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我国药品卫生微生物检验的现状、发展及思考程家国2012108124 2012级卫生检验公共卫生学院大理大学【摘要】药品卫生微生物学检验,是一门应用微生物技术对药品在研制、生产、贮藏过程中进行质量检测和安全性评价的专业技术学科。
《中国药典》在2000年版正式收载药品微生物限度检查法。
新中国成立以来，我国卫生微生物检验取得了很大的进展，大大提高了检验水平，然而药品微生物检验工作中却出现了一些问题，对临床用药造成了一定的影响。
本文简要讲述了我国药品卫生微生物检验工作的现状发展及思考，并且分析了我国药品卫生微生物检验工作中存在的主要问题，最后提出了我国药品卫生微生物检验工作的几点建议，旨在提高我国药品卫生微生物检验的水平，控制药品卫生微生物检验的质量。
【关键词】我国药品卫生微生物检验;现状;发展;思考1 前言最近几年来，随着卫生微生物检验的国内交流、国际交流较广，并且引起了许多先进的仪器设备，大大提高了卫生微生物检验水平，然而，我国药品卫生微生物检验工作中出现了一些问题，这些问题在很大程度上降低了我国药品微生物检验质量，甚至对临床用药造成了很大的影响。
本文尝试性提出了我国药品卫生微生物检验工作的几点建议。
2 我国药品卫生微生物检验工作的现状卫生微生物检验的设备仪器有很多，例如免疫分析仪、尿液分析仪、血液分析仪、全自动生化分析仪、全自动细菌培养和鉴定仪，这些设备仪器得到了广泛应用。
很多医院使用的药敏纸片、细菌编码鉴定卡、商品培养基的质量较好。
而检验人员队伍已经被大量研究生、本科生、大专生取代，甚至逐渐培养出大量临床微生物专家药品卫生微生物检验的国内交流、国际交流较广，药品卫生微生物检验的质量得到了广泛的认可和接受，大大提升了我国药品卫生微生物检验水平。
2.1药品微生物污染率逐年减少。
我国大部分省份药品卫生微生物污染率呈逐年减少趋势。
说明GMP认证和GSP达标工作的推行收到了一定的成效,同时,生产企业的质量意识也在不断提高。
无菌检查试验的先天缺陷及应对策略的思考研究【摘要】无菌检查试验长久以来都存在着较大的争议，原因是无菌检查试验本身存在先天性的缺陷。
为了降低无菌检查试验中因先天缺陷而引起的消极影响，促进我国药品中的无菌检查试验的规范性，本文将对无菌检查试验的先天缺陷进行分析，并结合西方对无菌检查试验的经验，对我国药品中的无菌检查试验管理提出思考。
【关键词】无菌检查试验；先天缺陷；应对策略前言无菌检查试验是用于检查药典或其他品种是否无菌的一种检查方法。
在我国，无菌检查法的历史已经超过数十年，但是它的质量检测问题因其先天缺陷，一直饱受争议。
近年来，为了降低无菌检查试验先天缺陷对试验结果的影响，欧美和日本等国家对药典中的无菌检查试验做出了一些调整和改变。
为规范我国的无菌检查试验方法，减少试验结果的失误率，下文将分析西方国家对无菌检查试验的做法，并探究我国应当采取的应对措施。
无菌检查试验的先天缺陷2.1采样无菌检查试验在进行样品采集的过程中，由于没能以统计学的角度进行采集，所以检测污染物的能力不足，以致于检测结果容易出现错误。
根据相关的调查研究显示，污染率越低，污染物漏检的可能性越大，而产品的样品不可能进行一一检测，所以检测时不可避免地会出现漏检的情况[1]。
2.2培养条件自然界中的真菌生长的环境温度为25℃-30℃左右，细菌的生长温度则为25℃-40℃左右，但是，药典中规定的微生物生长条件是在20℃-25℃左右，由此可见，药典中所要求的微生物培养条件，并非菌类最适宜的生长条件。
药典中所规定的微生物培养温度之所以不同于微生物的适宜温度，是因为检测试验的目的是为了检测环境中的污染菌，而不是专门培养菌类。
但是研究结果发现，使用不同的培养基检查不同的菌类，其结果总是存在缺陷，往往不尽人意。
西方国家对克服无菌检查试验缺陷的对应措施3.1欧洲欧洲药典中对无菌试验做出了相应的规定，在“5.1.9无菌试验使用指南”这一章节中明确规定，无菌试验的成功源自微生物的生长条件、采样方式以及批次是否一致等，所以，灭菌过程比无菌试验更为重要。
微生物检测中培养基的质量控制培育基是是发酵过程或动植物细胞大量培育中供微生物或动、植物细胞的生长、繁殖或积累代谢产物,以合成生物化工产品所必需的养分基质。
培育基的制备和使用是微生物试验室检测工作的重要环节。
近些年来商品化的干燥培育基成品培育基进展快速，但由于该行业的生产工艺设备还相对比较落后,质控手段也不够健全,市场监管又比较薄弱,这些都影响培育基的质量本文对微生物试验室在培育基购置贮存、制备、使用等方面应实行的质量掌握措施进行争论,以便微生物试验室不断完善和提高培育基的质控水平。
1 培育基的购置与验收1.1 购置微生物检验用的各种药品、试剂和干粉培育基必需是专业厂家生产的产品,质量必需符合有关的质量标准,并且生产商应供应培育基的名称、产品编号、批号、各种成分和任何补充成分、培育基使用前的pH值贮存资料及有效期等信息,以利于使用者对产品进行记录和比较。
应选择产品市场信誉度高、有质量保证力量和服务保证力量的企业；企业是否通过了质量管理体系的认证是较为客观的评价指标。
1.2 验收购买的培育基到货后，应有专人做好接受和验收工作，应认真核对生产企业供应的资料、培育基名称、规格数量、外观特征、批号、保质期是否符合要求。
每批培育基到货物后都应对培育基的质量进行检测，满意检测方法规定的要求后方可投入使用。
2 培育基的储存干粉培育基应保存在阴凉干燥处，要避开阳光直射；未开瓶的培育基保存期限应根据生产厂家供应的信息执行，开瓶后的干粉培育基易吸湿，应留意防潮并尽快用完。
应定期对储存中的培育基进行常规检查，如容器密闭性复查、首次开封日期、内容物的感官检查，假如培育基发生结块、颜色特别和其他变质迹象就不能再使用。
3 培育基的制备3.1 培育基用水培育基制备用水应使用电阻率不小于30万cm的蒸馏水或与其同质的水，最好不使用离子交换器生产的去离子水。
3.2 称量称量时要用专用的角匙，避开交叉污染而影响检验结果；干粉培育基易吸潮，如有条件，尽量在湿度较低的房间称取培育基。
无菌检查试验的先天缺陷及应对策略的思考 - 【摘要】本文对无菌检查试验的存在的问题进行介绍并提出应对策略。
【关键词】无菌检查；试验；策略1.无菌检查试验的先天缺陷1。
1采样ﻭ由于没有从统计学的角度考虑采样，使无菌检查试验检测污染物的能力受到限制，出现错误结果的可能性很大。
有学者从统计学角度分析发现污染率越低对污染物漏检的可能性越大。
由于不可能对一批成品的每一包装单位进行检测,所以药品生产者必须遵守GMP进行生产。
无菌生产工艺的验证、良好厂房设计、员工的培训，才能取得高水平的无菌保障［５］.研究表明，药典规定的微生物培养条件并不是许多细菌和真菌的最适生长条件[6]。
细菌生长在二十五摄氏度到四十摄氏度之间,真菌生长在二十五摄氏度到三十摄氏度之间，而药典规定在二十摄氏度到二十五摄氏度下培养。
药典对温度规定的目的是检测环境中的污染菌.药典无菌试验专家委员会推荐25～３0℃为细菌、酵母菌和霉菌的培养温度［6］。
用不同的培养基检查不同的细菌、酵母菌和霉菌，结果发现，二十六摄氏度培养真菌和酵母菌１０天后，胰酪胨大豆胨肉汤培养基的效率不及蛋白胨肝消化肉汤等培养基［6］。
硫乙醇酸盐流体培养基也不适用于苛求厌氧菌的恢复培养［7］.胰酪胨大豆胨肉汤培养基不适用于对苛求微生物的培养。
2．西方国家相应的对策2。
12.22。
3在2021年发布的《治疗产品无菌检查指南》中提出了控制无菌检查试验的附加试验一停滞试验.停滞试验目的是要证明使用的培养基在整个培养期是否具有支持生长的能力。
《治疗产品无菌检查指南》的原理部分指出：统计学考虑也是无菌检验成功的重要一环;药典无没有对所使用的培养基作具体要求,只是从原则上菌检查方法不利于对低水平污染的检出。
3。
对规范我国药品标准中无菌检查试验的思考3．1应对无菌检查试验做出充分的解释ﻭ我国少数药品生产企业的部分从业人员对药品无菌检查试验的原理理解不深，导致无菌检查试验方法不规范.药品监督管理部门对生产企业监管的同时，应制订与药典“无菌试验使用指南"相类似的文件，促进我国药品质量的提高.我国药典没有对无菌检查试验的原理、所起作用等做详细的解释说明。
基层实验室细菌培养检查存在的问题及改进方法宝鸡市中医医院检验科张永宁（主管检验师）邮编：72100目前，许多基层实验室临床细菌学培养检查中过多地沿用传统的分类细菌学那一套方法，即采集标本-接种培养-纯培养-鉴定药敏-报告。
由于分类细菌学和临床细菌学研究方法和目的有一定差异，这种按部就班的方法，往往使取得的信息陈旧而失去助诊意义，已不能适应临床的客观需要【1】，应进行改进。
1当前基层实验室细菌学培养检测存在问题1.1标本采集过程存在问题1.1.1被动采集标本造成培养阳性率降低或培养结果与临床诊断不符。
许多基层医院医生习惯根据实验使用抗生素，无效时才做到细菌培养，这样造成多数患者在留取标本前已经使用过抗生素，细菌处于抑制状态或转成L型状态，使培养阳性率大为降低。
1.1.2大多数基层实验室标本由护士采集或病人自采送检验科室的模式。
而细菌培养标本具有不同与其一般检验对标本的要求，对标本采集有严格的要求。
例如血液培养需要在病人高热,寒战时由护士通知检验人员以无菌手续，床头采集；前列腺液采集需由医生清洁患者尿道口后按摩采集于无菌容器；痰液标本需护士指导病人用0.1%心洁尔漱口后辅助病人深呼吸气后用力咳出肺部的痰液等。
病人自菜标本造成许多标本被污染，使培养结果的可靠性大打折扣。
1.2方法学问题1.2.1基层实验室细菌培养检查以传统手工法为主，多沿用传统分类细菌学检查方法，因报告迟缓失去助诊意义。
1.2.2忽视标本的革兰染色直接显微镜检查，使许多有用的信息被忽视。
1.2.3盲目追求鉴定项目多而全，造成浪费或延时；或仅凭形态染色及菌落特征等数个鉴定实验即草率出报告。
1.2.4培养基悬着单一，致病菌检出率低。
对当前我国细菌抗菌药敏试验的建议我国与世界各国一样面临着感染菌的耐药性明显增多的威胁,尽管新型抗菌药物不断出现,但常见感染菌的耐药性也随之增加。
国内耐甲氧西林的金黄色葡萄球及血浆凝固酶阴性的葡萄球菌（MRSA）及血浆凝固酶阴性的葡萄球菌的检出率在20%-80%之间，耐万古霉素的肠球菌（VRE），具有超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科，耐青霉素的肺炎链球菌的检出率也在增多。
因此，有效而合理的抗生素治疗更加依赖准确而及时的抗菌药敏试验。
当前，我国微生物检验手段虽有明显进步，但仍是检验各学科中的薄弱环节，很有必要加强，以适应临床诊断和治疗的需要。
（一）当前国内药敏试验中存在的主要问题。
1、方法学不统一，没有标准化。
2、市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片以及最低抑菌浓度（MIC）稀释板等缺乏严格质控，质量难以保证。
3、细菌检验队伍薄弱，检验人员知识更新不够，对药敏试验方法的标准化、抗菌药物的选择、影响因素等缺乏了解。
4、药敏试验报告出结果时间长，检验与临床缺乏沟通,致使药敏试验结果不能满足临床治疗要求。
为解决此类问题,必须共同完成以下任务。
（二）药敏试验方法的选择与标准化。
美国临床试验室标准化委员会（NCCLS）推荐纸片扩散法测抑菌环直径和肉汤稀释法测MIC，少数细菌和抗生素要求用琼脂稀释法。
在常规工作中选用纸片扩散法或MIC可依本单位情况而定，一般纸片扩散法较为灵活实用。
MIC对于比较抗生素间的抗菌活性或对纸片扩散法“中介”结果有补充价值。
有的试验如部分MRSA及VRE 的筛检宜用琼脂筛选平皿法。
浓度梯度药敏法（如Etest法）兼具纸片扩散法与MIC 的特点，必要时选用。
纸片扩散法，肉汤稀释法及琼脂稀释法必须标准化。
如抗生素浓度、培养基的组合、PH、细菌接种方法、接种量、培育时间、结果判定标准及结果解释等，应该按照NCCLS1997年发布的文件和全国临床检验操作规程（第2版）严格执行。
常规纸片扩散法、肉汤稀释法只适用于速生细菌。
第1篇一、实验背景无菌技术是医学、生物学、微生物学等领域中非常重要的一项技术，其目的是通过一系列严格的操作步骤，确保实验过程中使用的物品和环境保持无菌状态，从而避免微生物的污染，保证实验结果的准确性和可靠性。
本实验报告针对无菌技术进行了详细的描述和总结，以下是对该实验报告的评价。
二、实验目的与内容1. 实验目的（1）掌握无菌技术的操作原则和方法。
（2）了解无菌技术的重要性及其在医学、生物学等领域的应用。
（3）培养严谨、细致的实验态度和团队协作精神。
2. 实验内容（1）无菌操作前的准备工作：洗手、戴手套、穿无菌衣等。
（2）无菌物品的取用与传递：无菌持物钳、无菌容器等。
（3）无菌操作过程中的注意事项：防止污染、保持无菌环境等。
（4）无菌技术的实际应用：植物组织培养、微生物培养等。
三、实验方法与步骤1. 实验方法本实验采用无菌技术操作，包括无菌操作前的准备工作、无菌物品的取用与传递、无菌操作过程中的注意事项等。
2. 实验步骤（1）无菌操作前的准备工作：洗手、戴手套、穿无菌衣等。
（2）无菌物品的取用与传递：使用无菌持物钳、无菌容器等。
（3）无菌操作过程中的注意事项：保持操作区域整洁、避免交叉污染、正确使用无菌器械等。
（4）无菌技术的实际应用：植物组织培养、微生物培养等。
四、实验结果与分析1. 实验结果通过无菌技术操作，成功实现了实验过程中物品和环境的无菌状态，保证了实验结果的准确性和可靠性。
2. 实验分析（1）无菌操作前的准备工作：严格按照无菌操作规程进行，确保操作人员自身和操作环境的无菌状态。
（2）无菌物品的取用与传递：正确使用无菌持物钳、无菌容器等，避免污染。
（3）无菌操作过程中的注意事项：保持操作区域整洁、避免交叉污染、正确使用无菌器械等，确保实验过程中无菌状态。
五、实验评价1. 实验目的达成本实验报告详细描述了无菌技术的操作方法、注意事项及实际应用，达到了实验目的。
2. 实验方法科学实验方法遵循无菌操作规程，科学合理，保证了实验结果的准确性和可靠性。
药品生产企业无菌检验常见问题及处理措施1、人员管理人员资质：根据调查发现，国内从事无菌检验的多数人员具有大专以上学历，但部分企业（国有改制企业、小型企业）还存在检验人员学历偏低，不满足“质量控制实验室的检验人员至少应当具有相关专业中专或高中以上学历”的要求。
产品检验要确保准确性，那么企业应选用相关专业的人员组建专业化的检验团队。
人员培训：调查的企业从事无菌检验的人员都经过相关培训和考核，包括各地药品检验所、药监部门、企业内部等举行的培训，培训内容包括微生物检测技术、无菌检查法、菌种管理及操作、培养基配制及灭菌、药品GMP等内容。
检验人员分工明确，职责清楚。
但是培训后的考核内容形式化，无法充分体现培训的效果，无法评估培训人员是否可以上岗操作，或还需要对那些方面做进一步的培训。
根据无菌检验其他的几项要素的缺陷项可见培训效果不良。
人员经验：企业从事无菌检验工作的人员应具有半年以上的工作经历，基本可以独立执行检验操作。
人员数量：企业正常生产状态下，无菌检验的人员数量基本能够满足生产需要，但一般企业从事无菌检验的人员同时负责其他微生物检验工作，企业集中出现大量验证或产品质量异常处理时，人员数量无法满足生产需要。
对此企业应充分评估检验工作量，确保不因为人员数量造成样品检验不及时，或人员工作量大而检验结果不准确。
调研结果也显示，个别企业的实验管理人员对于偏差调查分析的能力不够，无法对检验异常情况进行有效的调查分析。
2、设施设备无菌实验室包括：检验（无菌检查）用洁净室或隔离系统及阳性菌实验室、培养区、培养基及实验用具准备（包括灭菌）区、样品接收和储存区、菌种贮存区。
1.1受调查企业无菌实验室基本情况及分析1家企业无菌检验试验室单独用一套隔离器系统，4家企业的无菌检验试验室为B级背景下局部百级，1家企业无菌检验试验室为10万级背景下局部百级。
50%的企业无菌检查用洁净区空调净化系统连续开启。
阳性对照试验基本都在10万级背景下的生物安全柜内进行，但部分企业出现洁净区的压差无法保证负压，部分在10万级背景下隔离器内进行。
县级医院药品微生物检查验证试验现状调查与建议目的：对药品微生物检查验证试验现状进行调查并提出相应建议。
方法：采用查阅相关资料、询问当事检测人员等回顾性分析方法，回顾各医院及药品生产企业微生物检查验证试验内容，分析试验中可能影响检查结果的相关因素，并提出解决建议。
结果：药品微生物检查验证试验现状所反应的问题包括培养基的质量参差不齐及使用混乱、无统一检测标准、实验室环境未能达标、操作人员自身素质较低等。
结论：建立统一的检测标准，采取相应措施监督培养基使用情况及实验室环境，组织集中学习提高操作人员自身素质，是保障药品微生物检查验证试验结果准确性的关键因素。
标签：药品微生物检查;验证试验;现状调查;建议目前临床用药应首先通过药品微生物检查，待其所含微生物符合相关标准后方可用于临床疾病治疗[1]。
本文对药品微生物检查验证试验的现状进行了调查并提出相应建议，现报告如下。
1 资料与方法1.1 一般资料以本县中心医院（二级甲等）、人民医院（二级乙等）、中医院（二级乙等）等医疗机构中设立的微生物实验室为研究对象。
1.2 方法采用查阅相关资料、询问当事检测人员等回顾性分析方法，调查各医院微生物实验室中微生物检查验证试验的相关内容（如培养基、实验室环境、仪器、人员等），分析试验中可能影响检查结果的相关因素，并提出解决建议。
2 结果2.1 检测标准我国《药典》1995版首次将药品微生物检查纳入其中，并制定检查方法及标准，此后2000版、2005版及2010版《中国药典》在此基础上加以修订完善，但在本次调查中发现不同机构进行药品微生物检查所使用的检测标准并不相同，部分企业及医院仍采用老版《药典》的相关规定。
2.2 培养基①质量：部分实验室使用干粉培养基检测药品中微生物含量，但该培养基吸潮情况严重，若未正确存放将影响其凝固效果，应避免使用，此外，不同微生物所需培养基要求也略有不同，如进行肺结核杆菌培养时PH值应在6.8～7.2之间，有利于结核杆菌的生长繁殖，因此，若所用微生物培养基的PH 值不符合标准将影响检测结果;②使用：由于食品微生物检测及药品微生物检测均可涉及某些菌类，如大肠杆菌的药品检测采用胆盐乳糖增菌液，食品检测采用乳糖单眼培养基，二者名称相近但配方不同，在实际使用中易将两者混淆。
