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实验一蠕虫学粪便检查法（一）一、内容1.直接涂片法；2.饱和盐水漂浮法；3.各种蠕虫卵的特征。
二、参考资料蠕虫学粪便检查是蠕虫病生前诊断的重要方法。
因为大多数的寄生性蠕虫是寄生在家畜、家禽的消化道及其相连的器官（如肝脏、胰脏），有的寄生在呼吸器官和生殖器官（家禽），如后圆线虫、前殖吸虫。
寄生在这些部位的寄生虫，它们的虫卵、幼虫或节片都随着宿主的粪便排除体外，因此，通过粪便检查可以获得生前诊断。
除蠕虫以外，还有一些原生动物的寄生虫，如结肠小袋纤毛虫及球虫，它们的包囊或卵囊亦随着宿主的粪便排除体外，依靠粪便检查也可以建立生前诊断。
根据蠕虫学粪便检查的目的可分为：（一）蠕虫虫体检查法：是从粪便中检查虫体或节片，如莫尼茨绦虫，一般以肉眼直接检查；（二）蠕虫虫卵检查法：是从粪便中检查虫卵，如大多数的吸虫、绦虫和线虫；（三）蠕虫幼虫检查法：是从粪便中检查幼虫，如牛、羊的网尾线虫等，随粪便排出的不是虫卵而是幼虫。
下面主要分述虫卵和幼虫检查法。
1.蠕虫虫卵检查法（之一）：（1）直接涂片法：取一片洁净的载玻片，在玻片中央滴加1-2滴50％甘油生理盐水，然后用镊子或牙签挑取少量粪便，与甘油生理盐水混匀，并将粗粪渣推向一边，涂布均匀，作成涂片，涂片的厚薄以放到书上隐约可见下面的字迹为宜，加上盖玻片，置显微镜下检查，检查时先在低倍镜下顺序查找，如发现虫卵，再换高倍镜仔细观察。
如无甘油生理盐水时可以用常水代替，加甘油可使标本清晰，易于观察，并可防止涂膜很快变干燥。
但是检查原虫的滋养体，必须以生理盐水进行稀释，不应加甘油，否则会影响其运动而妨碍观察。
本法操作简单，能检查各种蠕虫卵，但检出率不高，特别是轻度感染时，往往得不到可靠结果，因此，本法只能为辅助的诊断方法，并且每次检查要重复观察8-10片，才能收到确实的效果。
（2）饱和盐水漂浮法：本法基本原理是采用比重比虫卵大的溶液，使虫卵浮集于液体的表面，形成一层虫卵液膜，然后蘸取此液膜，进行镜检。
寄生虫学实验诊断技术一、病原检查（一）粪便检查粪便检查是诊断寄生虫病常用的方法。
要取得准确的结果，粪便必须新鲜，送检时间一般不宜超过24小时。
如检查肠内原虫滋养体，最好立即检查。
盛粪便的容器要干净，并防止污染与干燥；粪便不可混杂尿液等，以免影响检查结果。
1．直接涂片法用以检查蠕虫卵、原虫的包囊和滋养体。
方法简便，连续作3次涂片，可提高检出率。
⑴蠕虫卵检查：滴一滴生理盐水于洁净的载玻片，用棉签棍或牙签挑取绿豆大小的粪便块，在生理盐水中涂抹均匀；涂片的厚度以透过涂片约可辨认书上的字迹为宜。
一般在低倍镜下检查，如用高倍镜观察，需加盖片。
应注意虫卵与粪便中异物的鉴别。
虫卵都具有一定形状和大小；卵壳表面光滑整齐，具固有色泽；卵内含卵细胞或幼虫。
⑵原虫检查：1）活滋养体检查：涂片应较薄，方法同查蠕虫卵。
气温愈接近体温，滋养体的活动愈明显。
必要时可用保温台保持温度。
2）包囊的碘液染色检查：直接涂片方法同上，以一滴碘液代替生理盐水。
如碘液过多，可用吸水纸从盖片边缘吸去过多的液体。
若同时需检查活滋养体，可在用生理盐水涂匀的粪滴附近滴一滴碘液，取少许粪便在碘液中涂匀，再盖上盖片（图21－1）。
涂片染色的一半查包囊；末染色的一半查活滋养体。
图21－1 原虫包囊碘液染色操作方法碘液配方：碘化钾4g，碘2g，蒸馏水100ml。
3）隐孢子虫卵囊染色检查：目前较佳的方法为金胺酚改良抗酸染色法。
对于新鲜粪便或经10％福尔马林固定保存（4℃1个月内）的含卵囊粪便都可用此法染色。
染色过程是先用金胺－酚染色，再用改良抗酸染色法复染。
方法步骤如下：金胺－酚染色法：①染液配制：1g／L金胺－酚染色液（第一液）：金胺0.1g，石碳酸5.0g，蒸馏水100ml；3％盐酸酒精（第二液）：盐酸3ml，95％酒精100ml；5g／L高锰酸钾液（第三液）：高锰酸钾0.5g，蒸馏水100ml。
②染色步骤：滴加第一液于晾干的粪膜上，10～15分钟后水洗；滴加第二液，1分钟后水洗；滴加第三液，1分钟后水洗，待干；置荧光显微镜检查。
寄生虫卵粪便检查法许多寄生虫的虫卵、卵囊或幼虫可随宿主的粪便排出体外.通过检查粪便,可以确定是否感染寄生虫及其种类和感染强度。
粪便检查在寄生虫病诊断、流行病学调查和驱虫效果评定上均具有重要意义。
一、目的及要求1、掌握直接涂片法、漂浮法、沉淀法检查寄生虫卵。
2、在光学显微镜下区分虫卵、幼虫或虫体和异物.3、观察常见吸虫卵、绦虫卵、线虫卵等寄生虫虫卵,掌握其一般特征。
二、实验内容（一)粪样采集及保存方法1.被检粪样应该是新鲜且未被污染，最好从直肠采取。
2.大动物按直肠检查的方法采集；小动物可将食指套上塑料指套，伸入直肠直接钩取粪便。
自然排出的粪便,要采取粪堆上部未被污染的部分。
3。
采取的粪便应装入清洁的容器内.采集用品最好一次性使用,如多次使用则每次都要清洗，相互不能污染.4.采取的粪便应尽快检查，否则，应放在冷暗处或冰箱冷藏箱中保存。
当地不能检查需送出或保存时间较长时，可将粪样浸入加温至50~60℃、5％～10％福尔马林中，使其中的虫卵失去活力，但仍保持固有形态，还可以防止微生物的繁殖.（二）直接涂片法（Examination of Direct Smears）在清洁的载玻片上滴1-2滴水或1滴甘油与水的等量混合液(加甘油的好处是能使标本清晰，并防止过快蒸发变干),其上加少量粪便,用火柴棍儿仔细混匀。
再用镊子去掉大的草棍儿和渣子等，之后加盖玻片，置光学显微镜下观察虫卵或幼虫。
注意涂片的厚薄以在载玻片的下面垫上有字的纸时，纸上的字迹隐约可见为宜。
直接涂片法的优点是简便易行、快速、适合于虫卵量大的粪便检查；缺点是对虫卵含量低的粪便检出率低。
因此在实际工作中，需多检几片，以提高检出率.检查虫卵时，先用低倍镜顺序查盖玻片下所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察。
因一般虫卵（特别是线虫卵）色彩较淡,镜检时视野宜稍暗一些（聚光器下移).图1-1-1 直接涂片法示意另一方法是直接涂片法的改良法叫回旋法。
