免疫标记技术在食品安全检测中的应用

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胶体金免疫技术
采用电子致密物质 ( 通常用辣根过氧化物酶和铁
蛋白 ) 标记的抗体与其相应抗原发生特异性结合, 借电 镜检出这一标记复合物的技术称为免疫电镜技术。近 年来逐渐发展到用胶体金( co lloidal g old) 作为非放射 性示踪剂 , 即胶体金免疫技术。胶体金免疫技术是 20 世纪 80 年代继三大标记技术 ( 荧光素、 放射性同位素 和酶 ) 后发展起来的固相标记免疫测定技术[ 11] 。 有关胶 体 金 免 疫 技 术 的 最 早 报 道 是 1971 年 Faulk 和 T ay lor
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放射免疫标定法
放射免疫测定法 ( radioimm uno - assay, RIA) 是
采用放射性同位素的抗原或抗体来检查相应抗体或抗
2010 年第 3 期 总第 35 卷
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CHINA CONDIMENT
专 论综述
稳定性, 可放置数年 。胡孔新 等人以被列为 I 类 潜在重要生物恐怖因子鼠疫杆菌作为诊断对象 , 建立了 适合于现场快速检测鼠疫杆菌抗原用的胶体金标记免 疫层析方法 , 其检测灵敏度达到 1 ∀ 10 cfu/ mL, 并对常
The application of immunolabelling technique in food safety detection
REN Ya ni, CH E Zhen ming * ( Bioengineering Co lleg e in Xihua Univer sit y, Chengdu 610039, China ) Abstract: T he applicat ion of im muno labelling t echnique in foo d saf et y detection, such as im muneof luo r escens technique, imm unoenzymat ic t echnique, radio immuno assay, co lloidal go ld technique, lum i nescent imm uno assay are sum marized, and also review ed t he significance ef fect ion of t hese techniques in foo d safet y det ection in this paper Key words: imm unolabelling t echnique; foo d safet y; detect ion 食品安全问题是关系全民健康和社会稳定的一大 问题 , 近年来发生的食源性有害微生物中毒和药物残 留等事件, 已引起了人们对食品安全的高度重视。加 快发展快速、 灵敏、 简便的免疫标记技术 , 并及时进行 现场检测 , 防止各种食源性疾病, 是食品安全检测发展 的必然趋势。免疫标记技术是指将抗原或抗体用小分 子的标记剂, 如荧光素、 放射性同位素、 酶、 铁蛋白、 胶 体金及化学( 或生物 ) 发光剂等作为追踪物 , 并借助于 荧光显微镜、 射线测量仪、 酶标检测仪、 电子显微镜和 发光免疫测定仪等精密仪器 , 以提高其灵敏度和便于 检出的一类新技术
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免疫荧光技术
免疫荧光技术又称荧光抗体法( f luo rescent ant i
body t echnique, FA T ) , 是一种将结合有荧光素 ( 异硫 氰酸荧光素、 罗丹明、 二氯三嗪基氨基荧光素 ) 的荧光 抗体作为分子探针与抗原进行反应, 借以提高免疫反 应灵敏度和适合显微镜观察的免疫标记技术。该法具 有灵敏度高、 特异性强的特点。 免疫荧光技术的原理是将抗原抗体反应的特异性 和敏感性与显微示踪的精确性相结合, 以有荧光素作 为标记物 , 与已知抗体结合, 但不影响其免疫学特性。 然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂 , 用以检测和 鉴定未知抗原。在荧光显微镜下, 可以直接观察呈现 特异荧光的抗原抗体复合物以及其存在部位。 张冬青等 采用膜溶解、 密度梯度分离纯化结合 免疫荧光技术对饮用水中的 两虫 ( 隐孢子虫和贾第 鞭毛虫 ) 进 行 定性 定 量分 析检 测 , 其 回 收率 分别 为 56% 和 35% , 均高于 EPA1623 方法的质量控制要求。 采用免疫荧光技术操作方法简便且经济 , 适合在国内
收稿日期 : 2009- 09- 28 * 通讯作者
作者简介 : 任亚妮 ( 1986- ) , 女 , 西华大学在读硕士研究生 , 研究方向 : 食品生物技术。
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水源检测中推广使用。有报道首次将微菌落技术同免 疫荧光技术相结合, 建立了微菌落免疫荧光技术 ( M CIF ) 。M CIF 法敏感性和重复性好, 用已知沙门氏菌 浓度 做 最 低 检 出 限 量 实 验 , 常 规 法 检 出 限 为 10 个/ m L, 而该法为 5 个/ m L; 阳 性对照和阴 性对照 重复 10 次 , 阳性菌落均荧光明亮, 颜色稳定, 阴性菌落 均荧光很弱。用 M CIF 法对不同菌落进行特异性的 荧光染色鉴别细菌, 仅需 5~ 6 h, 在食品有害微生物 检测方面有着非常大的应用前景。
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免疫酶技术
免疫酶技术又称酶免疫测定法 ( enzyme immunoas say) , 是将抗原和抗体的特异免疫反应和酶催化反应的高 效性和专一性相结合而建立的一种新技术。常用的酶是辣 根过氧化物酶。其原理和免疫荧光技术相似, 不同的是用 酶代替荧光剂做标记, 以及酶的特殊底物处理标本来显示 酶标记的抗体, 以检测标记物的有无及含量间接反映被测 物的存在与多少。该技术具有操作简单、 敏感性高、 准确性 好、 易于商品化等特点, 正被广泛应用于微量物质检测、 免 疫相关物质检测等各个领域的分析检测[4] 。 免疫酶技术方法很多, 最主要的方法为酶联免疫吸 附法 ( enzyme linked immunosorbant assay, ELISA) , 简称 酶标法, 被广泛用于检测抗原或抗体, 可进行定性和定量 分析[ 5,6] 。ELISA 法可检测食品中的病原菌沙门氏菌、 大 肠杆菌等, 食品中的微量农药残留, 以及酱油生产中能引 起中毒的霉菌次级代谢产物黄曲霉毒素、 超曲霉毒素等 方面。用该法进行李斯特氏菌的快速检测, 用三株针对 单核细胞增生李斯特氏菌、 无害李斯特氏菌和西里杰氏 李斯特氏菌共同表位 的单抗, 以夹心 ELISA 法, 仅需 48 h, 在人工模拟肉中检测下限为5 cfu/ g样品。陈琦等 采用酶联免疫试剂盒及绘制以氯霉素浓度为半对数坐标 的标准曲线对牛肉和蜂蜜中氯霉素残留量进行测定, 变 异系数为 3. 1% ~ 8. 6%, 重复性好, 精确度高。有报道用 酶联免疫吸附 酶标仪分析法和免疫亲和微柱 荧光仪分 析法分别对粮油样品中黄曲霉毒素 B1 进行测定, 对其检 测条件和结果进行差异性分析, 比较发现酶联免疫吸附 分析法适宜大批量样品快速筛选, 检出限为0. 1 g/ kg, 可 在广大基层实验室推广应用[ 8] 。
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随着分子生物学、 基础免疫学及免疫化学等学科 的发展, 免疫标记技术也在迅速更新和完善, 至今已形 成的主要有免疫荧光技术、 免疫酶技术、 放射免疫标定 法、 免疫胶体金技术和发光免疫测定法等。免疫标记 技术具有敏感性高、 特异性强、 反应速度快、 应用范围 广、 操作简便等优点 , 在临床医学、 食品安全检测及环 境监测等领域已经广泛应用。本文主要就各类免疫标 记技术在食品安全检测中的应用作以简要介绍。
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将胶体金与抗体结合 , 用于电子显
微镜水平的免疫细胞化学研究。此后, 胶体金作为一 种新型免疫标记技术发展很快。目前在微生物学检验 中应用的主要是免疫层析法和快速免疫金渗滤法[ 13] 。 胶体金是由氯金酸在还原剂作用下, 聚合成特定大小 的金颗粒 , 并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态。 胶体金标记实质上是蛋白等高分子被吸附到胶体金表 面的包被过程, 利用它在碱性环境中带负电荷的性质, 与蛋白质分子或其他生物大分子的正电荷基团借静电 吸引而形成牢固结合。 由于胶体金标记蛋白质是一物理结合过程 , 结合牢 固, 很少引起蛋白质活性改变, 所以试剂非常稳定, 不受 温度等外界因素影响, 可在办公室、 家中甚至野外进行 检测力学 ! 35 !
原的高灵敏度免疫分析方法 , 此法具有高灵敏度 ( 达 10- 9 或 10- 12 ) , 可进行超微量分析, 敏感性高等优点。 本法常用的同位素有 3 H , 14 C, 125 I 和131 I 等。放射免疫 分析法应用范围广泛, 在食品安全检测中可用来检测 肉类药物残留, 黄曲霉毒素等。 徐美奕等人 [ 9] 用125 I 标记的放射免疫试剂盒测定 养殖红笛鲷与野生红笛鲷肌肉中雌二醇、 孕酮、 睾酮三 种性腺激素残留量。在养殖红笛鲷与野生红笛鲷肌肉 中均检出三种激素, 野生红笛鲷中的激素残留量较低, 但仍能被检出, 放射免疫分析 法放射性活度低、 毒性 小、 样品处理简单、 灵敏度高, 检出限高于液相色谱法, 可达 ng pg 级 , 可作为水产品中激素残留量的有效检 测手段。有文献应用 Charm II 放射免疫分析方法测 定猪尿样的磺胺类残留 , 检测限为 200 g / kg, 符合欧 美等国磺胺类最大残留限量的检测要求 , 同时快速简 便, 在 30 m in 内可出初筛结果 , 假阴性率为 0% , 有助 于大批量样品的初筛, 同时本方法为动物养殖过程中 的用药监控提供了一种快速检测方法[ 10] 。
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中, 简便、 灵敏、 快速的联用技术、 免疫技术能为食品安 全检测提供快捷方法 , 也为人们的营养健康做出保证, 为疾病预防做出贡献。
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