半定量RT-PCR试验心得

PCR学习心得（优秀范文六篇）本站小编为你整理了多篇相关的《PCR学习心得(优秀范文六篇)》，但愿对你工作学习有帮助，当然你在本站还可以找到更多《PCR学习心得(优秀范文六篇)》。

第一篇：实习学习心得作为一名即将奔赴教师岗位的大学生，学习科学发展观，更要结合自身实际情况，要认真贯彻执行胡同志提出的：发展要有新思路，改革要有新突破，开放要有新局面，各项工作要有新举措，顶岗实习教师科学发展观学习心得。

我们要把学习践行科学发展观与执教工作结合起来；与谋划好今后与学生交往结合起来；着力提升我们的教师职业道德水平和专业素质。

实践已经充分证明，当代教育需要新的理念新的方式，教学改革的口号也越喊越响亮，这就更需要我们这些即将从事教师职业的顶岗实习生充分利用好实习这个锻炼的机会，以新的理念新的方式来组织教学，提高自己的教学能力，同时锻炼自己管理学生的实践能力，心得体会《顶岗实习教师科学发展观学习心得》。

通过近期的学习，我对科学发展观理论有了进一步的理解，我明白了科学发展观无处不在，无处不可以应用。

从人类个人、国家，乃至整个世界；从经济、政治到环境保护等等。

我们应该从现在起就将科学发展观应用于我们实习教师的学习、生活、思想、工作上，在实习工作中以科学的理念来完善自己的各项能力。

我更加深刻感受到这次学习实践活动的意义，明白更多认识问题、解决事情的方法，凡事要全面地协调地去看待问题。

第二篇：实习学习心得第一天，进入焊接实验室之前，老师简要地给我们讲解了一下实训的要求，让我们对收音机有一个大概的了解，在进行实训的时候心中更加有数。

在实训前，老师给我们发下了中夏S66E六管超外差式收音机实验套件。

接下来几天我们的工作就是将这套套件安装成一个合格的收音机了。

我们每个人拆开套件之后对照元件清单仔细检查了各个元件有无缺失，损坏。

在进行焊接元件之前，我们用废弃的电路摸板练习，掌握烙笔的用法。

刚刚开始自己练习的时候，我们的焊点可谓“抽不忍赌”，有的同学甚至在焊接的时候会出现手颤抖的现象。

RT-PCR的操做经验分享在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。

而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。

由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。

因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。

在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。

RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。

外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中。

在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。

这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。

而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。

一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。

2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。

3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。

4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。

然后用高压灭菌除去残留的DEPC。

不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。

1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。

它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。

2. 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RN A酶失活。

它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。

3. 氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。

pcr工作总结个人
PCR工作总结
在过去的一段时间里，我参与了PCR实验的进行并进行了相
关数据分析。

以下是我的个人总结：
1. 设计合适的引物和探针: 在PCR实验中，选择合适的引物和
探针非常重要，因为它们直接影响到反应的特异性和效率。

我在设计引物和探针时充分考虑了目标序列的特性，并通过生物信息学工具进行了引物的有效性和特异性检验。

2. 优化PCR反应条件: 我进行了一系列的试验，优化PCR反
应条件以提高扩增效率和特异性。

我尝试了不同的温度梯度、不同反应体系的比例和浓度，并通过监测反应产物的大小和纯度评估了优化效果。

3. 建立PCR实验流程: 我详细记录了PCR实验的步骤和条件，并建立了实验流程，以确保实验的重复性和可靠性。

我还优化了DNA提取和PCR反应的操作步骤，减少了潜在的污染和误差。

4. 数据分析和解释: 在PCR反应完成后，我对产生的数据进行
了分析和解释。

我使用统计学方法评估了扩增效率，并将结果与已知的参考数据进行了比较。

通过对扩增曲线和产物的大小进行分析，我能够确定目标序列的特异性和数量。

5. 结果和结论: 基于实验结果和数据分析，我得出了一些结论，
并提出了相应的建议。

我希望进一步优化PCR反应条件，尽量提高扩增效率和特异性。

另外，我还发现一些PCR反应中的问题，并提出了改进的措施。

总的来说，我的PCR工作经验使我对PCR技术有了更深入的理解，并提高了实验设计、操作和数据分析的能力。

在未来的工作中，我将继续应用这些技能，进一步拓展和应用PCR技术。

RT-PCR经验浅谈Hxwuchina做RNA病毒基因的RT-PCR成败的关键首先在于RNA模板的制备。

本人三年前做过一个正链RNA病毒全基因组分段扩增，设计方案是将全基因组分成7个片段，0.6kb-3.3kb不等，分别进行RT-PCR扩增，刚开始的三个月，我们课题组三个人辛辛苦苦，什么招都想过了，结果连一个片段都没有拿到。

后来有一个周末，我一个人安安静静做了一天，PCR跑胶的结果足以让我兴奋一个月：一下子隐隐约约出了3个片段！！！紧接着把胶里的弱带切下，水溶并后做二次扩增(注：跑胶总会吧，在UV下，参照marker，将特异性高，且与预期大小相同的DNA带切出，放在一个ep管里，加入适量无菌水，用枪头将胶反复搅碎，高速离心，小心吸取2ul上清用作模板，进行第二次PCR扩增)很快，三个预期的片段都得到了理想的扩增。

不到一个月，12kb的全基因组各片段全部收归囊下。

我这次成功的关键在于：提取RNA时，收集沉淀这一步。

离心速度不要低于13000rpm （r=5cm），提高离心速度、延长离心时间，在离心前的沉淀也尽可能在低温下长时间进行，这些时我本人总结出来的经验。

在后来的实验中，几乎每次RT-PCR都非常顺利，除了材料本身就没有目标基因。

这一次谈一下逆转录酶和逆转录反应的问题，在一般的逆转录反应中，较常用的是MMLV（鼠源的）和AMV（禽源的）两种，现在更有各家公司推出的耐热的（50-60度）、超长片段的逆转录酶，这方面具有专长的数gibco（现在并购于invitrogen）。

我们实验室使用的一般是MMLV，鼠源的酶，虽然活性比较低一点，但是对应的RNaseH 活性也很低，在长时间的逆转录过程中，不会造成模板的降解，获得cDNA的几率大，适用于较长的cDNA链的合成。

对于从细胞培养物中利用RT-PCR方法扩增mRNA丰度低的基因也很有效。

但是AMV也有其自身的优点，酶的活性很高，扩增1kb以下的基因时比较常用，我知道临床上血液检测中有时使用AMV，省时，也省试剂。