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细菌生长曲线的测定的实验步骤

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细菌⽣长曲线的测定的实验步骤

细菌⽣长曲线的测定的实验步骤

⼀、

实验⽬的1. 了解细菌⽣长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；

2. 学习液体培养基的配制以及接种⽅法；

3. 反复练习⽆菌操作技术；

4. 了解不同细菌，不同接种⽅法在同⼀培养基上⽣长速度的不同；

5. 掌握利⽤细菌悬液混浊度间接测定细菌⽣长的⽅法

⼆、 实验原理

将⼀定量的细菌接种在液体培养基内，在⼀定条件下培养，可观察到细菌的⽣长繁殖有⼀定的规律性，如以细菌的活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成⼀条曲线，成为⽣长曲线（如图⼀）。

图⼀ 微⽣物⽣长曲线⽰意图

单细胞微⽣物的发酵具有四个阶段，即Ⅰ调整期（延滞期）、Ⅱ对数期（⽣长旺盛期）、Ⅲ平衡期（稳定期）、Ⅳ死亡期（衰亡期）。

⽣长曲线可表⽰细菌从开始⽣长到死亡的全过程的动态。不同的微⽣物有不同的⽣长曲线，同⼀种微⽣物在不同的培养条件下，其⽣长曲线也不⼀样。因此，测定微⽣物的⽣长曲线对于了解和掌握微⽣物的⽣长规律是很有帮助的。

测定微⽣物⽣长曲线的⽅法很多，有⾎球计数板法、平板菌落计数法、称重法和⽐浊法等。本实验采⽤⽐浊法测定，由于细菌悬液的浓度与混浊度成正⽐，因此，可利⽤分光光度计测定细菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在⼀定条件下的⽣长曲线。注意，由于光密度表⽰的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测定的⽣长曲线的衰亡期不明显。

从⽣长曲线我们可以算出细胞每分裂⼀次所需要的时间，即代时，以G 表⽰。其计算公式为：2

lg /)lg (lg 121

2W W t t G --=

式中t1和t2为所取对数期两点的时间；W1和W2分别为相应时间测得的细胞含量（g/L ）或OD 。 三、 实验仪器、材料和⽤具

1.实验材料:⼤肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；

2.培养基:⽜⾁膏蛋⽩胨葡萄糖培养基

3.实验仪器:取液器(5000ul, 1000ul 各⼀⽀);培养箱, 摇床，722s分光光度计；

4.实验⽤具:⽆菌1000ul吸头80个;⽆菌5000ul吸头2个;⽐⾊⽫9个+共⽤参⽐杯⼀个.

四、实验步骤1.准备菌种：将细菌接种到⽜⾁膏蛋⽩胨葡萄糖三⾓瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另

外准备单菌落平板各1块2.分为三个⼩组：

第（1）⼩组

取1.0ml⼤肠杆菌菌液接种到100ml培养基, 37 ℃ 200rpm

取3.0ml⼤肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm

取5.0ml⼤肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 200rpm

第（2）⼩组

取⼀个⼤肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm

取1.0ml⼤肠杆菌菌液接种到100ml培养基，37 ℃ 110rpm

取1.0ml⼤肠杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm

第（3）⼩组

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 30 ℃ 200rpm

取1.0ml枯草杆菌接种到100ml培养基， 37 ℃ 110rpm

每培养⼀⼩时取样⼀次(2.5h,3.5h加测1次). 对照组测量起始pH,所有瓶⼦测量发酵9h结束测pH.3.测量：选⽤600nm波长，以蒸馏⽔作为参⽐，开始培养前测定每组培养液的OD值作

为起始点。开始培养后，每⼩时吸取测定⼀次OD值。

五、实验结果及分析1.实验数据：

表⼀三个⼩组时间-OD数据

2.作图、简要分析及代时计算：

1）取⼀个⼤肠杆菌菌落接种到100ml培养基， 37 ℃ 200rpm

图⼀单菌落⼤肠杆菌⽣长曲线

这条曲线属于⽐较标准的“S ”形曲线，很容易看出调整期和对数期，由于单菌落菌较少，⽽且从固体培养基转移⾄液体培养基环境变化较⼤，所以出现了长达4⼩时的调整期，但可以看出，调整期之后这瓶菌都⽣长良好。

计算代时：取培养4⼩时到5⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.061 W2=0.263 代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=

h h

474.02lg /)061

.0lg 263.0(lg 1=-=2） 取1.0ml ⼤肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，37 ℃ 110rpm

图⼆ ⼤肠杆菌菌⽣长曲线（取1.0ml ⼤肠杆菌接种到100ml 培养基，37 ℃110rpm ）

接种后⼏乎没有调整期出现，⼤肠杆菌很快适应了新的环境并开始呈指数增长，估计是新的培养环境和原有环境较⼀致，⽽且在培养最初的时候溶氧和酸碱度都较为适宜，但是这瓶菌是稳定期OD 最⼩的，估计是培养基最初分装不均产⽣的。 计算代时：取培养2⼩时到2.5⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=0.5h W 1=0.174 W 2=0.265代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h

824.02

lg /)174.0lg 265.0(lg 5.0=-=

3） 取1.0ml ⼤肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，30 ℃ 200rpm

图三 ⼤肠杆菌⽣长曲线（取1.0ml ⼤肠杆菌接种到100ml 培养基，30 ℃ 200rpm ） 可以看出温度对⼤肠杆菌适应环境产⽣了⼀定的影响，使它在调整期滞留了较长的时间，且在对数期增长较慢，应该是酶活性对细胞复制的影响所致。 计算代时：取培养2.5⼩时到3.5⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.168 W 2=0.371 代时 2lg/)lg (lg 1212W W t t G

--=

h h

875.02

lg /)168.0lg 371.0(lg 1=-=

4） 取1.0ml ⼤肠杆菌菌液接种到100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm

图四 ⼤肠杆菌⽣长曲线（取1.0ml ⼤肠杆菌接种到100ml 培养基, 37 ℃ 200rpm ） 这是⼤肠杆菌培养的最适调节，可以看出其⽣长良好，调整期较短，对数期较长。 计算代时：取培养2⼩时到3⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.148 W 2=0.362

代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h

775.02

lg /)148.0lg 362.0(lg 1=-=

5） 取3.0ml ⼤肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，37 ℃ 200rpm

图五 ⼤肠杆菌⽣长曲线（取3.0ml ⼤肠杆菌接种到100ml 培养基，37 ℃ 200rpm ） 接种量的增加没有产⽣太⼤的影响，⽣长曲线没有太⼤变化。

计算代时：取培养2⼩时到2.5⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=0.5h W 1=0.218 W2=0.334

代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h

812.02

lg /)218.0lg 334.0(lg 5.0=-=

6） 取5.0ml ⼤肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，37 ℃ 200rpm

图六 ⼤肠杆菌⽣长曲线（取5.0ml ⼤肠杆菌菌液接种到100ml 培养基，37 ℃200rpm ）

3⼩时出现了⼀次明显的波动，应该是测量过程中没有摇匀的结果，忽略它之后，这条⽣长曲线属于正常形态，⽐较前两天⽣长曲线，发现5mL 得到的最⼤OD 反⽽减⼩了，说明在⼀定量的培养基下，初始接种量对最后结果影响不⼤。最⼤OD 应该是受到了最初添加培养基的影响。

计算代时：取培养1⼩时到2⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.067 W2=0.235 代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G

--=

h h

552.02

lg /)067.0lg 235.0(lg 1=-=

7） 取1.0ml 枯草杆菌接种到100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm

图七 枯草杆菌⽣长曲线（取1.0ml 枯草杆菌接种到100ml 培养基， 37 ℃ 200rpm ） 枯草杆菌的⽣长曲线包含了调整期、对数期和很⼩⼀部分稳定期，虽然稳定期很短，但是已经可以看出停⽌⽣长的趋势，说明枯草杆菌的代时较长。 计算代时：取培养3⼩时到4⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.176 W 2=0.246 代时 2lg /)lg(lg 1212W W t t G

--=

h h

108.12

lg /)176.0lg 246.0(lg 1=-=

8） 取1.0ml 枯草杆菌接种到100ml 培养基， 30 ℃ 200rpm

图⼋ 枯草杆菌⽣长曲线（取1.0ml 枯草杆菌接种到100ml 培养基， 30 ℃ 200rpm ） 温度降低后，⽣长变得缓慢了，最后达到的最⼤OD 也更⼩了，代时加长。 计算代时：取培养4⼩时到5⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.158 W 2=0.248 代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h

537.12

lg /)158.0lg 248.0(lg 1=-=

9） 取1.0ml 枯草杆菌接种到100ml 培养基， 37 ℃ 110rpm

图九 枯草杆菌⽣长曲线（取1.0ml 枯草杆菌接种到100ml 培养基， 37 ℃ 110rpm ） 4⼩时时，似乎由对数期进⼊了稳定期，但是对⽐前两组数据，此时的OD 值明显偏⼩，所以分析，可能此时突然有外因影响，使细胞进⼊了调整期，可以看到后来7、8⼩时左右细菌⼜有增长趋势。

计算代时：取培养2.5⼩时到3⼩时之间的数据（对数⽣长期）来计算代时。 由代时计算公式，t 2－t 1=1h W 1=0.123 W2=0.223

代时 2lg /)lg (lg 1212W W t t G --=h h

582.02

lg /)123.0lg 223.0(lg 5.0=-=

3. 发酵结束pH 对照组pH=7.5

实验结束后所有瓶pH 均⼩于6.4pH 全部降低，说明⼤肠杆菌和枯草杆菌发酵均产⽣了酸。 4. 分析

表⼆ 不同环境和菌种⽣长⽐较

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微生物实验报告：测定细菌生长曲线

微生物实验报告：测定细菌生长曲线

测定细菌生长曲线

一、 实验目的

1． 了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；

2． 学习液体培养基的配制以及接种方法；

3． 反复练习无菌操作技术；

4． 了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；

5． 掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；

二、 实验原理

将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：

G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]

式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。

三、 实验器材

大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；

培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；

取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；

实验：计数法测定细胞生长曲线

实验：计数法测定细胞生长曲线

1 实验内容：计数法测定细胞生长曲线

作者：王卫东 实验日期：2001.10.24-2001.10.31

实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。

实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。

仪器、材料和试剂：

1、 仪器：CO2 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板

2、 材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精 灯

3、 试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶

实验步骤：

1、 细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培 2 养基制成细胞悬液后计数。

2、 接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实际接种每瓶5.9×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶）。

3、 计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。

4、 绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。

结果与讨论：

1、 细胞计数结果如下：

天数 0 1 2 3 4 5 6 7

细胞数

（万/瓶） 5.9 12 24 66 93 321 318 210

细胞数

实验报告微生物的生长曲线实验

实验报告微生物的生长曲线实验

实验报告微生物的生长曲线实验

实验报告

实验目的：

本实验旨在通过监测微生物的生长曲线，研究微生物的生长规律，并探讨其对环境因素的响应。

实验材料及方法：

1. 材料：

- 微生物培养基

- 无菌培养瓶或试管

- 微量移液器或移液管

- 无菌平板

- 培养箱或恒温摇床

- 显微镜

2. 方法：

（这里使用编号列表来列出具体的实验步骤）

实验步骤：

1. 实验前准备：

（这里写明实验前的准备工作，如准备培养基、灭菌操作等） 2. 微生物获取：

（这里描述如何获取微生物样品，如从环境中采样、有选择地分离微生物菌落等）

3. 微生物培养：

（这里阐述微生物的培养过程，包括制备培养基、接种微生物样品等步骤）

4. 生长曲线检测：

（这一部分是实验的重点，需要详细记录实验过程和结果。可以使用表格、图表等方式展示数据）

5. 结果分析：

（根据实验结果，对微生物生长曲线进行分析和解读，可结合图表进行说明）

6. 讨论与结论：

（根据实验结果的分析，进行讨论并得出结论，可以对实验中可能存在的问题进行分析，提出进一步改进的建议）

实验结论：

通过本实验对微生物的生长曲线进行监测，我们得出了如下结论： （这里简洁地总结实验结果得出的结论，为了增加字数可以进一步展开阐述，如讨论生长曲线的不同阶段、影响微生物生长的环境因素等等）

实验报告结束。

注意：本实验报告以“实验报告”的格式为基础，根据实验内容进行适当的调整。其中，具体的实验步骤和结果可以根据实际情况进行修改和补充，以确保文章的准确性和完整性。

实验三微生物生长曲线的测定

实验三微生物生长曲线的测定

实验三 微生物生长曲线的测定

一、实验目的目的

1、了解细菌生长曲线特点及测定原理

2、学习用比浊法测定细菌的生长曲线

二、实验原理

将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，定时测定培养液中的菌量，以菌量的对数作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、对数期、稳定期和衰亡期。这四个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所改变。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解各菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。

测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简便。

三、实验材料

1、菌种

2、培养基 ：肉膏蛋白胨培养基

3、仪器和器具

721分光光度计，比色杯，恒温摇床，无菌吸管，试管，三角瓶。

4、流程

种子液→标记→接种→培养→测定

四、实验步骤 1、种子液制备

取细菌菌种1支，以无菌操作挑取1环菌液，接入肉膏蛋白胨培养液中，培养18h作种子培养液。

2、标记编号

取盛有30mL无菌肉膏蛋白胨培养液的三角瓶6个，分别编号为0、4、8、12、16、20。

3、接种培养

用2mL无菌吸管分别准确吸取1mL种子液加入已编号的6个三角瓶中，于37℃下振荡培养。然后分别按对应时间将三角瓶取出测定OD值。

4、生长量测定

将未接种的肉膏蛋白胨培养基倾倒入比色杯中，选用600nm波长分光光度计上调节零点，作为空白对照，并对不同时间培养液从0h起依次进行测定，对浓度大的菌悬液用未接种的牛肉膏蛋白胨液体培养基适当稀释后测定，使其OD值在.～以内，经稀释后测得的OD值要乘以稀释倍数，才是培养液实际的OD值。