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抗体的保存抗体纯化后，一般将其缓冲液置换成PBS，便于后期标记或其他用途使用，如果浓度太低，需要浓缩,抗体浓缩后浓度最好不要太高，太高容易引起沉淀。
一、透析浓缩方法1.透析袋浓缩将纯化的抗体装入透析袋中，透析袋表面覆满PEG20,000进行浓缩（不要用蔗糖浓缩）。
2.超滤管浓缩将纯化的抗体转入15 ml的超滤管，3,500rpm离心12min左右（根据要浓缩的体积摸索离心时间）。
3.抗体浓度测定取适量抗体检测OD280nm的吸光度，读数不要超过2。
如果读数超过2，再稀释，用吸光度读数除以1.35，再乘以稀释倍数即为抗体的大致浓度（mg/ml）。
抗体的浓度（mg/ml）也可以用（OD280nm-0.35×OD495nm）/1.4这个公式计算。
二、抗体的保存抗体的保存需要注意以下几个方面：1.纯化完的抗体推荐于PBS或者TBS溶液保存，可添加0.1%叠氮化钠防腐剂，但是叠氮化钠可能对下游实验中的辣根过氧化物酶产生抑制作用，作为免疫检测试剂开发的抗体一般使用有机化合物高分子防腐剂，避免对下游酶或者荧光染料的影响，如有需要可联系福因德生物。
2.分装成小管，避免污染或者反复冻融，溶解时需要缓慢解冻，不可直接放热水急速解冻。
3.存放抗体容器不要选择聚苯乙烯材料，可以选择玻璃或者对蛋白低吸附材料的管子。
4.如果抗体要进行后期标记，最好在PBS中保存，不加防腐剂，短期内使用可放4，长期存放-20保存。
5.如果抗体只做免疫学实验，不进行标记可以添加保护剂（1% BSA或海藻糖），还可以加30%～50%甘油，-20保存，此保存方法只适合下游直接使用（ELISA，IHC，WB），不适合对其进行标记开发，但其在-20不结冰，对抗体效价保存较好，并且使用时也不用反复冻融。
6.冻干可以保存更长时间，但是同样要加入很多辅料保护剂，如：海藻糖、BSA，加了保护剂后期开发较难；也可以直接不加辅料保护，直接冻干，但效价损失大。
抗体选择随着生命科学的发展，围绕蛋白进行的研究越来越多，抗体试剂在实验中的重要性越来越举足轻重。
面临着纷呈复杂的抗体试剂市场，如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。
当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。
抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、抗体选择总体原则1. 关于特异性的选择特异性的选择主要需要考虑四个方面：蛋白特异性、种属特异性、实验方法特异性、标记物的特异性。
（1）蛋白特异性针对需要检测的蛋白查找抗体，几个细节要区分，重组表达的蛋白和内源性蛋白的检测，对抗体的要求是不一样的，注意查看抗体说明书的检测说明。
如果重组蛋白不是全长表达，则需要注意抗体的免疫原区域是否在重组蛋白区域内。
内源性蛋白最好能清楚其剪切与修饰的方式，特殊表型的蛋白需要进行序列比对，并结合抗体免疫原序列，查看交叉反应的情况。
磷酸化蛋白检测需要确定具体位点，不同位点的磷酸化意味着可能有不同的机制存在，不宜一概而论。
（2）种属特异性同种蛋白不同物种，有着或大或小的差异。
目前大部分商品化抗体都是以人源蛋白序列为模板重组蛋白或设计多肽抗原的，根据蛋白的同源性情况与其他种属发生交叉反应。
需要参照说明书注明的可反应种属信息。
一些稀有种属很难找到抗体，可以通过蛋白的序列比对，选择同源序列免疫的抗体，不过一般这种情况生产商不会受理其关于质量的申诉，如果可以申请到免费的抗体样品，则利于抗体选择。
（3）实验方法特异性目前使用抗体的实验方法有很多，不同的使用方法过程中，因为对蛋白样品的处理方式不一样，蛋白的含量有差异，对抗体的识别表位和效价要求都是不一样的。
具体的根据说明书注明的产品应用方法进行选择。
但是生产商一般不会将每个抗体都进行各种实验的检测，目前检测比较多的只是WB、IHC、IF等，如果针对具体的实验方法没有找到合适的抗体的，可以结合蛋白序列分析和抗体的抗原信息，选择尽可能有效果的抗体。
rd抗体选择方法
明确实验需求：首先，需要明确实验的具体需求，例如需要检测的抗原类型、抗体的应用场合（如Western Blot、免疫组化、流式细胞术等）以及所需抗体的特异性和敏感性等。
抗体特异性验证：查看抗体供应商的产品描述和数据表，确保抗体是针对所需抗原特异性制备的，并且经过了验证。
优先选择经过多种验证方法（如免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等）证实的抗体。
抗体来源和类型：考虑抗体的来源（如鼠、兔、人等）和类型（如多克隆抗体、单克隆抗体、重组抗体等）。
不同类型的抗体有其各自的优缺点，需要根据实验需求选择合适的抗体。
抗体纯度和批次一致性：抗体的纯度和批次间的一致性对于实验结果至关重要。
选择经过严格质量控制、纯度高的抗体，并尽可能选择同一批次的抗体进行实验。
抗体保存和使用条件：了解抗体的保存条件和使用方法，确保在实验过程中正确保存和使用抗体，避免抗体失活或降解。
参考同行评价和文献：查阅相关文献和同行评价，了解抗体在实际应用中的表现，优先选择经过同行验证、表现良好的抗体。
成本效益分析：在考虑抗体质量的同时，也需要考虑成本效益。
根据实验预算和需要，选择性价比高的抗体。
总之，选择适合的RD抗体需要综合考虑多个方面的因素，并参考可靠的信息和数据。
正确的选择将为实验的成功奠定坚实的基础。
bioss 抗体说明书
一、产品简介
1、本抗体可用于检测和tag融合表达蛋白的表达、细胞内定位，以及纯化、定性或定量检测tag融合表达蛋白等。
2、产品组成：抗体10uL。
3、建议稀释比例：WB（1:1000）。
4、存储条件：抗体-20℃保存，可稳定保存一年，避免反复冻融。
二、注意事项
1、在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。
稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
2、回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。
如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1到3分钟，取上清用于后续检测。
如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
简述抗体的保存方法一、简介抗体是免疫系统产生的一种特殊蛋白质，具有识别和结合特定抗原的能力。
在医学研究和临床诊断中，抗体被广泛应用于免疫组化、免疫印记、免疫沉淀等实验中。
为了确保抗体的稳定性和长期保存，合理的保存方法至关重要。
二、抗体的保存条件1. 温度抗体的保存温度是决定其稳定性的重要因素。
一般而言，抗体应保存在-20℃或更低的温度下，可以有效地减缓抗体的降解速度。
对于一些特殊的抗体，如酶标抗体、荧光抗体等，应根据其特性选择适当的保存温度。
2. 冷冻液在保存抗体时，应使用含有保护剂的冷冻液，如甘油、明胶、牛血清白蛋白等。
这些保护剂可以有效地减少抗体的降解和损伤，保持其活性和稳定性。
3. 分装为了避免多次冻融对抗体的影响，应将抗体分装成小份，每份只使用一次。
分装时应注意避免空气接触，以防止氧化和污染。
4. 储存容器抗体的储存容器应选择无毒、无味、耐低温和耐腐蚀的材质，如聚丙烯、聚乙烯等。
此外，储存容器应密封良好，以防止空气和水分进入，影响抗体的稳定性。
5. 防光抗体对光敏感，容易受到光的照射而降解和失活。
因此，在保存抗体时，应将其存放在避光的环境中，如黑暗的冷冻箱或冷藏室。
三、抗体的保存期限抗体的保存期限取决于其质量和保存条件。
一般而言，抗体在-20℃下可以保存6个月至1年，而在更低的温度下，如-80℃，可以保存数年甚至更长时间。
然而，值得注意的是，抗体的保存期限并非一成不变，受到多种因素的影响，如制备工艺、纯度、稀释液、保存温度等。
四、抗体的解冻和使用1. 解冻在使用冷冻保存的抗体之前，应先将其缓慢解冻至室温。
为了避免抗体的损伤，解冻过程中应尽量避免温度的突变和震动。
2. 稀释抗体在使用前需要进行适当的稀释。
稀释液的选择应根据实验需求和抗体的特性进行，一般常用的稀释液有PBS、BSA、TBST等。
3. 使用在实验中使用抗体时，应严格按照实验方案和操作规程进行。
避免抗体与其他试剂或物质的接触，以免干扰实验结果。
抗体选择指南抗体保存指南抗体说明书样本一抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
抗体试剂技术要求随着生物医学领域的不断发展，抗体试剂作为一种重要的实验工具，被广泛应用于生物学研究、临床诊断以及药物开发等领域。
抗体试剂技术的要求包括多个方面，下面将从抗体选择、制备与储存、检测与验证等方面进行详细介绍。
抗体的选择是抗体试剂技术的关键步骤之一。
在选择抗体时，需要考虑抗体的特异性、亲和力、稳定性等因素。
特异性是指抗体只能与目标抗原特异性结合，而不与其他非特异性物质结合。
亲和力则是指抗体与抗原结合的强度，亲和力越高，抗体与抗原的结合越紧密。
稳定性是指抗体在不同条件下的保存稳定性，如耐高温、耐酸碱等。
因此，在选择抗体时，需要根据实验需求仔细评估这些因素。
抗体的制备与储存也是抗体试剂技术中不可忽视的环节。
一般来说，抗体的制备包括抗原的制备和免疫动物的免疫过程。
抗原的制备需要注意保持其天然结构和活性，以确保抗体的特异性。
免疫动物的选择则需要考虑其免疫应答能力、抗原的相似性等因素。
制备好的抗体需要正确储存，一般建议在-20℃或更低温度下保存，避免重复冻融。
此外，抗体的储存液应该选择适当的缓冲液，并添加一些保护剂，如蛋白质稳定剂，以增加抗体的稳定性。
抗体试剂技术中的检测与验证也是至关重要的一步。
在使用抗体试剂进行实验前，需要对抗体进行验证，以确保其特异性和敏感性。
常用的验证方法包括免疫印迹、免疫组化、流式细胞术等。
验证抗体时，应使用已知表达目标抗原的样本进行实验，并与负对照样本进行比较。
如果抗体的特异性和敏感性达到实验要求，则可以进行下一步实验。
除了上述内容，还有一些其他方面的要求需要注意。
例如，在实验中使用抗体试剂时，需要注意正确的稀释倍数和操作条件，避免出现误差。
此外，抗体试剂的交叉反应性也需要进行评估，以避免与其他相关物质发生非特异性结合。
最后，抗体试剂的批次一致性也是重要的要求之一，为了保证实验结果的准确性和可重复性，建议在同一批次中使用同一供应商提供的抗体试剂。
抗体试剂技术的要求包括抗体选择、制备与储存、检测与验证等多个方面。
抗体制备与使用实验指南概述及解释说明1. 引言1.1 概述在生物科学研究中，抗体制备与使用是一项关键的实验工作。
抗体具有高度的特异性和亲和力，可以用于检测、定位和纯化特定分子或细胞结构。
因此，准确、可靠地制备和使用抗体对于科学研究的进展至关重要。
1.2 文章结构本文将以详细而全面的方式介绍抗体制备与使用的实验指南。
首先，我们会概述整篇文章的结构，并简要说明各个部分的内容。
接下来，我们将讨论抗体制备与使用的概念及其在科学研究中的应用。
然后，详细解释抗体制备实验流程中的各个步骤，并介绍相关方法和技术。
最后，我们会探讨抗体使用实验流程中需要注意的事项，并提供标定、优化以及特异性验证等方面的方法。
1.3 目的本文旨在为研究人员提供一份全面且易于理解的实验指南，帮助他们更好地理解和掌握抗体制备与使用技术。
通过本文所提供的内容，读者将能够了解不同类型的抗体制备方法、抗体选择与设计原则、抗体应用范围与限制等知识。
同时，我们也将详细讲解实验流程中的关键步骤，并提供一些常用的技术和方法。
通过学习本文，读者将能够正确地使用抗体进行科学研究，并在实验设计和结果解读方面取得更好的成果。
以上是“1. 引言”部分的内容，希望对你的长文撰写有所帮助。
如需继续撰写其他部分，请再告诉我需要撰写哪个部分的内容。
2. 抗体制备与使用实验指南概述：2.1 抗体制备方法介绍:抗体制备是指通过免疫动物或体外细胞培养等手段，获得能够特异性识别和结合特定抗原的抗体。
常用的抗体制备方法包括小鼠单克隆和多克隆抗体制备、大规模生产抗体以及重组技术获得单克隆抗体等。
每种方法有其优缺点，在选择时需根据实验需要和研究对象的特性进行权衡。
2.2 抗体选择与设计原则：在抗体选择时，要考虑目标分子的免疫原性、表达情况和应用需求等因素。
同时，还需要关注抗体的特异性、亲和力以及交叉反应性等指标，确保选用的抗体能够准确且可靠地检测目标分子。
此外，还需要考虑实验条件、成本和供应商信誉等方面的因素。
抗体使用注意事项嘿，朋友们！今天咱们来唠唠《抗体使用注意事项》呢。
这抗体呀，在好多地方都起着超重要的作用呀，可使用的时候，那得注意老多事儿了哇！首先哇，咱得说说抗体的保存呢。
哎呀呀，这保存可不能马虎啊！不同类型的抗体保存条件那是有差别的呀。
有的抗体需要低温保存，比如说零下20度甚至零下80度呢！你要是随随便便就把它放在常温下，那可就坏事儿喽！这就像是把冰块放在太阳下，很快就化掉了不是吗？所以呀，在使用之前一定要确认好它的保存要求，这可是保证抗体活性的关键呀！其次呢，在使用抗体的时候，浓度的把握很重要哇！你不能随便乱加吧？这就好比做菜放盐，放多了太咸，放少了没味。
抗体浓度过高，可能会产生非特异性结合，出现一些假阳性的结果呢；浓度过低呢，又可能检测不到目标蛋白，这多让人头疼呀！所以呢，一定要按照说明书或者是实验的要求，准确地配置合适的抗体浓度呀。
还有哇，抗体的稀释剂也不能乱来哦！不是随便什么溶液都能拿来稀释抗体的呀。
合适的稀释剂能保证抗体的稳定性和活性，选错了的话，那抗体的性能可能就大打折扣喽！哎呀呀，这可不能不重视呢！另外呀，在使用多克隆抗体和单克隆抗体的时候也要注意区别呢。
多克隆抗体能识别多个抗原表位，单克隆抗体只能识别一个特异性的表位。
这就决定了它们在不同的实验场景下有着不同的用途呀。
你要是用错了类型，那实验结果可能就完全不对劲儿喽！这就像你出门穿错了鞋子，走路都不舒服不是吗？在做实验的时候呢，抗体的孵育时间也得好好把控呀。
孵育时间过长或者过短都可能影响结果的准确性呢。
就像烤蛋糕，时间长了烤焦了，时间短了没烤熟，这抗体孵育也是同样的道理呀。
你得根据具体的实验要求和抗体的特性来确定合适的孵育时间，这可不能含糊哇！再就是，抗体使用完了之后的处理也很重要呢。
不能就那么随随便便地扔了呀。
要是有污染性的抗体，要按照规定的生物安全流程来处理呢。
哎呀呀，这可关乎到实验室的安全和环境的保护呀！总之呢，朋友们，抗体使用的这些注意事项呀，每一个环节都很关键呢。
抗体的选择和保存指南展开全文当我们要检测目的蛋白在组织中表达情况的时候，如何选择适合我们实验需要的抗体，并恰当保存使用，是每个科研人员需要细心考虑的。
抗体种类繁多，品牌众多，技术参数不一，价格和质量更是相差甚大，如何购买到高质量价格合适的抗体，并准确地做出我们想要的结果，其中有很多细节需要注意。
一、怎样选择适合你实验需要的抗体？1. 一抗选择要点（1）确定抗体的名字，注意中英文名字、它名、亚型等信息。
（2）确定你的实验类型，Elisa，WB，IHC，ICC，还是FACS。
一般抗体的说明书都会列出该抗体经验证过适用于何种实验的类型，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种实验验证，请根据说明书列出的已验证的类型来选择适合你实验的抗体。
（3）确定实验样本的种属，Human，Mouse，还是Rat。
一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种物种实验，请根据说明书列出已验证的种属来选择适合你实验的抗体。
（4）样本蛋白的结构性质。
了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，待测样本蛋白的结构域和样本在提取和处理过程中是否会变性，蛋白空间构象的改变，会影响抗体的免疫亲和反应。
（5）单多克隆抗体的选择。
市面上的抗体还是以多克隆抗体为主，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2. 二抗选择要点（1）种属来源。
主要根据一抗种属来源来决定购买二抗来源，如一抗是小鼠来源，那二抗就买抗小鼠的即可（羊、兔等均可）。
（2）标记物的选择。
有HRP、Biotin、荧光素等标记物。
一般SP三步法二抗选择Biotin标记的二抗，以与后面的SP结合反应，而免疫荧光染色就需要购买不同荧光素标记的二抗，如罗丹明、FITC、Cy3等常用荧光素。
二、抗体的稳定性1. 抗体的稳定性是自然界长期进化的结果。
小鼠抗人IgM（单克隆抗体）
本产品使用具有高效价抗体的小鼠腹水为原料，采用免疫亲和层析方法纯化，去除杂抗体，并采用免疫亲和层析方法纯化，制成高纯度（＞95%）高活性的抗人IgM（μ链特异）单克隆抗体。
纯度：≥95%
保存体系：10mM PBS、0.03%防腐剂、PH7.2
应用范围：Elisa、WB、IHC、金标、点膜、包被等科研、生产实验
稳定性：-20℃保存2年
产品规格：1mg、5mg、10mg、50mg
注意事项：
1.请根据实验需要选择最适工作效价，部分实验根据具体实验情况可在推荐工作效价
基础上进行增加或减小。
2.短期保存的抗体：如抗体几周内就会使用，收到后推荐在2-8℃保存，2-8℃短暂保
存数周对抗体活性没有影响。
3.长期保存的抗体：如抗体需超过1个月后才会使用，请酌情分装后于-20℃保存。
4.建议：将抗体保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。
绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
反复冻融过程中，冰晶会对抗体的空间结构造成破坏，导致蛋白变性形成多聚
体，从而降低抗体的结合能力，加快抗体降解速度。
抗体的制备与使用指南一、抗体的制备。
1. 免疫原的选择。
- 对于制备抗体，首先要确定合适的免疫原。
如果是针对蛋白质抗原，要保证其纯度尽可能高。
例如，从细胞裂解物中纯化目标蛋白，可以采用亲和层析等方法。
对于小分子半抗原（如药物分子等），通常需要将其与大分子载体蛋白（如牛血清白蛋白）偶联，以增强其免疫原性。
- 免疫原的剂量也很关键。
一般来说，初次免疫时，对于小鼠等小动物，蛋白质抗原的剂量可在10 - 100μg之间，具体剂量需要根据抗原的性质和动物的种类进行优化。
2. 动物的选择与免疫。
- 动物选择。
- 常用的动物有小鼠、大鼠、兔子等。
小鼠因为繁殖快、成本低，是实验室制备单克隆抗体时常用的动物。
兔子则常用于制备多克隆抗体，其血清中抗体产量相对较高。
- 免疫程序。
- 对于小鼠，初次免疫可采用皮下注射或腹腔注射的方式。
以皮下注射为例，可在小鼠背部多点注射免疫原。
初次免疫后，间隔2 - 4周进行加强免疫，加强免疫的剂量可以适当减少，一般为初次免疫剂量的1/2 - 1/3。
经过2 - 3次加强免疫后，可检测动物血清中的抗体效价。
3. 单克隆抗体的制备。
- 细胞融合。
- 在小鼠免疫后，取其脾脏细胞（其中含有产生抗体的B淋巴细胞），与骨髓瘤细胞（如SP2/0细胞系）在聚乙二醇（PEG）的作用下进行融合。
融合后的细胞具有两种细胞的特性，既能产生特异性抗体，又能在体外无限增殖。
- 筛选阳性克隆。
- 利用次黄嘌呤 - 鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）缺陷型的骨髓瘤细胞和HAT （次黄嘌呤 - 氨基蝶呤 - 胸腺嘧啶核苷）选择培养基进行筛选。
在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因为缺乏HGPRT酶而死亡，未融合的脾细胞在体外不能长期存活，只有融合成功的杂交瘤细胞能够生长。
然后通过ELISA等方法筛选出产生特异性抗体的阳性克隆。
- 克隆化培养。
- 对筛选出的阳性克隆进行克隆化培养，常用的方法有限稀释法和软琼脂平板法。
限稀释法是将细胞悬液进行连续稀释，使每个孔中理论上只含有一个细胞，然后培养这些细胞，形成单克隆的细胞集落，从而得到稳定分泌特异性抗体的单克隆细胞系。
GAPDH抗体说明书注意：本说明书提供关于GAPDH抗体的相关信息，包括抗体的来源、性能、应用等。
请在使用前仔细阅读本文档，并按照说明进行实验操作。
如有任何疑问，请咨询我们的技术支持团队。
1. 抗体来源本抗体由优质小鼠单克隆抗体产生，经过多次和GAPDH蛋白免疫去正常反应并经ELISA、WB等方法筛选获得。
2. 抗体性能2.1 特异性GAPDH抗体具有良好的特异性，仅与目标蛋白GAPDH结合，不与其他蛋白发生交叉反应。
经过多次验证，本抗体在多种物种中展现出高度的特异性。
2.2 敏感性本抗体具有较高的敏感性，可以在低浓度目标蛋白的条件下检测到GAPDH的表达。
2.3 稳定性本抗体经过特殊处理，具有较好的稳定性。
久贮存后，抗体的免疫活性仍然能够保持较高水平。
3. 抗体应用3.1 免疫检测GAPDH抗体可用于WB（Western Blot）、IP（免疫沉淀）、IHC （免疫组化）、IF（免疫荧光）等实验技术中。
3.2 WB应用以下为WB实验操作步骤：a) 准备样品：将待检测的蛋白组织或细胞裂解，制备总蛋白提取液。
b) SDS-PAGE分离：将总蛋白提取液通过SDS-PAGE电泳分离。
c) 转膜：将分离得到的蛋白转移到聚丙烯酰胺膜上。
d) 阻断：用5%脱脂奶粉或3%BSA在室温下阻断非特异性结合位点。
e) 一抗孵育：添加稀释后的GAPDH抗体，于室温下孵育2小时或过夜。
f) 洗涤：用PBS-T洗涤膜上未与抗体结合的蛋白。
g) 二抗孵育：添加辣根过氧化物酶标记的抗小鼠二抗，于室温下孵育1小时。
h) 洗涤：用PBS-T洗涤膜上未与二抗结合的抗体。
i) 显色：加入ECL显色剂进行显色，观察目标蛋白是否有特异性表达。
4. 注意事项4.1 使用前请确保本抗体处于稳定的状态，并按照规定的方法进行保存和操作。
4.2 本抗体仅供科学研究使用，不可用于临床诊断。
4.3 不同实验条件下可能需要进行抗体的适应性优化，建议用户根据实际情况进行试验操作。
抗体保存指南不同类型抗体的保存指南，用以避免抗体污染或损伤请不时核查数据表以获取特定保存建议。
对于未正确保存的抗体，Abcam不予保证。
如果恰当保存和处理，大多数抗体应能保持活性数月乃至数年。
保存温度和条件对于我们的很多抗体而言，分装成小等份并冻存于-20o C 或-80o C 是最佳保存条件。
分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。
小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于4o C. 在收到抗体时，在10,000 × g 下离心20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。
小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。
小等份应不小于10 µl; 等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。
在大多数情况下，收到抗体时在4o C 下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。
同样，遵照数据表上的建议是重要的。
免责条款和其它特别条件：∙酶偶联抗体不应冻存，而应保存于4o C. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。
∙无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。
特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。
∙IgG3 同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势，应始终保存于4o C.用叠氮化钠防止污染为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。
很多Abcam抗体已经包含这种防腐剂抗体已经包含这种防腐剂，所用浓度范围为0.02 至0.05%。
这会标示在数据表上标题为“保存缓冲液”的栏目。
不使用叠氮化钠的情形：∙如果用抗体染色或处理活细胞，或如果用抗体进行体内研究，一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。
该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性：它阻断细胞色素电子传递系统。
简述抗体的保存方法抗体是一种免疫蛋白，用于检测和治疗疾病。
为了确保抗体的有效性和稳定性，正确的保存方法至关重要。
下面将对抗体的保存方法进行详细讨论。
首先，在保存抗体之前，必须确保抗体是在符合质量要求的条件下生产和购买的。
质量好的抗体可能会在保存时表现出更好的稳定性和持久性。
此外，购买抗体时应选择可靠的供应商，并检查抗体的适用性和经过验证的数据。
在保存抗体时，必须将其存放在恰当的温度和环境条件下，以防止蛋白结构的变性和失活。
温度是保存抗体时最重要的因素之一、一般来说，抗体应保存在冷冻温度下，通常是-20℃或更低的温度。
在这种温度下，抗体可以长时间保持其活性。
如果只是短期储存，抗体也可以暂时保存在4℃的冰箱中。
长时间保存抗体时，应将其分装成小的工作用量，并使用无菌技术将其存放在冷冻管中，以防止细菌和其他污染物的侵入。
此外，应避免频繁地从冷冻库中取出抗体，因为反复冻结和解冻可能会影响其稳定性。
光的暴露是导致抗体失去活性的另一个重要因素。
抗体应保存在暗处，以减少紫外线和可见光对抗体的影响。
为此，应使用不透明的冷冻管或保鲜膜来覆盖抗体样品。
在保存抗体过程中，还应避免抗体与其他细胞因子或蛋白质的接触，因为这可能导致抗体的降解或聚集。
因此，在分装抗体时，应格外小心，并避免抗体与硅胶、蛋白质、乳化剂等物质的接触。
此外，在抗体保存过程中，还应密切关注抗体的过期日期。
抗体的过期可能导致活性降低，增加误差，因此需要及时更新抗体。
最后，为了避免冷冻过程中的温度变化，应使用专业的冷冻设备和储存系统，如液氮罐或冷冻干燥机。
综上所述，抗体的保存方法至关重要，以确保其在保存期间保持其活性和稳定性。
正确的保存方法包括存放在冷冻温度下，避免光的暴露，防止抗体与其他物质接触，及时更新过期抗体，并使用专业的冷冻设备和储存系统。
只有这样，才能确保抗体的有效性和可靠性，为科学研究和临床诊断提供可靠的支持。
抗体的制备与使用指南
《抗体的制备与使用指南》
嘿呀，今天咱就来聊聊抗体这玩意儿。
你知道吗，就像我之前有一次感冒了，那可真是难受得要命啊！整天咳咳咳，感觉肺都要咳出来了。
这时候我就在想，要是有个什么东西能帮我快点好起来就好了。
后来我才知道，这抗体就像是我们身体里的小战士。
咱先来说说抗体的制备吧。
这就好比是在训练一支精锐部队，得有各种条件和步骤呢。
首先得找到合适的“原料”，就像做菜得有好食材一样。
然后经过一系列复杂的过程，慢慢培养出这些厉害的抗体小战士。
那抗体怎么使用呢？就像我感冒的时候，如果身体里有足够多的针对感冒病毒的抗体，它们就能迅速出击，把那些坏家伙给干掉。
这些抗体就像是一个个聪明的小精灵，知道该去对付谁，然后精准打击。
而且哦，抗体还挺有个性的。
不同的抗体针对不同的敌人，可不能乱来。
就像我们不能让步兵去打飞机一样，得让合适的抗体去对付合适的病原体。
哎呀，说了这么多，总之抗体就是我们身体的好帮手啦。
有了它们，我们才能在这个充满各种病菌的世界里好好地活着。
下次要是再感冒，我可得好好指望我身体里的这些抗体小战士啦！希望它们能像超级英雄一样，迅速把病魔赶跑，让我又能活蹦乱跳的啦！哈哈！
怎么样，这下你对抗体的制备和使用有点了解了吧！。
抗体选择指南抗体保存指南抗体说明书样本一抗体选择指南:检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，为缩小抗体的选择范围选中合适的抗体，需要考虑如下几种因素：1. 分析或应用的类型2. 样本蛋白的结构性质3. 样本的种属4. 抗体宿主的种类5. 抗体的标记和检测1分析试验的应用类型一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。
2 样本蛋白的结构性质了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑(1)..待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。
如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。
(2)样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。
当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来3 样本的物种应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。
4 一抗宿主物种的选择一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。
如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting 检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。
5 二抗的选择二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源，例如：如果你的一抗是小鼠的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗anti-mouse secondary。
建议检查二抗说明书确保该抗体适用于你的检测应用，二抗一般连接荧光素FITC或发光团。
6 双重染色抗体的选择用未偶联一抗进行细胞培养物或组织切片的双重免疫染色要求一抗来源于不同物种并且二抗分别识别其中之一，二抗说明书应描述其与其它物种来源的免疫球蛋有否有交叉吸附。
7荧光和化学发光标记连接于二抗的标记物是为了检测抗体的结合，选择标记物依赖于几个参数：检测方法：荧光或着色沉淀，荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光，下表列出了几种荧光素的分子特征：荧光素颜色激发波发射波长分子量Aminomethylcoumarin (AMCA) Blue 353 440 410Fluorescein (FITC) Green 495 528 390Fluorescein (DTAF) Green 495 528 530Rhodamine (TRITC) Red 550 570 444Texas Redtm Red 596 620 625Cy2tm Green 489 505 897Cy3tm Orange 552 565 949Cy3.5tm Scarlet 581 596 1,286Cy5tm Far-Red 650 667 975Cy5.5tm Near Infra-Red678 703 1,312Cy7tm Near Infra-Red743 767 1,001R-Phycoerythrin (RPE) Red 488 575 240,000B-Phycoerythrin (BPE) Red 545 575 240,000C-Phycocyanin Red 618 640 110,000R-Phycocyanin Red 615 620 110,000二抗连接标记酶HRP and AP 与其底物产生有颜色的沉淀物 辣根过氧化物酶Horseradish peroxidase (HRP) 碱性磷酸酶Alkaline phosphatase (AP)AEC (red) Fast red (pink) DAB (brown) INT (yellow / brown) NBT (brown / purple) New Fuchsin (red) TNBT (purple) Vega red (pink)封片介质（仅免疫组化）. AEC, Fast Red, INT 或其它水性发光基团是可以醇溶的并要求水性封片. 除上述之外的发光基团是有机的所以最好使用有机性封片介质。
荧光素标记物要求水性封片介质，藻红蛋白(藻青素 / 藻红素要求不添加甘油的水性封片介质，因其有淬灭荧光的效应，生物素化的抗体通常用于加强亲和素-生物素-酶或荧光素复合物（ABC 试剂 或亲和素或链霉亲和素连接酶或荧光素的信号）封片介质抗体保存指南抗体保存得当与否，直接决定了抗体的活性和使用效果！如果抗体保存得当，大部分抗体活性都可以维持数月甚至数年。
本指南以abcam抗体保存方法为主，同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品！请谨记！无论何时请按照说明书推荐的保存条件正确保存抗体！1. 收到抗体后请务必在12000rpm离心20-30s后再打开管盖进行分装和保存！质优的抗体使用非常特殊的储存管，只有在12000rpm离心20-30s才能将附着在管壁或盖内的抗体全部离心下来。
即使是在10000rpm离心也会导致离心不完全，导致出现抗体的量不足的现象！o 2. 对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20度 or -80度对绝大多数抗体来说，保存在-20度是完全足够了。
没有任何证据显示保存在-80度 会有更多的好处！o分装可以最大程度的降低反复冻融对抗体活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体造成的污染可能性。
o分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10ul每份。
因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响o复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在4度，避免再冻起来！o抗体工作液应该当天配制当天用完，在4度 尽量不要超过1天。
o绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。
尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上3. 大部分抗体收到后4度短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。
如果抗体很快（1-2周）会使用，推荐在4度保存，这是为了避免反复冻融对抗体活性的损害。
如果要长期保存则最好是在-20度 or -80度。
最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体！但是，腹水形式的产品请在收到后立即冻起来！因为该类产品含有大量的蛋白酶，长期在4度保存会导致抗体的降解！4. 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4度的条件下来完成的。
4度运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体是冻起来的，为了分装就需要解冻。
这就多了一次冻融的过程）。
所以运输过程中绝对避免干冰运输！特殊抗体的保存条件：1.酶联抗体：永远保存在4度，避免冻起来。
否则会导致酶活性的下降或者丧失2.偶联抗体：所有偶联抗体都是在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。
尤其是荧光抗体，对光极为敏感，因此在所有的实验阶段也是要避光操作的！3.IgG3的同型对照：永远保存在4度，避免冻起来。
因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体无论是保存还是运输，绝对避免反复冻融！反复冻融会导致抗体变性，导致多聚体形成，从而降低抗体的结合能力！抗体保存其它相关信息：关于加入甘油保存：有些人会加50%的甘油到抗体中来避免反复冻融，甘油在-20度 会降低冰点。
这对很多抗体可能是可行的。
但是abcam仅对非常小的一部分抗体检测过其在这种条件下的稳定性；而abcam只对按照推荐条件保存的抗体提供质量保证！加入甘油的溶液不建议在-80度保存，因为这已经超过了甘油的冰点。
如果您要加入甘油来保存抗体的话，请谨慎注意无菌操作，避免污染！关于蛋白保护剂：蛋白在高浓度时更不容易降解（1 mg/ml 或者更高），这就是为什么在抗体中加入BSA之类作为稳定剂的原因了；另一方面，加入的蛋白也可以减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。
但是如果抗体要用来标记的话，则不能加入蛋白稳定剂，因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
关于叠氮化钠（sodium azide）的使用：为了防止微生物污染，叠氮化钠经常被加入到抗体中（终浓度0.02% (w/v)）。
Abcam的很多抗体已经含有了0.02％-0.05%的叠氮化钠，在说明书的“Storage buffer”中有标明的。
在下述情况中不能使用叠氮化钠：•如果抗体用于染色或处理活细胞，用于体内研究：叠氮化钠在抵抗微生物的同时，对其它大部分有机物也是有毒的，因为它阻断了线粒体的cytochrome electron transport system.•要偶联带有氨基基团的抗体：叠氮化钠会干扰任何含有氨基基团的偶联，因此在进行偶联之前，应将叠氮化钠去除。
偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存，但是浓度只能是0.01％。
对于需要偶联的抗体，thimerosal (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂！注：叠氮化钠的去除方式：可以通过凝胶电泳或过滤的方式去除！IgG的分子量是150kDa (IgM 是~ 600kDa); 叠氮化钠的分子量只有65Da。
使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除抗体说明书样本Product Name NFkB p105 / p50 antibody [E381] (注:E381是指克隆号)Product type Primary antibodiesDescription Rabbit monoclonal [E381] to NFkB p105 / p50 Immunogen A synthetic peptide corresponding to residues in thenuclear factor NFkB p50 subunit.Reacts with Hu, Ms, Rat (注:人小鼠大鼠)Specificity This antibody will detect both forms: p50 and p105.Tested applications Flow Cyt, ICC, IHC-P, WB(流式细胞分析免疫细胞化学免疫组织化学-石蜡包埋 western bloting)Application notes Recommended dilutionsFlow Cyt: 1/30.ICC: 1/250 - 1/500.IHC-P: 1/250 - 1/500.WB: 1/5000. Detects bands of approximately 50 and 105 kDa(predicted molecular weight: 50 and 105 kDa).Is unsuitable for IP.Not yet tested in other applications.Optimal dilutions/concentrations should be determined by the enduser.Positive control HeLa cell lysate; human prostate carcinomaCellular localization Nuclear, but also found in the cytoplasm in an inactive formcomplexed to an inhibitor (I kappa B).Research areas Cancer>>Signal transduction>>Nuclear signaling>>NFkB pathwayChromatin>>Transcription>>Transcription FactorsNuclear Signaling>>Nuclear Signaling Pathways>>NFkB pathwayNuclear Signaling>>Transcription>>Other factorsCell Biology>>Signal Transduction>>Nuclear Signaling>>NFkBPathwayImmunology>>Innate Immunity>>Macrophage / Inflamm.Cell Biology>>Apoptosis>>Intracellular>>NFkB>>p50Relevance NFkB is a transcription regulator that is activated by various intra andextra cellular stimuli such as cytokines, oxidant free radicals,ultraviolet irradiation, and bacterial or viral products. NFkB is a familyof transcription factors that consists of homo and heterodimers ofNFkB1/p50 and RelA/p65 subunits, and controls a variety of cellularevents including development and immune responses. All membersshare a conserved amino terminus domain that includes dimerization,nuclear localization, and DNA binding regions, and a carboxy terminaltransactivation domain. Serines 529 and 536 in the transactivationdomain of RelA/p65 are phosphorylated in response to several stimuliincluding phorbol ester, IL1 alpha and TNF alpha as mediated by IkBkinase and p38 MAPK. Serine 529 is located in a negatively chargedregion (amino acids 422-540) that is phosphorylated in response tophorbol myristate acetate plus calcium ionophore activation.Phosphorylation of serines 529 and 536 is critical for RelA/p65transcriptional activity. Activated NFkB translocates into the nucleusand stimulates the expression of genes involved in a wide variety ofbiological functions. Inappropriate activation of NFkB has beenassociated with a number of inflammatory diseases while persistentinhibition of NFkB leads to inappropriate immune cell development ordelayed cell growth.Alternative names for NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360) Database links The links below go to external sites and will open in a new browserwindowEntrez Gene 4790 (Human) 18033 (Mouse) 81736 (Rat)GeneCar d GC04P103880 (Hum an)Omim164011 (Human) SwissProtP19838 (Human)P25799 (Mouse)Q63369 (Rat) Unigene431926 (Human)Raised in RabbitClonality MonoclonalClone number E381Isotype IgGPurity Protein A purifiedStorage buffer Preservative: 0.01% Sodium AzideConstituents: 40% Glycerol, 0.05% BSA, 0.15M Sodium chloride,50mM Tris glycine. pH 7.4Material safety datasheets (MSDS) for this product:Form LiquidStorage instructions Shipped at 4°C. Upon delivery aliquot and store at -20°C. Avoid freeze/ thaw cycles.NFkB p105 / p50 antibody [E381] images:Western blot - NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360)NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360) at 1/5000 dilution + HeLa cell lysatePredicted band size : 50 kDaObserved band size : 50,105 kDaImmunohistochemistry (Paraffin-embedded sections) -NFkB p105 / p50 antibody [E381] (ab32360)Paraffin-embedded human prostate carcinomaab32360 at 1/250 dilution。
