淮安市猪弓形虫病血清学调查
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畜牧兽医科技信息2019年第02期猪弓形虫病是由龚地弓形虫引起的一种原虫病,其终末宿主是猫,人也会感染此病,因此该病是一种严重的人畜共患病。
当人弓形虫被猫吃掉后,就开始在猫的肠壁细胞内裂殖,最后以卵囊的形式随猫的粪便排出。
如果猪吃掉这些卵囊后,就会引发弓形虫病。
特别是3 ̄5月龄的仔猪,感染该病的可能性较大。
1流行病学1.1感染源感染源是病人、病畜和带虫动物,其肉、组织和血液中都含有弓形虫,且病体的分泌物中如唾液、乳汁、痰、尿液等也都含有弓形虫。
1.2传染源该病的主要传染源是被终宿主猫排出的卵囊所污染的饲料、饮水或食具,卵囊对人和中间宿主都有很强的感染性。
1.3感染途径包括经口感染,即动物之间相互捕食和吃未经煮熟的肉类、损伤的皮肤和黏膜感染、经胚盘感染。
1.4易感动物人、畜禽和野生动物都具有感染性。
在家畜中羊和猪是最易感染,尤其是猪,常发生暴发性流行和大死亡。
1.5流行季节一年四季均可发病,但猪的发病季节一般以夏秋季居多,即每年的5 ̄10月份。
2临床症状该病对仔猪和怀孕母猪都有很大的感染性,尤以仔猪感染性较强。
患病仔猪常突然少食或废食,体温升高、呼吸急促(多呈腹式呼吸)、流清鼻涕、粪便干并外附黏液、眼内出现浆液性或脓性分泌物等。
发病后期,出现腹泻、精神沉郁、后肢麻痹、在耳、鼻端、下肢、下腹等处出现紫红斑或小出血等症状,最后因呼吸极度困难和体温急剧下降而死亡。
3诊断方法3.1直接镜检可取肺、肝、淋巴结做涂片,用姬氏液染色后检查;取患畜的体液、脑脊髓液做涂片染色检查;也可取淋巴结,研碎后加生理盐水过滤,经离心沉淀后,取沉渣做涂片染色镜检。
虽然这些方法操作简便,但有假阴性,必须对阴性猪做进一步诊断。
3.2动物接种取肝、淋巴结研碎后加10倍生理盐水,加双抗后在室温下放置1h。
接种前摇匀,待较大的组织沉淀后,取上清液接种小鼠腹腔,每只接种0.5~1mL。
经1~3周小鼠发病时,可在腹腔中查到虫体。
3.3血清学诊断国内常用有IHA法和ELLSA法。
猪弓形虫病的诊疗报告摘要:对一例病猪进行了流行病学调查和实验室检查,结合血清学和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR)方法进行病例检测,结果表明,该例病猪是由弓形虫(Toxoplasma gondii Nicolle & Manceaux)感染引起。关键词:猪;弓形虫病;聚合酶链式反应;诊断弓形体又叫弓形虫、弓浆虫或毒浆虫(Toxoplasma gondii Nicolle & Manceaux),属于一种单细胞原虫,是引发弓形虫病的病原体。病原体寄生在终末宿主猫科动物体内生长繁殖,形成卵囊并随宿主粪便排出体外,发育成熟而具有感染力。具有感染力的卵囊污染食物和水源,被中间宿主(人或猪等多种动物)食入或饮入后,经淋巴和血液进入组织器官,并侵入有核细胞内,造成组织器官的严重损害和机体免疫力下降,而出现患病体征。据相关统计资料表明,一般猪场猪群感染率在20%以上,有的高达60%,死亡率达60%~80%。弓形虫病一年四季均可发生,但以每年的4~10月多发,任何年龄的猪都可感染,而以10~50 kg的中小猪发病较严重。临床上生产母猪(包括后备母猪)常有发病,但配种公猪很少发生,这可能与抵抗力有关[1-3]。高床饲养的猪群少见发病,而平养的猪群则屡见不鲜,可能与猪只接触粪便的程度有关。河南省信阳市平桥区某商品猪场养猪3 000多头,2010年4~5月期间猪群突然发病,在1个月内陆续死亡5头,20多头病危,另有100多头发病。发病和死亡的猪以40~50 kg的中小猪为主。作者主要就这起猪弓形虫病的流行特点、临床症状、诊断方法以及防治处理等方面做如下报告。1材料与方法1.1材料1.1.1试验动物1头发病死亡的育肥猪;6头活猪,有育肥猪4头、母猪1头和空怀母猪1头,从6头活猪颈静脉随机无菌采集全血,每头约4 mL,得到血液样品。1.1.2检测试剂Taq酶、PCR缓冲液(含Mg2+)、dNTP为大连宝生物公司产品;蛋白酶K为Merck公司产品;弓形虫抗原ELISA检测试剂盒购自武汉科前生物技术有限公司;小白鼠购自信阳职业技术学院。染色液有瑞氏染液、HE染液。1.1.3引物设计根据GenBank中已登录的猪弓形体基因序列(AF146527),利用Primer5.0软件设计一对引物,上游引物P1为5′-CGTGACTCGGGCCCAGCTGCGTCTG-3′;下游引物P2为5′-CGCTGCAGACACAGTGCATCTGGAT-3′。预计PCR扩增产物长度为463bp。1.1.4主要仪器为实验室现有的PCR仪(美国AB公司)、高速冷冻离心机(Sigma 公司)、尼康E200显微镜、尼康4500数码照相机。1.2兽医检查1.2.1涂片对发病死亡的育肥猪进行剖检,剖检时,取病死猪的血液、心包液和腹腔液进行涂片,用瑞氏染色法染色后光学显微镜检查,进行流行病学调查。1.2.2病理学检查按常规方法对发病死亡的育肥猪进行尸体剖检,记录眼观病变情况。1.2.3血清学检测将采集到的4头育肥猪的全血在高速冷冻离心机上5 000 r/min离心8 min,分离血清。采用猪弓形虫酶联免疫吸附试验(ELISA)进行检测。1.3PCR检测剖解时无菌分别取一块肺脏、肝脏、淋巴结以及脾脏组织,放入无菌塑料袋中,于-70℃环境备用。1.3.1DNA的提取取病料肺、肝、淋巴结组织研碎,后加10倍生理盐水接种小白鼠腹腔,每只接种0.5 mL。待小白鼠出现被毛粗乱、呼吸促迫症状,从其腹水收取弓形虫速殖子,计数后加入SDS裂解液和蛋白酶K,混匀后置于37℃消化过夜。消化好的虫体悬浮液再加入5 mol/L NaCl溶液和5% CTAB溶液,65℃水浴10 min;苯酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1)溶液抽提2次,用异丙醇沉淀,70%乙醇洗涤;适量的灭菌水溶解,-20℃保存。1.3.2PCR反应PCR反应体系为50 μL,DNA模板添加量为0.5 μg。PCR反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性30 s,53℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;最后72℃延伸10 min。PCR产物经12 g/L琼脂糖凝胶电泳观察结果[4-7]。选取其中一阳性样品的463 bp左右的PCR扩增产物片段,用TaKaRa公司的DNA片段琼脂糖凝胶回收试剂盒回收后,与T-Easy载体(Promega)连接,转化Escherichia coli JM109感受态细胞,筛选阳性重组质粒,送上海生工生物技术服务有限责任公司测序。2结果与分析2.1临床症状患猪突然减食或废食。稽留高热,体温常达41.5~42.0℃或更高,并稽留不退,一般持续5~10 d或更长。咳嗽,有明显的呼吸症状,常呈腹式呼吸。腹泻,鼻、耳、四肢及股内外侧、胸腹部、臀背部等处皮肤出现紫红色出血点或由出血点融合而成的瘀血斑块,甚至有的遍及全身而遍体紫红(图1)。2.2病理变化体表瘀血发绀或有坏死结痂斑块;胸腔、腹腔出现积液,色浅黄;肺、脾、肝等实质器官具有特征性病变,肺膨大(水肿),被膜紧张有光泽,表面可见大小不等的紫红色坏死病灶,小叶间质明显增宽(图2);脾肿大,表面有灰白色坏死点,脾髓如泥;肝肿胀浑浊,表面和切面可见灰白色坏死病灶(图3)。全身淋巴结显著肿大,特别是颌下、肺门、肝门等处淋巴结比正常的大2~3倍。胃黏膜潮红,肠道明显充血,肠黏膜可见多量坏死病灶,肠系膜淋巴呈绳索样肿大(图4)。2.3涂片观察血液涂片用瑞氏液染色,镜检发现月牙形滋养体,核为红色,细胞质为蓝色(图5)。2.4血清学诊断试验设猪弓形虫血清抗体大于0.494判为阳性,小于0.422判为阴性,在0.422~0.494之间为可疑。得到的猪弓形虫血清抗体ELISA检测结果分别是育肥猪1号0.936、育肥猪2号0.867、育肥猪3号0.927、育肥猪4号0.831、母猪0.922、空怀母猪0.910,由此可见,所检测样品的抗体均为阳性。2.5PCR结果剖检猪所采样品出现了与预期大小一致的目的条带,且为阳性(图6)。2.6PCR产物的克隆和序列测定测序分析结果表明,克隆的基因片段长度为463 bp,核苷酸序列经测定提交后证实,所克隆的基因为猪弓形虫的部分基因,其核苷酸序列为:TGACTCGGGCCCAGCTGCGTCTGTCGGGATGAGACCGCGGAGCCGAAGTGCGTTTTCTTTTTTTGACTTTTTTTTGTTTTTTCACAGGCAAGCTCGCCTGTGCTTGGAGCCACAGAAGGGACAGAAGTCGAAGGGGACTACAGACGCGATGCCGCTCCTCCAGCCGTCTTGGAGGAGAGATATCAGGACTGTAGATGAAGGCGAGGGTGAGGATGAGGGGGTGGCGTGGTTGGGAAGCGACGAGAGTCGGAGAGGGAGAAGATGTTTCCGGCTTGGCTGCTTTTCCTGGAGGGTGGAAAAAGAGACACCGGAATGCGATCCAGACGAGACGACGCTTTCCTCGTGGTGATGGCGGAGAGAATTGAAGAGTGGAGAAGAGGGCGAGGGAGACAGAGTCGGAGGCTTGGACGAAGGGAGGAGGAGGGGTAGGAGAGGAATCCAGATGCACTGTGTCTGCAG。3讨论3.1诊断根据PCR和血清学检测结果为阳性,可以判定该次疫情是由弓形虫感染引起的。依据其临床症状和病理变化特点,该起猪弓形虫病为急性感染。3.2猪弓形虫病与猪瘟在临床上的鉴别诊断猪弓形虫病在临床表现上,有些症状与猪瘟颇为相似,这常常导致误诊。其实,猪弓形虫病与猪瘟在临床上的表现虽然相似,但却不尽相同,只要仔细观察,是不难分辨的,总结我们的临床经验,可从下面几点进行鉴别。3.2.1体表出血(瘀血)斑点不同猪瘟的体表皮肤出血仅发生于耳尖、四肢内侧、腹下等皮薄处,而猪弓形虫病的出血点或瘀血斑块则全身到处可见,特别是在胸背部、荐臀部等皮肤厚实的部位出现,这是猪瘟患猪所少见的。猪瘟出血是局限性、散在性的出血点(如火鸡蛋或麻雀蛋样),即使融合也不会形成大斑块,程度较轻微;而猪弓形虫病患猪的出血则呈广泛性、弥漫性的瘀血斑块,甚至有的瘀血斑块互相融合遍及全身。猪瘟体表出血斑点呈紫黑色或蓝黑色,颜色较深;猪弓形虫病患猪体表瘀血斑块多呈紫红色,颜色相对较浅。3.2.2排泄物不同猪瘟便秘阶段排出的粒状干硬粪团呈灰黑或灰褐色,后期拉稀呈黄褐色水样腹泻,尿液浅黄色;而猪弓形虫病患猪排的粒状干硬粪团呈暗红色,后期拉稀呈酱油(煤焦油)样半流体黏稠粪便。尿液呈鲜橘黄色。3.2.3体温不同猪瘟病猪虽体温升高,但高热稽留时间相对较短,常于高热后不久就下降到40.5℃,而持续低烧不退;猪弓形虫病患猪的高热稽留时间较长,41.5℃以上高热可稽留7~10 d或更长时间。3.2.4病理变化不同典型临床症状的猪瘟虽已不多见,但解剖病变仍具有特征性,即以全身性出血为主,如皮下组织和实质器官表面的针头状散在性出血,以及全身淋巴结肿大出血,淋巴结切面红白相间(大理石样);而弓形虫病猪内脏器官则以出现大量的坏死病灶为特点,虽然全身淋巴结肿大,但却没有周边出血和切面红(黑)白相间的病理变化。3.2.5发病季节不同两者虽一年四季均可发生,但猪瘟多发生于寒冷季节(深秋、冬季和初春);弓形虫病病原体(卵囊)需要一定的温度和湿度条件才能发育成熟而具备感染力,所以多在高温高湿季节(4~10月)出现。3.3预防措施猪弓形虫病一旦在猪场发生,病原很难清除,将会在场内经久不息,必须采取综合措施,全面防范,否则后患无穷。猫是弓形虫的终末宿主,是传播本病的罪魁祸首,猪场内应禁止养猫和防止野猫进入(毒饵诱杀或人工捕杀);定期灭鼠,加强饲料及原料的保管贮存,避免猫鼠进入饲料仓库,禁止使用被猫、鼠粪尿污染的饲料喂猪;定期全场消毒,清除粪污,减少环境中的病原数量和传播机会;定期在饲料中添加磺胺类药物,新出现病例的猪场或曾发生过猪弓形虫病的猪场,添加药物混饲进行群体预防尤为必要。应于发现确诊病例之后或于每年4月气温回升之时实行全场加药,实施群体预防;在添加磺胺类药物时,应按常规比例添加磺胺增效剂;为减少磺胺类药物对猪体肾脏的毒害及副作用,还应同时添加小苏打[8]。3.4治疗猪弓形虫病病原对磺胺类药物敏感,早期和足够疗程治疗,疗效相当确切,应在发现病例后尽快做出确诊并立即用药,以阻止病原体在病猪体内的繁殖和减少对机体的危害。常用的药物是磺胺六甲(磺胺间甲氧嘧啶)、磺胺五甲(磺胺对甲氧嘧啶)和增效磺胺嘧啶钠注射液(可按75 mL/kg肌注,首剂加倍),这些药物每天2次,连用2 d后,再以同样剂量每天用药1次,继续连用3~5 d[8],一般都会康复。参考文献:[1] 林曦. 家畜病理学[M]. 第三版. 北京:中国农业出版社,1997. 326-329.[2] 殷震,刘景华. 动物病毒学[M]. 第二版. 北京: 科学出版社,1997.[3] 蒋金书. 动物原虫病学[M]. 北京: 中国农业大学出版社,2000.258-272.[4] 单连玉,杨秀珍,杨树森. PCR技术诊断弓形虫病的研究进展[J]. 国外医学——寄生虫病分册,2002,29(2):58-65.[5] 甘绍伯,佟玉品,尹清源. 聚合酶链式反应检测弓形虫的实验研究[J]. 中国人兽共患病杂志,1999,15(2):27-31.[6] 单连玉,杨秀珍,刘佩梅. PCR技术检测RH 株弓形虫组织内感染的实验研究[J]. 天津医科大学学报,2002,8(4):416-419.[7] 崔平,刘红彬, 方素芳, 等. PCR检测猪弓形虫病方法的建立[J]. 中国动物检疫, 2009,26(5):62-63.[8] 朱芬花. 中西医结合治疗猪弓形体病[J]. 中兽医医药杂志,2010,29(2):32.。
猪弓形虫病的诊断和治疗摘要:云南墨江某规模猪场综合效益近年来持续下降,母猪具有明显的繁殖障碍,仔猪保育阶段死亡率和淘汰率较高,疾病混合感染情况相对严重,采用多种药物进行治疗,均未获得理想的治疗效果。
对该猪场进行进一步的流行病学调查、剖检、病理检查,采集不同猪体血清使用酶联免疫吸附测定法检测,确诊为猪弓形虫病,采取有效的防治措施,效果确切。
关键词:猪;弓形虫病;诊断;治疗云南墨江某规模猪场近年来生产能力明显下降,经济效益不理想,疫病发生风险较大,养殖户采用诸多抗菌素治疗,整体效果不理想,疾病复发问题严重。
2022年动物疫病防控中心前往该养殖场进行全面调查,结合流行病学调查、症状体征分析、剖检、实验室检验等确诊为弓形虫病。
根据感染情况为养殖户制定了科学、可行的防治方案,取得了良好效果。
1.症状表现病猪主要为保育猪、种猪,体重在10-50kg之间,其中保育舍中处于关键发育阶段的仔猪发病率较高。
具体表现为急性经过,食欲明显下降,2-3天后病猪被毛粗乱,不具有光泽,精神不振,不喜动,离群独居,每日多数时间处于伏卧状态。
进一步观察病猪的症状体征,可见鼻盘干燥,体温明显升高,在40℃左右,稽留一周左右恢复至正常体温,濒死期处于低体温状态,且病猪嗜睡严重。
呼吸明显加快,表现为腹式呼吸或犬坐式呼吸,伴有一定的咳嗽症状。
打喷嚏频次较高,流清涕,病情发展至中后期时观察鼻孔可发现分泌物和饲料粉末。
眼眶有异物,眼角有眼屎,表现为浆液性、脓液性或血样。
粪便表现为颗粒状,外部附着黏液;部分病猪拉稀严重,少数有呕吐症状;尿为橘黄色或褐色;部分病猪的病程较长,伴有慢性消耗性症状。
部分病猪伴有神经症状,主要表现为肢体麻痹、行走失稳,或者突然倒地,嘶叫,有角弓反张症状的表现。
对病猪的耳尖、鼻端、下腹、股内侧等皮肤部位进行观察,可见点状出血或紫红色斑块,耳内整洁度较差,部分病猪耳尖存在干性坏死,耳壳上生成痂皮,颜色为黑色。
随着病情的发展,患病猪明显消瘦,伴有一定的贫血症状,眼结膜苍白,治疗时注射针眼部血凝情况较差,出血不止。
国畜禽业中种2019.04对猪弓形虫病的调查与诊疗措施何安强(四川省江油市方水畜牧水产站621705)摘要:猪弓形虫属于人畜共患病,死亡率与发病率较高,不易被治愈,严重危害养殖业的经济与社会效益,甚至还会影响人类身体健康。
对此,相关工作人员调查了感染猪弓形虫的部分猪场发病情况,介绍其诊疗措施。
关键词:猪弓形虫病;调查;诊疗作者简介:何安强(1974.3-),男,四川省江油市人,大专,助理兽医师,研究方向:动物检疫和防疫。
1材料与方法为了解感染猪弓形虫的部分猪场发病情况,共调查了5个猪场,首先采集每个猪场猪弓形虫病的发病与死亡头数,之后对死亡率与发病率进行有效统计和分析。
2结果5个猪场1400头猪,发现病猪为572头,死亡病猪为287头,发病率为40.9%,死亡率为20.6%。
频繁发病为3月龄的仔猪,6月龄以上的仔猪很少发病,即便发病症状也较轻,不存在死亡情况。
3小结与讨论调查结果表明,猪弓形虫病可以严重危害当地养殖产业,属于传染性较强的疾病,养殖人员应及时针对疫病的发病情况进行诊断,并采用综合防治措施。
3.1诊断本病发生无特异性的临床症状,养殖人员应根据血清学检查、病理剖检及病原等进行确诊。
首先是病理变化,猪全身可见黏膜,且腹下、四肢内及耳根处皮肤呈现出紫红色斑块,全身淋巴呈高度充血问题,腹腔与胸腔内存在大量积液。
肺脏有光泽,切面流出泡沫样的红黄色液体,并出现白色坏死灶与出血点。
同时,病猪脾脏、肾脏及肝脏等出现黄色坏死灶,且大小不一,心脏右心室存在明显扩张,质地变软。
除此之外,病猪肠黏膜有出血点,且胃底腺黏膜呈潮红色。
其次是病原检查,一是直接镜检,通过染色病猪血液、肝脏、脾脏等抹片,检查是否存在弓形虫。
二是进行动物试验,将病猪肾脏、肝脏等器官组织制成乳剂注射于小白鼠腹腔。
小白鼠发病或死亡后,注射抽取腹水,利用高倍镜检查压片,观察是否存在裂体。
最后是血清学检查,在正常与免疫后的血清中培养游离的弓形虫,1~2h 后取出加碱性美蓝。
2019年第3期 吉林畜牧兽医27·养猪专栏·YangZhu ZhuanLan猪弓形虫病的诊疗措施赵明学四川省南充市南部县河坝镇畜牧兽医站,四川南部 637330摘 要:弓形体病亦称作弓形虫病或弓浆虫病, 猪弓形虫病是一种感染率极高的病症,是由弓形体感染动物和人而引起的一种人畜共患病。
这种病的寄宿主种类很多,导致疫情一旦爆发很快就传染全群。
该病的临床特征主要是高热、呼吸及神经系统症状、妊娠母猪流产、死胎、胎儿畸形。
猪弓形虫病已经成为危害养猪生产中较严重的传染病,对养猪业的健康发展构成严重威胁。
笔者简要阐述了本病的病原、流行特点、临床症状、剖检病变、诊断,并提出了防治方法, 必须及早做出诊断,采取综合性防治措施,以供养殖户参阅。
关键词:猪;弓形虫病;诊疗;措施弓形虫病是一种世界性分布的人、畜共患的血液原虫病, 通常在人和牲畜间均可传染,有时感染率很高。
已经成为危害养猪生产中较严重的传染病,对养猪业的健康发展构成严重威胁,同时对饲养管理人员也带来安全隐患,需要尽早防治。
1 临床症状1.1 当猪弓形虫病急性发作时,其症状与猪瘟基本相同。
整个身体颤抖,在感染之后的3~7 h,体表温度升高,基本维持在40.5~42 ℃。
1.2 鼻镜干燥,出现浆液性鼻涕或者脓性鼻涕等,呼吸比较困难,食欲不振甚至绝食等。
1.3 患病的猪整个身体的皮肤均出现血斑,并且发生变化,成为蓝紫色,弥漫性特征显著,头部、四肢与下腹等部位淤血现象严重。
1.4 猪患病初期,便秘,排泄物表面有黏液,进入患病后期,粪便呈现水样或者脓性等。
1.5 猪身体表面出现淋巴结,腹股沟淋巴结尤为严重,肿大明显,在下肢与耳部出现血斑甚至大面积发绀。
2 诊断2.1 在高热期间,所应用的抗生素和退热药没有效果,需要将其与临床症状作为重要依据,进行初步诊断。
2.2 直接镜检,采取多个部位抹片,主要包括淋巴结、脾脏与血液等,在染色之后对其进行镜检,判断是否存在弓形体。