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螺旋藻中藻蓝蛋白提取的工艺流程王艺生物技术二班20100404071、预处理将螺旋藻洗净晾干2、细胞破碎利用超声波破碎发破碎细胞，藻胆蛋白属于胞内蛋白质，要提取分离藻胆蛋。
首先必须要破坏藻类细胞的细胞壁、细胞膜，使藻胆蛋白以溶解的状态释放出来，并保持其活性。
超声波细胞粉碎仪破碎鱼腥藻细胞的最佳处理条件是超声仪的功率为600 W，超声时间为9min，固液比为1：8，破壁容量为20 mL。
也可与其他方法合用最大限度的破碎细胞。
3、提取（初步分离）（1）用超滤膜过滤藻胆蛋白提取液，获得藻胆蛋白粗制品。
用NaNO3，高渗一超滤法分离提纯藻胆蛋白，超滤时选用聚砜膜，在超滤过程中，无机盐和小分子蛋白质，包括小分子的藻毒素透过滤膜而去掉，特别适用于易产生水华的微囊藻脱毒，提高产品的安全性。
NaNO3高渗．超滤法是提取藻胆蛋白的简单易行的方法，用此法提取的藻胆蛋白是安全无毒的，且易于纯化，脱水方便，产品易于干燥。
（2）也可利用沉淀法将大量盐加到蛋白质溶液中，蛋白质胶粒凝结并沉淀析出，因此向细胞破碎液中加入盐溶液使蛋白质沉淀析出。
用25％硫酸铵可将藻红蛋白沉淀出，用30％硫酸铵可将藻蓝蛋白沉淀出，再用50％硫酸铵可将蓝藻蛋白沉淀出。
4、精制（高度纯化）离子交换层析法，用 DEAE一步纯化藻蓝蛋白；改变传统以离子强度作梯度洗脱的方法，根据藻红蛋白的等电点进行pH梯度洗脱，仅用DEAE一步层析，就将藻红蛋白纯度从1.042提高至5.6，回收率达67.33％。
用硅藻土545柱分级洗脱，再用该法纯化，从螺旋藻中获得初度为4.1的藻蓝蛋白和纯度为4.6的别藻蓝蛋白；将提取液上DE。
AE一52纤维素柱，提取纯度只有1.9，在上葡聚糖凝胶柱，则得到了纯度较高的蓝藻蛋白。
5、成品制作随着藻蓝蛋白制品的应用范围的不断扩大，对提取分离工艺的要求也逐渐提高。
不仅要有高的提取率、好的产品质量，而且要考虑省时、省力、自动化程度高。
利用缓慢冷却加晶种的方法使藻蓝蛋白结晶，干燥后进行保存。
富营养化湖泊中藻类蛋白特征及其资源化开发程宇凯;秦可娜;魏亮亮;涂剑成;赵庆良【摘要】藻类的大量繁殖是富营养化水体最显著的污染特征。
介绍我国富营养化水体中藻类生长特性、营养价值，就藻类蛋白在食品、药品、光电材料、生物探针、环境监测、毒素等方面的资源化开发利用进行了综述，相关研究成果对富营养化水体中藻类蛋白的资源化开发利用具有重要的意义。
%The abundant growth of algae is the main waste characteristic of eutrophic lake and other water.In this paper, the growth characteristic, ecology and alimentation of algae in eu-trophic lake and other water were reviewed.Specifically, the interferences of algal blooms on lakes were briefly addressed.The apply methods, such as food, medicine, photoelectricity material, toxin were introduced significantly.The foregrounds of the applying of algae were forecasted as a conclusion.【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】5页(P201-205)【关键词】富营养化水体;藻体蛋白;物化特征;开发应用【作者】程宇凯;秦可娜;魏亮亮;涂剑成;赵庆良【作者单位】南昌水业集团，南昌330025;哈尔滨工业大学市政环境工程学院，哈尔滨150090;哈尔滨工业大学市政环境工程学院，哈尔滨150090;南昌水业集团，南昌330025;哈尔滨工业大学市政环境工程学院，哈尔滨150090【正文语种】中文【中图分类】X524水体富营养化是指生物营养物质氮(N)、磷(P)等无机营养物质大量进入相对封闭或水流缓慢的水体后，在适宜的水域物理化学环境因素综合作用下，引起藻类及其他浮游生物大量繁殖，水质恶化，甚至鱼类及水生生物大量死亡的现象[1].目前环境领域中所说的水体富营养化多指由于人类的过度活动引起的水体中氮、磷等营养物质富集的而使浓度过高的现象，通常情况下，水体富营养化在诸如湖泊及水库等封闭水体中较容易出现[2-3]；当前我国湖泊面积70 988 km2，约占全国陆地总面积的0.8%，大于1 km2的天然湖泊有2 300余个，据统计2013年我国富营养、中营养和贫营养的湖泊(水库)面积比例分别占到总湖泊(水库)面积的27.8%、57.4%和14.8%，水体富营养化严重[4].此外，我国的湖泊环境非常脆弱，再加上湖泊中的营养物质来源广、背景浓度高，使得湖泊富营养化进程有进一步加速的趋势，如武汉东湖、杭州西湖、云南滇池、南京玄武湖、江苏太湖等富营养化严重[5-6].藻类是水体生态系统中最主要初级生产者，绝大部分藻类个体较小、营养丰富、生长繁殖迅速、环境适应性强，能对太阳能高效利用，是水体富营养化的一个重要特征[7-8]，不同的水体中的藻类分布不同，其中在淡水水体中的藻类主要有绿藻，蓝藻等，而在咸水水体中的藻类主要有甲藻、蓝藻等.虽然藻类是水体富营养化的罪魁祸首，但是，藻类作为一种高蛋白和高糖的天然物质，其自身有很多经济实用价值，怎样对富营养化水体中的藻类加以利用，成为我们控制水体富营养化的另一条出路.2.1 藻类的生态学特性藻类通过光合作用进行生长，可在富营养化水体中大量繁殖，因此利用水面生产高质量的藻类蛋白质，可实现江河湖海农牧化，可解决耕地资源减少给农业的发展带来的困难等问题[9].藻类生长过程中的光合作用可吸收CO2，并释放氧气，在完成藻类自身生长的同时，优化空气质量.例如在实际生产过程中若生产200 g鲜藻，约放氧66.6 L，相当于246 m2草坪的放氧能力[10].所以，藻类蛋白资源的开发利用，在实现藻体中有用物质资源化利用的同时，将发挥藻类生态学功能，必将为人类社会的发展做出巨大的贡献.2.2 藻类中蛋白的含量及特性藻类具有极强的光合成能力，藻类的光能利用率可达18%，光合效率达43%，是一般农作物的1.4～3倍，故其具有生长繁殖快，周期短(人工栽培时从接种培养到收获只需5～8 d).此外，藻类中蛋白质含量极高，一般藻体干细胞中蛋白质的含量约占到50%～70%，故每公斤干藻含植物中蛋白可达500～700 g，该部分蛋白可作为食品、保健品等加以开发利用[4].蓝藻作为藻类中较特殊的一种，在富营养化湖泊中大量繁殖生长，其主要成分为藻胆蛋白、多糖、脂肪、氨基酸等，通常情况下1t蓝藻干物质经加工后可生产天然蓝色素 50 kg、藻多糖 10 kg、藻毒制品1 kg [11].2.3 藻类蛋白的营养学特性藻体中含有大量的高蛋白物质和不饱和脂肪酸(PUFA)，其中PUFA的主要成分为二十五碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，上述营养物质不仅价值高，且无腥臭味，不含胆固醇[12]，另外，藻体蛋白中还有鱼类等赖以生存的微量元素.所以，藻体蛋白还可以作为渔业中的饲料，即达到了去处藻类的作用，还可以产生巨大的经济效益.3.1 藻蓝蛋白在食品、医疗等领域的开发应用藻蓝蛋白是蓝藻、红藻等藻类中特有的捕光色素蛋白[13]，其质量分数约占藻体细胞干质量的18%，在食品、医疗、化妆品等工业领域均有广泛应用[14-15].藻蓝蛋白作为一种少见的水溶性色素蛋白，颜色鲜艳，可作为天然食用色素改善食品色泽；藻蓝蛋白具有齐全的氨基酸组成，必需氨基酸含量高，是一种营养丰富的蛋白质，如目前我国已有10余种以螺旋藻片和胶囊为主要成分的保健食品.据科学研究表明，藻蓝蛋白具有刺激红细胞集落生成，可提高人体免疫力、促进血红细胞生成、抑制癌细胞，故其在医疗领域具有广泛的应用前景.陈红兵[16]等研究发现藻蓝蛋白对短暂性脑缺血后的神经元损伤有明显的保护作用；李继发[17]等研究表明藻蓝蛋白对胰岛细胞具有一定的保护作用；章申峰[18]等报道浓度大于40 μmol/mL的藻蓝蛋白可在体外显著抑制肺腺癌细胞的生长；Haizhen Wang[19]等发现藻蓝蛋白的p亚基具有抗癌作用.此外，藻蓝蛋白还具有抗氧化、清除自由基等特性[20]，能起到补血、丰胸的作用；Patel等[21]进行了藻蓝蛋白体外抗氧化活性研究，发现其对过氧化氢基团和羟基的消除效果良好.Romay等[22]证明从极大节旋藻中提取的藻蓝蛋白具有抗炎症和抗氧化的作用.藻蓝蛋白还具有优良的荧光特性、理想的光敏作用，其具有很强的二次电子发射能力和优良的光电性能，可作为细胞和分子的荧光标记物[23-24].目前，藻蓝蛋白常用的提取方法有反复冻融法、双水相萃取技术、化学试剂处理法、膜分离技术、溶胀法、扩张床吸附技术、超声波法等[25-26].3.2 藻类中蛋白在光电材料中的开发应用藻胆蛋白中具有光合作用的捕光功能的蛋白主要分为藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、藻红蓝蛋白和藻红蛋白四大类.藻胆蛋白一般含有α和β亚基，上述亚基中则含1～2个辅基色素，使得藻胆蛋白具有特殊的光谱吸收性质，对光的响应性灵敏度高，通常情况下可在可见光范围内完成光电信息转换，故有研究者已将基于藻胆蛋白开发出新型的生物光电材料.周林等采用静电组装技术成功地制备了基于B-藻红蛋白的多层复合薄膜，所制的薄膜的最大吸光度和光致发射强度均与组装层数呈线性递增关系，光学效应明显[27].周明等通过将人体红细胞膜上的血型糖蛋白A中的跨膜片段基因和藻红蓝蛋白基因片段的N 端的分子设计，实现了α-PEC的分子构建，为藻红蓝蛋白在生物光电材料中的应用打下了基础[28].总体上，藻蛋白的可逆光致变色特性强、耐热性好、耐疲劳性强、可固定性好，具有的独特的应用前景.如赵开弘等人经过对天然藻红蓝蛋白α亚基(α～PEC)研究指出：1) 在pH 为7.2 下提取的α～PEC稳定性较好，可长期保持较高的可逆光致变色特性；2)α～PEC 具有较好的热稳定性，在60 ℃以下能长期保持高光化学活性；3)α～PEC 在反复循环光照上万次后仍具有光化学活性，耐疲劳性强； 4)琼脂糖是α～PEC 较好的固定包埋剂，包埋工艺简单，透明度高，有利于通过对α～PEC 的固定化构建光电器件，实现光电信息转换[29].3.3 藻胆蛋白生物探针开发藻胆蛋白作为一种新型的性能优良的生化探针广泛应用于免疫细胞化学、免疫组织化学、流式细胞荧光测定、荧光激活细胞分选、共聚焦激光显微镜、单分子检测等荧光免疫分析测试[30].20世纪80年代初, 美国加利福尼亚大学的Glazer等[31]最先研制藻胆蛋白探针，通过双功能试剂SPDP将藻红蛋白和生物素等交联，发现交联后的藻红蛋白其发射光谱和荧光产量没有改变，并且藻红蛋白荧光检测具有极高的灵敏度.Parks等人[32]于1984年又将别藻蓝蛋白开发为荧光探针.此后，藻胆蛋白荧光探针相继在医学检测、人源疾病病毒、动物病毒、植物病毒检测中应用，陈良华[33]将藻红蛋白荧光探针应用在烟草花叶病毒的免疫荧光检测，具有较好的特异性；颜世敢等[34]首次应用纯化的R-藻红蛋白与H9 亚型禽流感病毒抗体交联制备荧光探针，成功用于H9 亚型禽流感病毒的检测.与传统荧光染料相比，藻胆蛋白荧光探针具有如下优点[35]：1)藻胆蛋白在pH=4～10之间吸收光谱无明显变化，液、固状态的藻胆蛋白均十分稳定；2)光吸收能力强，色基多，荧光量子产额高；3)荧光波长在550～700 nm的橙红光区，荧光背景干扰少；4)藻胆蛋Stokes位移大，高达80 nm，而普通荧光素通常小于30 nm；5)藻胆蛋白等电点在4.7～5.3范围内，生理溶液中带负电荷，较难发生非特异性吸附；6)天然生物大分子不会使其荧光猝灭；7)其表面具有如-SH基等活性基团，交联方便；8)藻胆蛋白在溶液状态下极其稳定，与抗体结合后不影响其光谱特性，且能保持抗体免疫特征.藻胆蛋白正因为有上述优点，其在免疫检测上显示出广泛的应用前景.3.4 藻胆蛋白在环境监测方面的应用水体富营养化引起蓝藻等水生植物异常生长，导致部分水体出现水华或赤潮现象严重破坏了水体生态平衡，因此及时掌握蓝藻分布，实现对蓝藻连续实时原位监测，是水华预警的重要环节[36].藻蓝蛋白和藻红蛋白是蓝藻进行光合作用时吸收、转化和传递光能的重要辅助色素，这两种色素具有特征性的荧光光谱吸收峰和发射峰，可用来进行荧光特性分析，故在环境污染监测方面发挥巨大的作用.虽然荧光分析法会受到细胞世代、营养盐浓度、光照条件等外部因素影响，但因其操作简易仍然是检测蓝藻生物量的较好方法，目前国内外已广泛应用这种方法监测水库、湖泊中的蓝藻并对其进行卫星遥感监测.陈纬栋等[37]通过对蓝藻活体进行荧光光谱扫描，确定藻蓝蛋白的最佳荧光激发、发射波长，建立了蓝藻生物量与藻蓝蛋白特征荧光强度之间的关系.Dekker等[38]通过对藻蓝蛋白进行监测的方法，较为详细的研究了澳大利亚昆兰士东南水域中的蓝藻.李发荣等[39]使用荧光水质监测仪及时获取了蓝藻生物量数据，并与3S技术结合，形成可视化的滇池蓝藻浓度分布图，为水环境监测提供技术支撑.3.5 藻蛋白中藻毒素的开发应用已知的蓝藻藻蛋白毒素主要是两类：1)肝毒素，主要包括七肽微囊藻毒素、moipurin等，以微囊藻毒素为代表；2)神经毒素，主要以鱼腥藻毒素为代表[40].如滇池中蓝藻的主要优势藻为微囊藻，微囊藻毒素主要是由Microcystis、Anabaena、Oscillatoria、Nostoe等属中的种类产生[41]，上述藻毒素可引起肝损伤，是已知的促肿瘤形成因子之一.但是，藻毒素作为一种天然的毒素，在生物、制药等方面有很大的用处，故对藻毒素的开发应用的前景十分明朗.如在富营养化湖泊中较为常见的鱼腥藻分子结构具有半刚性，不易被酶解，能作用于突触后膜，是一种高效拟胆碱去极化神经肌肉阻滞剂[42-43]，由于其高活性和分子刚性，成为研究烟碱样胆碱受体与配基相互作用的有效探针[44].申晴等[45]将微囊藻毒素(MC-LR)做为模板，以邻氨基酚为单体，应用循环伏安法在金电极的表面电聚合成膜分子印迹材料，制成了可快速检测富营养化水体中微囊藻毒素的传感器.另微囊藻毒素因其稳定的化学结构，其对肝脏极强的靶毒性引起医学界高度重视，有研究学者设想将其脱毒后作为研究肝病的专一性载体.3.6 藻蛋白中色素的提取及应用从微藻中可以提取的色素主要有β-胡萝卜素、虾青素、藻蓝蛋白等[46].如β-胡萝卜素可以从杜氏澡中提取，虾青素可从雨生红球藻中提取，而藻胆蛋白可从蓝藻、红藻、雨藻中提取.所有这些色素在社会生产生活中都有很广泛的用途，是未来藻蛋白开发过程中的一个重要方向.藻蓝蛋白色素多从念珠藻、蓝藻、螺旋藻中提取，主要成分为藻青素[47].如从螺旋藻提取的可食用色素[15]以叶黄素及胡萝卜素为主要组分，另其中含有的蓝色素更是目前天然食用色素品种中较罕见的色素之一.目前，从藻类中提取色素的常规工艺主要包括CO2超临界萃取技术(SPE)和溶剂法等[27-28].从藻蛋白中提取色素可解决目前天然色素开发中原料来源少、价格昂贵等问题，还可解决水体富营养的问题，可谓一举两得.3.7 藻胆蛋白作为药品的研究及应用藻蛋白的特殊化学结构使得其在药品的开发方面具有很大的潜力，如藻胆蛋白具有一定的抗病毒活性，对抑制肝肿瘤细胞的淋巴细胞活性方面效果显著，可提高肌体免疫性.2003年，Shih等[48]研究发现从钝顶螺旋藻中提取的别藻蓝蛋白能有效抑制肠道病毒，有望开发成抗肠道病毒药物.哈佛医学院的Schwardz和Shilar在1986年就发现藻胆蛋白对一些癌细胞有抑制作用[49].此后Morcos等用0.25mg/mL 的藻蓝蛋白处理小鼠骨髓瘤细胞，在激光辐射对照下细胞存活率由15%提升到71%.研究还表明藻蓝蛋白对骨髓造血具有刺激作用，可用于临床辅助治疗各种血液疾病，对血癌有治疗作用[50]；另外，藻体中的多糖可提高机体抗病毒和抗肿瘤能力，提高机体的免疫调节作用等[40].除此之外，藻体蛋白在艾滋病的防治方面具有很大的开发潜力，如1997年 Boyd等[41]从蓝藻 Nostoc ettipsosporum中分离得到一种具有独特的抗病毒活性的水溶性糖蛋白Cyanovirin，Cyanovirin能与病毒表面衣壳蛋白上的甘露寡糖结合，阻止病毒与宿主细胞表面的受体结合，对各种严重的 RNA逆转录病毒具有抗病毒活性.上述获得的抗病毒多肽经基因工程改造并大规模生产后可作为艾滋病治疗药物[29] .3.8 藻蛋白其他方面的应用藻类除了在以上几个方面的应用之外，在生物抗生素、动植物生长促进剂方面也有很大的开发前景，下面就介绍一下藻蛋白在这两方面的一些应用.生物抗生素：利用海洋微藻可以用来生产用于人类或动物健康方面的活性化合物，从蓝藻中已分离提取的诸如有机酸、脂肪酸、溴酚、丹宁、多糖及醇类的许多抗生素，具有抗癌、抗细菌、抗真菌及抗病毒活性化合物的作用，有些抗生素甚至在抗肿瘤、抗艾滋病方面有重要作用.动、植物生长促进剂和调节剂：小球藻蛋白及螺旋藻蛋白的部分组成成分能加速动物细胞的生长速率，某些微藻蛋白提取液能促进植物生根、发芽、生长等.藻类蛋白的高利用价值越来越受到学者的广泛关注，并且有大量的学者就富营养水体的藻类利用展开了研究.可以看出的是，对藻类的开发利用不仅能够实现对富营养化水体中藻类的资源化利用，而且能够实现对污染水体的综合治理，可谓一举两得.另外，藻体蛋白的综合利用涉及光电材料、生物探针、卫生保健、医药开发、色素生产等诸多领域，不仅应用范围广，而且与我们人类的日常生活息息相关，前景十分广阔.【相关文献】[1] 李安峰, 潘涛, 杨冲, 等. 水体富营养化治理与控制技术综述[J]. 安徽农业科学, 2012, 40(16): 9041-9044.[2] 尹星, 李如忠, 杨继伟, 等. 基于延拓盲数的湖库水体富营养化评价模型[J]. 环境科学学报, 2014, 34(4): 1045-1053.[3] 王和云, 于丹, 倪乐意. 浅析轮藻植物与水体富营养化的关系[J]. 长江流域资源与环境, 2014,23(05): 693.[4] 杨俊, 夏东升, 曾庆福. 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目录一、海洋科技成果汇编（一）海洋生物制品及药物1.脂肪酶抑制剂Orlistat的研制开发 (6)2.氨基葡萄糖盐酸盐生产技术 (7)3.大海里的小巨人--有孔虫及其模型／雕塑制作与开发 (9)4.对虾暴发性流行病病原核酸探针点杂交检测试剂盒 (10)5.富含EPA或DHA海洋微藻胶囊开发技术 (10)6.高密度培养雪藻生产不饱和脂肪酸 (11)7.国家一类新药——抗动脉粥样硬化海洋药物几丁糖酯 (11)8.海水养殖鱼虾清洁生产及其产品安全技术 (12)9.海水养殖鱼虾用肽聚糖免疫增强剂的研制与应用 (13)10.海洋保健食品海奇 (13)11.海洋碱性蛋白酶和溶菌酶的研究与开发 (14)12.海洋生物蛋白酶的开发与应用 (14)13.海洋生物活性豆奶开发技术 (15)14.海洋生物酶绿色生态制剂的产业化开发 (16)15.海洋生物溶菌酶的研究与开发 (16)16.海洋生物源磁性纳米材料的开发应用 (17)17.海藻多糖胶囊产业化项目 (17)18.成果名称：红球藻工程开发技术 (18)19.降血糖海洋新药OSS的研制 (18)20.抗艾滋病海洋药物聚甘古酯 (19)21.抗老年性痴呆海洋新药HSH-971 (20)22.抗脑缺血海洋药物D-聚甘酯 (20)23.抗尿路结石海洋药物古糖酯 (21)24.抗血管生成药物-重组鲨鱼软骨蛋白因子 (22)25.抗肿瘤海洋生物新药 (22)26.抗肿瘤海洋一类新药---镭普克 (23)27.抗肿瘤新药红藻多糖酯（CPS） (23)28.孔石莼多糖的提取 (24)29.皮肤组织修复海洋生物材料 (24)30.新型鱼虾复合免疫增强剂研究与开发 (25)31.烟草专用海洋生物制剂农乐二号 (25)32.一种适用于海参育苗生产的特效杀虫剂 (26)33.有毒亚历山大藻种群识别与计数方法的研究 (26)34.藻胆蛋白的分离纯化技术及应用 (27)35.真鲷、河鲀、牙鲆促生长剂的研究 (27)36.新型海藻植物生长剂 (28)37.新型化控植物生长营养素 (28)38.“海状元818”液体生物肥 (29)39.大型海藻―海带综合利用新技术的研究与开发 (30)40.功能性食品添加剂小分子甲壳胺生产技术 (31)41.寡糖新产品开发技术 (31)42.海洋活性化妆品生产技术 (33)43.甲壳质及其衍生物的开发应用 (34)44.稼棵安——植物营养素生产技术 (35)45.牡蛎壳土壤调理剂 (36)46.鱼肉水解蛋白粉工厂化生产技术 (37)47.智能盐碱土壤修复材料制备技术 (38)48.海洋生物源杀虫剂JMT简介 (38)49.海藻多酚抗氧化剂的制备及其应用 (39)50.海藻抗逆植物生长剂 (39)（二）海洋化工51.AE活性酯 (40)52.N,N’-二环己基碳二亚胺 (40)53.高性能水中防腐涂料 (41)54.功能陶瓷制备技术 (41)55.甲磺酸达氟沙星 (42)56.零排放非晶态耐蚀合金镀液 (42)57.绿色综合水处理剂 (43)58.马尾藻碘晶 (44)59.镁系溶雪剂的低成本生产新工艺 (44)60.纳米级浆料的研制及在纯棉高密织物浆纱中的应用 (4444)61.室温固相反应法生产高纯纳米碳酸钡 (45)62.水热晶化法制备阻燃型氢氧化镁 (46)63.甜菜碱系列产品 (4646)64.溴系列精细化学品 (48)65.盐酸二氟沙星 (48)66.一种新型阻燃增强材料——镁盐晶须 (50)67.油田注水管道内壁防腐蚀涂层的研制 (50)68.钢铁设施在海洋环境中的腐蚀及其防腐技术 (51)69.工业废水处理絮凝剂与工业固体废弃物固化剂生产技术 (51)70.废弃物白泥综合利用技术 (52)（三）海洋工程、电子、信息设备71.海洋测量仪器 (53)72.海洋钢结构物腐蚀智能检测机器人研究开发 (55)73.海洋钢铁设施腐蚀状态跟踪扫描系统 (55)74.基于GIS的应用信息系统开发 (56)75.可遥控腐蚀电位测量仪 (61)76.宽视角水下激光电视 (62)77.海洋平台局部损伤检测技术 (62)（四）海洋环境78.贝类养殖区老化和荒芜滩涂修复与调控试验示范……….. .. 6479.对虾养殖环境生物修复技术 (64)80.改性粘土体系治理有害赤潮的机制研究 (65)81.海湾系统养殖容量与环境优化技术 (66)82.海洋环境防腐蚀新技术及其产业化研究 (67)83.海洋环境腐蚀能力现场监测技术 (67)84.海洋生态与环境评价技术 (68)85.海藻资源高值化利用及环境治理新途径 (6868)二、中科院烟台海岸带可持续发展研究所科技成果汇编1. 一种非激素类饲料添加剂及其制备方法 (69)2. 富硒胶原蛋白-菊粉胶囊 (69)3. 钒多糖及其衍生物的制备及其降血糖应用 (70)4. 天然高效抗海洋生物污损活性剂……………………………………….71.5. 糖衍生物类吸湿保湿剂 (72)6. 用于重金属废水处理的生物吸附剂 (72)7. 海洋生物制品物性仪 (73)8. 户用自动化沼气罐项目………………………………………………….74.三、其他院所项目（一）山东大学1、海洋生物蛋白资源的高值化加工 (76)2、红蓝藻藻胆体纳米荧光颗粒的研制与应用 (76)3、低分子肝素脂质体喷胶 (77)4、LMWH-SOD……………………………………………………………..78.5、重组南瓜胰蛋白酶抑制剂 (79)6、硫酸皮肤素项目简介 (79)7、依诺肝素钠（Enoxaparin sodium），原料药和预灌装注射剂 (82)8、达替肝素(Dalteparin sodium), 原料药和预灌装注射剂 (82)9、那曲肝素钙（Nadroparin calcium），原料药和预灌装注射剂 (82)10、帕肝素钠（Panaparin sodium），原料药和预灌装注射剂 (82)11、硫酸皮肤素及低分子硫酸皮肤素 (82)12、治疗关节炎口服制剂 (82)13、用于解酒的保健食品 (83)14、生物多肽原料及其制剂生产 (83)15、口服胰岛素制剂研究 (83)16、水溶性芦丁片的研究 (83)17、一种治疗妇女更年期的药物 (84)（二）山东中医药大学1、银络胶囊 (84)2、肺积宝胶囊 (84)3、舒心胶囊 (85)4、消渴降糖颗粒 (85)5、清营抗感颗粒 (85)6、痤疮净凝胶…………………………………………………………………85.7、徐长卿规范化种植研究 (86)8、全蝎规范化养殖研究 (86)（三）山东省中医药研究院1、目前独立开发的可转让项目及技术服务……………………………….86.2、联合开发的可转让项目 (87)3、地麦宁心颗粒 (87)4、金虎胆康颗粒 (88)5、血升康颗粒 (89)6、功劳去火颗粒 (90)7、八正颗粒 (91)8、参苓白术咀嚼片 (91)一、海洋科技成果汇编（一）海洋生物制品及药物1、脂肪酶抑制剂Orlistat的研制开发肥胖是一种比较复杂的疾病，是基因（遗传）与生存环境交互作用的结果。
目录1 文献综述 (1)1.1 紫球藻研究简介 (1)1.2 藻胆蛋白研究概述 (1)1.3 藻红蛋白概述 (1)1.4 藻胆蛋白分离纯化的研究进展 (1)1.4.1 破碎细胞方法 (1)1.4.2 藻胆蛋白的粗分离方法 (2)1.4.3 藻胆蛋白的纯化 (2)1.5 论文工作的选题目的、意义及研究内容 (3)2 材料与方法 (4)2.1 试验材料 (4)2.1.1 原料 (4)2.1.2 药品与试剂 (4)2.1.3 培养基 (4)2.1.4 常用溶液的配制 (5)2.1.5 仪器与设备 (5)2.2 试验方法 (6)2.2.1 紫球藻的培养 (6)2.2.2 紫球藻细胞的破碎 (7)2.2.3 藻红蛋白粗提液的超滤 (7)2.2.4 藻红蛋白的纯化 (7)2.2.5 SDS-PAGE检测藻红蛋白的亚基组成及相对分子质量 (8)2.2.6 藻红蛋白抗氧化活性的测定 (8)3 结果与分析 (10)3.1 紫球藻生长状况及荧光性能 (10)3.2 紫球藻细胞的破碎 (11)3.2.1 溶胀法（水溶胀） (11)3.2.2 溶胀法（PB溶胀） (11)3.2.3 反复冻融法 (12)3.3 藻红蛋白的预处理-超滤法 (13)3.4 藻红蛋白的纯化 (14)3.4.1 吸附法 (14)3.4.2 盐析法 (15)3.4.3 层析法 (17)3.5 藻红蛋白荧光光谱特性分析 (20)3.6 藻红蛋白对DPPH自由基的消除能力 (20)结论 (22)致谢.......................................................................................................... 错误!未定义书签。
参考文献.................................................................................................. 错误!未定义书签。
广东生物化学设计实验大赛获奖课题———大集合（三）第四届获奖项目（2010 年）序号题目一等奖1 鱼鳞纯化虾青素及虾青素抗氧活化性测定（最佳设计奖）2 葛花中两种解酒成分的提取及其解酒机制分析3 地沟油与安全食用油的摩尔法氯离子含量鉴别及方法评价4 纤维素酶与木聚糖酶的协同效应375 固定酶法清除大豆制品中胰蛋白酶抑制剂以提高其营养价值（最佳设计奖）6 鲜榨果汁(橙汁)掺假成分初探7 探究油菜籽中原花青素提取的最佳条件及对自由基的清除效果二等奖8 酒精性肝损伤生化诊断新指标——乙醇脱氢酶同工酶电泳的专一性鉴定9 广州各大超市市售番木瓜转基因成分检测10 天然植物紫甘蓝中色素提取及其功能应用初步探究11 探究新型复合保鲜剂对香蕉成熟的影响12 不同pH 下豆腐中钙和菠菜中草酸的拮抗作用13 利用废弃的虾、蟹外壳制备新型环保的改良保鲜膜14 微生物絮凝剂EBU-1 处理废水的实验研究15 不同养殖模式对草鱼肝胰脏中脂肪含量影响的研究16 化妆品与黄瓜超氧化物歧化酶提取及活性比较17 番茄红素对N-二甲基亚硝胺生成阻断作用的探究18 纺织品中甲醛含量的测定19 加碘食盐在烹饪过程中碘损失的测定三等奖20 美洲大蠊活性多肽的提取方法研究和初步鉴定21 海藻酸钠的提取及在果蔬保鲜与工业污水处理中的应用探究22 尖顶羊肚菌胞外多糖抗氧化实验研究23 香蕉皮多糖的提取及其抗衰老作用的探究24 提取橙皮苷及合成橙皮苷锌配合物并比较二者清除自由基的能力25 虾壳中提取复合氨基酸及复合氨基酸锌的制备26 一片清心在玉竹——玉竹多糖的提取和抗氧化性研究27 微波法提取南美蟛蜞菊叶的黄酮类物质及影响因素分析28 葡萄皮中花色苷的提取及稳定性研究29 植物木槿叶中令头发柔顺成分及除油污作用的探究30 红葡萄酒中二氧化硫残留量测定方法的改进及二氧化硫去除方法探究31 乙酰胆碱酯酶法检测蔬果农药残留探究32 韶关产山楂肉中总黄酮的微波提取及含量的测定3833 鱼腥草中SOD 的提取、纯化和单位酶活力的测定34 探讨在厨房中去除发芽土豆毒素的最佳方法35 CO2 测定法检测不同水果的发酵性能36 茶叶中鞣酸（单宁酸）含量的测定及探究鞣酸对人体铁元素吸收的影响37 火锅汤水中火腿肠亚硝酸盐含量与沸腾时间关系研究38 酶法提高苹果汁中的果糖含量39 热水辅助超声波法提取凤眼莲多糖的工艺研究优胜奖40 龟苓膏粉中落新妇苷浓度检测与质量评定41 正交试验法优化啤酒花中黄酮成分的提取以及提取物生物学活性的研究42 环境条件对活性污泥去磷作用的影响43 从菜籽油脚中提取磷脂及其测定44 火龙果果皮红色素的提取与探究45 超声波辅助提取芒果叶多酚46 花生壳中黄酮类物质的提取及抗氧化作用的检验47 油条中铝含量的检测48 雀巢咖啡伴侣植脂末脂肪含量的测定49 红枣干与红枣浓浆的粗多糖含量的测定与比较50 不同产地的茶叶中铁与氨基酸含量的测定及其相关性51 西瓜皮蜡质的提取及其蜡质成分的检测52 贝壳中柠檬酸钙的简易制备及纯度分析53 提取测定烟草中的烟碱54 不同蛋类胆固醇含量的测定及营养价值的评价55 玉米中超氧化物歧化酶SOD 的提取56 常见品牌无磷洗衣粉中五氧化二磷含量的测定——钼蓝分光光度法57 超声波提取野菊花总黄酮的工艺研究58 不同洗衣粉中磷含量的分析测定59 从牛奶中分离制备酪蛋白60 水解法降低乌头碱毒性）第二届获奖项目（2008 年）序号题目特等奖1 猪毛中胱氨酸的精制提取和测定一等奖2 室温下放置时间对草鱼肉样新鲜度的影响3 体外模拟法探究不同浓度绿茶对亚硝酸盐清除率的影响4 芦荟多糖的提取及其抗氧化性的研究5 金银花茶、夏桑菊凉茶黄酮含量的测定及其抗氧化活性的比较6 两相萃取制备细胞色素C 及辅酶Q 的回收7 蟹壳综合生产法制备壳聚糖及其理化性质研究二等奖8 耐盐藻类的关键酶GPDH 的电泳鉴定9 变废为宝——虾壳废弃物的综合利用10 油炸方便面中丙二醛含量的探讨11 茚三酮快速检测单粒种子生活力的非破坏性方法12 熟地黄多糖的含量测定及其体外抗氧化活性研究13 超声提取一点红花色素苷及其稳定性探究14 几种水果皮提取物对亚硝化反应的抑制作用的研究15 豆角中血细胞凝集素的分离提纯及分子量测定16 壳聚糖的提取与鉴定17 稀酸沉淀法与乙醇洗涤法相结合制备花生浓缩蛋白18 发芽马铃薯毒性物质的初探19 NaCl 盐浓度对人唾液淀粉酶活力的影响三等奖20 糖尿病人专用蜂蜜的品质测定及饮用方式探索（最佳设计奖）21螺旋藻藻蓝蛋白别藻蓝蛋白的提取、纯化的探究及纯度检测（最佳设计奖）22 几种蜂蜜产品中超氧化物歧化酶酶活性的研究23 益母草鲜汁对酪氨酸酶活性的抑制作用探究24 芦荟运动保健饮料的研制25 黄芪总黄酮的测定及最佳提取工艺研究26 菠菜色素的提取及薄层色谱和柱色谱27 微波辅助提取紫甘薯色素及其酸碱显色性质28 甘草、金银花有效成分提取方法比较29 碱预处理稻草的酶解糖化30 八角茴香挥发油的提取与定性鉴别31 马铃薯中龙葵素的提取与其解毒方法的探索32 几种品牌纯牛奶营养成分测定和营养价值的比较33 黄连中盐酸小檗碱的提取、分离和检识34 从水葫芦中制取叶绿素锌钠35 蜘蛛兰制取叶绿素锌钠盐研究36 橙皮中柠檬油的提取37 紫外分光光度法测几种品牌的冬凌草片中冬凌草甲素的含量38 柚子皮果胶的提取39 金银花中总黄酮的微波提取及含量的测定优胜奖40 凉茶中掺西药成分(对乙酰氨基酚)的定性鉴别41 不同植物双加氧酶活性的测定研究42 木瓜蛋白酶提取与性质研究43 SOD 的提取及其与VC 的抗氧化性的比较44 检验用传统法处理后腌菜中亚硝酸盐含量的变化45 茶叶中茶多酚的提取与含量的比较46 两种豆芽中提取SOD 的对比研究47 牛奶中常见掺假物的检验48 艾叶挥发油及其制品肥皂对体外螨虫作用的探究49 烟叶蛋白质的提取与测定50 比较西瓜、西红柿、橙子中维生素C 的含量51 几种凉果中亚硝酸盐含量的测定52 柑橘皮提取果胶53 金黄色葡萄球菌对三种抗生素的耐药性分析54 大蒜油的不同提取方法比较55 合成洗涤剂的分析（浪奇洗衣粉）56 洗衣粉磷含量的分析57 橙汁饮料中维生素C 的测定58 测定浸泡前后空心菜中草酸的含量59 鸭粪作为饲料的可行性探索研究3460 从柑橘中提取果胶（二）第三届获奖项目（2009 年）序号题目一等奖1 胰蛋白酶抑制剂的明胶-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定及其保鲜作用的研究2 四季豆中有毒物的提取及初步分析3多酚氧化酶与苹果褐变的关系以及天然抑制剂防褐变方案的探讨（最佳设计奖）4 青瓜与番茄、青椒营养素拮抗的初探5 榴莲内壳提取液抗亚硝化反应及抗氧化活性的研究6 粗提取柚子皮或橙皮对泡沫有降解作用的成分7 尿素试纸的制备及应用的初步研究（最佳设计奖）二等奖8 不同品牌酸奶活体乳酸菌LDH 电泳与酸奶质量价值的探究9 混合果汁防褐变因素的初步探究10 大孔吸附树脂法提取槐米中芦丁及其得率的测定11 毛竹中黄酮类化合物和多糖的提取研究12 芹菜黄酮测定方法的改进13 钼蓝比色法探索彩椒颜色与VC 含量的相关性及其实际意义14 快速测定白酒中甲醇含量是否超标15 甘草中甘草酸的测定及最佳提取工艺研究16 从花生壳中提取肌醇六磷酸的方法及其含量检测17 探究提取苦瓜多糖的最适浸提温度18 木瓜蛋白酶粗酶提取以及酶活力研究19 从马尾藻中制取叶绿素铬钠盐的研究35三等奖20 快速全面检测鉴定酱油品质优劣21 龙胆紫褪色光度测定法探究洗洁精对蔬果二次污染22 分光光度法测定仙人掌中总黄酮的含量23 菜肴不同煲煮时间NO2-含量的变化24 从蛋白质底物及酶活性角度研究茶对蛋白质消化的影响25 韶关地区葛根中总黄酮的微波提取工艺研究26 橙皮苷的提取与鉴定27 “新”凯式定氮法测牛奶中有机氮与无机氮28 东莞家具厂工业废水COD 的测定及环境影响情况分析29 皂甙中毒的快速定性分析30 不同品牌火腿肠中亚硝酸钠含量的测定以及不同的测定方法的研究报告31 龙眼壳黄酮的提取32 超声法提取柚皮总黄酮的工艺研究33 黄连中盐酸小檗碱的提取、分离和检识方案34 大蒜细胞SOD 的提取与分离35 市售啤酒中甲醛含量的测定36 香蕉多酚的提取37 分光光度法测定腌制类肉品中亚硝酸盐含量38 无花果蛋白酶和果胶的综合提取39 柑橘中果胶的提取优胜奖40 微波萃取法提取香茅油的条件优化试验41 电泳法测定中药中的“寒热蛋白”42 从柑橘中提取果胶3643 洗衣粉磷含量的分析44 洗衣粉中聚磷酸盐的含量测定45 检验市面上的蜂蜜是否掺假46 火腿肠淀粉含量的测定天然和人工牛黄解毒片中胆红素含量、抗氧化性的对比及维生素C 和甘草对胆红素稳定性影响的测定48 金属离子对柔红霉素与人血清白蛋白相互作用的影响49 大豆皮在酚类废水中的应用50 探究黄酮类化合物芦丁在清除自由基及抗氧化方面的功能51 Vc 药品中维生素C 含量的测定及其抗氧化性影响因素的讨论52 张裕、长城、王朝三种品牌葡萄酒中营养成分的测定53 甜橙皮类胡萝卜素提取与稳定性探究54 废电池回收处理的综合利用55 饲料中三聚氰胺快速定性检测方法的探讨56 利用微波辅助法提取榴莲皮内囊物果胶57 模拟酸雨以及土地盐碱化对农作物根系活力的影响58 市售真伪大黄的鉴定59 香草醛交联壳聚糖-吲哚美辛缓释微球制备及释放度研究60 解吸—减压内部沸腾两步法提取葡萄籽原花青素（三）第五届获奖项目（本科组，2011 年）39序号题目一等奖1 马铃薯中消炎成分的提取及其消炎作用的比较研究（最佳设计奖）"广东省生物化学实验技能大赛决赛题目"供借鉴［作者：Admin 来源：植物科学实验教学中心更新时间：2009-6-16 文章录入：Admin］【字体：】下面是2009年广东省生物化学大赛决赛的参赛题目，供同学们参考，旨在为同学们提供一点思路，但注意不要雷同。
藻蛋白的分离纯化及光谱性质研究Isolation, purification of phycobiliprotein from Porphyra and itsspectroscopic properties一、实验目的和要求1. 了解藻蛋白的生理意义和功能，藻蛋白一般的纯化方法；2. 掌握盐析和凝胶层析的实验技术；3. 掌握紫外可见光谱仪检测蛋白的方法；4. 了解藻蛋白的荧光发射特性。
二、实验原理藻蛋白是藻类特有的捕光色素蛋白，参与光合作用的能量吸收和传递，主要存在于红藻、蓝绿藻和隐藻的藻胆体中。
藻蛋白主要包括藻红蛋白、藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白三类。
藻蛋白在藻类中的含量可达细胞干重的25%～28%, 除了作为荧光探针用于医学诊断、免疫学和细胞学研究之外，藻胆蛋白具有抗氧化、提高机体免疫力和抗肿瘤等重要药理功能，在功能食品、化妆品和药品中有广泛的应用前景。
我国藻类资源十分丰富，是世界上最大的紫菜生产大国，是获取藻蛋白的理想资源。
选用紫菜提取藻红蛋白，具有成本低、得率高的优点，具有较好的利用价值。
1．蛋白质的盐析沉淀盐在水溶液中电离所形成的正负离子可吸引水分子，从而夺取蛋白质分子上的水化膜，还可中和部分电荷，致使蛋白质聚集，从而达到盐析沉淀蛋白质的目的。
由于各种蛋白质颗粒大小、所带电荷的多少及亲水程度不同，当使用某种中性盐对其进行盐析时，所需的最低盐浓度各不相同。
2．葡聚糖凝胶柱层析分离纯化蛋白质凝胶层析也称分子筛层析、排阻层析。
是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离的技术。
单个凝胶珠本身象“筛子”。
不同类型凝胶的筛孔的大小不同。
相对分子质量较大的物质由于直径大于凝胶网孔被完全排阻在孔外，只能在凝胶颗粒外的空间向下流动，因此流程较短，移动速度快；所以首先流出。
相对分子质量较小的物质由于直径小于凝胶网孔，可完全渗透进入凝胶颗粒的网孔，在向下移动过程中，因此流程较长，移动速率慢；所以最后流出。
藻蓝蛋白及其酶解产物的抗肿瘤效应研究进展邓伟;王雪青【摘要】从海洋生物中寻找高效、低毒副作用的抗肿瘤药物是近年天然药物研究的新领域.随着海洋生物药学研究的不断深入,发现许多海洋生物的活性物质源于其食物.因此对于海洋生物食物链基层藻类的生物活性物质研究,更具有实际的意义.藻蓝蛋白(C-phycocyanin, C-PC)是存在于一些藻体中的光合色素蛋白,具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化等多种生物学功能,有重要的开发利用价值.国内外关于藻蓝蛋白的抗肿瘤作用及其机制的研究已有报道,而酶解后的藻蓝蛋白多肽抗肿瘤效应研究国内外报道很少.随着酶工程技术的发展和应用,利用蛋白酶水解藻蓝蛋白获取生物活性肽更具研究开发潜力,围绕藻蓝蛋白及其酶解产物的抗肿瘤活性及机制进行了综述.【期刊名称】《海洋通报》【年(卷),期】2010(029)003【总页数】4页(P357-360)【关键词】藻蓝蛋白;酶解产物;抗肿瘤活性【作者】邓伟;王雪青【作者单位】天津市食品与生物技术重点实验室、天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津300134;天津市食品与生物技术重点实验室、天津商业大学生物技术与食品科学学院,天津300134【正文语种】中文【中图分类】R282.77;R151.2藻胆蛋白是大量出现于红藻 (Rhodophyta)、蓝绿藻 (Cyanophyta) 和隐藻(Cryptophyta) 中的捕光色素蛋白，主要包括藻红蛋白 (R-PE)、藻蓝蛋白(C-PC)和别藻蓝蛋白 (APC) 3种。
藻胆蛋白在藻类细胞中的主要功能是作为光合作用捕光色素系统，把捕获的光能高效地传递给叶绿素，从而使海藻的光合作用得以发生[1]。
藻蓝蛋白 (Phycocyanin) 是从螺旋藻中提取的藻胆蛋白的一种，其氨基酸组成合理，其中必需氨基酸占氨基酸总量的37.42%。
大量的临床研究结果表明[2-9]，藻蓝蛋白具有抗肿瘤、抗辐射、抗疲劳、调节免疫力、清除自由基、促进细胞生长和保护神经等生理作用。
收稿日期：2010-12-28；修订日期：2011-10-25基金项目：江苏省海洋生物技术重点建设实验室开放基金项目（No．HS07014）；江苏省基础研究计划（自然科学基础）（No．BK2009641）；淮海工学院引进人才科研启动基金（No．KQ07018）作者简介：赵艳景（1976-），女（汉族），河北保定人，现任淮海工学院海洋生物技术重点建设实验室讲师，博士学位，主要从事海洋生物活性物质研究工作．条斑紫菜藻蓝蛋白抗氧化作用研究赵艳景1，胡虹2，王颖3（1．淮海工学院江苏省海洋生物技术重点建设实验室，江苏连云港222005；2．连云港中医药高等职业技术学校，江苏连云港222006；3．中国药科大学，江苏南京210009）摘要：目的研究条斑紫菜藻蓝蛋白的抗氧化作用。
方法蓝蛋白对超氧阴离子自由基清除的能力；使用Fenton 体系测定其对羟自由基（·OH ）清除的能力；使用DPPH 法测定其对二苯代苦味酰自由基清除的能力。
结果紫菜藻蓝蛋白对超氧阴离子O 2－·的清除率为33．79%；对·OH 的清除率为92．71%；对二苯代苦昧酰自由基清除能力，其IC 50为0．86mg /ml 。
结论紫菜藻蓝蛋白有较强的体外抗氧化活性，为其下一步活性研究与开发利用提供一定的试验基础。
关键词：条斑紫菜；藻蓝蛋白；Fenton 体系；抗氧化活性DOI 标识：doi ：10．3969/j．issn．1008-0805．2012．02．037中图分类号：R285．5文献标识码：B 文章编号：1008-0805（2012）02-0337-01自由基是生物体活动过程中生物化学反应所产生的中间产物，具有很高的反应活性，能在分子、细胞及器官水平给机体造成损伤，造成机体衰老，也是诱发肿瘤等恶性疾病的重大原因，随着人们对自由基的深入研究，这一学说为越来越多的人所接受。
近年来，研究发现自由基与许多疾病如心血管病、癌症及氧化胁迫的其他机能障碍密切相关［1，2］。
