决明子超高效液相色谱指纹图谱研究

开题报告

生物技术

基于决明子有效成分的HPLC指纹图谱研究

一、课题研究意义及国内外研究现状

决明子为豆科植物决明Cassia obtusifoliaL.或小决明C. toraL.的干燥成熟种子,含蒽醌类和萘骈吡喃酮类等多种化学成分,具有清肝明目、润肠通便的功效。用于目赤涩痛、羞明多泪、头痛眩晕、目暗不明,大便秘结。

决明子有抗菌、抗真菌、降压、降血脂、抗血小板聚集的药理作用。

对于决明子的鉴别，《中华人民共和国药典》（2005年版，一部）以大黄酚、大黄素作为理化鉴别指标，此法虽然简单实用，但无法体现决明子中其他蒽醌、蒽醌苷、萘并吡喃酮类等药效成分的存在，因此仅以大黄酚、大黄素作为决明子的鉴别指标难以全面反映决明子的药用成分及质量优劣。

当前，研究中药指纹图谱技术在国内外已成为一种发展的趋势。我国国家食品药品监督管理局2000年8月颁发了《中药注射剂指纹图谱检测标准研究指导原则》《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》（国药管注[2000]348号）以来，中药指纹图谱的研究成为中药研究的热点。国家药品监督管理局要求到2002年末，所有申报的中药注射剂均应有相关的指纹图谱资料，包括中药原料、提取物、产品3种图谱，3种图谱的峰形必须有较大的相关性，否则不予受理。2003年国家科技部将指纹图谱研究列入“十五”重点攻关专项。近几年国家攻关计划中“常用中药的品种整理与质量研究”项目的开展，已经对200余种常用中药的本草考证、来源、产地、指标性成分含量测定等进行了系统研究。国外有关指纹图谱的报道无一例外地将指纹图谱作为鉴别项，用来评价植物药物的真实性以及产品质量的一致性。美国《植物药产品工业指南》中明确表示，允许植物药保健品申报资料提供色谱指纹鉴别图谱，在申报IND和CMC资料时，植物药物质和植物药产品的质量控制可以产用指纹图谱：英国植物药典（1986年）、印度植物药典（1998年）以及加拿大、德国等国家也接受色谱指纹图谱。

高效液相色谱法测定决明子中蒽醌类成份的含量

王宾豪 杨荣平 张小梅 龚桥 励娜

【摘要】 目的测定决明子中5种蒽醌类成份的含量。方式采纳高效液相色谱法。色谱柱：Shim-pack CLC-ODS C18柱；流动相：甲醇%磷酸水溶液梯度洗脱；流速：1 ml/min；λ：440 nm。结果该方式准确靠得住，重现性好。结论 该方式能够测定决明子中5种蒽醌类成份的含量。

【关键词】 高效液相色谱法 决明子 蒽醌

Abstract：ObjectiveTo determine the content of

anthraquinones in Semen Cassiae. MethodsHPLC method was

developed .The separation was performed on an ODS column with

the mobile phase of % phosphoric acid. The flow rate was 1ml/min

and the detection wavelength was 440 nm. ResultsThis method was

convenient and reliable. ConclusionThis method can be used to

determine the content of anthraquinones in Semen Cassiae.

Key words：HPLC; Semen Cassiae; Anthraquinones

决明子为豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具有清肝明目、润肠通便之功效，为临床经常使用中药［1］。其要紧化学成份为蒽醌类化合物。本实验采纳HPLC法同时测定了决明子中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的含量，为决明子中有效物质研究奠定了基础。

ＨＳＨＩＺＨＥＮ　ＭＥＤＩＣＩＮＥ　ＡＮＤ　ＭＡＴＥＲＩＡ　ＭＥＤＩＣＡ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　２００８　ＶＯＬ．１９　ＮＯ．４　时珍国医国药２００８年第１９卷第４期　效益和广阔的应用前景。黄芪多糖作为免疫增强剂已被应用于　临床且效果稳定，其促神经修复机制有待进一步探讨。　参考文献：　［１］　单俊杰，王顺春，刘　涤，等．黄芪多糖的化学和药理研究进展　［Ｊ］．上海中医药大学学报，２０００，１４（３）：６１．　［２］　刘飙，尹维田，崔凤双，等．周围神经损伤后免疫系统变化的动物　实验观察［Ｊ］．白求恩医科大学学报，２０００，２６（５）：４８５．　［３］Ｓｃｈｎｅｌｌ　Ｌ，Ｆｅａｒｎ　Ｓ，ＳｃｈｗａｂＭＥ，ｅｔ　ａ１．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ａｃｕｔｅｉｎｆｌａｍ—　ｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ａｎｄ　ｓｐｉｎａｌ　ｃｏｒｄ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｍｐａｔｈｏｌ　Ｅｘｐ　Ｎｅｕｍｌ，　１９９９，５８（３）：２４５．　［４］Ｌｉｓａｋ　ＲＰ．Ｂｅａｌｍｅ￣Ｂ．Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｏ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一１　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ—　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ｒａｔ　Ｓｃｈｗａｎｎ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ『Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏ－　ｉｍｍｕｎｏｌ，１９９１，３１（２）：１２３．　［５］　ＧｅｏｒｇｅＫ．Ｔｏｆａｒｉｓ，ＰａｕｌＨ．Ｐａｔｔｅｒｓｏｎ，ＫｒｉｓｔｊａｎＲ．Ｊｅ￣ｅｎ．ｅｔ　ａ１．Ｄｅｎｅｒｖａｔ—　ｅｄ　Ｓｃｈｗａｎｎ　Ｃｅｌｌｓ　Ａｔｔｒａｃｔ　Ｍａｃｍｐｈａｇｅｓ　ｂｙ　Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　Ｉｎｈｉｂｉ・　ｔｏｒｙ　Ｆａｃｔｏｒ（ＬＩＦ）ａｎｄ　ｏｎｏｃｙｔｅ　Ｃｈｅｍｏａｔｔｒａｃｔａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｉｎ一１　ｉｎ　ａ　Ｐｌ＇ｏｃｅ￥８　Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｂｙ　Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ一６　ａｎｄ　ＬＩＦ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｅｕｍｓｃｉｅｎｃｅ，　Ａｕｇｕｓｔｌ，２００２．２２（１５）：６６９６．　［６］Ｓｃｈａｆｅｒ　ＫＨ，Ｍｅｓｔｒｅｓ　Ｐ，Ｍａｒｚ　Ｐ，ｅｔ　ａ１．Ｔｈｅ　ＩＬ一６／ｓｌＬ一６Ｒ　ｆｕｓｉｏｎ　ｐｒｏ－　ｔｅｉｎ　ｈｙｐｅｒ——ＩＬ—－６　ｐｒｏｍｏｔｅｓ　ｎｅｕｒｉｔｅ　ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｎｅｕｍｎ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｉｎ　［７］　［８］　［９］　［１Ｏ］　［１２］　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｅｎｔｅｒｉｃ　ｎｅｕｒｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ　Ｃｙｔｏｋｉｎｅ　Ｒｅｓ．１９９９　Ｍａｙ，１９　（５）：５２７．　Ｅｋｓｔｒｅｍ　ＰＡ，Ｋｅｒｅｋｅｓ　Ｎ，Ｈｏｋｆｅｈ　Ｔ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒ　ｎｕｌｌ　ｍｉｃｅ：ｕｎｈａｍｐｅｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｓｅｎｓｏｒｙ　ａｘｏｎｓ　ｂｕｔ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ｓｔｉｍ・　ｕｌａｔｏｒｙ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｂｙ　ｎｅｒｖｅ　ｓｅｇｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｌｅｔｔ．２０００　Ｍａｒ　１０；　２８１（２～３）：１０７．　张艳，梁华平．黄芪多糖对烧伤小鼠细胞免疫功能的作用及机理　探讨［Ｊ］．中国实验临床免疫学杂志，１９９５，７（２）：４１．　梁华平，张艳，王正国．等．黄芪多糖、人参茎叶皂甙对创伤子鼠　血浆及免疫细胞内ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ的影响［Ｊ］．中国病理生理杂志，　１９９５，ｌ１（６）：５９５．　胡庭俊，程富胜，陈炅然，等．黄芪多糖对小鼠免疫细胞信号转导相　关分子的影响［Ｊ］．畜牧兽医学报，２００５，３６（６），６１６．　Ｐｓｈｅｎｉｃｈｋｉｎ　ＳＰ，Ｓｚｅｋｅｌｙ　ＡＭ，Ｗｉｓｅ　ＢＣ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　ｐｏｓｔ　ｔｒａｎ・　ｓｃｒｉｐｉ—ｆｉｏｎａｌ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｎｔｅｒｌｅｕｌ一１．ｓｔｅｒｏｉｄ　ａｎｄ　ｐｒｏ—　ｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅ　Ｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｅｒｖｅ　ｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｉｎ　ｃｏｒｔｉｃａｌ　ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，１９９４，６３（２）：４１９．　邱培勇，徐自超，陈正跃，等．黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响［Ｊ］．　新乡医学院学报，２００６，２３（６），５８５．　高效液相色谱法测定决明子　不同清炒品中５种蒽醌类成分的含量　王宾豪　，杨荣平ｈ，张小梅　，龚桥　，励娜　（１．重庆市中药研究院，重庆４０００６５；２．重庆邮电大学，重庆４０００６５）　摘要：目的研究决明子不同清炒品中５种醌类成分含量的变化。方法采用高效液相色谱法。色谱柱为Ｓｈｉｍ—ｐａｃｋ　ＣＬＣ—ＯＤＳ　Ｃ。８柱；流动相为甲醇一０．１％磷酸水溶液梯度洗脱；流速１　ｍｌ／ｍｉｎ；波长４４０　ｎｉｎ。结果该方法准确可靠，重复　性好。结论清炒温度越高，决明子中游离蒽醌含量有变大趋势，结合蒽醌含量有变小趋势，总蒽醌含量变化不大。　关键词：高效液相色谱法；　决明子清炒品；　蒽醌　中图分类号：Ｒ２８３．１；Ｒ２８４．２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－０８０５（２００８）０４－０８５３－０２　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ　ｉｎ　Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｓｅｍｅｎ　Ｃａｓｓｉａｅ　Ｆｒｉｅｄ　ｗｉｔｈｏｕｔ　Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｂｙ　ＨＰＬＣ　ＷＡＮＧ　Ｂｉｎ－ｈａｏ　，ＹＡＮＧ　Ｒｏｎｇ－ｐｉｎｇ　，ＺＨＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｍｅｉ　，ＧＯＮＧ　Ｑｉａｏ　，ＬＩ　Ｎａ　（１．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍａｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｗａ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００６５，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＰｏｓｔｓ　ａｎｄ￣ｌｅｃｏｍｍｕｗａｔｉｏｎｓ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ　４０００６５，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｖａｒｉｅｔｙ　ｏｆ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅ　ｉｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　Ｓｅｍｅｎ　Ｃａｓｓｉａｅ　ｆｉ４ｅｄ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｉｎｇｒｅｄｉ—　ｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ，Ｔｈｅ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ　ｏｎ　ａｎ　ＯＤＳ　ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ＣＨ１　ＯＨ　一０．１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ　ａｃｉｄ．Ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　１　ｍｌ／ｍｉｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　３２０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｃｏｎｖｅｎ—　ｉｅｎｔ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｔｈａｔ　ｆｒｉｅｄ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ　ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｈｉｇｈ．ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｉｓ　ｍｏｒｅ　ｒｉｃｈ，ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｉｓ　ｌｅｓｓ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｖｅ　ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｌｉｔｔｌｅ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；　Ｓｅｍｅｎ　Ｃａｓｓｉａｅ；　Ｆｒｉｅｓ　ｗｉｔｈｏｕｔ　ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ　ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ：　Ａｎｔｈｒａｑｕｉｎｏｎｅｓ　决明子为豆科植物决明Ｃａｓｓｉａ　ｏｂｔｕｓｉｆｏ舰Ｌ｜或小决明Ｃａｓｓｉａ　ｔｏｒａ　Ｌ．的干燥成熟种子。性味甘、苦、咸、微寒，归肝、大肠经。具　有清肝明目、润肠、通便之功效，为临床常用中药　。其主要化　收稿日期：２００７－０６－２８；修订日期：２ｏｏ７一ｌ１—１８　基金项目：重庆市科委攻关项目（Ｎｏ，２００４ＡＡＡ５００４）　作者简介：王宾豪（１９８２一），男（汉族），河北石家庄人，现任重庆市中药研　究院实习研究员，学士学位，主要从事药物质量标准的研究工作．　‘通讯作者简介：杨荣平（１９７５一），女（汉族），重庆人，现任重庆市中药研　究院副研究员，博士学位，主要从事中药新制剂新剂型研究工作．　学成分为蒽醌类化合物。决明子在历史文献中有醋制、炒制、火　炙及酒制４种炮制方法，其中以炒制在文献中记载最多，且沿用　至今　。在炒制过程中，由于受热等因素的影响，其化学成分及　药理作用均有所变化。本实验采用ＨＰＬＣ法分别测定了它们中　芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚蒽醌类成分的　含量，研究不同清炒品中蒽醌的含量变化，以期为决明子的基础　研究和工业饮片炮制提供实验依据。　１仪器与材料　Ｌｃ一１０ＡＴｖｐ高效液相色谱仪（日本岛津公司）。ＡＥＧ一４５ＳＭ　电子天平（十万分之一，日本岛津公司）；芦荟大黄素（批号０７９５　・８５３・

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