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金银花中绿原酸成份的提取方法分析研究陈茜【摘要】目的对金银花中绿原酸的提取方法进行分析研究.方法针对绿原酸的性质,设计了纯乙醇提取、50％乙醇提取、水提取与超声波提取方法对比实验、醇提法与超声波提取方法对比实验,并对每种提取方法的优缺点进行了分析.结果50％的乙醇水溶液比纯乙醇提取效果好.与传统的醇提取法相比较,超声波法提取绿原酸的提取效果更好.研究亦表明,增加乙醇的浓度,提取绿原酸的浓度会增加,但是当绿原酸浓度到达最高峰后,随着乙醇浓度的增加,绿原酸的含量却呈降低趋势.传统醇提法乙醇的最佳浓度是70％,超声波醇提法乙醇的最佳浓度是60％.结论与水提法相比较,醇提法提取效果较好,绿原酸的提取效率也较高,加入超声波后提取效率变得更高,提取物绿原酸的含量也会增加.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2018(016)005【总页数】3页(P88-90)【关键词】金银花;绿原酸;超声波;乙醇提取;中药化学【作者】陈茜【作者单位】锦州市妇婴医院中药局,辽宁锦州121000【正文语种】中文金银花为常用中药，具有清热解毒，保肝利胆、凉风散热，抗病毒等功能[1]。
近年来研究表明，金银花还具有抗人类免疫缺陷病毒、抗肿瘤的功效，具有广阔的临床应用前景。
金银花的主要成分包括绿原酸、肌醇、木犀草素、异绿原酸以及三萜皂苷等，其中，绿原酸是金银花的抗菌有效成分，一般常用绿原酸的含量高低来评价金银花质量的好坏[2]。
绿原酸是一种有机酸，同时含有羧基和邻二酚羟基，易溶于醇溶液、丙酮和水等溶剂。
当前，从金银花当中提取出绿原酸的常用提取方法包括传统的水提法、乙醇提取法、酶提取法等。
本文将对绿原酸的常用提取方法进行实验和分析总结，并根据绿原酸的性质，设计出了水提取、纯乙醇提取、50%乙醇提取、超声波提取方法与醇提法对比实验、水提法与超声波提取方法对比实验，对每种提取方法的优缺点进行了分析。
1 材料与方法1.1 仪器和试药电子天平、烧杯若干、量筒、锥形瓶、漏斗、超声波发生器（郑州予华仪器制造有限公司）、离心机（江苏天瑞仪器股份有限公司）、高效液相色谱仪（上海仪电分析仪器有限公司）。
第二章金银花叶中绿原酸的提取工艺研究金银花叶的主要有效成分是绿原酸，有文献报道同一时期的金银花叶中绿原酸类有效成分约为花的６０％到７０％，并且８、９月的金银花叶含量最高。
绿原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抑制突变和抗肿瘤等多种生物活性效用；此外，绿原酸还是一种活性很强的抗氧化剂，抗氧化能力与常用的丁基羟基茴香醚和维生素Ｅ相当‘４７１。
绿原酸除医用外，还广泛用作食品保鲜剂和化妆品的抗衰老剂。
因此，从金银花叶中提取分离绿原酸具有重要的意义。
国内外已有不少文献报道了金银花中绿原酸的提取和分析方法，主要的提取方法有酶解法、超滤法、超声提取法、索氏提取法等【４８】。
不同方法各有优缺点，例如酶解法有利于细胞内物质（绿原酸等）的溶出且反应条件温和但是大大增加生产成本【４９】；超滤法能有效保留有效成分、无污染且绿原酸得率较高但是对提取液预处理较高，产量易受超滤条件的影响且膜的清洗麻烦［４９】。
超声波提取法因其独具的物理特性能促使植物细胞组织破壁或变形，使有效成分提取更充分，所以提取率比传统工艺显著。
此外，超声波提取法还具有提取温度低、适应性广、提取工艺运行成本低，综合经济效益显著、操作简单易行，设备维护、保养方便等优点【４９】。
虽然研究者报道了绿原酸的各种提取工艺，但是没有对不同方法提取的绿原酸得率进行比较。
实验确定提取工艺最优条件所用方法一般采用的是正交实验法，但正交实验也有其局限性，它只宜用于水平数不多的实验中，而均匀设计实验法较正交试验法有单因素试验的次数明显减少、考虑因素间交互作用变得简单等优点。
均匀设计和正交设计相似，也是通过一套精心设计的表来进行设计的即均匀设计表。
每一个均匀设计表是一个方阵，设方阵有ｎ行ｍ列，每一行是｛１，２，…，ｎ）的一个置换（即１，２，…，ｎ的重新排列），表的第一行是｛１，２，…，ｎ）的一个子集，但不一定是真子集。
５０３。
本章对超声波提取工艺与索氏提取工艺进行研究，并采用均匀设计实验优化了两种提取工艺的条件，在此基础上对两种工艺在绿原酸提取率、提取条件等方面进行了综合的比较。
金银花中绿原酸的分离纯化工艺研究
金银花中绿原酸的分离纯化主要包括以下步骤：
1. 采集金银花：在适当的时间和条件下采集金银花，并进行初步处理如清洗、剪除杂质等。
2. 提取绿原酸：将采集好的金银花进行浸泡提取。
常用的溶剂包括水、乙醇、乙醚等。
可以通过浸渍或者回流提取等方式来提高绿原酸的提取效率。
3. 过滤和浓缩：将提取得到的浸膏进行过滤，去除固体杂质，得到纯净的提取液。
然后将提取液进行浓缩，通常使用旋转蒸发器或萃取器进行浓缩，直至得到较高浓度的绿原酸溶液。
4. 结晶和洗涤：将浓缩得到的绿原酸溶液进行结晶，可以通过降温结晶、溶剂结晶等不同方法来获得结晶产物。
然后将结晶产物进行洗涤，去除杂质。
5. 干燥和粉碎：将洗涤得到的绿原酸结晶产物进行干燥，通常使用真空干燥器或喷雾干燥器等设备进行干燥。
然后将干燥的绿原酸进行粉碎，得到粉末状的绿原酸。
6. 检测和分析：对得到的绿原酸进行质量检测和分析，包括纯度、含量、溶解度等参数的测定，以确保绿原酸的质量达到要求。
需要注意的是，以上步骤仅为一般性的分离纯化工艺，在具体
操作过程中可能根据实际需求进行调整和优化。
此外，根据目标纯化的绿原酸的用途和产量的不同，分离纯化工艺也可能有所差异。
因此，在实际操作中，应根据实际情况进行具体方案设计和实验验证。
金银花绿原酸分离纯化金银花叶提取绿原酸纯品以1%收率计算,年需要金银花叶100吨每年生产10个月,每个月处理金银花叶10吨,按6天一个生产周期计算,则每个月生产5个批次,每批次需要处理2吨金银花叶、生产出20公斤绿原酸,依此设计设备及生产,物料及能耗等计算。
一.样品前处理金银花粉碎过筛二.绿原酸提取浓缩1.提取80℃水浸提，溶剂pH值为3,料液比为1：10,提取1.5小时,提取3次(第二三次的料液比为1：8)。
2.浓缩提取液低温(80℃)浓缩到1ml/1克药材三．初步除杂1.絮凝沉淀除杂每100 ml浓缩液中加入1%壳聚糖溶液4 ml，搅拌，在60℃静置60 min，过滤，滤液再活性碳脱色。
2.活性炭脱色除杂活性炭添加量为1.25g／100mL绿原酸浓缩过滤液、脱色温度为60℃(保温)、脱色时间为30 min、绿原酸浓缩液pH值为3，得清液。
四.分离纯化1.双水相萃取上述脱色液泠到室温,再用乙醇／硫酸铵形成的新型双水相体系萃取，往泠缺脱色液中加入乙醇、硫酸铵使其质量分数分别为35.1%、17.7%、 pH为3左右时，水相与乙醇分相,上层乙醇相(主要含绿原酸),下层水相(主要含水溶性杂质),下层水相仍含绿原酸,则继续按前述方法加入乙醇或少量硫酸铵以分相,以进一步萃取水相绿原酸,直至水相无绿原酸，总共萃取3次，合并3次乙醇相浓缩干燥。
2.乙酸乙酯纯化上述乙醇相干燥物以PH3的60℃热水溶解、0.2ml/g药材,再泠却到室温，溶解液与乙酸乙酯用量比1：2萃取,水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯相,浓缩干燥得绿原酸粗品。
3.结晶纯化上述绿原酸粗品用pH值3的10倍甲醇溶解,再放在4℃下结晶，得白色针状晶体,真空干燥。
金银花绿原酸的提取纯化研究的开题报告
一、研究背景
金银花，又名忍冬、木藤花等，为常见的中药材。
金银花中最具药效的成分是绿原酸，具有抗病毒、抗氧化、解毒、抑菌、降血糖等多种药理作用。
因此，研究金银花绿原酸的提取纯化技术对于发掘其药效具有重要意义。
二、研究目的
本研究旨在探究金银花绿原酸的提取纯化方法，比较不同提取剂、提取时间、提取温度等条件对提取效率的影响，优化提取纯化工艺，进一步提高品质和产量。
三、研究内容
3.1 金银花的提取方法
选取乙醇、水、乙醚等不同提取剂，采用水提法、热提法、超声波辅助提取法等不同提取方法，比较不同条件下的提取效率。
3.2 绿原酸的纯化方法
根据提取物的性质，采用聚合物吸附法、逆流色谱法、溶剂萃取法等不同纯化方法，研究各方法对绿原酸的纯化效果，并结合成本、操作难度等方面进行综合评估。
3.3 研究金银花绿原酸的化学性质
通过理化性质分析，探究金银花绿原酸的结构、分子量、稳定性、pH值等化学性质。
四、研究意义
本研究对于深入了解金银花中绿原酸的提取纯化过程和工艺优化方法具有重要意义，可以提高绿原酸的提取率和纯度，进一步发挥其药理
作用，有利于促进金银花的有效利用和深入开发。
同时，本研究也对于其他类似中药提取纯化研究具有参考意义。
从金银花中提取绿原酸的工艺研究
张来新;杨琼;马跃
【期刊名称】《贵州化工》
【年(卷),期】2009(34)3
【摘要】尝试了多种从金银花中提取绿原酸的工艺流程,但结果都不能令人满意.从实验中总结了许多关于绿原酸的性质,从而设想用乙醇和水组成的混合溶剂作提取剂,用盐酸作电离抑制剂,水浴加热回流.并利用绿原酸在热乙醇和冷乙醇中溶解度相差非常大的特点,使其在热乙醇中溶解而在冷乙醇中析出,从而达到分离的目的.并研究了实验中乙醇浓度、溶剂用量、水浴温度、回流时间以及pH值对提取绿原酸的影响,用正交设计选取了最佳工艺.结果表明,最佳提取条件为:40%乙醇(体积分数)、溶剂用量为12倍、水浴温度80℃、回流时间2.5h、pH值6.
【总页数】4页(P19-22)
【作者】张来新;杨琼;马跃
【作者单位】宝鸡文理学院,化学化工系,陕西,宝鸡,721007;宝鸡文理学院,化学化工系,陕西,宝鸡,721007;宝鸡文理学院,化学化工系,陕西,宝鸡,721007
【正文语种】中文
【中图分类】R282.4
【相关文献】
1.水热法提取金银花中绿原酸的工艺研究 [J], 李杰;陈道鸽;王兵兵;王学廷
2.金银花中绿原酸提取纯化工艺研究进展 [J], 田洋
3.响应面法优化微波-辅助提取金银花中绿原酸工艺研究 [J], 侯敏娜;侯少平;刘艳红;王珊;许海燕;彭修娟
4.金银花中绿原酸的提取工艺研究 [J], 王鑫;李楠;齐佳慧;李晓辉;蔺彬彬
5.金银花中绿原酸提取工艺研究 [J], 刘金磊;邓皮凯;邓仕英
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第5期刘金磊，等:金银花中绿原酸提取工艺研究-5 -金银花中绿原酸提取工艺研究刘金磊，邓皮凯,邓仕英（长江大学工程技术学院，湖北荆州434020）摘要:绿原酸作为金银花中的主要 成分,具有高 抗氧化、抗病毒、保肝利胆等功效，在医化工和食 有广泛的应用。
金银花为原料， 醇提法 ，探讨了 、、料液比、 、 浓及 pH 值 素对绿原酸 影响， 了 金银花中绿原酸的最：以70%的乙醇，料比为1 : 25,控制pH 值为6,60 < , 60 min 。
关键词：金银花；绿原酸;提中图分类号:TQ460.7文献标识码：A 文章编号：1008-021X （ 2021） 05-0005-02金银花作 见的植物，具有清热解毒,疏散风 功效,广泛用于中药制剂、抗病毒、降血脂等。
其中最主要的有效 成分为绿原酸，是 抗氧化剂,是重要 质，具有抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗氧化等功效,在临床 中有重要作用。
近年来，从金银花中 绿原酸受到广泛关注”勺。
，绿原酸方法主要有：酶 法、超声波法、水醇 !法*4*。
王 [5]方 金银花中绿原酸，探讨了最 工艺；[6] 水热法对绿原酸进， 响分析法优化了 。
通过醇提法,对金银花中的绿原酸 ，探了 素对绿原酸影响， 过程中，影响 量 素 了分析。
1实验部分15实验材料与仪器金银花，无水乙醇（AR ）、甲醇（AR ）、丙酮（AR ）、 酸 （AR ）、氢氧化纳（AR ）、绿原酸 （98%）、723分光光度计、DZTW -电子 、 、真空泵、 瓶、 烧瓶璃仪器。
15实验过程1.2.1 标准曲线的绘制6 mg 绿原酸，加 量80%的乙醇 解后，定容到50 mL 容量瓶的刻度线，静 备用。
用移 管分别量取 1.0,2.0,3.0,4.0,55） mL 的母 于 25 mL 的容量瓶中，用 80%乙醇 定容至刻度线，测光度， 328 nm , 测吸光值及 浓度绘制绿原酸 曲线， 方程。
1.2.2绿原酸的提取回 法⑴, 金银花粉末2.5000 g ,用25 mL 的乙醇 回 ，控制 、 、 pH 值、料比、 体积分数。
天然产物研究与开发 NATURAL PRODUCT RESEARCH AND DEV ELOPMEN T 2003 Vo1.15 No.2 收稿日期:2002209215 修回日期:2002211222金银花不同提取方法的绿原酸比较研究林 丹 赵国玲 刘佳佳(中南大学化学化工学院 湖南长沙 410083)摘 要 本文采用了水提法、水提醇沉法、酶解法、醇提法对金银花进行提取,并用紫外分光光度法来测定提取物中绿原酸的含量,依此来比较各种方法的优劣。
由实验结果可得:以绿原酸作为指标来考察各种方法的优劣,尤以醇提法较好,绿原酸的含量可达到15128%;以提取物的得率作为指标来考察,以酶解法为最好,提取物的得率可达到37191%。
关键词 金银花;绿原酸;酶解;提取工艺 金银花为忍冬科(Caprifoliaceae )忍冬属(L onicera )忍冬L onicera japonica Thunb.植物的干燥花蕾[1],为中医常用药,具有清热解毒、凉风散热、抗病毒、保肝利胆的功能。
其主要活性成分为绿原酸,别的药性成分还有黄酮类、挥发油等。
几千年传统经验及近代药理实验和临床应用都证明金银花对于多种病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果。
金银花中绿原酸的提取方法[1,2]有传统的水提法、乙醇回流法、水提醇沉法、酶解法,本文对这几种方法进行了研究,采用紫外分光光度法[3,4]来测定提取产物中绿原酸的含量,依此来比较各种方法的优劣。
1 实验部分111 实验仪器 紫外分光光度计(756型)、恒温水浴锅(上海申生科技公司)、分析天平、旋转蒸发仪R 2201(上海申生科技公司)、SHB 23型循环水真空泵(郑州杜甫仪器厂)。
112 实验试剂 金银花为隆回县小沙江产,绿原酸标准品为中国药品生物制品检测所提供,纤维素酶为上海丽珠东风生物有限公司生产。
其他所用试剂均为分析纯。
113 实验方法[1,2,5]水提法:取适量干燥并粉碎的金银花粉末在80℃的水浴下加热3次,每次1h ,将提取液在60℃下减压浓缩至5ml 左右,浓缩液稀释,测其紫外吸收。
水热法提取金银花中绿原酸的工艺研究李杰;陈道鸽;王兵兵;王学廷【摘要】The hydrothermal extraction techology of chlorogenic acid from Flos lonicerae were studied. The single factor experiment combined with Box-Behnken design was used to optimize the hydrothermal extraction technology, with the yield of chlorogenic acid as evaluation index, in order to three factors, including the liquid/solid ratio,extraction temperature and extraction time,and optimize the hydrothermal extraction process of chlorogenic acid from Flos lonicerae.The research results showed that the optimum hydrothermal extraction parameter was:liquid/solid ratio20:1(mL/g),extraction temperature 120℃,extraction time 20 min.Under the conditions,the yield of chlorogenic acid was 3.60 %,which was agree with the predicted value(3.69 %).%对金银花中绿原酸的水热法提取工艺进行了研究.在单因素试验的基础上,选取液料比、提取温度以及提取时间为自变量,绿原酸得率为评价指标,采用Box-Behnken试验设计及响应面分析法,对该提取工艺进行了优化.结果表明,绿原酸水热法提取的最佳条件为液料比20:1(mL/g),提取温度120℃,提取时间20 min,在此条件下,绿原酸的得率为3.60 %与预测值3.69 %基本相符.【期刊名称】《食品研究与开发》【年(卷),期】2018(039)002【总页数】6页(P62-67)【关键词】金银花;绿原酸;水热法;提取;响应面【作者】李杰;陈道鸽;王兵兵;王学廷【作者单位】河南科技大学医学院,河南洛阳471023;河南科技大学医学院,河南洛阳471023;河南科技大学医学院,河南洛阳471023;河南科技大学医学院,河南洛阳471023【正文语种】中文绿原酸（Chlorogenic Acid，CA）是一种缩酚酸，在植物中经莽草酸途径形成的一类苯丙素类化合物[1]，是国际公认的“植物黄金”[2]。
现代药理学研究表明，绿原酸具有多种药理活性[3]，如抗肿瘤、降血压、抗病毒等。
同时，绿原酸还作为食品添加剂和植物生长激素，广泛应用于食品和化妆品行业[4-5]。
鉴于绿原酸具有多种药理活性和广阔的应用领域，因此如何有效的从植物中进行提取越来越受到人们的关注。
目前国外主要从咖啡豆中[6]提取绿原酸，而国内多以金银花为原料进行提取。
金银花原产我国，具有清热解毒、疏散风热的功效，并且作为经济作物在各省都有大规模的人工种植区，资源丰富。
目前金银花中绿原酸的提取按照提取溶剂分类可大致分为水提法、有机溶剂提取法[7-8]和二氧化碳超临界萃取法 [9]。
从经济方面考虑水提法较为理想、实际，但是传统的水提法都是在开放的体系中进行提取，存在提取时间长、得率低等问题。
近几年来发展起来的亚临界水提取[10]技术在一定程度上克服了传统水提法的不足，但设备比较昂贵，主要由高压注射泵、恒温炉、预加热器、萃取罐、冷却器及萃取接受等装置组成[11]，提取成本较高。
因此，有必要建立一种简便、经济、高效的水提法来提取金银花中的绿原酸。
水热法[12]是纳米材料合成[13-14]的一种常用方法，但在中药活性组分提取方面的应用研究还鲜见报道。
其原理主要是以水为反应介质，通过对密闭的反应体系加热，在体系内部创造一个高温、高压的反应环境，使水处于亚临界（温度介于100℃～374℃之间）或超临界（温度高于374℃）[15]状态，从而表现出高活性、高传质速率的特点。
该方法具有设备简单、操作简便、无污染等优点。
因此，本研究通过单因素试验探讨了液料比、提取温度以及提取时间对金银花中绿原酸得率的影响，并在此基础上进行Box-Behnken中心组合设计，以绿原酸的得率为响应值，对该提取工艺进行了优化，以期为绿原酸的提取提供一种新途径、新方法，同时为金银花的开发利用提供参考。
1 材料与仪器1.1 材料金银花：洛阳中药材批发市场（粉碎过80目筛），经河南科技大学王学廷副教授鉴定，均为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾；绿原酸标准品（质量分数为99.0%）：上海金穗生物科技有限公司；甲醇、乙腈、磷酸（均为色谱纯）：天津市巴斯夫化学试剂有限公司。
1.2 仪器天美LC2000液相色谱仪：上海天美科学仪器有限公司；CT14RD高速离心机：上海天美生化仪器设备有限公司；BT125D双量程电子分析天平：德国多利斯公司；聚四氟乙烯内衬的不锈钢反应釜：福建物质结构研究所；PHG9246A烘箱：上海精宏实验设备有限公司。
2 方法2.1 绿原酸的测定2.1.1 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（13∶87，体积比）；检测波长：327 nm；进样量：20 μL；流速：1.0 mL/min；柱温：室温。
2.1.2 标准工作曲线的配制精密称取绿原酸标准品10 mg，50%甲醇溶液溶解，并定容于50 mL棕色容量瓶中，逐级稀释为5、10、20、30、40、50 μg/mL 的绿原酸标准溶液。
在“2.1.1”色谱条件下进行测定绿原酸的峰面积，以各浓度为纵坐标（Y），峰面积为横坐标（X）进行线性回归计算，得绿原酸标准品回归方程。
2.1.3 供试品溶液的制备及测定按照料液比称取金银花粉末于18 mL水混合于水热釜中，密封反应釜并置于一定温度的烘箱内进行提取。
提取结束后，自然冷却至室温，移取提取液2.00 mL以10 000 r/min离心分离5 min，取上清液0.20 mL于10 mL棕色容量瓶内，50%甲醇定容，0.45 μm滤膜过滤，取续滤液作为供试液，高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）法测定绿原酸的含量。
根据回归方程计算提取液中绿原酸的浓度，按公式计算绿原酸得率。
改变提取条件，考察液料比、提取温度以及提取时间对绿原酸得率的影响。
式中：C为提取液中绿原酸的浓度，μg/mL；V为提取液的体积，mL；n为稀释倍数；M为金银花质量，g。
2.2 单因素试验设计选取液料比10 ∶1、20 ∶1、30 ∶1、40 ∶1、50 ∶1（mL/g）5 个水平；提取温度 80、90、100、110、120、130℃ 6个水平以及提取时间 10、20、30、40、50 min 5 个水平分别进行单因素试验。
2.3 Box-Behnken响应面法试验设计综合单因素影响的试验结果，根据Box-Behnken试验设计原理，通过Design Expert 8.0.5统计分析软件的响应面分析法安排试验，优选水热法提取的最佳工艺参数。
采用三因素三水平进行试验设计，水平编码见表1。
表1 Box-Behnken效应面法因素水平表Table 1 Factors and levels of Box-Behnken response surface method水平A提取时间/minB提取温度/℃C液料比/（mL/g）-1 20 100 20∶1 0 30 110 30∶1+1 40 120 40∶12.4 数据分析金银花中绿原酸提取试验平行进行3次，取平均值，然后利用Origin8.0和Design Expert 8.0.5软件进行作图和统计分析。
3 结果与讨论3.1 标准品及供试品的色谱图图1是绿原酸标准品、供试品以及空白溶剂的高效液相色谱图。
从图1中可以看出，在“2.1.1”的色谱条件下，供试液中的绿原酸和杂峰在12 min内实现了良好分离，且峰形对称不拖尾。
绿原酸标准品的质量浓度Y与峰面积 X 的回归方程为：Y=2×10-5X+0.314 2，R2=0.999 9，线性关系良好。
图1 供试品溶液（A）绿原酸标准品溶液（B）空白溶剂（C）的高效液相色谱图Fig.1 HPLC of reference sample（A），reference substance（B）and 50%methanol（C）3.2 方法学考察3.2.1 精密度试验取同一个绿原酸标准溶液，连续进样6次，以绿原酸的峰面计，绿原酸的RSD为1.42%，说明仪器的精密度良好。
3.2.2 重复性试验取金银花粉末 0.8 g，液料比为20 ∶1（mL/g），提取温度90℃，提取时间30 min，平行提取6份，在“2.1.1”色谱条件下进行检测，绿原酸峰面积的RSD值为1.39%，说明水热法提取绿原酸的重复性和稳定较好。
3.2.3 稳定性试验取同一份供试液样品，在上述的色谱条件下，分别于配置后0、2、4、6、24 h进样，记录绿原酸的峰面积，RSD值为0.60%，表明供试液液在24 h内稳定。
3.2.4 回收率试验精密量取0.5mL已知含量（绿原酸含量为0.545mg）供试液于50 mL容量瓶中，分别加入绿原酸对照品溶液（2.18 mg/mL）0.4、0.5、0.6 mL，按照低、中、高制备3组，平行测定3次，测得绿原酸平均加样回收率为96.58%，RSD=1.89%，说明该方法准确可靠。
3.3 单因素试验3.3.1 液料比对绿原酸得率的影响在提取温度为110℃，提取时间为20 min，液料比为10 ∶1、20 ∶1、30 ∶1、40 ∶1、50 ∶1（mL/g）进行试验，探讨液料比绿原酸得率的影响，结果如图2所示。
由图2可知随着液料比增大，绿原酸得率呈现先升高后下降的趋势。
这是因为随着提取溶剂体积的增大，金银花粉末与水的接触面积增大，使得绿原酸的得率逐渐升高，当液料比为30∶1（mL/g）时，绿原酸得率最大。
超过30∶1（mL/g）后，绿原酸得率逐渐降低，这可能是由于当液料比为30∶1（mL/g）g时，在此提取条件下，金银花中的绿原酸已经完全提取出来，如果继续扩大液料比只会稀释提取液中绿原酸的浓度，从而表现为绿原酸的得率降低。
