槲皮素检测

天然药物化学设计实验

开题报告

题目：槲皮素提取及结构鉴定

学生姓名： 舒泉湧

学 号： 200804040125

院 （系）： 生命科学与工程学院

专 业： 制药工程

指导教师： 孔阳

一．【文献综述】

1．1研究意义

我国北部、华南和西南地区等地区都产槐花，尤河北和江苏省产量最为丰富。槐花中含有丰富的黄酮类化合物，其芦丁(nltin)为黄酮中的主要成分，含量为8—20％；槲皮素(quercetin)为芦丁的苷元。芦丁和槲皮素具有抗炎作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、抗血小板聚集作用；对糖尿病的肾脏、胃肠粘膜、器官缺血损伤具有保护作用；同时还有抗忧郁、抗心胸肥大、降压等作用。因此，对槐花中芦丁和槲皮素的提取分离研究具有非常重要的研究意义。

1．2研究现状

1．2．1槐花性状与产地简介

槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾；前者习称为“槐花”，后者习称为槐米。落叶乔木，单数羽状复叶互生，长达25 cm，叶柄基部膨大，小叶7—15，卵状长圆形或卵状披针形，长2.55 cm，先端尖，基部圆形或阔楔形，全缘,上面绿色，下面伏生白色短毛。小叶柄长2.5cm；托叶镰刀状，早落。花瓣多数散落，完整花呈飞鸟状，花瓣5枚，黄色或淡棕色，皱缩，卷曲。雄蕊淡黄色，须状，有时弯曲，子房膨大；质轻，气微，味微苦；花期为7—8月。主产于我国北部、华南及西南地区；河北省产量较丰富，江苏主产于镇江、苏州、南京、徐州等地。

1．2．2槐花的化学成份及理化性质

1．2．2．1槐花中的化学成份

槐花中含赤豆皂甙（azukisaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ，大豆皂甙（soyasaponin）I、Ⅲ，槐花皂甙（kaikasaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。还含黄酮类：槲皮素（quercetin），芸香甙（rutin），异鼠李素（isorhamnetin），异鼠李素-3-芸香糖甙（isorhamnetin-3-rutinoside），山奈酚-3-芸香糖（kaempferol-3-rutinoside）。又含白桦脂醇（betulin），槐花二醇（sophoradiol）。花油中含月桂酸（lauric

化学工程师　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒ　２０１１年第７期　棼　糯　能　文章编号：１００２—１　１２４（２０１　１）０７—００２３—０２　高效液相色谱法测定槲树叶中　槲皮素的含量　赵焕君　，赵琳　，孙长晶２，刘　威　（１．辽宁中医药大学药学院。辽宁大连１１６６００；２．吉林大峻药业销售部，辽宁沈阳１１０００６）　摘要：目的：建立高效液相色谱法测定槲树叶中槲皮素含量的方法。方法：ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ．　色谱柱；流动相：　甲醇一水（５５：４５）溶液；检测波长：３６５ｎｍ。结果：槲皮素的平均回收率为９７．９％，ＲＳＤ（ｎ＝６）为１．４６％。结论：方　法简便、准确，可作为槲树叶的质量控制方法。　关键词：槲树叶；槲皮素；高效液相色谱法　中图分类号：０６５７．７　文献标识码：Ａ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　ｏａｋ　ｌｅａｖｅｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ＺＨＡＯ　Ｈｕａｎ－ｊｕｎ　，ＺＨＡＯ　Ｌｉｎ’，ＳＵＮ　Ｃｈａｎｇ－ｊｉｎｇ。，ＬＩＵ　Ｗｅｉ　（１．Ｌｉａｏｎｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄａｌｉａｎ，１１６６００，Ｃｈｉｎａ；　２．Ｓａｌｅｓ　ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｄａｊｕｎ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，Ｓｈｅｎｙａｎｇｌ　１０００６，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ａ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｏａｋ　ｌｅａｖｅｓ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂ—　ｌｉｓｈｅｄ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃ　１　８　ｃｏｌｕｍｎ；ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ：ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ（５５：４５）ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：　３６５ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｗａｓ　９７．９％．ＲＳＤ（ｎ＝６）ｗａｓ　１．４６％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｏａｋ　ｌｅａｖｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｏａｋ　ｌｅａｖｅｓ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　￣（Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｄｅｎｔａｔａＴｈｕｎｂ．）为壳斗科（Ｆａｇａｃｅａｅ）　栎属（Ｑｕｅｒｃｕｓ　Ｌ．）植物，作为民间中草药被广泛应　用，并且有着悠久的药用历史。据记载其主要用于　治疗痢疾、恶疮等症。有清热解毒、安神利尿之功　效，对血痢、血痔、淋病、尿赤有较好的医疗效果。　《本草纲目》上记载“槲叶具有活血，利小便，除面上　齄赤，孩子淋疾”。《现代实用中药》、《中药大辞典》，　均有关于槲叶治疗淋症的记载。　槲皮素（ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）作为槲树叶的主要有效成分　之一，本文用高效液相色谱法对槲树叶中的槲皮素　进行定量研究，为槲树叶的质量控制提供了实验方　法。　１实验部分　１．１仪器与试剂、原料药材　Ａｇｉｌｅｎｔ液相色谱仪；Ａｇｉｌｅｎｔ检测器；安捷伦色　谱工作站；ＫＱ３２００超声波清洗器（江苏昆山）。　槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所）；甲　收稿日期：２０１１－０４—１２　作者简介：赵焕君（１９７１一），女，副主任中药师，毕业于辽宁中医药大　学，现从事药品质量分析工作。　醇（Ｃ．Ｐ）；其他所用试剂均为分析纯；槲树叶（丹东东　港，经鉴定为槲树（Ｑｕｅｒｃｕｓ　ｄｅｎｔａｔａ　Ｔｈｕｎｂ．）的叶）。　１．２实验方法　１．２．１对照品溶液制备精密称取槲皮素对照品，　加甲醇溶解，制成每ｌｍＬ含０．００５５６ｍｇ槲皮素的溶　液，作为对照品溶液。　１．２．２供试品溶液的制备精密称取干燥槲树叶　粉末２．０ｇ，至具塞三角瓶中，精密加人乙醚２０ｍＬ，　超声提取２０ｒａｉｎ，弃去乙醚液，至药渣无乙醚昧，再　精密加入甲醇２５ｍＬ，称重，超声３０ｍｉｎ，放凉，称重，　用甲醇补足重量，然后用滤纸过滤，再用０．４５　Ｉｌｌ　的滤膜过滤，即得供试品溶液。　１．２．３　测试条件　经紫外扫描，检测波长为　３６５ｎｍ。色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂；流动　相：甲醇一水溶液（５５：４５）；检测波长为３６５ｎｍ。　２测定结果　２．１线性关系考察　取槲皮素对照品溶液，分别精密吸取３、６、９、　１２、１５　Ｌ，测定色谱峰面积，并以峰面积为纵坐标，　进样量（　ｇ）为横坐标，绘制标准曲线，结果见图１，

高效液相色谱法测定叶下珠中槲皮素的含量

高效液相色谱法（HPLC）是一种常用的分离和定量分析方法，可用于测定槲皮素在叶下珠中的含量。以下是一种可能的测定方法：

1. 样品准备：将适量的叶下珠样品粉碎并通过筛网去除杂质。

2. 提取：将粉碎的样品加入适量的提取剂中，如乙醇或醋酸甲酯，并进行超声处理或搅拌提取一段时间。

3. 过滤：将提取液经过滤纸或微孔膜过滤，以去除悬浮物和杂质。

4. 色谱条件：

- 色谱柱：使用C18反相色谱柱，柱长为150 mm，内径为4.6 mm。

- 流动相：以甲醇和水为流动相，并逐渐调整它们的比例，以优化槲皮素的分离和检测。

- 流速：一般为1 mL/min。

- 检测波长：选择适当的波长进行检测，一般为254 nm。

5. 标准曲线制备：准备一系列不同浓度的槲皮素标准溶液，并注入色谱仪中进行分析。使用标准溶液的峰面积和浓度之间建立标准曲线。

6. 叶下珠样品分析：取一定量的提取液注入色谱仪中进行分析。通过标准曲线可以计算出样品中槲皮素的含量。

需要注意的是，在进行分析之前，可以根据实际情况对方法进行优化和改进，以获得更准确和可靠的结果。

纸层析法鉴定芦丁和槲皮素的实验方程式

纸层析法是一种简单、快速、经济、易于操作的色谱分离技术，广泛应用于化学分析和药物化学等领域。在实际应用中，纸层析法常用于对化合物的分离和纯化，并通过染色、显色等方法进行定性和定量分析。在鉴定芦丁和槲皮素中，可以使用纸层析法进行分离和鉴定。

实验步骤如下：

1.实验物料准备：准备好检测芦丁和槲皮素的纸层析板、标准品芦丁和槲皮素、溶剂毛细管、显色剂等。

2.准备样品溶液：取一定量的待测样品，将其溶解在适量的溶剂中，使浓度适当，以便在纸层析板上均匀涂抹。

3.准备标准溶液：准备芦丁和槲皮素的标准溶液，浓度分别为C1和C2

4.样品处理：将纸层析板上端标出起点线，再标出标准品C1和C2的位置，然后用毛细管在起点上均匀涂抹样品溶液和标准溶液。

5.平行纸层析：将涂抹好样品和标准品的纸层析板，放入干燥的脱水培养器中，在温度适宜的条件下进行平行纸层析分离，待样品跑至标准品C1和C2处时，取出纸层析板进行干燥。

6.显色：将纸层析板放入含有显色剂的容器中，在室温下进行显色反应，待出现斑点时取出。

7.结果分析：观察纸层析板上的斑点形成情况和色谱图，对比标准品的色谱图，根据斑点位置和色谱图形态，可以初步判断出纸层析板上的斑点是否与标准品C1和C2相同或相似。 8.定量分析：根据纸层析板上斑点的形成情况和色谱图，可以根据标准品的浓度、质量和相对迁移率等参数，计算出样品中芦丁和槲皮素的含量。

需要注意的是，纸层析法是一种相对简单的色谱分离方法，但是对于复杂样品的分离和鉴定较为有限。在实际应用中，需要对样品进行预处理、选用合适的纸层析板和显色剂，并进行合理的操作控制和数据分析。同时，纸层析法也可以与其他色谱分离方法如薄层色谱、柱层析等相结合，提高分析的准确性和可靠性。