鸭疫里默氏杆菌分离株外膜蛋白(ompA)基因的克隆、表达及其单克隆抗体制备

2型鸭疫里默氏菌42000外膜蛋白的克隆与表达刘文华;苏敬良;王晓雷【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2008(28)4【摘要】利用PCR技术扩增了标准血清2型鸭疫里默氏菌的42000外膜蛋白基因片段(OmpA-2)1045bp,将其克隆到pGM-T-Easy克隆载体和pGEX-4T-1原核表达载体中,分别构建了pGM-OmpA-2和GST-OmpA1-2重组子,并进行了测序和表达。

对表达产物做了SDS-PAGE和Western-blotting检测。

结果表明,扩增获得的外膜蛋白基因序列与Gen-Bank中已发表的鸭疫里默氏菌外膜蛋白序列的同源性为95.4%,氨基酸序列间仅存在点置换,无插入或缺失变异,证明重组子构建正确。

SDS-PAGE和Western-blotting检测表明,获得的融合表达蛋白GST-OmpA1-2的相对分子质量约为65000。

【总页数】5页(P379-382)【关键词】鸭疫里默氏菌;外膜蛋白;克隆;表达【作者】刘文华;苏敬良;王晓雷【作者单位】中国农业大学动物医学院;莱阳农学院动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】Q78;S852.61【相关文献】1.1、2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白分析 [J], 程龙飞;施少华;李文杨;傅光华;彭春香;黄瑜2.鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A克隆表达及纯化 [J], 李富祥;王传禹;胡骑;苗海生;李华春3.鸭疫里默氏菌OmpA与鸭IL-2融合基因的克隆与原核表达 [J], 高云航;刘佳丽;王巍;李秋菊;张福君;马红霞4.16S rRNA基因及外膜蛋白基因分析在鸭疫里默氏菌鉴定中的应用 [J], 刘文华;苏敬良;刘颖;许秀梅;金鑫;吴培福5.鸭C4BPα的克隆、表达及其与鸭疫里默氏菌的互作 [J], 李德龙; 谭理娟; 谷九龙; 王思媛; 刘婷; 陈思怀; 高继业; 唐发书; 李继祥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

抗鸭疫里氏杆菌OMP单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立覃志初;张任娜;帅领;王豪举;吴胜昔【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2009(045)002【摘要】鸭传染性浆膜炎病原为鸭疫里氏杆菌（riemerella anatipestifer，RA）。

目前世界上报道的RA血清型共有21型，且血清型有变化和增多的趋势，RA各血清型间无交叉免疫保护作用。

许多研究表明：RA的抗原类型为荚膜抗原和菌体抗原，血清型不同，荚膜及菌体表面免疫原蛋白也不相同。

苏敬良等通过超速离心法提取了RA其外膜蛋白并研究了其免疫原性，认为44kD的外膜蛋白是其主要抗原。

【总页数】2页(P23-24)【作者】覃志初;张任娜;帅领;王豪举;吴胜昔【作者单位】重庆市牧草与草食家畜重点实验室,重庆,北碚,400716;西南大学动物科技学院,重庆,北碚,400716;重庆市牧草与草食家畜重点实验室,重庆,北碚,400716;西南大学动物科技学院,重庆,北碚,400716;重庆市牧草与草食家畜重点实验室,重庆,北碚,400716;西南大学动物科技学院,重庆,北碚,400716;重庆市牧草与草食家畜重点实验室,重庆,北碚,400716;西南大学动物科技学院,重庆,北碚,400716;重庆工学院生物工程学院,重庆,杨家坪,400050【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立 [J], 赵蕾;林源;李本强;朱建国2.抗卡那霉素单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立 [J], 齐红莉;杨广;刘金兰3.KGF-2单克隆抗体间接ELISA筛选方法的建立 [J], 朱佳男;姚娜;官丽莉;车莹;李校堃4.定量检测猕猴血清中重组人源化抗狂犬病毒单克隆抗体间接ELISA法的建立 [J], 刘晓雷;侯禹男;陈知航;单成启;车津晶;刘运龙;宋艳霞;苗小红;程远国5.1型鸭疫里氏杆菌OmpA蛋白间接ELISA方法的建立 [J], 孙;郭东春;刘家森;姜骞;司昌德;林欢;崔玉东;曲连东因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸭疫里默氏杆菌pfs基因的克隆表达及单克隆抗体制备范国博;韩先干;张宇曦;王少辉;左佳坤;徐达;于圣青【摘要】将鸭疫里默氏杆菌的pfs基因进行原核表达,重组蛋白经纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠.经过3次免疫后,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株.通过间接ELISA法测定腹水效价、Western blot法检测其免疫反应性,并鉴定抗体的亚型.重组蛋白SDS-PAGE 检测结果验证得到26 kDa Pfs蛋白,免疫小鼠后最终获得1株阳性杂交瘤细胞株,命名为2E2E6,为IgG1亚类,间接ELISA法检测腹水效价为1:64 000.Western blot结果表明制备的单克隆抗体具有良好的免疫反应性.本研究成功制备了Pfs的单克隆抗体,为进一步研究Pfs在鸭疫里默氏杆菌中的作用提供了参考.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2015(023)005【总页数】5页(P41-45)【关键词】鸭疫里默氏杆菌;Pfs蛋白;单克隆抗体【作者】范国博;韩先干;张宇曦;王少辉;左佳坤;徐达;于圣青【作者单位】中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;安徽农业大学动物科技学院,合肥230036;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241;扬州大学兽医学院,扬州225000;中国农业科学院上海兽医研究所,上海200241【正文语种】中文【中图分类】S852.612鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎（infectious serositis），是由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）引起的一种急性或慢性接触性传染病，可感染鸭、鹅和火鸡等禽类，主要侵害1～8周龄的雏鸭，特别是2～3周龄雏鸭最易感［1］。

鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的原核表达和单克隆抗体制备侯湾湾;韩先干;王少辉;王小兰;岳嘉蘋;曹守林;范红结;于圣青【摘要】The objective of this study was to generate monoclonal antibodies (MAbs) against GroEL protein of Riemerellaanatipestifer. The GroEL gene was cloned from R. anatipestifer strain WJ4 and the recombinant GroEL was expressed in E. coli. After purification, the recombinant GroEL was used to immunize BALB/c mice 3 times. Spleen cells of immunized mice were fused with murine myeloma SP2/O cells. Specific MAb secreting hybridomas were screened using indirect ELISA and positive hybridomas were cloned 3 times. As a result, two hybridoma cell lines (1G2B6, 1G2F10) stably producing anti-GroEL MAbs were identified and established. The isotype of both MAbs was IgG1. The ELISA titer of ascetic fluids was determined to be 1:102 400. In Western blot, both MAbs reacted with R. anatipestifer serotypes 1, 2 and 10 strains but not with Escherichia coli, Salmonella enterica and Pasteurella multocida strains. Besides, both MAbs were specific for R. anatipestifer serotypes 1, 2 and 10 strains tested. The availability of MAbs specific for GroEL paved a path for further development of diagnostic kit for R.anatipestifer.%本试验旨在研制鸭疫里默氏杆菌GroEL蛋白的单克隆抗体。

鸭疫里默氏杆菌中国分离株的外膜蛋白A基因的克隆与序列分析魏秀丽;孙亚妮;姜世金;孔义波;张兴晓【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2008(017)003【摘要】为了对鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)中国分离株的外膜蛋白A (OmpA)基因的序列进行分析,根据GenBank中已发表的鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer, RA)的外膜蛋白A (OmpA)基因序列,在其高度保守区设计一对特异性引物,应用PCR技术,分别扩增从中国广东、福建和山东等地分离的8株鸭疫里默氏杆菌中国分离株的OmpA基因,克隆测序后与GenBank中已发表的26株鸭疫里默氏杆菌进行序列比较,结果表明:所有菌株的OmpA基因均为由1164个碱基组成的ORF,编码387个氨基酸组成的蛋白质,起始密码子均为ATG,终止密码子均为TAA,其核苷酸序列非常保守,同源性高达88.2%～100%,氨基酸同源性达到88.9%～100%.试验表明,OmpA基因具有种内相对保守性,其核苷酸与氨基酸同源性与鸭疫里默氏杆菌的血清型、分离时间和地点之间无必然联系.【总页数】5页(P7-11)【作者】魏秀丽;孙亚妮;姜世金;孔义波;张兴晓【作者单位】山东农业大学动科学院,山东泰安,271018;山东农业大学动科学院,山东泰安,271018;山东农业大学动科学院,山东泰安,271018;山东农业大学动科学院,山东泰安,271018;山东农业大学动科学院,山东泰安,271018;山东博莱威生物技术研究所,山东滨州,256618【正文语种】中文【中图分类】S858【相关文献】1.鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A的克隆与表达 [J], 霍翠梅;韦强;鲍国连;崔言顺;蔡秀磊;季权安2.鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A克隆表达及纯化 [J], 李富祥;王传禹;胡骑;苗海生;李华春3.鸭疫里默氏杆菌不同分离株生化特性及胞外蛋白酶的检测 [J], 唐妤;李继祥;高继业;丁孟建;汪敏4.云南鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A及16S rRNA序列分析 [J], 李富祥;王传禹;常志顺;杨斌;李华春5.鸭疫里默氏杆菌血凝素基因的克隆、表达及其蛋白的定位分析 [J], 屠晶;胡青海;于圣青;丁铲;韩先干;朱寅玉;王小兰;苗双;卢凤英因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸭疫里默氏杆菌OmpA基因的克隆与表达周祖涛;陈芬芬;李自力;胡思顺;孙淑娜;吴仁蔚;肖运才;许青荣;毕丁仁【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2008(28)1【摘要】利用本实验室分离、鉴定并保存的鸭疫里默氏杆菌血清1型湖北云梦分离株(RA-YM),根据GenBank上的序列设计了1对引物,用PCR方法扩增了RA-YM株的主要外膜蛋白OmpA基因,并克隆到pMD18-T载体,序列测定结果表明OmpA基因全长1152bp,序列同源性分析表明该基因相当保守,与其他不同RA菌株OmpA基因之间的核苷酸序列同源性为93%～97%。

用pGEX-KG构建了原核表达载体pKG-OmpA,在大肠杆菌中进行了高效表达,表达蛋白约占菌体总蛋白的30%,主要为包涵体形式。

SDS-PAGE电泳结果显示表达的融合蛋白大小约为68000,Western-blot结果表明该表达蛋白具有抗原性。

【总页数】4页(P20-23)【关键词】鸭疫里默氏杆菌;OmpA基因;克隆;原核表达【作者】周祖涛;陈芬芬;李自力;胡思顺;孙淑娜;吴仁蔚;肖运才;许青荣;毕丁仁【作者单位】华中农业大学动物医学院湖北省预防兽医学重点实验室【正文语种】中文【中图分类】S852.61【相关文献】1.鸭疫里默氏杆菌siderophore基因的克隆与表达 [J], 赖丽萍;黄藏宇2.鸭疫里默氏杆菌OmpA/motb蛋白的表达纯化及免疫学特性分析 [J], 张雪梅;王小兰;任晓梅;丁铲;窦亚峰;李涛;王桂军;于圣青3.鸭疫里默氏杆菌pfs基因的克隆表达及单克隆抗体制备 [J], 范国博;韩先干;张宇曦;王少辉;左佳坤;徐达;于圣青4.鸭疫里默氏菌OmpA与鸭IL-2融合基因的克隆与原核表达 [J], 高云航;刘佳丽;王巍;李秋菊;张福君;马红霞5.鸭疫里默氏杆菌CAMP基因的克隆、原核表达及生物信息学分析 [J], 梅世慧;陈国权;阎朝华;王娜;周碧君;程振涛;王开功;文明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸭疫里默氏菌贵州分离株OmpA基因的克隆及生物信息学分析马光强;刘丽娟;陈国权;吴良涛;杨均;刘军泽;李潇蒙;潘成文;周碧君【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2022(43)9【摘要】为了解鸭疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer,RA)贵州分离株OmpA 基因遗传特性和用作基因工程亚单位疫苗开发的可能性,以13株RA贵州分离株(RA-SS-1~12株和RA-AS-1株)为研究对象,用RA OmpA基因特异性引物对13株RA贵州分离株进行PCR扩增,将扩增得到的OmpA基因片段与pMD19-T载体连接,转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞,经PCR和双酶切鉴定为阳性克隆后进行测序;用生物信息学软件将13株RA贵州分离株与国内外15株参考株OmpA 基因序列进行核苷酸同源性分析和遗传进化分析,并对RA OmpA蛋白进行理化性质分析、跨膜结构和信号肽预测、B细胞抗原表位预测、二级和三级结构预测。

结果表明,13株RA贵州分离株OmpA基因全长均为1164 bp,可编码387个氨基酸,株间核苷酸同源性为100%,与参考株GZ-RA8、GZ-RA9、GZ060302、SD-RA2018和Yb2株的同源性达100%”;RA OmpA蛋白属亲水性蛋白,无跨膜和信号肽区域,含有较多的优势抗原表位结构,且OmpA基因高度保守并具有良好的抗原特性,其可作为制备RA基因工程亚单位疫苗的候选蛋白。

【总页数】8页(P12-19)【作者】马光强;刘丽娟;陈国权;吴良涛;杨均;刘军泽;李潇蒙;潘成文;周碧君【作者单位】黔南民族职业技术学院;都匀市农业农村局;贵州大学动物科学学院【正文语种】中文【中图分类】S852.6【相关文献】1.6种血清型鸭疫里默氏菌 SSPA 基因的克隆及序列分析2.鸭疫里默氏杆菌中国分离株的外膜蛋白A基因的克隆与序列分析3.鸭疫里默氏菌OmpA与鸭IL-2融合基因的克隆与原核表达4.1株难以定型的鸭疫里默氏菌分离株5.3株鸭疫里默氏杆菌OmpA单克隆抗体的制备及特性鉴定因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白生物学特性研究刘燕;韦强;鲍国连;季权安【期刊名称】《生物工程学报》【年(卷),期】2008(24)4【摘要】血清2型鸭疫里默氏杆菌强毒菌株体外传200代获得了无毒力无免疫原性菌株,采用超声波裂解和超速离心法提取二株菌的外膜蛋白,以比较分析鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白的生物学特性.电镜观察细菌超微结构显示传代菌株外膜膜密度降低,外膜泡的数量明显减少,细胞质不均匀,内有空泡产生;免疫印迹结果表明二株菌的外膜蛋白免疫原性多肽存在明显区别;原代菌株的外膜蛋白仅与2型RA抗体出现特异性凝集,而传代菌株的外膜蛋白与1、2,10与11型RA抗体均出现凝集;二株菌的外膜蛋白均可诱导雏鸭产生抗体.但原代菌株外膜蛋白诱导雏鸭产生抗体滴度显著高于200代次菌株;原代菌株外膜蛋白免疫鸭对同源RA菌株的攻击可产生100%的免疫保护,而传代菌株外膜蛋白免疫鸭对同源RA菌株的攻击不产生免疫保护.序列分析显示两者的外膜蛋白A同源性达到99.9%.结果表明强毒菌株的外膜蛋白为良好的亚单位疫苗候选,体外连续传代对RA外膜蛋白生物学特性影响显著.【总页数】6页(P586-591)【作者】刘燕;韦强;鲍国连;季权安【作者单位】浙江省农科院畜牧兽医研究所,杭州,310021;浙江省农科院畜牧兽医研究所,杭州,310021;浙江省农科院畜牧兽医研究所,杭州,310021;浙江省农科院畜牧兽医研究所,杭州,310021【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.鸭疫里默氏杆菌中国分离株的外膜蛋白A基因的克隆与序列分析 [J], 魏秀丽;孙亚妮;姜世金;孔义波;张兴晓2.鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A克隆表达及纯化 [J], 李富祥;王传禹;胡骑;苗海生;李华春3.血清2型鸭疫里默氏杆菌铁载体受体蛋白突变体的构建及生物学特性研究 [J], 董嘉文;孙敏华;李林林;马海彬;龚凤平;罗梦萍;王贵平;袁建丰4.云南鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白A及16S rRNA序列分析 [J], 李富祥;王传禹;常志顺;杨斌;李华春5.鸭疫里默氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立 [J], 刘燕;韦强;鲍国连;季权安;肖琛闻因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。