鸡外周血淋巴细胞分离液说明书

人外周血淋巴细胞分离液使用说明
人外周血淋巴细胞分离液是一种常用的实验试剂，用于分离和提取人体外周血中的淋巴细胞。

下面是使用该试剂的详细说明：
1. 实验准备：
- 准备干净的工作台和操作工具。

- 检查分离液是否过期，确保其保存条件良好。

- 为实验准备足够数量的外周血样本。

2. 样本处理：
- 从被试者的外周血中采集适量的血液。

- 使用无菌技术将血液转移至无菌离心管中。

3. 样本离心：
- 将含有外周血的离心管放入离心机中。

- 以2000-2500转速离心10分钟，使细胞沉淀到离心管底部。

4. 废液处理：
- 弃去上层的血浆和血小板，只留下上清或底部的细胞悬浮液。

5. 细胞分离：
- 将分离液缓慢倒入含有细胞沉淀的离心管中，通常使用10 mL分离液对应1 mL的细胞悬浮液。

- 轻轻摇晃离心管，使分离液均匀混合。

- 静置15-20分钟，使淋巴细胞在分离液中上浮。

6. 细胞收集：
- 将含有上浮淋巴细胞的上清缓慢转移到新的离心管中。

- 用相同的方法重复上述步骤，以提高细胞收集率。

- 将收集到的细胞悬浮于适当的培养基中，进行后续实验。

请注意，这只是一个基本的使用说明，具体的实验步骤和分离效果可能会因实验目的和细胞样本的来源而有所不同。

在进行实验前，建议查阅供应商提供的用户手册，以获得更加详细的使用说明和操作技巧。

同时，使用过程中严格遵守实验室安全操作规范，确保个人和实验室的安全。

希望以上使用说明能够对您的实验工作有所帮助。

实验 18 外周血淋巴细胞分离方法目的了解密度梯度离心法分离淋巴细胞的原理及其操作过程。

原理淋巴细胞分离掖是由60%的聚蔗糖2份和34%的泛影葡胺1份混合制成。

它具有分子量大、无化学活性、20℃时比重为1.077士0.001的特性。

血液中各种细胞的比重不同，淋巴细胞与单核细胞的比重约为1.070，而粒细胞和红细胞的比重为1.092左右。

将血液加至分离液上，通过离心，可使一定比重的细胞按相应密度梯度进行分布，从而将淋巴细胞与其它血细胞分离开。

材料1. 淋巴细胞分离液(比重1.077土0.001)。

2. 肝素。

3. 无Ca2+、Mg2+的Hanks溶液，pH7.2～7.6。

4. RPMI-1640培养液(含10%小牛血清)。

5. 其它:注射器、吸管、滴管（均为无菌）,血球计数板，水平离心机，显微镜等。

方法1. 无菌抽取静脉血2ml，去掉针头注人含有肝素的无菌试管中摇匀，加入2ml Hanks溶液进行对倍稀释，混匀。

2. 用吸管吸取稀释血液沿试管壁缓缓加到含有2ml淋巴细胞分离液的试管中（血液:Hanks液:淋巴细胞分离液的比例为1:1:1），沿管壁流下的稀释血液叠加在分离液之上，并与分离液形成明显的界面。

3. 经水平式离心2000r/min×20min，小心取出试管。

4. 用平口吸管小心吸取中层呈白色雾状的淋巴细胞层，用Hanks溶液洗涤两次，每次离心1500r/min ×10min。

5. 弃上清，加RPMI-1640培养液1ml混匀，取少许进行细胞计数及活力测定。

（1）细胞计数: 取1滴细胞悬液置血球计数板上，静置片刻，显微镜下计数四角四个大方格内的细胞数（见图15），按下列公式计算出细胞总数。

四个大方格细胞总数×稀释倍数×细胞悬液毫升数×104细胞总数= 4（2）台盼蓝拒染法测定细胞活力: 取4份0.2%台盼蓝与1份4.25%生理盐水混合，将台盼蓝生理盐水溶液与细胞悬液等量混合，在3分钟之内压片，在光学显微镜下计数未染色的细胞（为活细胞）与染色细胞（染成兰色,为死细胞），计算活细胞占细胞总数的百分数。

外周血淋巴细胞Ficoll分离法
实验材料： 50ml离心管,吸管，移液枪
试剂：生理盐水或PBS，淋巴细胞分离液(天津灏洋生物)，无菌蒸馏水，IMDM 培养基（Hyclone公司），FBS(Hyclone公司)
准备工作：将所需耗材提前准备好放于操作台边，确保所有试剂新鲜无菌操作步骤：
1、取中心血站供应的抗凝血用无钙、镁PBS稀释3-4倍。

2、将Ficoll淋巴细胞分离液（密度1.077）事先分装于离心管中，使其沉于管
底。

3、将经稀释的血细胞悬液，用吸管将细胞悬液沿离心管壁缓慢加入，不让细胞
悬液冲破分层液界面，使其悬于分层液上方，细胞悬液和Ficoll的体积比为2:1。

4、以2000r/min离心20min后，不同细胞可依密度不同而分布于各位置上。

白
膜层即为淋巴细胞。

5、收集混浊的白膜层细胞即获得的淋巴细胞，用无钙、镁PBS离心洗涤，
1200r/min，5min, 洗涤2次。

6、弃上清，加入2-3ml无菌蒸馏水裂解红细胞，吹打细胞使均匀分散，作用20s
后加生理盐水稀释终止，在此可取少量细胞悬液，按稀释倍数计数。

再次离心洗涤细胞，1200r/min，5min,。

7、弃上清，将细胞用适量培养液（IMDM培养液含10%FBS）轻轻吹打成均匀分散
的细胞悬液，再根据实验需要分组培养。

注意事项：将细胞悬液加入淋巴细胞分离液上层时，力度不能太大，以免破坏分层。

收集白膜层细胞要小心，如果破坏分层会看不清楚，导致损失细胞。

用蒸馏水裂解时，切忌时间过长，否则会导致所有细胞裂解死亡。

Lonza Walkersville, Inc.biotechserv@Tech Service: 800-521-0390Document # INST-17-829-1 06/07Walkersville, MD 21793-0127 USA© 2007 Lonza Walkersville, Inc.Lymphocyte Separation MediumInstruction For Use17-829EIntroductionLymphocyte Separation Medium (LSM) is a mixture of Ficoll® and sodium diatrizoate (Hypaque) with density adjusted to 1.077 g/ml. This sterile filtered product is intended for laboratory/manufacturing use, and is not for in vitro diagnostic use. It is commonly used to isolate lymphocytes from human blood. One protocol to accomplish this is presented here.Protocol1. Anticoagulated blood (citrated or heparinized)should be used.Note: Always treat human and other primatesource material as potentially infectious and take safety precautions.2. Dilute blood 1:1 with calcium-magnesium-freePBS and layer 9 ml onto 6 ml LSM. Use a clearplastic centrifuge tube with a cap. For largevolumes use a similar ratio of diluted blood toLSM.3. Centrifuge at 400xg for 15 minutes.4. Remove plasma-PBS without disturbing theinterface.5. Collect the interface with a cannula and dilute to20 ml in serum-free medium, such as RPMI1640.6. Centrifuge at 70xg for 10 minutes.7. Discard supernatant fluid and resuspend pelletin 2-3 ml serum-free medium.8. Count nucleated cells on a hemocytometer orelectronic counting device.9. Lymphocytes will be concentrated at theinterface, along with some platelets andmonocytes. Granulocytes will be found mostly in the Lymphocyte Separation Medium anderythrocytes will pellet at the bottom of the tube.References1. Boyum, A. 1968. Isolation of mononuclear cellsand granulocytes from human blood. Isolation of mononuclear cells by one centrifugation, and ofgranulocytes by combining centrifugation andsedimentation at 1 g. Scand. J. Clin. Lab. Invest.Suppl. 97:77-89.2. Boyum, A. 1976. Isolation of lymphocytes,granulocytes and macrophages. Scand. J. Clin.Lab. Invest. Suppl. 5:9-15.3. Boyum, A. 1977. Separation of lymphocytes,lymphocyte subgroups and monocytes: areview. Lymphology. 10-2:71-6.4. Boyum, A. 1984. Separation of lymphocytes,granulocytes and monocytes from human blood using iodinated density gradient media. Methods Enzymol. 108:88-102.5. Boyum, A. et al. 2002. Separation of HumanLymphocytes from Citrated Blood by DensityGradient (NycoPrep) Centrifugation: MonocyteDepletion Depending upon Activation ofMembrane Potassium Channels. Scand. J.Immunol. 56-1:76-84.6. Koistinen, P. 1987. Human peripheral blood andbone marrow cell separation using densitygradient centrifugation on Lymphoprep andPercoll in haematological diseases. Scand. J.Clin. Lab. Invest. 47-7:709-14.7. Rola-Pleszczynski, M. and W.H. Churchill. 1978.Purification of human monocytes by continuous gradient sedimentation in ficoll. J. Immunol.Methods. 20:255-62.Product Use StatementTHESE PRODUCTS ARE FOR RESEARCH USE ONLY. Not approved for human or veterinary use, for application to humans or animals, or for use in clinical or in vitro procedures.INST-17-829-1 06/07Ficoll is a trademark of GE Healthcare. All other trademarksherein are marks of Lonza Group or its subsidiaries.1。

人外周血白细胞分离液使用说明一、试剂的制备1.将人外周血样品采集入采血管中，并将其与抗凝剂轻轻混匀。

2. 采用无菌条件下，将采集的外周血放入离心管中，以2000 rpm的转速离心10分钟。

3.弃去上清液，保留沉淀，注意不要干扰底部白细胞沉积。

4. 向离心管中加入合适体积的分离液，通常建议将1 ml分离液加入约2 ml外周血样品中。

5. 使用离心机以2000 rpm的速度离心10分钟。

6.弃去上清液，并将其中的底泥转移到新离心管中。

7.向新的离心管中加入平衡液，与底泥充分混匀。

8. 使用离心机以2000 rpm的速度离心5分钟。

9.弃去上清液，并将底泥转移到合适的容器中。

10.向底泥中加入适量的培养基，细胞培养基通常是最常用的培养基。

二、试剂的存储1.试剂储存温度通常在2-8摄氏度之间。

2.开封后的试剂，建议在使用之前将其置于室温下适当回温。

3.试剂一旦开封，应避免重复的冻融循环，以防止对试剂活性造成损害。

4.尽量避免接触光线，以防止试剂活性的降低。

三、使用注意事项1.使用前，请确认试剂是否过期，过期试剂不得使用。

3.使用前，应先将分离液均匀搅拌，以保证其活性。

4.在试剂使用过程中，尽量避免受到湿气和阳光的影响。

5.将待提取的外周血样品严格根据提取方法进行操作，以获得高质量的白细胞。

6.在离心过程中，注意离心管的盖子要盖好，防止离心时离心液的外溢。

7.实验过程中，尽量避免反复提取，以避免对白细胞活性造成损害。

8.在培养细胞的过程中，注意细胞培养基的选择和培养条件的控制，以保证白细胞的健康生长。

四、注意事项1.本试剂仅供科研使用，禁止用于临床诊断等用途。

3.请按照相关实验室安全操作规范进行操作，做好个人防护措施。

4.请勿将试剂倒入下水道或垃圾箱中，应根据相关规定进行处理。

总结：通过以上的使用说明，我们可以了解到人外周血白细胞分离液的使用方法以及使用注意事项。

正确和规范使用试剂可以帮助我们获得高质量的分离液和细胞，进一步推动科学研究的进展。

SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验最佳条件的筛选刘宸铄;刘芳;杨鸣琦【摘要】[目的]探讨磺酰罗丹明B法(Sulforhodamine B,SRB)检测鸡外周血T淋巴细胞增殖反应的最佳条件.[方法]体外培养鸡外周血T淋巴细胞,选用SRB法对淋巴细胞含量(1×105,1×106,2.5×106,5×106,7.5×106和1×107 mL1)、ConA质量浓度(5.0,7.5,10.0,12.5和15.0 μg/mL)、培养时间(36,48,60 h)3个因素进行组合设计培养T淋巴细胞,每个组合设3个重复,SRB显色后用酶标仪在492 nm波长处测量OD492值,计算刺激指数(Stimulation index,SI),筛选SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳条件.[结果]SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖试验的最佳条件为:淋巴细胞含量1×106 mL-1,ConA质量浓度5.0 μg/mL,培养时间48 h.[结论]确定了体外培养鸡外周血T淋巴细胞增殖的最佳ConA质量浓度、培养时间及淋巴细胞含量,证实用SRB法检测鸡外周血T淋巴细胞增殖结果可靠,是切实可行的淋巴细胞数量与活性检测方法.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(041)007【总页数】5页(P15-18,24)【关键词】鸡;外周血T淋巴细胞;细胞增殖;磺酰罗丹明B法【作者】刘宸铄;刘芳;杨鸣琦【作者单位】西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】R446.63;S858.31磺酰罗丹明B(Sulforhodamine B,SRB)法是美国国家癌症研究院(NCI)推荐的一种抗癌药物筛选方法，该方法发明于1990年，具有快速、经济、灵敏的特点[1]，其测量结果不受时间影响，如今已广泛应用于细胞数量与活性的检测。

人外周血淋巴细胞分离液使用说明使用人外周血淋巴细胞分离液的步骤如下：1.样本准备：准备外周血样本，并将其采集到一个干净的试管中。

确保样本是新鲜的，并在使用前充分混合。

2.离心：将样本离心，以去除血浆或血浆和血小板，通常以低速（300×g）离心5-10分钟。

将离心管中的血浆小心吸除。

3.阻止红细胞溶解：加入足够的红细胞阻断缓冲盐溶液到血细胞沉淀中，使其与样本体积相等。

这将阻止红细胞的溶解和污染淋巴细胞。

4.包裹淋巴细胞：将滤质或管中的混合物转移到一个滤筒或离心管中，并加入合适的分离液。

分离液的添加量通常是样本体积的2-3倍。

5.混合和离心：彻底混合分离细胞和分离液，然后以适当的速度和时间进行高速离心（500×g，5-10分钟）。

此步骤将导致淋巴细胞在分离液的底部形成一个沉淀。

6.转移沉淀：使用无菌吸管或移液器小心地将沉淀转移到干净的离心管中，以避免污染。

7.洗涤：向沉淀中加入足够的平衡缓冲盐溶液，如磷酸缓冲盐溶液，轻轻混合后进行低速离心。

再吸去上清液，保留沉淀。

8.储存：沉淀可在冷藏条件下暂时储存，或冷冻保存以备将来使用。

需要注意的是，在使用人外周血淋巴细胞分离液时，一些步骤可能因其具体的类型和制造商而有所不同。

因此，建议在使用前仔细查阅并遵守产品说明书和使用手册。

此外，使用前要确保实验室操作是在严格的无菌条件下进行的，以避免污染和细胞的损伤。

总而言之，人外周血淋巴细胞分离液是一种用于从人类外周血样本中分离和富集淋巴细胞的试剂。

准确遵循产品说明和使用手册中的步骤和建议，能够帮助实验者在研究和临床应用中有效地使用该分离液。

第1篇一、产品概述本产品为一种生物医学试剂，主要用于从人血液中分离纯化淋巴细胞。

淋巴细胞是人体免疫系统的重要组成部分，广泛用于免疫学研究和临床诊断。

本产品采用特殊的分离技术，能够高效、快速地从人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的免疫学研究提供高质量的实验材料。

二、产品规格| 产品规格 | 批号 | 有效期 || :-------: | :---: | :----: || 100ml/瓶 | ABC123 | 2025年12月 |三、产品特性1. 高效分离：本产品采用独特的分离介质，能够高效地将淋巴细胞与其他血细胞分离，分离效率高，纯度好。

2. 操作简便：本产品使用方法简单，无需特殊设备，适合实验室常规操作。

3. 稳定性好：本产品在规定的储存条件下，稳定性良好，保质期内质量稳定。

4. 无污染：本产品在生产过程中严格遵循无菌操作规程，产品无细菌、病毒等生物污染。

四、产品用途1. 免疫学研究：用于分离淋巴细胞，进行细胞因子检测、细胞培养、细胞因子基因表达等研究。

2. 临床诊断：用于检测血液中的淋巴细胞，辅助诊断某些疾病，如自身免疫性疾病、肿瘤等。

3. 药物研发：用于药物筛选、药效评价等。

五、使用方法1. 准备工作：- 将分离液室温下平衡至室温。

- 准备无菌试管、移液器、吸头等实验器材。

- 准备适量抗凝剂（如EDTA-K2）。

2. 操作步骤：- 将抗凝全血加入分离管中，轻轻混匀。

- 将分离液加入另一支无菌试管中，加入量约为全血量的2倍。

- 将全血和分离液轻轻混合，避免产生气泡。

- 将混合后的样品垂直静置1-2小时，直至形成清晰的三层界面。

- 小心吸取淋巴细胞层，避免混入其他细胞层。

- 将淋巴细胞转移至新的无菌试管中，加入适量磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤，重复洗涤2-3次，以去除残留的分离液和杂质。

- 最后，将洗涤后的淋巴细胞悬浮于适量的PBS中，即可进行后续实验。

六、注意事项1. 操作过程中应严格遵守无菌操作规程，防止污染。

人外周血淋巴细胞分离液使用说明人外周血淋巴细胞分离液（Peripheral Blood Lymphocyte Separation Medium）是一种广泛应用于分离人外周血中淋巴细胞的试剂，被广泛应用于免疫学和生物医学研究领域。

该试剂通过层析技术，可快速、高效地分离出外周血中的淋巴细胞，供后续的分析和实验使用。

一、试剂组成人外周血淋巴细胞分离液的主要成分包括离心管分层缓冲液、细胞分离密度悬液、所需的辅助试剂和脏器灭菌液等。

离心管分层缓冲液的成分通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、酵母精、酵母根、胰蛋白水解物、洋葱提取物、N-酰胺毛细管蓝等。

细胞分离密度悬液则通常包含氯化钠、氯化无水亚铁、葡萄糖、胰蛋白水解物等，以及一些辅助试剂如生理盐水、浓度为2%的纯度高粘度明胶等。

辅助试剂方面，常用的有人凝血酶、去细菌酶、维生素C和青霉素等。

脏器灭菌液则是为了确保细胞分离过程中试剂和设备的无菌。

二、试剂使用方法1.准备工作在开始实验前，应准备好所需的实验试剂和设备，并确保所用的所有物品和材料都是无菌的。

同时，应将离心管分层缓冲液和细胞分离密度悬液放在常温下静置30分钟以上。

2.外周血分离取相应容量的外周血标本，在无菌条件下加入带有抗凝剂的离心管中，并轻轻倾转混合均匀，避免凝块形成。

置于无菌离心管架中，以1000-1500r/min离心5-10分钟，离心后分血浆、白细胞层和红细胞层。

3.分离淋巴细胞将离心后的中间白细胞层完全转移至新的离心管中，加入适量的生理盐水进行洗涤，离心1500r/min 5分钟。

倒掉上清液，留下沉淀。

重复该步骤2-3次。

洗涤后，加入等量的细胞分离密度悬液轻轻混合，再次离心。

离心1000r/min 20分钟。

此步骤可以使淋巴细胞充分分离。

4.收集淋巴细胞将分离好的淋巴细胞沉淀取出，加入等量的生理盐水或适宜的培养基中进行悬浮，使淋巴细胞悬浮液浓度适宜。

然后可以根据实验需要进行后续分析和实验操作。