超高效液相色谱法测定环孢素A的血药浓度

安徽医药Ａｎｈｕｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　２００９　Ｊａｎ；１３（１）　・８３・　

环孢素Ａ血药浓度监测方法的研究进展　

沈景芬　

（安徽省六安市药品检验所，安徽六安２３７０００）　

摘要：本文通过对近年来国内外报道的ＣｓＡ的测定方法进行　

归纳、分析、总结，介绍全血中环孢素Ａ（ＣｓＡ）的血药浓度监　

测方法。为临床开展ＣｓＡ的血药浓度监测和科研工作提供　

参考。目前全血中环孢素Ａ浓度的监测方法主要包括高效　

液相色谱法（ＨＰＬＣ）、荧光偏振免疫法（ＦＰＩＡ）及放射免疫法　

等，其中以ＨＰＬＣ和ＦＰＩＡ法应用最为广泛。各种监测反方法　

各有优缺点，监测值对指导临床鉴别器官移植手术后排异与　

中毒反应以及各种个体化给药具有重要意义，实际工作中应　

根据测定要求，结合试验仪器设备情况，选择合适的分析方　

法。　

关键词：环孢素Ａ；血药浓度；监测方法研究　

环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ　Ａ　ＣｓＡ）自２０世纪７０年代用于临　

床以来，使器官移植的成功率大大提高　Ｊ。ＣｓＡ代谢复杂，血　

药浓度受多种因素如生理病理因素、剂量、时间、移植器官种　

类、剂型、药物相互作用等的影响，生物利用度和药动学参数　

个体差异较大（１０％～９０％），治疗范围窄，安全范围小，疗效　

与毒性相关紧密　。临床应用ＣｓＡ时，需要定期检测血药浓　

度，以此调整给药剂量，达到最佳治疗效果　。本文对ＣｓＡ　

血药浓度监测方法作一综述如下。　

１高效液相色谱法　

监测的样品有全血、血浆、血清和血细胞。ＣｓＡ代谢物生　

理活性还不清楚，代谢方式因不同患者、不同疾病和不同治疗　

手段而有差异。而高效液相色谱法的测定值与药理效应之间　

具有更好地量效关系　。　

１．１色谱柱的选择　

１．１．１　Ｃ　柱　经常使用的规格有（５　Ｉ．ｔｍ，１５　ｅｍ×４．６　ｍｍ；５　Ｉｘｍ，２５　ｅｍ×４．６　ｍｍ；７　ｔｘｍ，２０　ｃｍ×４．６　ｍｍ），分析柱　

免疫抑制药的药物浓度检测原理及方法

目前常用的免疫抑制药包括环孢素A和他克莫司等，具有免疫抑制作用，广泛用于器官移植后排斥反应和某些自身免疫性疾病的治疗。由于该类药物有效浓度和中毒浓度接近，且生物利用度和药动学的个体差异大，药物的吸收和代谢速率在不同的疾病状态、器官移植类型及年龄上存在很大个体差异。因此，应监测免疫抑制药物血药浓度，以便及时调整给药剂量，保证用药安全和有效。

一、环孢素A

高效液相色谱法测定环孢素A血药浓度如下：

1.原理

全血破碎红细胞后用乙醚将环孢素A（cyclosporin A）提出，蒸干提取液，用流动相及正己烷重溶解后，进行高效液相色谱（HPLC）分析测定。

2.试剂与仪器

（1）仪器：

Hp1090M高效液相色谱仪。

（2）试剂：

标准品环孢素A，内标环孢素D，乙醚，乙腈，甲醇，异丙醇，氟化钠及正己烷等。环孢素A标准贮存液（1mg/ml）的配制：称取环孢素A 0.1g溶于100ml甲醇中。内标贮存液（1mg/ml）配制：取环孢素D 0.1g溶于100ml甲醇。内标应用液用甲醇稀释内标贮存液为10μg/ml。

（3）色谱条件：

分析柱Spherisorb C18 4.6mm×200mm （7μm）不锈钢层析柱，流动相：乙腈∶水∶甲醇∶异丙醇按57∶18∶25∶1.5的比例配成。进样量20μl，柱温65℃，流速1.4ml/min，检测波长为208nm。

3.操作

取全血2ml加入16μl环孢素D内标液（10μg/ ml）及约1g氟化钠，漩涡混合30秒后加入乙醚5ml，振荡2.5分钟，离心（4000r/min），移取有机层4ml于另一试管，50℃空气流中吹干。残渣中加入流动相150μl及正己烷400μl重溶解，取20μl进样。环孢素A与环孢素D保留时间分别约为4.6分钟及5.5分钟。

4.计算

以标准管环孢素A和环孢素D（内标）面积比及相应环孢素A浓度，建立回归方程。根据待测标本的面积比，用上述方程求出标本中环孢素A浓度。

５４　Ｉ临床研究　中国医药指南２０１０年１０月第８卷第２８期Ｇｕｉｄｅ　ｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１０，Ｖｏ１．８，Ｎｏ．２８　

肾移植术后患者环孢素Ａ血药浓度监测结果分析　

郭江宁　汤鸿云　宁博　张武杰　

【摘要】目的分析肾移植（ＲＴ）术后惠者环孢素Ａ（ＣｓＡ）血药浓度监测情况，指导临床合理用药。方法采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）　

对２００７年８月至２００９年１２月来中国人民解放军第２０１医院的７２例肾移植术后患者３５７例次ＣｓＡ血药浓度进行监测，并对其ＣｓＡ谷　浓度（ｃ０）、术后时间、性别进行回顾性分析。结果在７２例肾移植术后患者３５７例次ＣｓＡ血药浓度监测中，８８．８％达到有效血药浓度　

（１Ｏ０￣４Ｏ０　ｇ／Ｌ），６．４％低于有效血药浓度（＜１ｏ０　ｇ／Ｌ），４．８％高于有效血药浓度（＞４００￣ｔｇ／Ｌ）。ＣｓＡ血药浓度和服药剂量随术后时间的　

延长呈现下降趋势，且个体差异较大。术后２４个月，男女两组血药浓度具有显著性差异　＜０．０５）。结论由于环孢素Ａ不良反应大，　

治疗窗范围窄，因此应定期监测ＣｓＡ血药浓度并及时调整给药方案，对于提高肾移植患者的长期存活率，降低其毒性和不良反应具有重　要的临床意义。　【关键词】肾移植；环孢素Ａ；血药浓度监测　

中图分类号：Ｒ６１７　文献标识码：Ｂ　文章编号：１６７１－８１９４（２０１０）２８－００５４－０２　

环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ　Ａ，ＣｓＡ）是一种强效、高选择性的免疫　

抑制剂，广泛用于器官移植术后抗排异反应和其他自身免疫性疾病的　治疗。但由于ＣｓＡ的生物利用度和药代动力学的个体差异较大，治疗　

窗范围窄，且其肾毒性反应与肾移植术后发生的排异反应难以区别，　

因此临床上必须定期监测ＣｓＡ的血药浓度，以调整给药剂量。本文就　

２００７年８月至２００９年：２ｆｌ长期来中国人民解放军第２０１医院进行ＣｓＡ血　

药浓度监测的７２例肾移植（ｒｅｎａｌ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，ＲＴ）术后患者，３５７例次　ＣｓＡ全血谷浓度的监测结果进行回顾性分析，现将结果报道如下。　１材料与方法　

・１３８０・　２００７年４月第１４卷第１１期（旬刊）ＪＰＭＴ，Ａｐｒｉｌ．２００７．Ｖｏ１．１４．Ｎｏ．１１（Ｉｓｓｕｅｄ　Ｅｖｅｒｙ　Ｔｅｎ　

以相邻椎体为主。但也有病变跳跃性累及非相邻椎体。本组　

发现３例。受累椎体的信号改变是多样性的，大多在Ｔ　ＷＩ　上呈均匀的低信号，多系骨髓水肿或髓内均匀无结构之干酪　

脓肿所致，少数呈混杂低信号。在Ｔ２ＷＩ上多呈混杂高信号，　

部分呈均匀高信号，曲型者形态不规则，边界清楚。椎体终板　

低信号带破坏，中断，严重者终板破坏、消失。破坏严重者则　椎体压缩骨折、崩解、碎裂。病变椎体增强后多呈轻度不均匀　

强化。　・　椎间盘改变是脊柱结核常见的诊断特征。椎间盘改变包　

括椎间盘破坏、椎间隙变窄或消失。受累椎间盘在Ｔ　ＷＩ上　多呈低信号，在Ｔ：ｗＩ上常为不均匀高信号。本组３例椎间　

盘形态及信号正常，可能系较早期改变所至。Ｐｅｒｔｕｉｓｅｔ等　Ｊ　

认为椎间盘正常者病变时间短，更多见于年轻人。椎间隙改　变原因一方面可能由于椎体终板破坏，椎间盘水分代谢停止，　

致间盘脱水退变，继而间隙狭窄；另一方面可能是晚期脓肿侵　

蚀椎间盘，致间隙狭窄甚至消失。　椎旁脓肿几乎可见于绝大部分脊柱结核患者。ＭＲＩ上可　显示脓肿范围、程度，更重要的是可以与肿瘤等引起的软组织　病变相鉴别。脓肿在ｒｒｌｗＩ上多呈低信号，Ｔ：ｗＩ上呈高信号。　

Ｔ　ｗＩ强化后由于脓肿内部为无血液供应的脓液成分，因此脓　肿表面为弱高信号，而脓肿内部为低信号改变。恶性肿瘤引　

起的软组织肿块由于内部血运丰富，Ｔ　ｗＩ强化后呈高信号改　变。因此，Ｔ　ＷＩ强化可用于结核性冷脓肿与肿瘤软组织肿块　

的鉴别诊断。　参考文献：　［１］Ｍｏｏｎ　ＭＳ．Ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｐｉｎｅ［Ｊ］．Ｓｐｉｎｅ，１９９７，２２：１７９１．　１７９７．　［２］　李亮．单椎体结核［Ｊ］．中华骨科杂志，２００１，２１（１０）：６０５－６０８．　［３］Ｈｏｆｍａｎ　ＥＢ，Ｃｒｏｓｉｅｒ　ＪＨ，Ｃｒｅｍｉｎ　ＢＪ．Ｉｍａｇｉｎｇ　ｉｎ　ｃｈｉｌｄｒｅｎ　ｗｉｔｈ　ｓｐｉｎ．　ａｌｔｕｂｅｒｃｕ１．ｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇ，１９９３，７５（２）：２３３－２３９．　［４］Ｄｅｓａｉ　ＳＳ．Ｅａｒｌｙ　ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｓｐｉｎａｌ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｂｙ　ＭＲＩ［Ｊ］．Ｂｏｎｅ　Ｊｏｉｎｔ　Ｓｕｒｇ，１９９４，７６（６）：８６３－８６９．　［５］Ｐｅｒｔｕｉｓｅｔ　Ｅ，Ｂｅａｕｄｒｅｕｉｌ　Ｊ，Ｌｉｏｔｅ　Ｆ，ｅｔ　ａ１．Ｓｐｉｎａｌ　ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ　ｉｎ　ａｄｕｌｔｓ　［Ｊ］．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１９９９，７８：３０９－３０２．　（收稿日期：２００７４１１－２２）