固相萃取-反相高效液相色谱法测定全血中环孢素浓度

免疫抑制药的药物浓度检测原理及方法

目前常用的免疫抑制药包括环孢素A和他克莫司等，具有免疫抑制作用，广泛用于器官移植后排斥反应和某些自身免疫性疾病的治疗。由于该类药物有效浓度和中毒浓度接近，且生物利用度和药动学的个体差异大，药物的吸收和代谢速率在不同的疾病状态、器官移植类型及年龄上存在很大个体差异。因此，应监测免疫抑制药物血药浓度，以便及时调整给药剂量，保证用药安全和有效。

一、环孢素A

高效液相色谱法测定环孢素A血药浓度如下：

1.原理

全血破碎红细胞后用乙醚将环孢素A（cyclosporin A）提出，蒸干提取液，用流动相及正己烷重溶解后，进行高效液相色谱（HPLC）分析测定。

2.试剂与仪器

（1）仪器：

Hp1090M高效液相色谱仪。

（2）试剂：

标准品环孢素A，内标环孢素D，乙醚，乙腈，甲醇，异丙醇，氟化钠及正己烷等。环孢素A标准贮存液（1mg/ml）的配制：称取环孢素A 0.1g溶于100ml甲醇中。内标贮存液（1mg/ml）配制：取环孢素D 0.1g溶于100ml甲醇。内标应用液用甲醇稀释内标贮存液为10μg/ml。

（3）色谱条件：

分析柱Spherisorb C18 4.6mm×200mm （7μm）不锈钢层析柱，流动相：乙腈∶水∶甲醇∶异丙醇按57∶18∶25∶1.5的比例配成。进样量20μl，柱温65℃，流速1.4ml/min，检测波长为208nm。

3.操作

取全血2ml加入16μl环孢素D内标液（10μg/ ml）及约1g氟化钠，漩涡混合30秒后加入乙醚5ml，振荡2.5分钟，离心（4000r/min），移取有机层4ml于另一试管，50℃空气流中吹干。残渣中加入流动相150μl及正己烷400μl重溶解，取20μl进样。环孢素A与环孢素D保留时间分别约为4.6分钟及5.5分钟。

4.计算

以标准管环孢素A和环孢素D（内标）面积比及相应环孢素A浓度，建立回归方程。根据待测标本的面积比，用上述方程求出标本中环孢素A浓度。

反相高效液相色谱法测定环孢霉素A全血浓度

秦　伟　颜　梅　印晓星　姚　兵　谷淑玲

(药理学教研室)

摘要　目的　研究建立以反相高效液相色谱法测定环孢霉素A全血浓度的方法。方法　建立简

便易行的血样提取方法,采用C18柱,乙晴和水为流动相,分离药物,紫外检测器测定浓度。结果　线性

范围为75～1200μg/L,提取回收率和方法回收率分别为(70.4±1.5)%和(99.7±0.6)%,日内和日间

变异系数分别为(1.3±0.4)%和(4.1±0.3)%,无其它常用药物的干扰。结论　本方法操作简便,可用

于临床血药浓度的监测。

关键词　环孢霉素A　色谱法,高效液相　治疗药物监测

中图法分类号　R927.1

环孢霉素A(cyclsporineA,CsA)是一种

免疫抑制药物,广泛用于各种器官移植,对预

防移植器官的排斥反应十分有效。由于CsA

体内过程个体差异大,其相对生物利用度在

7.6%～47.6%范围内波动[1],而CsA的有效

治疗浓度范围较窄,剂量过低出现排斥现象,

剂量过高则出现肾毒性,且临床症状很相

似[2],单凭经验很难区别,这就给临床用药带

来很大困难。因此,CsA血药浓度监测对临床

安全有效地用药至关重要。本文运用反相高

效液相色谱法(HPLC),摸索CsA全血浓度的

测定方法,为临床合理用药提供依据。

1　材料和方法

1.1　仪器与试剂　VarianSY-5000液相色

谱仪,VarianUV-100可变波长紫外检测器,

SP-4270积分记录仪,恒温水浴箱,离心机。

环孢霉素A标准品由香港SandozPharmaceu2

ticalLtd提供,乙晴为色谱纯,乙醚、正已烷、

盐酸、氢氧化钠均为分析纯。

1.2　色谱条件　色谱柱为C18柱、规格4.6

mm×280mm(大连化学物理研究所),流动相

为乙晴:水(86:14),检测波长210nm,流速1.

0ml/min,样温60℃。

1.3　血样处理　在2.0ml血样中加入25mmol/LNaOH溶液2ml,振荡摇匀破坏血

高效液相色谱法快速同时检测全血中两种免疫抑制剂

黄永鹏;唐慧;孟祥燕;钟辉;宋云扬;陈博;邹志云

【期刊名称】《色谱》

【年(卷),期】2023(41)2

【摘 要】环孢素A和西罗莫司是许多器官移植手术中广泛使用的免疫抑制剂,且一起使用时会产生协同效应,但这两种免疫抑制剂的治疗窗口都非常窄,仅在特定的血药浓度范围内有预期的治疗效果。因此,快速同时检测全血中这两种免疫抑制剂的浓度,可为患者器官移植手术后的给药方案提供有价值的信息。该工作首先考察了环孢素A和西罗莫司在生物液相色谱柱和传统液相色谱柱上的色谱行为,然后基于生物液相色谱柱,建立了可快速分离和检测全血中环孢素A和西罗莫司的高效液相色谱分析方法。全血样品经样品前处理后进样分析,采用ZORBAX 300SB C8柱(250 mm×4.6 mm,5.0μm)进行分离,以乙腈-水(70∶30,v/v)为流动相进行等度洗脱,柱温为60℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为205 nm和278 nm,进样量为20μL。结果表明,环孢素A和西罗莫司在6 min内可实现较好的分离;环孢素A和西罗莫司在各自的浓度范围内具有良好的线性关系(r>0.997),检出限(S/N=3)分别为10 ng/mL和1 ng/mL,定量限(S/N=10)分别为30 ng/mL和2 ng/mL,3个水平的平均加标回收率分别为83.5%~89.7%和95.8%~97.8%,相对标准偏差(RSD)分别为3.2%~9.0%和3.4%~6.7%(n=5)。该方法操作简便,流动相简单,分析时间短,线性范围宽,灵敏度高,可用于全血中环孢素A和西罗莫司的含量检测。

【总页数】8页(P152-159)

【作 者】黄永鹏;唐慧;孟祥燕;钟辉;宋云扬;陈博;邹志云 【作者单位】国民核生化灾害防护国家重点实验室

【正文语种】中 文

【中图分类】O658

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高效液相色谱法与荧光偏振免疫法测定全血环孢菌素A浓度比较

赵滨红;郭丽萍

【期刊名称】《中南药学》

【年(卷),期】2007(5)3

【摘 要】目的探讨两种方法测定环孢菌素A浓度结果的可靠性。方法分别用高效液相法和荧光偏振免疫法测定全血中环孢菌素A浓度,比较2种方法测定结果的差异。结果2种方法的测定结果有显著性差异,FPIA法所测结果高于HPLC法。结论对环孢菌素A进行治疗药物监测时应考虑测定方法的影响。

【总页数】4页(P224-227)

【关键词】环孢菌素A;高效液相色谱法;荧光偏振免疫分析法

【作 者】赵滨红;郭丽萍

【作者单位】郑州市中心医院药剂科

【正文语种】中 文

【中图分类】R969.1

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