多棘海盘车多糖对正常小鼠免疫功能的影响_刘铁铮
- 格式:pdf
- 大小:207.85 KB
- 文档页数:4
多房棘球蚴分泌物抗原对脂多糖诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞表型及功能的影响李文登;李超群;胡旺;徐凯;庞明泉;乜茹;冯浩杰;张占红;刘处处;樊海宁【期刊名称】《临床肝胆病杂志》【年(卷),期】2022(38)3【摘要】目的探究不同浓度多房棘球蚴分泌物抗原(Em-sAg)对脂多糖(LPS)诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(BMDC)表型和功能的影响。
方法小鼠骨髓腔中所分离的骨髓前体细胞,经小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)刺激后形成BMDC,于正倒置显微镜下观察细胞形态。
用流式细胞术鉴定BMDC纯度后,分为Control组、阳性对照组(LPS 1μg/mL)、LPS+3 mg/mL Em-sAg组、LPS+1.5 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.75 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.375 mg/mL Em-sAg组共6组。
流式细胞术检测各组BMDC表面分子(CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子)的表达情况,ELISA法检测各组细胞因子IL-12p70的表达水平。
满足正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验表示。
结果在正倒置显微镜下观察到,培养8~10 d的细胞可见毛刺样突起,细胞呈完全悬浮状态。
流式细胞术检测发现,CD11c的阳性率均在70%以上,据此鉴定所培养的细胞大部分为BMDC。
流式细胞术的进一步结果表明,与Control组相比,LPS组表面的细胞分子CD80、CD86、MHC-Ⅱ均显著增加(P值均<0.05);与LPS组相比,LPS+3 mg/mL Em-sAg组、LPS+1.5 mg/mL Em-sAg组、LPS+0.75mg/mL Em-sAg组、LPS+0.375 mg/mL Em-sAg组中BMDC的CD80显著减少(F=34.870,P<0.001),CD86、MHC-Ⅱ无明显减少(P值均>0.05)。
沙棘对小鼠免疫调节作用的实验研究
刘荣珍;李凤文;苏爱荣;何励;付伟忠;姚思宇;梁坚;马宇燕;覃辉艳
【期刊名称】《中国热带医学》
【年(卷),期】2005(5)9
【摘要】目的探讨沙棘对动物的免疫调节作用. 方法以2.5、5.0、10.0 g/kg BW 剂量的沙棘颗粒给予小鼠连续灌胃30~45d. 结果沙棘能促进小鼠的脾淋巴细胞增值、转化作用,提高小鼠的抗体生成细胞数、血清溶血素水平及NK细胞活性, 促进小鼠的单核-巨噬细胞的碳廓清和单核-腹腔巨噬细胞的吞噬能力,促进小鼠的迟发型变态反应. 结论沙棘具有增强免疫力作用.
【总页数】2页(P1950-1951)
【关键词】小白鼠;沙棘颗粒;免疫调节
【作者】刘荣珍;李凤文;苏爱荣;何励;付伟忠;姚思宇;梁坚;马宇燕;覃辉艳
【作者单位】广西壮族自治区疾病预防控制中心卫生毒理科
【正文语种】中文
【中图分类】R994.4
【相关文献】
1.沙棘籽原花青素对小鼠免疫功能调节作用的影响 [J], 曹少谦;徐晓云;潘思轶
2.沙棘油对小鼠免疫调节作用影响的研究 [J], 张娟妮;赵立群;王振林
3.黄芪多糖对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脾细胞的免疫调节作用研究 [J], 刘建春;张红珍;李俊莲;樊慧杰;柴智;尉杰忠;于婧文;肖保国;马存根
4.妊娠对实验性自身免疫性妊娠对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的免疫调节作用[J], 张洪连;周鑫华;谢琛;江建香;梅竹君;刘诗英;胡凡;曹文锋
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄芪多糖对小鼠免疫功能影响的研究石永芳【期刊名称】《山东化工》【年(卷),期】2017(46)3【摘要】将40只小鼠随机分为正常对照组、氢化可的松(HC)致免疫功能低下组,正常黄芪多糖组,HC加黄芪多糖组.对照组注射生理盐水0.8 mL/只,实验组注射黄芪多糖0.8 mL/只,连续注射7~14 d.检测到黄芪多糖显著增加小鼠淋巴细胞转化率、溶血素生成、胸腺和脾脏重量,表明黄芪多糖可显著提高小鼠免疫力.%40 mice were randomly divided into normal control group,hydrocortisone (HC) induced by low immune function group,normal group HC plus astragalus polysaccharides,astragalus polysaccharide group.The control group was injected with saline 0.8mL/,the experimental group was injected with Astragalus Polysaccharide 0.8mL/,continuous injection 7 to 14days.Detection of Astragalus Polysaccharide significantly increase the lymphocyte transformation rate,hemolysin,weight of thymus and spleen,showed that Astragalus polysaccharide can significantly improve the immune system of mice.【总页数】2页(P17-18)【作者】石永芳【作者单位】菏泽学院药物科学与技术系,山东菏泽 274015【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.黄芪多糖对猪免疫功能影响的研究进展 [J], 刘瑞生2.黄芪多糖对猪免疫功能影响的研究进展 [J], 隋昀原;沈国顺3.黄芪多糖对肠道免疫功能影响的研究进展 [J], 韩立丽;王建发;王凤龙;韦旭斌4.黄芪多糖对小鼠免疫功能影响的研究 [J], 卢炜;顾蓓蓓;卢劲晔;陆江5.基于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路探讨黄芪多糖对肺癌小鼠免疫功能的影响及对Th1/Th2的调节作用 [J], 刘艳玲;袁娟;郭敏;张延锋;陆君君;曹巍因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
党参多糖口服液对小鼠免疫功能的影响晏永新;张丽;贾海芳;江润蓓;方学锋;舒文林【摘要】给小鼠灌服不同剂量(每kg体重灌服9、5、7 g生药)的党参多糖口服液后,通过测定小鼠免疫脏器指数、网状内皮系统吞噬功能、半数溶血值等指标的变化评价其对免疫系统的作用.结果显示,党参多糖口服液可显著增强小鼠网状内皮系统的吞噬功能,提高成年小鼠脾脏指数(P<0.05),能显著增强小鼠半数溶血值,提高小鼠的血清溶血素抗体生成水平(P<0.05),说明党参多糖口服液有显著的免疫调节能力.该试验可为党参多糖口服液的临床应用提供参考.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2013(047)003【总页数】3页(P18-20)【关键词】党参多糖口服液;免疫调节;小鼠【作者】晏永新;张丽;贾海芳;江润蓓;方学锋;舒文林【作者单位】江西新世纪民星动物保健品有限公司,南昌330096【正文语种】中文【中图分类】R285党参具有补中益气,健脾益肺之功效,动物临床常用于畜禽脾胃虚弱,少食腹泻,肺虚咳喘,体倦无力,气虚垂脱。
研究表明,党参多糖是党参的主要有效成分,具有免疫调节、消除自由基、造血、抗疲劳及提高动物生产性能等作用[1-2]。
本公司以党参多糖为研究对象,开发了动物免疫增强剂党参多糖口服液,并通过测定小鼠免疫脏器指数、网状内皮系统吞噬功能、半数溶血值等指标的变化评价其对免疫系统的作用,为党参多糖口服液的生产和临床提供理论依据。
1 材料与方法1.1 材料试验动物:昆明种小鼠,雌雄兼备,体重18~22 g,由江西中医学院实验动物中心提供。
试验药品:党参多糖口服液:由党参药材经过多糖提取浓缩等工艺制得,规格:100 mL/瓶,2 g生药,江西新世纪民星动物保健品有限公司提供,批号:20100501,试验前根据给药量适当浓缩;人参口服液,吉林省通化博祥药业有限公司,国药准字Z20075112,批号:20091201。
试验器材:4号针头、723分光光度计、离心机(TLG-16型,江苏省金坛市医疗仪器厂)。
石耳多糖对小鼠免疫功能影响的初步研究
万华涛;周彬
【期刊名称】《唐山师范学院学报》
【年(卷),期】2007(029)002
【摘要】通过酸、碱、水三种方法提取石耳子实体多糖,分别腹腔注射(200mg/kg)免疫小鼠,观察三种提取物对正常小鼠免疫功能的影响.结果表明:水提法多糖得率最高(4.3%).三种提取物均能显著提高(p<0.01)小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力;并使小鼠脾脏重量明显增加,而胸腺重量显著减轻.
【总页数】4页(P46-49)
【作者】万华涛;周彬
【作者单位】湖北省阳新广播电视大学,湖北,黄石,435200;湖北省阳新广播电视大学,湖北,黄石,435200
【正文语种】中文
【中图分类】Q939.9
【相关文献】
1.真菌多糖对小鼠免疫功能影响的初步研究 [J], 陈红菊;焦红梅;申厚凤;李国才;刘鑫;胡浩
2.软骨多糖对荷瘤小鼠免疫功能影响的初步研究 [J], 刘安军;车伟;张旭;张国蓉
3.茶树菇多糖对小鼠免疫功能影响的初步研究 [J], 陈少英;王卫东;黎云
4.天门冬多糖对免疫抑制小鼠免疫功能调节的初步研究 [J], 赵怡;潘贵珍;施君;韦英益;胡庭俊
5.软骨多糖治愈的S180荷瘤小鼠免疫功能的初步研究 [J], 刘安军;刘爽;曹东旭;袁博;王维君;阎妍
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202110161459.X(22)申请日 2021.02.05(71)申请人 中国水产科学研究院黄海水产研究所地址 266071 山东省青岛市市南区南京路106号(72)发明人 李风铃 于永兴 姚琳 江艳华 杜美荣 李兆杰 王联珠 曲梦 (74)专利代理机构 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427代理人 沈小明(51)Int.Cl.C12N 15/12(2006.01)C07K 14/435(2006.01)C07K 16/18(2006.01)C07K 16/06(2006.01)G01N 33/68(2006.01) (54)发明名称多棘海盘车卵黄蛋白原的基因、蛋白、多克隆抗体及应用(57)摘要本发明涉及多棘海盘车卵黄蛋白原的基因、蛋白、多克隆抗体及应用,属于分子生物学领域,所述多棘海盘车卵黄蛋白原的基因序列为SEQID NO:1,蛋白如SEQ ID NO:2所述。
利用所述多棘海盘车Vg抗体的ELISA方法,通过鉴定生物体中Vg的含量进而预警海洋生态系统中EEs的污染状况,利用多棘海盘车Vg抗体制备的检测试剂盒能够检测某一海区的雌激素污染程度,检测结果准确可靠。
权利要求书1页 说明书5页序列表12页 附图2页CN 112760325 A 2021.05.07C N 112760325A1.一种编码多棘海盘车Vg的基因,其特征在于所述基因的cDNA全长序列如SEQ IP NO.1所示。
2.权利要求1所述基因编码的多棘海盘车Vg,其特征在于所述多棘海盘车Vg氨基酸序列如SEQ IP NO.2。
3.本发明还提供一种多棘海盘车Vg的多克隆抗体,其特征在于以人工合成多棘海盘车Vg多肽作为抗原,免疫兔制备所得。
4.一种海洋雌激素污染原位检测方法,其特征在于所述方法利用多棘海盘车为标志生物,检测多棘海盘车权利要求2所述的多棘海盘车Vg的浓度,从而检测海区中雌激素的污染水平。
海藻硒多糖对小鼠免疫功能的影响
桑希斌
【期刊名称】《菏泽学院学报》
【年(卷),期】2002(024)002
【摘要】研究了海藻硒多糖对小鼠免疫功能的影响.结果表明,海藻硒多糖对小鼠各项免疫指标的影响均优于同剂量的无机硒和海藻多糖.证明海藻硒多糖发挥了硒和多糖的彼此协同作用,可作为新型的免疫调节剂应用.
【总页数】3页(P33-35)
【作者】桑希斌
【作者单位】菏泽师范专科学校,山东,菏泽,274015
【正文语种】中文
【中图分类】Q95-33
【相关文献】
1.海藻多糖对γ射线照射小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响 [J], 刘志辉;葛秀君;孟庆勇
2.猴头蘑硒多糖对正常小鼠免疫功能影响的实验研究 [J], 许伟;许洪霞;潘丽媛;朱黎霞
3.香菇硒多糖对小鼠免疫功能的影响 [J], 姚月梅;姚恩峰;等
4.海藻酸钠/乙二醇壳聚糖双网络水凝胶对小鼠调节性T细胞免疫功能的影响 [J], 陈坤威;姚咏明
5.海藻多糖对γ射线照射小鼠免疫功能的影响 [J], 刘志辉;孟庆勇;刘秋英;郑辉
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
香菇多糖对正常小鼠以及免疫抑制小鼠免疫功能的影响芦殿荣;祝彼得;芦殿香;刘啸;冯雪梅;金沈锐【期刊名称】《甘肃中医学院学报》【年(卷),期】2004(21)4【摘要】目的 :研究香菇多糖对正常小鼠以及免疫抑制小鼠免疫功能的影响 ,探讨香菇多糖对小鼠免疫功能的影响及其量效相关性。
方法 :分别检测在 3个不同剂量下香菇多糖对正常小鼠以及免疫抑制小鼠红细胞C3b受体 (RBC C3bR)花环形成率及红细胞免疫复合物 (RBC CIC)花环形成率、巨噬细胞吞噬功能、抗体生成实验、免疫器官重量及淋巴细胞转化实验等指标的影响。
结果 :香菇多糖可使正常小鼠以及免疫抑制小鼠红细胞C3b受体花环及红细胞免疫复合物花环形成均有不同程度的升高 ;巨噬细胞吞噬活性增强 ;抗体效价升高 ;免疫器官重量增加 ;淋巴细胞转化OD值增加 ,且以高剂量为佳。
结论 :香菇多糖能增强小鼠非特异性免疫、体液免疫及红细胞免疫能力 ,在一定的浓度范围内存在量效正相关性 ,并且对免疫抑制小鼠效果为佳。
【总页数】3页(P20-22)【关键词】香菇多糖;正常小鼠;免疫抑制小鼠;免疫功能【作者】芦殿荣;祝彼得;芦殿香;刘啸;冯雪梅;金沈锐【作者单位】成都中医药大学;华西医科大学【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.香菇多糖和黄芪多糖对免疫抑制小鼠免疫功能调节的研究 [J], 颜爱;李波;李润成;喻凯;余兴龙2.玉屏风散生物转化液对正常小鼠抗氧化功能及免疫抑制小鼠T细胞亚群、IL-4和IFN-γ的影响 [J], 王玉阁;周丽;王丽萍;王滨3.雷公藤甲素对糖尿病小鼠胰岛炎的免疫抑制效果及对正常小鼠糖代谢的影响 [J], 李玲;涌上民雄;膝卫平;邸国勋;村上启治;三村悟郎4.养阴益气合剂对正常及糖皮质激素免疫抑制小鼠免疫功能的调节 [J], 王莒生;刘欣;李萍;梁代英;苑惠清;刘薇5.土鳖虫多肽对正常和免疫抑制小鼠免疫功能的影响 [J], 严梦思;李兴暖;赵勇;周裔春;秦仲君因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
牛膝多糖对小鼠免度调节作用的研究进展
张志港
【期刊名称】《中国动物保健》
【年(卷),期】2010(012)012
【摘要】牛膝多糖是一种免疫调节剂,近年来倍受药理研究和临床应用的关注,本文就其对小鼠免疫调节作用及作用机制进行了综述,以期对其应用及进一步研究提供参考.
【总页数】2页(P18-19)
【作者】张志港
【作者单位】西南大学药学院,重庆,400716
【正文语种】中文
【相关文献】
1.不同运动强度对高脂血症小鼠血脂的调节作用研究 [J], 朱淦芳;魏纯镭;程东庆
2.金匮肾气丸对"劳倦过度、房事不节"肾阳虚小鼠Th1/Th2免疫调节作用的研究[J], 颜亭祥;李震
3.3种浓度乙醇提取的樟芝多糖对免疫缺陷小鼠模型免疫功能的调节作用研究 [J], 孔云;官俏兵;郭丽;李文燕;杨毅
4.川牛膝多糖对口蹄疫疫苗受免小鼠树突状细胞成熟的影响 [J], 封海波;刘娟;宋振辉;杜小刚;韩兴发;赵冰
5.川牛膝多糖硒酸酯对口蹄疫受免小鼠抗体的影响 [J], 何述辉;叶淑均;黄杨钦
因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄芪多糖增强小鼠免疫功能的实验研究王庭欣王庭祥吴广臣刘峥颢夏立娅【摘要】目的研究黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响。
方法采用ConA诱导小鼠淋巴细胞转化试验及迟发性变态反响试验测试黄芪多糖(Astragalus Polysaccharide APS)对小鼠细胞免疫功能的影响;采用抗体生成细胞检测及半数溶血值实验测试黄芪多糖对小鼠体液免疫的影响;采用小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验测试黄芪多糖对小鼠非特异性免疫的影响。
结果黄芪多糖能明显进步小鼠的足跖肿胀度、脾脏生成抗体细胞数、半数溶血值及巨噬细胞吞噬功能,黄芪多糖对小鼠淋巴细胞增殖才能无明显影响。
结论黄芪多糖对正常小鼠的细胞免疫、体液免疫及巨噬细胞功能均有明显的增强作用。
【关键词】黄芪;小鼠;多糖;免疫Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of astragalus polysaccharide (APS) on immunological function in mice.MethodsBy lymphocyte transformation test and delayed type hypersensitivity (DTH), the effect of APS on celluar immunity was evaluated. By determining plaque forming cells (PFC) and HC50, the effect of APS on humoral immunity was studied. Abdomen macrophages of mice devour chicken red cell was used to asscessphagositosis of peritoneal macrophages.ResultsCompared with the normal control group, APS could promote DTH, PFC, HC50 and phagositosis of peritoneal macrophages,but had no effect on lymphocyte proliferation.ConclusionAPS can stimulate the immunological function in mice in different ways.Key words:Astragalus; Mice; Polysaccharide; Immunity黄芪属豆科多年生草本植物,其主要含有多糖、谷甾醇、棕榈酸、胆碱、黄酮类等营养素,能镇静中枢神经系统,去除体内脂质过氧化物,具有较强的抗氧化作用[1,2]。
基金项目:山东大学威海大学生科研训练计划项目(A10019)作者简介:刘铁铮,男,本科研究方向:药理学*通讯作者:张崇禧,男,教授,博士,硕士生导师研究方向:天然产物活性成分研究Tel :(0631)5675313E-mail :zcx_11@多棘海盘车多糖对正常小鼠免疫功能的影响刘铁铮,郭爱洁,王桂春,吴泽华,褚福龙,张崇禧*(山东大学海洋学院,山东威海264209)摘要:目的研究多棘海盘车多糖(Asterias amurensis polysaccharides ,AAP )对正常小鼠免疫功能的影响。
方法昆明种小鼠灌胃给予低、中、高剂量AAP (50,100,200mg ·kg -1),连续14d 后,处死小鼠,测定免疫器官指数来考察AAP 对小鼠免疫器官的影响;测定白细胞数目、吞噬活性及血清溶菌酶含量来考察AAP 对小鼠非特异性免疫的影响;测定肝脏细胞中谷胱甘肽含量来考察AAP 对小鼠肝脏解毒功能的影响;采用刀豆球蛋白A (ConA )诱导小鼠淋巴细胞增殖实验考察AAP 对小鼠细胞免疫的影响。
结果AAP 能显著提高小鼠的免疫器官指数、血液中中性粒细胞吞噬能力、血清溶菌酶含量、肝脏细胞中谷胱甘肽含量及淋巴细胞增殖能力,但对小鼠血液中白细胞数目无显著影响。
结论AAP 对正常小鼠的非特异性免疫和细胞免疫有显著的增强作用。
关键词:多棘海盘车多糖;免疫;淋巴细胞增殖;刀豆球蛋白A 中图分类号:R965文献标志码:A文章编号:1001-2494(2011)24-1894-04Effect of Asterias amurensis Polysaccharides on Immune Function of Normal MiceLIU Tie-zheng ,GUO Ai-jie ,WANG Gui-chun ,WU Ze-hua ,CHU Fu-long ,ZHANG Chong-xi *(Marine College ,Shandong University ,Weihai 264209,China )ABSTRACT :OBJECTIVE To study the effect of Asterias amurensis polysaccharides (AAP )on immune function of normal mice.METHODSThe mice were treated with oral administration of AAP (50,100,200mg ·kg -1)for 14d.The effect of AAP on im-mune organs was evaluated by determination of immune organ indexes.By determining the count and phagocytic activity of leucocytes in blood and lysozyme (LZM )content in serum ,the effect of AAP on nonspecific immunity was studied.By determining the content of glutathione (GSH )in liver cells ,detoxification capability of liver was investigated.Lymphocyte proliferation test was adopted to assess the effect of AAP on cellular immunity.RESULTSCompared with the control group ,AAP increased immune organ indexes ,phago-cytic activity of leucocytes in blood ,content of LZM in serum and content of GSH in liver cells ,but had no effect on leucocyte count.The effect of AAP on multiplication capacity of lymphocytes was significant.CONCLUSION APP can stimulate the nonspecific im-munity and cellular immunity in normal mice.KEY WORDS :Asterias amurensis polysaccharides ;immunity ;lymphocyte proliferation ;concanavalin A多糖是一种广谱的生物效应调节剂,其来源广泛[1],具有抗氧化[2]、调节免疫[3]等多种生物活性。
多棘海盘车(Asterias amurensis )为棘皮动物门(Echinodermata ),海星纲(Asteroidea ),钳棘目(Forcipulata ),海盘车科(Asteriidae ),是我国北方海域的主要品种,具有平肝和胃、止痛、镇惊等功效[4]。
威海近几年海星屡次泛滥(主要为多棘海盘车),严重危害贝类养殖,因此开发利用海星资源,具有巨大的经济和社会效益。
海星中皂苷[5-6]等多种生物活性物质已被深入研究,多棘海盘车多糖(Asterias amurensis polysaccharides ,AAP )被证实具有体外抑菌活性[7],而目前对其在免疫调节方面的作用研究很少。
因此本实验选取小鼠作为动物模型,灌胃给予AAP 和阳性对照黄芪多糖[8](astragalus polysaccharides ,APS ),通过测定免疫器官指数、血清溶菌酶含量、脾脏淋巴细胞增殖率等来考察AAP 对正常小鼠免疫功能的影响,为AAP 的开发利用提供实验依据。
1材料1.1实验动物清洁级昆明种小鼠[山东绿叶制药有限公司,合格证号SCXK (鲁)20090009],体重18 22g ,雌雄兼用。
环境温度(22ʃ2)ħ,在12h 光照周期的动物室内饲养,自由饮水、进食,适应性饲养1周后用于本实验。
1.2供试品、试剂与仪器多棘海盘车多糖(含量81.2%,批号20110218)、黄芪多糖(含量83.6%,批号20110227)(山东大学威海生药学实验室);RPMI1640培养基及胎牛血清(Gibco公司);刀豆球蛋白A(ConA)及噻唑蓝(MTT)(Sigma公司);溶菌酶(lysozyme,LZM)试剂盒(批号20110302)、谷胱甘肽(glutathi-one,GSH)试剂盒(批号20110119)(南京建成生物工程研究所);其余试剂均为国产分析纯;PL303型分析天平[METTLER-TOLEDO仪器(上海)有限公司],752型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司),MCO-15AC型CO2培养箱(Sanyo公司),TS100型倒置显微镜(Nikon公司),680型酶标仪(BIO-RAD公司)。
2方法2.1动物分组与给药方法分别以生理盐水配制APS、AAP低、中、高剂量溶液,0.45μm滤膜过滤除菌。
昆明种小鼠随机分为5组,每组10只,即空白对照组(生理盐水),黄芪多糖阳性对照组(APS,100mg·kg-1),多棘海盘车多糖低剂量组(50mg·kg-1),中剂量组(100mg·kg-1),高剂量组(200 mg·kg-1)。
ig,每日1次,连续14d。
末次给药24h后,小鼠摘眼球取血后颈椎脱臼处死,测定相关实验指标。
2.2对免疫器官指数的影响小鼠处死前称体重,处死后,取脾脏、胸腺,分别称重。
根据以下公式计算相应免疫器官指数:脾脏指数=脾脏重(g)/体重(g),胸腺指数=胸腺重(g)/体重(g)。
2.3对血液白细胞数目和吞噬活性的影响小鼠摘眼球取血后,部分血液用肝素钠抗凝,取20μL抗凝血加入380μL白细胞稀释液(98mL蒸馏水加入冰醋酸2mL和3滴1%亚甲蓝),溶解全部红细胞后,吸取少量液体进行白细胞计数。
另取0.25mL抗凝血,加入0.1mL金黄色葡萄球菌(9ˑ108·mL-1),25ħ培养1h 后,4000r·min-1离心15min,取沉淀底层物抹片,待风干后用甲醇固定,姬母萨染色,镜检。
计数100个中性粒细胞,计算吞噬活性与吞噬指数。
吞噬活性=(吞噬细菌的中性粒细胞数/100)ˑ100%,吞噬指数=(被中性粒细胞吞噬的细菌总数/100)。
2.4对血清溶菌酶含量和肝脏细胞中谷胱甘肽含量的影响未抗凝血液静置后离心取血清,按照溶菌酶试剂盒说明书测定血清溶菌酶含量。
小鼠处死后,解剖取肝脏,制成10%匀浆,按照谷胱甘肽试剂盒说明书测定肝脏细胞中谷胱甘肽含量。
2.5ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖实验小鼠处死后,无菌取脾脏,剔除脾脏表面脂肪及结缔组织,用PBS液洗净表面血迹。
将脾脏剪成小块,继续用PBS液冲洗至清亮。
经200目筛网过滤,用RPMI-1640培养基冲洗,收集含脾细胞的1640冲洗液,1500r·min-1离心5min。
去上清后加入0.83%Tris-NH4Cl裂解红细胞1min,重复裂解1次,再用RPMI-1640液洗2 3次,经台盼蓝染色,检查死细胞数少于5%,用含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基(添加青霉素,链霉素,盐酸环丙沙星)将脾细胞稀释至5ˑ106·mL-1的细胞悬液。
取100μL 加入96孔细胞培养板内(每孔含5ˑ105个细胞),每只小鼠的淋巴细胞样本分装6孔,其中3个孔各加入终质量浓度为5μg·mL-1的ConA100μL,另外3个孔各加入RPMI-1640完全培养基100μL,于37ħ、5%CO2培养箱中培养48h。
培养结束前4h,每孔加入20μL MTT(5mg·mL-1),再继续培养4h。
培养结束后,培养板2500r·min-1离心15min,弃上清,每孔加入DMSO150μL,充分振荡30s后静置10 min,在酶标仪上测定吸光度A值,波长570nm,并计算淋巴细胞刺激指数:淋巴细胞刺激指数=A实验/A对照ˑ100%。
2.6统计学分析数据应用SPSS17.0处理,作组间均值的t检验,结果用珋xʃs表示,当双侧检验P<0.05时,说明组间均值的差异具有统计学意义。
3结果3.1AAP对正常小鼠免疫器官的影响与空白对照组比较,阳性对照组小鼠的两个免疫器官指数均显著增大(P<0.05),中、高剂量AAP 对两个免疫器官指数的增大作用显著(P<0.05),说明中、高剂量AAP能促进正常小鼠免疫器官发育,而低剂量AAP对免疫器官的影响不显著(P>0.05),见表1。