2016-7-20 科内讲课 脑脊液常规检验规范

• 墨汁染色原理：在菌细胞周围存在黏多糖荚膜物， 应用墨汁湿片法能证明荚膜的存在，新型隐球菌 的荚膜取代了墨汁中的胶状碳粒，呈现清楚无色 透明的晕圈环绕着菌体
新型隐球菌染色镜检
1、将标本3000转离心10分钟，取10μl沉淀
物放于载玻片上。
2、 取10μl墨汁加于沉淀物上，再覆盖上盖
玻片，注意先将盖玻片一边接触墨汁而后
• 三、细胞分类 • 2、染色分类法
–如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时，可 将脑脊液离心沉淀1500转5分钟，取沉淀物2滴，加正常 血清1滴，推片制成薄膜，置室温或37℃温箱内待干， 行瑞氏染色（经验：染液3滴+缓冲液7滴，染3分钟。否 则染黑不易辩认细胞类型）。用高倍镜或油镜分类。如 见有不能分类的细胞，应请有经验技术人员复核，并另 行描述报告，如脑膜白血病细胞或肿瘤细胞、内皮细胞 等。
脑脊液 常规检验规范
玉林市红十字会医院检验科临检组 2016年7月20日
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脑脊液标本的采集与处理
• 1.脑脊液主要由临床医师采集，一般行腰椎穿剌，必要时从 小脑延髓池或侧脑室穿剌采集。将脑脊液分别收集于3个无 菌试管中，每管l～2ml： – 第一管做化学或免疫学检査 – 第二管做病原微生物学检査 – 第三管做理学和显微镜检査。
升脑脊液的细胞总数。对压线细胞按“数上不数 下、数左不数右”的原则。
• 二、白细胞计数 1、非血性标本：小试管内加入冰酸酸1～2滴，转
动试管，使内壁沾有冰酸酸后倾去，然后滴加混 匀脑脊液3～4滴，待数分钟红细胞溶解后，混匀 充池， 按白细胞计数法计数。
• 二、白细胞计数 • 2、混浊或血性标本：将混匀脑脊液用
1%冰醋酸溶液按全血白细胞计数法稀释 后进行计数。
• 二、白细胞计数
校正
• 因穿刺出血而来的白细胞数，用下式公式进行校正。
• 脑脊液白细胞校正数=脑脊液白细胞计数值－出血增加 的白细胞数
• 出血增加的白细胞数=外周血白细胞数×脑脊液红细胞 数/外周血红细胞数
• 总式
• 三、细胞分类 • 1、直接分类法
• 1、加的墨汁不要太多，以免加盖玻片时外溢造成 污染。 • 2、脑脊液墨汁染色阳性则高度怀疑新型隐球菌。
• 3、注意将隐球菌与白细胞进行仔细鉴别，
隐球菌菌体中央有折光颗粒，而白细胞没有。
新型隐球菌染色镜检注意事项
• 4、因为墨汁染液不能高压灭菌，每次操作应进行
阴性对照，以防墨汁污染造成假阳性。
• 5、阳性标本要求送微生物室培养鉴定，同时请主 管辨认复核。
Pandya试验临床意义
正常时多为阴性。有脑组织和脑膜感 染性疾患（如化脓性脑膜炎、结核性脑膜
炎、中 枢神经系统梅毒、脊髓灰白质炎和
流行性脑炎等）、 蛛网膜下腔出血及蛛网 膜下腔梗阻等时常呈阳性反 应。脑出血时 多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑 脊 液中，亦可呈阳性反应。
有形成分分析
• 一、红细胞计数：
透明度
1.正常为清澈透明；病理情况下可有不同改变的混浊 welcome to use these PowerPoint templates, New
Content design, 10 years experience 脑脊液中细胞数大于 300× 106/L或含大量细菌、真菌时 呈不同程度混浊。 2.结核性脑膜炎时呈毛玻璃样浑浊； 3.化脓性脑膜炎时呈脓性浑浊； 4.正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而呈轻度浑浊。
– 成人（0～8）×106/L; – 儿童（0～15）×106/L；
– 新生儿（0～30）×106/L。
细胞分类参考区间
成人： 淋巴细胞40%～ 80% 单核细胞15% ～45%， 中性粒細胞<6%。 新生儿 ： 淋巴细胞5%～35% 单核细胞 50% ～90% 中性粒細胞<8%。
脑脊液常规检验注意事项
检验项目
一般形状检查 化学检查 有形成分及病原微生物检查 免疫学检查
一般形状检查
颜色
正常脑脊液颜色为无色透明，病理情况下可有不同的改变：
1.红色：穿刺损伤出血，蛛网膜下腔出血，脑室出血。 2.黄色：颅内陈旧性出血。
3.米汤样：为白细胞增多，见于化脓性脑膜炎
4.绿色：可见于铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌 引起的脑膜炎。 5.褐色或黑色 黑色可见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素瘤； 褐色可见于脑出血的康复期。
– 白细胞计数后，将低倍镜换到高倍镜，直接在 高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞 （包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞， 应数100个白细胞，并以百分率表示。若白细 胞数少于100个，应直接写出单个核、多个核 细胞的具体数字，用细胞30/50。
• 3、细菌感染时，如化脓性脑膜炎，细胞数显著增
加，早期以中性粒细胞为主。
脑脊液常规检验临床意义
• 4、脑寄生虫病时，可见较多嗜酸性粒细胞。 • 5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数 红细胞、红细胞吞噬细胞及含铁血黄素细跑。 • 6、脑膜白血病和脑膜癌时，可见白血病细胞或癌
细胞。
墨汁染色
–如果用玻片离心沉淀仪，则取0.5ml脑脊液制片。
–如果白细胞总数在30个以下，可不做分类计数。
• 四、仪器法细胞计数、分类
• 仪器：血细胞分析仪 • 要求： • 标本无凝固物； • 清洗仪器管道，直至细胞本底为0。 • 最好使用体液细胞模式（专用通道） 检测标本。
细胞计数参考区间
• 红细胞计数：0×106 /L。 • 白细胞计数：
• 1.计数应在标本采集后1小时内完成。如放置过久， 细胞会破坏、沉淀或纤维蛋白礙集，导致计数不 准确。
• 2.细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞区别。 前者不溶于醋酸，加优质墨汁后可见荚膜。
• 3.使用计数板后应立即淸洗，以免细胞或其他成 分黏附在计数板上，影响使用。
脑脊液常规检验临床意义
• 1、中枢神经系统病变时，脑脊液细胞数可增多， 增多程度及细胞种类与病变性质有关。 • 2、病毒性脑膜炎、结核性膜炎或真菌性脑膜炎 时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主，早 期伴有中性粒细胞及单核细胞。
缓缓斜放下，使其不产生气泡。
3、在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到
后，转换高倍镜确认。
新型隐球菌染色镜检
4、结果报告 (1)如果涂片在墨汁的黑背景下呈现清楚的晕圈，并
且在晕圈内可见菌细胞，报告“墨汁染色阳性”。
(2)如果涂片在墨汁的黑背景下无清楚的晕圈， 报告“墨汁染色阴性”。
新型隐球菌染色镜检注意事项
脑脊液标本的采集与处理
• 2.标本采集后无特殊处理要求，应立即送
检， 不超过1小时。久置可致细胞破坏，影 响细胞计数及分类检査，葡萄糖分解使含 量降低，以及病原菌破坏或溶解。病原微 生物检验标本须室温条件下运送，以免冷
藏致某些微生物死亡。
脑脊液标本的采集与处理
• 3.细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标 本 时，可用EDTA盐抗凝（血常规管）。
• 脑脊液常规检验分析后质量控制：
1、危急值报告。 2、复查复核、审核签发。 3、保留标本。
4、特殊交班。
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化学检验
蛋白质定性试验
Pandya试验： 脑脊液中球蛋白（glubin，Glb）与苯酚结合， 可形成 不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀， 即潘 （Pandy)试验阳性
结果判定 阴性：清澈透明，不显雾状。 阳性： ±：极弱阳性微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。 1+：为灰白色云雾状； 2 + ：为白色浑 浊； 3 +：为白色浓絮状沉淀； 4 +：为白色凝块
• 1、澄淸标本：可混匀脑脊液后用滴管直接滴 入血细胞计数池，静置1分钟，在高倍镜下.计数5 个大方格内红细胞数，乘以2即为每微升红细胞 数。 如用升表示，则再乘以106。
一、红细胞计数：
2、浑浊或血性标本：取混匀的脑脊液20μl,加入红 细胞稀释液0.38ml（稀释20倍），混匀后充池，静 置下沉2～3分钟，计数中央大方格四角和正中中方 格内红细胞数（5个中方格），乘以1000即为毎