细胞染色方法大全

细胞染色操作步骤及注意事项概述细胞染色是一种常用的实验手段，它可以通过标记细胞的某些特定结构或分子，帮助研究者观察和研究细胞的结构和功能。

本文档将介绍细胞染色的常用操作步骤及注意事项。

操作步骤步骤一：细胞固定1. 取出培养皿中的细胞载玻片。

2. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除培养基中的残留物质。

3. 使用细胞固定液（如4%的甲醛溶液）固定细胞，通常固定时间为15-30分钟。

4. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除固定液中残留的甲醛。

步骤二：细胞渗透1. 取出细胞载玻片中的细胞。

2. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除固定剂中的残留物质。

3. 在细胞载玻片上滴加渗透液（如0.1% Triton X-100），孵育10-15分钟。

4. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除渗透液中的残留物质。

步骤三：染色1. 取出细胞载玻片中的细胞。

2. 在细胞载玻片上滴加适当浓度的染色液（如DAPI染料），孵育时间根据实验需要而定（通常为5-15分钟）。

3. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除染色液中的残留物质。

步骤四：显微观察1. 将细胞载玻片翻转到显微镜载玻片上。

2. 加入一滴适当的封片液（如甘油/丙酮溶液）。

3. 用显微镜观察和拍摄细胞。

注意事项1. 操作时要注意佩戴实验手套和眼部防护设备，避免接触有毒或有害物质。

2. 细胞固定液需要根据实验需要和细胞类型进行选择，避免使用具有细胞毒性的固定液。

3. 染色液要根据需要选择，确保染色剂与研究对象的亲和力。

4. 操作过程中要注意细胞的温度和湿润度，避免细胞损伤。

5. 洗涤的PBS缓冲液要充分冲洗，避免残留物质对结果的影响。

6. 操作前要确保显微镜和镜头清洁，以获得清晰的观察结果。

7. 操作结束后要及时清理实验台面和工具，避免交叉污染。

结论细胞染色是一种重要的细胞学研究手段，通过本文档介绍的操作步骤及注意事项，可以帮助研究者正确地进行细胞染色实验。

合理的实验操作和注意细节能够提高实验结果的准确性和可靠性。

细胞的固定与染色细胞是构成生物体的基本单位，通过对细胞进行固定与染色，可以更好地观察和研究细胞的结构和功能。

本文将介绍细胞固定与染色的方法及其在生物学研究中的应用。

一、细胞固定细胞固定是指将活细胞杀死并使其保持在某种状态下，以便后续的观察和研究。

常用的细胞固定方法有以下几种：1. 乙醛固定法：将细胞置于4%乙醛溶液中固定约30分钟，然后用磷酸盐缓冲液洗涤。

乙醛固定可以使细胞结构保持完整，适用于常规细胞观察。

2. 热固定法：通常适用于血涂片、涂片或带有厚切片的细胞。

将玻片放在炉中，加热至细胞开始变形，迅速取出冷却。

热固定可以固定大部分细胞成分且保持形态，但可能引起一些细胞成分的破坏。

3. 有机溶剂固定法：将细胞浸泡于有机溶剂如醇类、醚类等中，使细胞内水分逐渐脱失，细胞内的结构保存较好。

但该方法不适用于某些特殊化学成分的固定。

二、细胞染色细胞染色是为了突出细胞的结构或特定组分而对细胞进行染色。

常用的细胞染色方法有以下几种：1. 吉姆萨染色法：将经固定的细胞涂片浸泡在甲醇中，然后放入吉姆萨液中染色。

吉姆萨染色可以同时染色细胞核和细胞质，常用于细胞基础研究。

2. 血红蛋白染色法：适用于红细胞或含有血红蛋白的细胞。

将细胞涂片浸泡在溴化乙锭溶液中染色，血红蛋白会被染成深红色，方便观察。

3. 免疫染色法：利用抗体的特异性与抗原结合，再用染色剂进行着色。

免疫染色可以用于检测特定蛋白质在细胞中的分布位置和表达水平。

三、细胞固定与染色在生物学研究中的应用1. 细胞学研究：细胞固定与染色是细胞学研究中的基础技术，通过观察染色后的细胞，可以研究细胞的结构、形态以及各种细胞器的分布和功能。

2. 细胞生长与分裂研究：利用细胞固定与染色技术，可以观察和研究细胞的生长、分裂和增殖过程，揭示生物体的发育与生长机制。

3. 病理学研究：细胞固定与染色技术在病理学研究中有重要作用。

通过染色，可以观察和诊断细胞和组织中的病变，如肿瘤、感染等。

细胞染色一).瑞特(Wright)染色法：为发观察细胞内部结构，识别各种细胞及其异常变化，血涂片必须嘲行染色。

血涂片的各种染色方法大多是罗氏染色法衍变来的。

目前常用瑞特染色法。

(1)瑞特染料是由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。

亚甲蓝为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。

通常为氯盐，即氯化美蓝。

美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。

市售美蓝中部分已被氧化为天青。

伊红通常为钠盐。

即伊红和伊混合后，产生一种憎液性胶体伊红美蓝中性沉淀，即瑞特染料。

(2)细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的亲和力也不一样。

因此，用本染料液染色后，在同一血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白，嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质;细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

(3)PH对细胞染色有影响。

细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红;在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。

因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。

配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

新鲜配制的染料偏碱，须在室温或是37℃下贮存一定时间，待染料成熟，主要是美蓝逐渐转变为天青B后才能使用，贮存时愈久，染色效果愈好。

EAM GILLILAND等采用吸光度比值作为顼特染液的质量规格。

rA测定方法如下：取瑞特染液15-25μl(视染液浓度而定)，加甲醇10ml稀释，混匀后以甲醇为空折管，分别以波长650nm和25nm比色。

Ra=a6 50/a525.因为美蓝吸收峰小组长为650nm，伊红吸收峰波长为525nm ;天青B吸收峰也为650nm但吸光度A约为美蓝的一半。

细胞各种染色方法1细胞各种染色方法1细胞是生物体的基本结构单位，研究细胞结构和功能对于理解生命活动的基本原理具有重要意义。

而在细胞研究中，染色方法是最常用的一种技术手段之一、通过染色，可以使细胞内的各种器官、蛋白质、核酸等结构或分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。

下面介绍一些常用的细胞染色方法。

1.原位杂交染色原位杂交是一种通过特异性核酸探针与目标细胞中的特定DNA或RNA 序列结合，从而实现靶分子检测和定位的方法。

通过这种方法，可以查看细胞中特定基因或RNA的表达情况，从而揭示该基因或RNA在细胞中的作用。

在原位杂交染色中，探针可以用荧光标记或放射性同位素标记，并使用显微镜观察或放射性成像等方法进行检测。

2.免疫染色免疫染色是一种利用抗体与特定抗原结合的原理，对细胞或组织进行染色分析的方法。

由于抗体可以识别并结合到蛋白质、多肽、糖、核酸等生物分子上，所以免疫染色可以用于检测特定蛋白质或分子的存在和表达水平。

免疫染色可以通过荧光染色或酶标染色来实现，进一步结合显微镜观察和图像分析等方法，可以定量或定位地研究细胞内的各种分子。

3.组织化学染色组织化学染色是一种通过化学反应将细胞或组织中特定分子染色的方法。

常用的组织化学染色方法有哈维氏酸碱性染色、格里姆萨染色、伊红-Wright染色等。

这些染色方法可以用来观察细胞内的DNA、蛋白质、核酸以及细胞器等结构，并通过显微镜观察，从而对细胞和组织的结构和组成进行研究。

4.核酸染色核酸染色是一种利用荧光染料或放射性染料对DNA或RNA进行直接染色的方法。

通过核酸染色，可以观察到细胞和细胞核的形态、数量和分布情况，进而研究细胞的分裂、DNA合成和RNA转录等过程。

核酸染色方法包括荧光染色和核酸复合物染色等，其中荧光染色可用于显微观察，核酸复合物染色则可通过放射性成像等方法进行检测。

细胞染色是细胞生物学研究中非常重要的一种手段，通过染色可以使细胞内的各种结构与分子可视化，从而更好地研究细胞的结构与功能。

常用细胞染色方法
常用的细胞染色方法包括：
1.吉姆萨染色法：使用吉姆萨染料染色，可用于观察细胞核和细胞质的形态结构。

2.荧光染色法：使用荧光染料，通过荧光显微镜观察细胞内的特定结构、蛋白质或核酸等。

3.伊诺金染色法：使用伊诺金染料，主要用于显微镜下观察和鉴别细菌和真菌等微生物。

4.嗜酸染色法：使用嗜酸染料，能够染色细胞内的酸性结构和胞质。

5.嗜碱染色法：使用嗜碱染料，能够染色细胞内的碱性结构和胞质。

6.免疫组化染色法：利用特异性抗体与细胞中的特定蛋白质结合，再使用染料标记抗体来观察和定位细胞内的特定蛋白质。

7.核酸染色法：使用DNA或RNA特异性的染料，能够染色细胞内的核酸，常用于细胞周期和细胞分裂等研究。

8.血液细胞染色法：包括委氏染色法、中日染色法等，用于观察和鉴定血液细胞
类型和形态变化。

以上是一些常用的细胞染色方法，根据需要和研究目的的不同，可以选择合适的方法来观察和研究细胞。

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！染色步骤PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。

但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。

但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。

Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。

血细胞的染色方法
血细胞的染色方法有以下几种：
1. Wright染色法：这是最常用的一种染色方法。

首先将薄片
经过固定、脱水、清洁等处理，然后放置在含有Wright染料
的溶液中染色，之后再用清水洗去多余的染料。

这种方法可以使红细胞呈粉红色，细胞核呈紫色。

2. Giemsa染色法：这种染色方法与Wright染色法类似，但染
料的浓度和染色时间稍有不同。

这种方法可以使红细胞呈橙红色，细胞核呈紫色。

3. 苏木精-伊红染色法：首先将薄片经过固定、脱水、清洁等
处理，然后将薄片放入苏木精溶液中染色，之后再用酒精漂洗，最后用伊红染料染色。

这种方法可以使红细胞呈红色，细胞核呈蓝色。

4. 嗜酸性染色法：这种方法可以用来染色嗜酸性粒细胞。

常用的嗜酸性染料有尤伯霉素、柠檬酸镉等。

5. 免疫染色法：这是一种利用抗体与细胞特定抗原的特异性结合来标记细胞的染色方法。

它可以用来检测一些特定的细胞类型或疾病标志物。

以上是一些常用的血细胞染色方法，在实际应用中选择染色方法会根据具体需要和目的来决定。

细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。

由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。

目前，已有多种研究细胞的技术，从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法，本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。

第一节培养细胞的常规检查和观察方法细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等。

细胞常规检查观察的内容为：一、肉眼观察一般常规检查用肉眼即可观察，主要看培养液的颜色和透明度的变化。

正常情况下，培养液pH介于7.2〜7。

4之间，呈桃红色清亮透明。

加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降，引起颜色变浅变黄。

在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长甚至造成细胞退变死亡。

所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代.一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2〜3天换液一次，生长缓慢的细胞3~4天换液一次。

培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。

用含磷酸盐缓冲系统培养时,可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物，使培养液变碱发红，只致使细胞难以生长甚至死亡.细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄，要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净.贴壁细胞培养时若出现混浊,多为污染。

悬浮培养的细胞，应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染，也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。

二、显微镜观察生长良好的细胞，在显微镜下可观察到细胞透明度大折光性强，轮廓不清。

相差显微镜观察时可见细胞部分细微结构.若细胞生长状态不良，可见细胞轮廓增强，细胞折光性变弱，细胞胞质中出现空泡、脂滴和其他颗粒状物质，细胞之间空隙增大，细胞形态不规则，甚至失去原有细胞的特点，产生圆缩脱落,有时细胞表面及周围出现丝絮状物。

浆细胞染色方法
1.苏木精伊红染色法（H&E染色法）：
这是一种常规的组织切片染色方法，对于检测浆细胞的分布
和形态特征非常有效。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片置于苏木精溶液中染色，可以染出细胞核为深蓝色，胞质为红色。

3）用伊红溶液处理薄片，可使核仁染成深蓝色，细胞质和胶原纤维染成粉红色。

4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。

2.伊红/橙G染色法：
这种染色方法也可用于浆细胞的染色，它可以使细胞质染成
橙色、胞核染成淡红色。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片置于5%的酸性酒红溶液中，用浓盐酸处理23秒钟，使浆细胞细胞浆呈现橙色。

3）用伊红溶液处理薄片，胞核呈现淡红色。

4）最后用透明剂处理薄片，然后覆盖玻璃片，观察和分析浆细胞的形态和分布。

3.免疫组化染色法：
这种方法使用特异性抗体标记目标蛋白，可用于检测浆细胞中特定抗体的表达。

步骤如下：
1）将组织标本固定并嵌入石蜡中，然后切割成薄片。

2）将薄片进行抗原修复处理，以恢复蛋白质的免疫反应性。

3）在薄片上加上特异性的抗体，与目标抗体结合形成免疫复合物。

4）用酶标记的二抗结合免疫复合物，生成可视化信号。

5）最后用染色剂染色，观察和分析浆细胞中目标抗体的表达情况。

细胞各种染色方法细胞染色方法是一种用于研究细胞结构和功能的重要技术。

通过对细胞进行染色，可以使细胞成分和结构可见，便于观察和研究。

下面将介绍几种常用的细胞染色方法。

1.基本染色方法-干燥染色法干燥染色法是最常见的染色方法之一，用于观察细胞的形态和结构。

在细胞表面涂上染色剂（如吉姆萨、范斯丁染料等），然后用胶片或显微镜进行观察。

这种方法方便快捷，适用于常规的细胞观察。

-神经元染色法神经元染色法主要用于研究神经系统的结构和功能。

常见的神经元染色方法包括尼氏染色法、戈登染色法和格尔染色法等。

这些方法可以染色神经元的胞体、突触和轴突等结构，以及神经元之间的连接方式。

2.核酸染色方法-核酸荧光染色法核酸荧光染色法是一种用于检测细胞核酸的方法。

常见的核酸染色剂包括达尔林紫、伊曼纽尔蓝和乳胶蓝等。

这些荧光染料可以与DNA或RNA 结合，生成荧光信号，便于观察和分析。

-原位杂交法原位杂交法是一种利用互补的单链DNA或RNA探针与目标细胞中的互补序列发生杂交反应的方法。

这种方法可以检测特定的基因表达情况或检测一些病毒的感染情况。

常见的原位杂交方法包括原位PCR、荧光原位杂交和非放射性原位杂交等。

3.蛋白质染色方法-共聚焦显微镜染色法共聚焦显微镜染色法是一种利用荧光染料标记特定蛋白质的方法。

常见的荧光染料包括荧光素、乳酸钙蓝和荧光蛋白等。

这种方法可以使用不同的荧光染料标记不同的蛋白质，通过共聚焦显微镜观察细胞中的蛋白质分布和相互作用。

-银染法银染法是一种用于检测蛋白质的方法，特别适用于低表达量的蛋白质。

该方法通过将目标蛋白质与银离子结合，形成黑色或棕色的颗粒，便于观察和分析。

银染法常用于检测蛋白质在凝胶电泳中的分子量和含量。

4.细胞器染色方法-非特异性染色法非特异性染色法是一种用于检测细胞器的方法，常用的非特异性染色剂包括宙斯金、吉姆萨和荧光素等。

这些染料可以与细胞器特有的成分结合，使其在显微镜下可见。

-特异性染色法特异性染色法是一种用于检测特定细胞器的方法，常见的特异性染色剂包括桡胞蛋白、核蛋白和线粒体染料等。

细胞染色方法细胞染色是生物学研究中常用的一种技术手段，通过染色可以使细胞的形态、结构和功能更加清晰地展现出来，为细胞学研究提供了重要的帮助。

在细胞染色的过程中，我们可以利用不同的染色剂来染色，以观察细胞的形态和结构，从而更好地了解细胞的功能和特性。

本文将介绍几种常用的细胞染色方法，希望能够为您的细胞学研究提供一些帮助。

首先，常用的细胞染色方法之一是荧光染色法。

荧光染色法利用荧光染料对细胞进行标记，然后利用荧光显微镜观察染色的细胞。

荧光染色法具有高灵敏度和高分辨率的特点，可以用来观察细胞内的微小结构和分子。

常用的荧光染料有荧光素、DAPI、FITC等，它们可以针对不同的细胞结构和分子进行选择性染色，从而实现对细胞内不同成分的观察和分析。

其次，还有常规染色法。

常规染色法是指利用常规染色剂对细胞进行染色，然后在普通光学显微镜下观察染色的细胞。

常用的常规染色剂有伊红、甲苯胺蓝、格里姆萨染料等，它们可以染色细胞的细胞核、细胞质等不同部位，从而帮助我们观察细胞的形态和结构。

另外，还有免疫组织化学染色法。

免疫组织化学染色法是利用抗体对细胞内特定蛋白进行特异性染色的方法，通过这种方法可以对细胞内的特定蛋白进行定位和分析。

免疫组织化学染色法在细胞生物学和病理学研究中有着广泛的应用，可以帮助我们了解细胞内蛋白的表达和分布情况，从而对细胞的功能和特性进行深入研究。

最后，还有原位杂交染色法。

原位杂交染色法是利用标记的核酸探针对细胞内的特定核酸序列进行染色的方法，可以用来观察细胞内特定基因的表达和分布情况。

原位杂交染色法在遗传学和发育生物学研究中有着重要的应用，可以帮助我们了解细胞内基因的表达模式和调控机制。

细胞染色方法的选择应根据具体的研究目的和样本特点来确定，不同的染色方法有着各自的优缺点和适用范围，我们需要根据实际情况进行选择。

希望本文介绍的几种常用的细胞染色方法能够为您的细胞学研究提供一些参考，同时也希望能够为您在实验中的细胞染色工作提供一些帮助。

盘点细胞组织染色方法（一）引言：细胞组织染色是生物学和医学研究中常用的一种技术方法，它可以帮助科学家们观察和研究细胞的结构、功能和代谢过程。

本文将介绍盘点细胞组织染色方法中的一些常见技术，包括荧光染色、酶标染色、核酸染色、组织切片染色和特殊细胞组织染色方法。

正文：1. 荧光染色a. 选择适当的荧光染料：荧光染料的选择应考虑到目标细胞或组织的亲和性和可视性。

b. 预处理样本：在染色前，需要对样本进行适当的固定和处理，以保持细胞的结构完整性。

c. 染色条件优化：荧光染色的条件包括染料浓度、温度和时间等因素，需要根据具体实验进行优化。

d. 利用荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察样本时，要根据染色结果进行正确的激发光源和滤波器的选择。

2. 酶标染色a. 选择合适的酶标标记物：常用的酶标标记物有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。

b. 优化染色条件：染色条件包括酶标记物的浓度、染色时间和温度等，应根据实验目的和样本类型进行优化。

c. 反应终止：在染色反应结束后，要进行适当的反应终止步骤，以避免染色产物的进一步发展。

d. 观察和分析：利用酶标显色的样本可以通过比较色素密度来定量分析，也可以使用显微镜观察和记录。

3. 核酸染色a. 选择适当的核酸染料：核酸染料有Ethidium Bromide(EB)、DAPI等，选择染料时要考虑到染色效果和对细胞活性的影响。

b. 处理样本：对于酶消化的样本，可以使用蛋白酶K消化去除蛋白质。

c. 染色条件优化：核酸染色的条件包括染料浓度、染色时间和温度等，需要针对具体实验进行优化。

d. 利用荧光显微镜观察：使用荧光显微镜观察核酸染色的样本时，根据染色结果选择适当的激发光源和滤波器。

4. 组织切片染色a. 制备组织切片：使用组织切片技术对组织样本进行快速冷冻或固定处理，然后切片得到薄片。

b. 染色处理：对组织切片进行适当的染色处理，可以采用荧光染色或酶标染色等方法。

实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。

联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。

试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。

2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。

3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。

4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。

5．瑞氏(Wright)染色液。

6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。

操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。

2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。

3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。

4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。

注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。

2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。

3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。

涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。

若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。

4．染色液pH应为5.5。

一、形态学观察方法二、1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出芽”现象。

三、2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。

凋亡细胞核染色质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。

四、3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。

如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。

此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。

五、4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

六、二、DNA凝胶电泳七、（一）、检测原理八、细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。

但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。

九、（二）结果判断十、正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。

十一、三、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定十二、凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。

核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA法检测。

十三、（一）检测步骤十四、1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；十五、2、在微定量板上吸附组蛋白体’十六、3、加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合‘十七、4、加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合’十八、4、加酶的底物，测光吸收制。

十九、（二）用途二十、该法敏感性高，可检测5*100/ml个凋亡细胞。

可用于人、大鼠、小鼠的凋亡检测。

(8)甲醇/醋酸固定液：甲醇：醋酸为3:1的固定液是应用最广的一种培育细胞固定剂。

甲醇穿透力好，醋酸固定蛋白效果好，两者结合，能使固定细胞形态不变。

不仅最适用于固定染色体，而且固定的染色体适于Giemsa染色(留意：此固定液宜现用现配)。

(9)FAA固定液：此固定液适用于固定盖片单层培育的细胞，固定效果好。

配制方法:90ml配％酒精中加5ml冰乙酸和5ml40%甲醛。

(10)Carnoy固定液：Carnoy固定液是较好的非水溶性固定液，是显示细胞化学成分(如粘多糖等)时常用的固定剂，固定、保真效果好，但穿透力差，适于固定培育的单层细胞。

配制方法：60ml纯酒精加30ml氯仿和10ml冰乙酸。

(ll)Bouin固定液：用于固定双盖片法培育的标本，固定30分钟后，用70% 酒精褪去苦味酸黄色，如不马上染色，可将标本保存在70%酒精中。

本试剂适于固定组织细胞的糖原。

配制方法：先将75ml饱和苦味酸(100ml水中加1. 2〜L 4g)过滤，加入25ml福尔马林(40%甲醛，有沉淀时禁用)，最终加入5ml冰醋酸，混和后存于4℃冰箱中备用。

冰醋酸最好在临用前加入。

该固定液对组织细胞穿透力较强，固定效果较好，保存的细胞结构完好。

但因偏酸(pH为3-3. 5), 对抗原有肯定损害。

(12)4%多聚甲醛-PBS固定液：多聚甲醛为白色固体，在50ml蒸储水中加入4g多聚甲醛，加热至60〜70℃时，边搅拌边逐滴加入2mol∕LNaOH,至液体清o 用lmol∕LHCl 调整pH 至7. 4,冷却后加入0. 01mol∕LPBS楚透亮液至100ml, 4℃保存。

本试剂适于固定肾纤维蛋白和细胞骨架蛋白。

三、常见的细胞染色方法1一般染色观看苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色和Giemsa染色是观看培育细胞一般形态的最常用方法，也是把细胞作为标本保存的主要方法。

对于贴壁培育的细胞，以生长于盖玻片和塑料培育瓶壁者便于操作。

细胞染色方法细胞染色是生物学和医学领域中常用的一种实验技术，通过染色剂将细胞或细胞器的结构染色，以便观察和研究。

细胞染色方法的选择对于细胞学研究至关重要，不同的染色方法可以突出不同的细胞结构或分子，为科研工作提供重要的信息。

本文将介绍几种常用的细胞染色方法，希望能对您的实验工作有所帮助。

首先，常见的细胞染色方法之一是荧光染色。

荧光染色是利用荧光染料对细胞或组织进行染色，然后利用荧光显微镜观察。

荧光染色可以用于观察细胞器的分布和形态，也可以用于检测蛋白质的定位和表达水平。

常用的荧光染料包括荧光素、DAPI、FITC等，它们可以选择性地与DNA、蛋白质等结合，从而在显微镜下呈现出荧光信号。

荧光染色方法对于细胞内结构的研究具有重要意义，有助于揭示细胞的生理和病理过程。

其次，还有免疫组织化学染色法。

免疫组织化学染色是利用抗体对细胞或组织中的特定分子进行染色，从而实现对这些分子的检测和定位。

免疫组织化学染色可以用于检测蛋白质、细胞因子等分子的表达，也可以用于研究细胞凋亡、增殖等生理过程。

在免疫组织化学染色中，首先需要用特定的抗体与待检测分子结合，然后再加入染色剂进行染色，最后在显微镜下观察并分析结果。

免疫组织化学染色方法对于研究细胞信号转导、肿瘤生物标志物等具有重要意义。

此外，还有原位杂交染色法。

原位杂交染色是利用标记的核酸探针对细胞或组织中的特定核酸序列进行染色，从而实现对这些核酸序列的检测和定位。

原位杂交染色可以用于研究基因的表达模式、染色体结构和功能等。

在原位杂交染色中，首先需要合成标记的核酸探针，然后与待检测的核酸序列杂交，最后用染色剂进行染色。

原位杂交染色方法对于研究基因组学、细胞遗传学等领域具有重要意义。

细胞染色方法的选择应根据研究的目的和需要进行合理的选择，不同的染色方法可以提供不同的信息。

在进行细胞染色实验时，需要严格控制实验条件，选择合适的染色剂和探针，合理设计实验方案，从而获得可靠的实验结果。

1、酸性品红：酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容於水,略溶於酒精(0.3%).是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广,在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。

它跟甲基绿同染，能显示线粒体.组织切片在染色前先浸在带酸性的水中,可增强它的染色力。

酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。

2、刚果红：刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状,能溶於水和酒精，遇酸呈蓝色。

它能作染料，也用作指示剂.它在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。

用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色.在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。

刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由於它能溶於水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速3、甲基蓝：甲基蓝是弱酸性染料，能溶於水和酒精。

甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。

它跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。

它的水溶液是原生动物的活体染色剂.甲基蓝极易氧化，因此用它染色后不能长久保存。

4、固绿：固绿是酸性染料,能溶於水(溶解度为4%)和酒精（溶解度为9％）。

固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂,在染细胞和植物组织上应用极广。

它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。

它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。

5.苯胺蓝：是一种混合酸性染料，平常所用很难有一定的标准。

此染料一般很难溶於水，也不易溶於酒精（1。

5%）。

植物制片中可与番红合用，作为组织染色；也可作藻类植物染色。

因为这种染料的成分很不一致，染色效果不易掌握。

6、苏丹Ⅲ:苏丹Ⅲ是弱酸性染料，不溶解於水，呈红色粉末状，易溶於脂肪和酒精(溶解度为0。

15％)。

常用70％酒精中的饱和溶液。

苏丹Ⅲ是脂肪染色剂.7、苏丹Ⅳ：苏丹Ⅳ是弱酸性染料,也是很好的染脂肪染料，现在多用以代替苏丹Ⅲ，可染树脂、乳汁管、蜡质以及角质等结构，也可使叶绿体染成暗红色。