的分类鉴定。

通过调查植物内生真菌与宿主
植物的关系、分布范围、寄生程度和共生关系等生态习性，确定其属种、属、科等级别。

生态属性的研究能够揭示植物内生真菌的生态地位和功能。

植物内生真菌的分类鉴定方法主要包括形态学、生理学、分子生物学和生态学等方法。

这些方法可以相互结合使用，提高分类鉴定的准确性和可靠性。

随着科学技术的不断发展，新的鉴定方法也在不断涌现，为植物内生真菌的分类鉴定提供了更多的选择。

植物内生真菌的分类鉴定方法植物内生真菌的分类鉴定是一项重要的工作，可以帮助我们更好地了解真菌的多样性和生态功能。

在植物内生真菌的分类鉴定中，我们需要考虑到真菌的形态特征、生态习性、生物学特性等因素，以便正确地将其归类并进行相应的研究和应用。

下面将对植物内生真菌的分类鉴定方法进行详细介绍。

一、形态学鉴定方法形态学鉴定是最常用的真菌分类鉴定方法之一，通过观察真菌的形态特征来进行分类。

在植物内生真菌的形态学鉴定中，主要可以从以下几个方面来进行：1. 菌丝体形态：观察真菌的菌丝体形态特征，包括菌丝的大小、颜色、分支情况等。

有些内生真菌的菌丝体形态特征可以帮助我们进行初步的分类。

3. 壁形态：观察真菌的壁形态特征，包括壁的厚薄、纹理、颜色等。

壁形态对于内生真菌的分类鉴定也有一定的指导作用。

通过对真菌形态特征的观察和比较，我们可以初步确定植物内生真菌的分类，为后续的分子生物学和生态学研究提供基础。

1. DNA条码技术：利用DNA条码技术对真菌的特定基因序列进行测序和比对，来鉴定真菌的分类位置。

通过比对不同真菌的DNA条码序列，可以确定其属和种的分类。

3. 生物信息学分析：利用生物信息学工具对真菌的DNA序列进行比对和分析，来进行真菌的分类鉴定。

生物信息学分析可以帮助我们更深入地了解真菌的亲缘关系和进化规律。

1. 寄主关系：观察真菌与其寄主植物的关系，包括内生真菌对植物的寄生方式、对植物的影响等。

寄主关系对于内生真菌的分类鉴定有着重要的作用。

2. 分布情况：观察真菌在不同环境中的分布情况，包括地理位置、生境类型等。

分布情况可以帮助我们对真菌的生态适应性和地理分布规律进行了解。

植物内生真菌的分类鉴定方法主要包括形态学鉴定、分子生物学鉴定和生态学鉴定。

通过这些方法的应用，我们可以更准确、全面地对植物内生真菌进行分类鉴定，为我们更好地开展真菌生态学研究和应用研究提供基础数据支撑。

希望今后在这方面的研究能够得到更多的关注和支持，为促进真菌分类和生态功能的深入研究提供重要的技术与理论支持。

d植物内生菌分离处理方法文献材料前处理第一次消毒第二次消毒（含三消）处理对照培养基刘明志，2011 南方红豆杉的老树皮、幼茎、叶截成2～3 cm长的小段，去除树皮层75%酒精中浸泡30s0．1%升汞溶液浸泡8 min，无菌水冲洗3～5次研磨成匀浆液，倾倒于PDA上切成0．5 cm左右的块，接种于有100 mg L－1青霉素和链霉素的PDA固体培养基表面。

每皿10块刘金花2011 黄花蒿的根，茎，叶叶切成1cm2,茎和叶切成1cm左右小段（两端皆有切口）将根，茎，叶一次用75%酒精浸1min1%的次氯酸钙溶液浸泡1min,用无菌水冲洗5次置于含双抗的V A培养基平板培养待切口处长出菌落后转至PDA培养基进行内生真菌的分离宋培勇2011 珙桐茎、叶和叶柄将采集的新鲜珙桐的茎、叶和叶柄分别用流水冲洗, 风干表面水分, 剪成小块或小段,无菌水漂洗2 次75%酒精浸泡 1min再用2%NaClO 溶液中浸泡3 min, 转入75%酒精中浸泡30 s,接着用无菌水漂洗3 次,取最后一次漂洗液涂布NA 平板作为对照平放于NA 平板上,28 °C培养2−3 d孙传伯2011 台湾7303毛豆全株采回的样本用自来水洗净, 并用无菌纸吸干水分, 并用无菌纸吸干水分,切取支根110 cm长的小段, 须根切成115 cm的小块用75% 酒精浸泡5m in、7m in、10min分别用0.1% 升汞溶液处理4 m in、6m in、8 m in进行表面灭菌,此试验分别重复3次。

最后用无菌水冲洗4次,。

最后用无菌水冲洗4次将组织块在研钵中充分研磨成匀浆最后一次冲洗液涂3种不同培养基平板, 26~ 28e下培养2~ 3d, 筛选出最佳消毒时间和培养基, 将表面消毒彻底棉花根部切块放入灭菌研钵中用无菌水冲洗4次,取上清液涂抹于培养基上。

以无菌水冲洗为对照试验。

取上清匀浆涂抹于3种不同培养基上, 取匀浆涂布于不同培养基平板, 每浓度重复3次, 然后将培养皿置于26~ 28e 恒温箱中培养2~ 3d, 观察培养出的菌落形态张鑫2011 植物圣罗勒的健康叶子将叶子用流水冲洗10 min1% 的次氯酸钠中浸泡10min0．02 mol / L、pH7．0 的无菌磷酸钾缓冲液( PB) 漂洗4 次加无菌水将材料研磨涂布培养李铭, 2011 石耳目地衣为了诱导产孢，黑化菌株在光照/黑暗( 12 h∶12h) 条件下，于2%的PDA培养基上，18℃下培养 3 个月刘杰凤2011 健康的小白菜，染病的小白菜根，茎，叶流水冲洗干净，剪成小段75％酒精中浸泡3min10％次氯酸钠浸泡茎为8 min，根和叶由于气孔较茎大，浸泡5 min即可，然后用无菌水浸泡多次，每次3 min无菌条件下用适量的PBS缓冲液捣碎以最后一次的漂洗液作对照，30 ℃下培养一个星期搅拌后静置3 min，取上清液0．5 mL分别涂布于分离培养基平板上，每种材料做3次平行朱士茂2011 新采集的银杏枝条，叶子和根在自来水中冲洗干净，然后将枝条和根截成 3 －4cm长，将叶子和叶柄分开，分别将根，枝，叶放在不同的灭菌后的广口瓶中（一），根的表面灭菌: 0. 1%的土温20 消毒1min，无菌蒸馏水冲洗 2次。