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测定细菌生长曲线

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1 / 11 实验七 测定细菌生长曲线

一、 实验目的

1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；

2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；

3. 反复练习无菌操作技术；

4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；

5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法

二、 实验原理

将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。

图一 微生物生长曲线示意图

单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。

生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示。其计算公式为：

2lg/)lg(lg1212WWttG

式中t1和t2为所取对数期两点的时间；

W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L）或OD。

三、 实验仪器、材料和用具

1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板； 2 / 11 2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基

3. 实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；

4. 实验用具:无菌1000ul吸头80个;无菌5000ul吸头2个;比色皿9个+共用参比杯一个.

四、 实验步骤

1. 准备菌种：将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块

2. 分为三个小组：

第（1）小组

取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm

取3.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm

取5.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm

第（2）小组

取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm

取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm

取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm

第（3）小组

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 110rpm

每培养一小时取样一次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶子测量发酵9h结束测pH.

3. 测量：选用600nm波长，以蒸馏水作为参比，开始培养前测定每组培养液的OD值作为起始点。开始培养后，每小时吸取测定一次OD值。

五、 实验结果及分析

1. 实验数据：

表一 三个小组时间-OD数据

开始取样时间 10:55 12:01 12:39 13:17 13:53

结束取样时间 9:55 11:01 12:09 12:47 13:23 13:59

发酵时间 0 1 2 2.5 3 3.5

ODt 大肠杆菌 单菌落 0.004 0.024 0.027 0.027 0.025 0.036

37℃110rpm -0.010 0.049 0.164 0.255 0.312 0.327

30℃200rpm -0.010 0.043 0.088 0.158 0.242 0.361

1.0mL 0.010 0.070 0.158 0.266 0.372 0.436

3.0mL 0.039 0.096 0.257 0.373 0.420 0.451

5.0mL 0.067 0.134 0.302 0.361 0.334 0.456

枯草杆菌 37℃200rpm 0.008 0.023 0.076 0.132 0.184 0.254

30℃200rpm 0.013 0.032 0.052 0.088 0.091 0.125

37℃110rpm 0.007 0.017 0.098 0.130 0.230 0.253

OD=ODt-OD0 大肠杆菌 单菌落 0.004 0.020 0.023 0.023 0.021 0.032

37℃110rpm -0.010 0.059 0.174 0.265 0.322 0.337

30℃200rpm -0.010 0.053 0.098 0.168 0.252 0.371

1.0mL 0.010 0.060 0.148 0.256 0.362 0.426

3.0mL 0.039 0.057 0.218 0.334 0.381 0.412 3 / 11 开始取样时间 14:29 15:35 16:43 17:50 18:57 19:07 20:12

结束取样时间 14:35 15:43 16:50 17:57 19:09 20:07 21:12

发酵时间 4 5 6 7 8 9 10

ODt 大肠杆菌 单菌落 0.065 0.267 0.395 0.454 0.457 37℃110rpm 0.333 0.340 0.342 0.360 0.362 30℃200rpm 0.439 0.566 0.570 0.588 0.586 1.0mL 0.464 0.446 0.446 0.458 0.440 3.0mL 0.487 0.470 0.457 0.483 0.458 5.0mL 0.469 0.457 0.464 0.482 0.478

枯草杆菌 37℃200rpm 0.337 0.428 0.517 0.590 0.686 0.711 0.711

30℃200rpm 0.171 0.261 0.370 0.540 0.628 0.606 0.652

37℃110rpm 0.295 0.302 0.305 0.305 0.352 0.352 0.378

OD=ODt-OD0 大肠杆菌 单菌落 0.061 0.263 0.391 0.450 0.453 37℃110rpm 0.343 0.350 0.352 0.370 0.372 30℃200rpm 0.449 0.576 0.580 0.598 0.596 1.0mL 0.454 0.436 0.436 0.448 0.430 3.0mL 0.448 0.431 0.418 0.444 0.419 5.0mL 0.402 0.390 0.397 0.415 0.411

枯草杆菌 37℃200rpm 0.329 0.420 0.509 0.582 0.678 0.703 0.703

30℃200rpm 0.158 0.248 0.357 0.527 0.615 0.593 0.639

37℃110rpm 0.288 0.295 0.298 0.298 0.345 0.345 0.371

2. 作图、简要分析及代时计算：

1） 取一个大肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm

图一 单菌落大肠杆菌生长曲线

这条曲线属于比较标准的“S”形曲线，很容易看出调整期和对数期，由于单菌落菌较少，而且从固体培养基转移至液体培养基环境变化较大，所以出现了长达4小时的调整期，但可以看出，调整期之后这瓶菌都生长良好。 5.0mL 0.067 0.067 0.235 0.294 0.267 0.389

枯草杆菌 37℃200rpm 0.008 0.015 0.068 0.124 0.176 0.246

30℃200rpm 0.013 0.019 0.039 0.075 0.078 0.112

37℃110rpm 0.007 0.010 0.091 0.123 0.223 0.246 4 / 11 计算代时：取培养4小时到5小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。

由代时计算公式，t2－t1=1h W1=0.061 W2=0.263

代时 2lg/)lg(lg1212WWttGhh474.02lg/)061.0lg263.0(lg1

2） 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm

图二 大肠杆菌菌生长曲线（取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，37 ℃

110rpm）

接种后几乎没有调整期出现，大肠杆菌很快适应了新的环境并开始呈指数增长，估计是新的培养环境和原有环境较一致，而且在培养最初的时候溶氧和酸碱度都较为适宜，但是这瓶菌是稳定期OD最小的，估计是培养基最初分装不均产生的。

计算代时：取培养2小时到2.5小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。

由代时计算公式，t2－t1=0.5h W1=0.174 W2=0.265

代时 2lg/)lg(lg1212WWttGhh824.02lg/)174.0lg265.0(lg5.0

3） 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基，30 ℃ 200rpm 5 / 11

图三 大肠杆菌生长曲线（取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基，30 ℃ 200rpm）

可以看出温度对大肠杆菌适应环境产生了一定的影响，使它在调整期滞留了较长的时间，且在对数期增长较慢，应该是酶活性对细胞复制的影响所致。

计算代时：取培养2.5小时到3.5小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。

由代时计算公式，t2－t1=1h W1=0.168 W2=0.371

代时 2lg/)lg(lg1212WWttGhh875.02lg/)168.0lg371.0(lg1

4） 取1.0ml大肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm

图四 大肠杆菌生长曲线（取1.0ml大肠杆菌接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm）

这是大肠杆菌培养的最适调节，可以看出其生长良好，调整期较短，对数期较长。

计算代时：取培养2小时到3小时之间的数据（对数生长期）来计算代时。

由代时计算公式，t2－t1=1h W1=0.148 W2=0.362

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微生物实验报告：测定细菌生长曲线

微生物实验报告：测定细菌生长曲线

测定细菌生长曲线

一、 实验目的

1． 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；

2． 学习液体培养基的配制以及接种方法；

3． 反复练习无菌操作技术；

4． 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；

5． 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；

二、 实验原理

将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：

G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]

式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。

三、 实验器材

大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；

培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；

取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；

测定细菌生长曲线

测定细菌生长曲线

微生物实验

实验七 测定细菌生长曲线

一、 实验目的

1. 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；

2. 学习液体培养基的配制以及接种方法；

3. 反复练习无菌操作技术；

4. 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；

5. 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法

二、 实验原理

将一定量的细菌接种在液体培养基内，在一定条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，成为生长曲线（如图一）。

图一 微生物生长曲线示意图

单细胞微生物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（生长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。

生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程的动态。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数板法、平板菌落计数法、称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示。其计算公式为：

2lg/)lg(lg1212WWttG

式中t1和t2为所取对数期两点的时间；

W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L）或OD。

三、 实验仪器、材料和用具

1. 实验材料:大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；

2. 培养基:牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基 微生物实验

3. 实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各一支);培养箱, 摇床，722s分光光度计；

实验九 测定细菌生长曲线

实验九 测定细菌生长曲线

实验九 测定细菌生长曲线

实验九 测定细菌生长曲线

[实验目的] 1(了解细菌生长曲线特征:2(学习液体培养基的配制以及注意事项。3(学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。4(利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。

[仪器和材料]

1(实验材料

(1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。

(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml,250ml 三角瓶X 4瓶,大组)，配方:牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，pH7(5。

2(实验仪器

取液器(5000μl，1000μl，200tμl 各一支); 培养箱(摇床，722s分光光度汁; 1000μl 无菌吸头100个;5000μl 无菌吸头2个;1ml或4ml玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。

[实验原理]

将一定量的细菌接种在液体培养基内(在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图9 1)。

单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。

生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的( 测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值(测OD550或 OD620或OD600或OD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。

大肠杆菌生长曲线测定

大肠杆菌生长曲线测定

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。大肠杆菌生长曲线测定一、目的要求了解大肠杆菌生长曲线的基本特征，从而认识微生物在一定条件下生长、繁殖的规律。二、基本原理一定量的微生物，接种在适合的新鲜液体培养基中，在适宜的温度下培养，以菌数的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，做出的曲线叫生长曲线。一般可分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。不同的微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。测定微生物生长曲线的方法很多，有血球计数法、平板菌落计数法、称重法、比浊法等。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可利用光电比色计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测得的光密度值（OD值）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。现已有直接用试管就可以测定OD值的光电比色计（图Ⅶ-10），只要接种一支试管，定期用它测定，便可做出该菌的生长曲线。三、器材培养18—20小时的大肠杆菌培养液，盛有5ml肉膏蛋白胨液体培养基的大试管12支；72型或72．1型分光光度计，自控水浴振荡器或摇床，无菌吸管等。四、操作步骤1．编号取11支盛有肉膏蛋白胨液体培养基的大试管，用记号笔标明培养时间，即0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小时。2．接种用1ml无菌吸管，每次准确地吸取0．2ml大肠杆菌培养液，分别接种到已编号的11支肉膏蛋白胨液体培养基大试管中，接种后振荡，使菌体混匀。3．培养

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。将接种后的11支试管置于自控水浴振荡器或摇床上，37℃振荡培养。分别在0、1．5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小时将编号为对应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定光密度值。4．比浊测定以未接种的肉膏蛋白胨培养基作空白对照，选用540—560nm波长进行光电比浊测定。从最稀浓度的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其光密度值在0．1—0．65以内，记录OD值时，注意乘上所稀释的倍数。五、实验报告1．结果（1）将测定的OD值填入下表。（2）绘制大肠杆菌的生长曲线2．思考题（1）为什么说用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长状况？（2）在生长曲线中为什么会出现稳定期和衰亡期？在生产实践中怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰亡期？试举例说明。