牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)酶联免疫分析(ELISA)

一、绪论1. 植物生理学是研究植物生命活动规律与细胞环境相互关系的科学，在细胞结构与功能的基础上研究植物环境刺激的信号转导、能量代谢和物质代谢。

二、植物的水分生理1.水势：相同温度下一个含水的系统中一偏摩尔体积的水与一偏摩尔体积纯水之间的化学势差称为水势。

把纯水的水势定义为零，溶液的水势值则是负值。

水分代谢：植物对水分的吸收、运输、利用和散失的过程。

2.衬质势：由于衬质 ( 表面能吸附水分的物质，如纤维素、蛋白质、淀粉等 ) 的存在而使体系水势降低的数值。

3.压力势：植物细胞中由于静水质的存在而引起的水势增加的值。

4.渗透势：溶液中固溶质颗粒的存在而引起的水势降低的值。

5.渗透作用：溶液中的溶剂分子通过半透膜扩散的现象。

对于水溶液而言，是指水分子从水势高处通过半透膜向水势低处扩散的现象。

6.质壁分离：植物细胞由于液泡失水而使原生质体和细胞壁分离的现象。

7.吸胀作用：亲水胶体物质吸水膨胀的现象称为吸胀作用。

胶体物质吸引水分子的力量称为吸胀。

8.根压：由于植物根系生理活动而促使液流从根部上升的压力。

伤流和吐水现象是根压存在的证据。

9.蒸腾作用：水分通过植物体表面（主要是叶片）以气体状态从体内散失到体外的现象。

10．蒸腾效率：植物在一定生育期内所积累干物质量与蒸腾失水量之比，常用 g·kg-l表示。

11.蒸腾系数：植物每制造 1g 干物质所消耗水分的 g 数，它是蒸腾效率的倒数，又称需水量。

12. 气孔蒸腾：植物细胞内的水分通过气孔进行蒸腾的方式称为气孔蒸腾。

13.气孔运动主要受保卫细胞的液泡水势的调节，但调节保卫细胞水势的途径比较复杂。

14.保卫细胞：新月形的细胞，成对分布在植物叶气孔周围，控制进出叶子的气体和水分的量。

形成气孔和水孔的一对细胞。

双子叶植物的保卫细胞通常是肾形的细胞，但禾本科的气孔则呈哑铃形。

气孔的保卫细胞含有叶绿体，因为细胞壁面对孔隙的一侧（腹侧）比较厚，而外侧（背侧）比较薄，所以随着细胞内压的变化，可进行开闭运动。

大鼠神经元特异性烯醇化酶酶联免疫分析（NSE-ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：E0537r预期应用ELISA法定量测定大鼠血清中NSE含量，有助于诊断小细胞肺癌及相关性疾病。

概述烯醇化酶（Enolase）是参与糖酵解的酶，催化2-磷酸甘油酸向磷酸烯醇丙酮酸的转化，由三种亚基（α、β、γ）组成的二聚体同功酶。

其中αγ和γγ烯醇化酶同功酶存在于神经元及神经来源的细胞中，也称为神经元特异性烯醇化酶（Neurone specific enolase ，NSE）。

在正常大鼠群中NSE含量较低，但在某些神经内皮细胞增生的恶性疾病，如神经母细胞瘤（Neuroblastoma），其含量往往上升。

由于小细胞肺癌（Small cell lung carcinoma，SCLC）是最常表现有神经内分泌性质的肿瘤，目前NSE也是SCLC最敏感最特异的肿瘤标志物。

肺癌是近年来发病率日趋增高的癌种，在种种肺癌中小细胞肺癌占大约20%，因此正确诊断肺癌的类型，特别是确定小细胞肺癌的诊断很重要。

小细胞肺癌患者的αγ和γγ同功酶含量均有不同比例的增高，因些必须在同一敏感度下同时检测NSE的αγ和γγ同功酶含量。

本试剂盒所用单抗只针对NSE的γ亚基，而与α或β亚基无交差反应。

据文献报道，NSE含量测定可作为肺癌、成神经细胞瘤、黑素瘤、精原细胞瘤以及中枢精神系统损伤的诊断指标。

同时，也可用于SCLC治疗前后疗效的监测与预后，以及SCLC 与其它型肺癌的鉴别诊断。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定血清中NSE水平。

用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入NSE抗原、生物素化的抗大鼠NSE抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的NSE呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

酶免疫分析的名词解释酶免疫分析（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的生物化学分析技术，通过利用酶作为信号标记以及免疫反应的特异性，可以准确、灵敏地检测和定量目标物质，包括抗体、抗原、蛋白质等。

1. 酶免疫分析的原理及步骤酶免疫分析的核心原理是将目标物质与特异性抗体结合，形成抗原-抗体复合物。

该复合物在固定在固相载体上的抗体的作用下，使目标物质固定在特定位置。

而后，通过添加酶标记的二抗（即二级抗体）或联合酶-底物系统，使酶与抗原-抗体复合物发生反应，形成显色或荧光信号。

最终，通过光谱测量、比色测定或荧光测定，可以量化目标物质的含量。

酶免疫分析的步骤一般包括样品处理、免疫反应、洗涤、酶标记反应、洗涤和检测。

首先，需要对目标物质进行样品预处理，如稀释、去除干扰物质等。

接下来，将样品加入含有特异性抗体的固相底物，允许抗原-抗体反应发生。

然后，通过洗涤步骤去除未结合的物质。

加入酶标记的二抗或酶-底物体系，形成酶与抗原-抗体复合物。

经过再次洗涤后，将底物加入体系，产生可检测的信号。

最后，通过测定信号强度，可以定量目标物质的浓度。

2. 酶免疫分析的应用领域酶免疫分析在医学、生物学、生物制药等领域有着广泛的应用。

其中，常见的包括：2.1 临床诊断酶免疫分析可以用于检测疾病标志物、肿瘤标志物等，早期发现和诊断疾病。

例如，检测血液中特定蛋白质、抗体或血糖水平等，可用于诊断糖尿病、肝功能异常等病症。

2.2 药物研究和开发酶免疫分析可用于药物筛选、效价测定等。

通过测量药物分子与特定抗体结合能力的变化，可以评估药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄，从而指导药物设计和优化。

2.3 食品安全检测酶免疫分析可以检测食品中的残留农药、重金属、致病菌等有害物质。

通过快速、高效的检测手段，保障食品安全，减少人们食用风险。

2.4 环境监测酶免疫分析可用于检测环境中的污染物，如土壤、水体中的重金属、农药等。

牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定热牛血清，血浆及相关液体样本中磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)的含量。

实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)水平。

用纯化的牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)，再与HRP标记的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)浓度。

试剂盒组成：样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。

通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。

离心20分钟左右（2000-3000转/分）。

仔细收集上清。

保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。

重组抵抗素对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响陈傲第;贺鹏飞;刘国文;陈承祯;王哲【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2009(29)7【摘要】取单层培养72 h生长良好的犊牛肝细胞,采用单因素重复试验,分别添加0、25、50、100、200、400 ng/L的牛重组抵抗素(resistin),每个处理3个重复(每重复2孔)。

继续培养12 h后分别提取RNA并制备细胞上清液。

应用荧光定量PCR方法检测牛重组Resistin对肝细胞糖异生关键酶丙酮酸羧化酶(Pyruvate carboxylase,PC)基因表达的影响,同时用比色法检测其对肝细胞PC酶活性的影响。

结果表明,一定浓度的resistin显著下调了肝细胞PCmRNA表达,且降低了PC酶活性。

【总页数】4页(P924-927)【关键词】牛重组抵抗素;肝细胞;丙酮酸羧化酶;犊牛【作者】陈傲第;贺鹏飞;刘国文;陈承祯;王哲【作者单位】吉林大学畜牧兽医学院【正文语种】中文【中图分类】S856.5【相关文献】1.瘦蛋白对犊牛肝细胞PC mRNA表达及其活性的影响 [J], 陈承祯;刘国文;谢光洪;杨文艳;张嘉保;王哲2.胰岛素对犊牛肝细胞PC mRNA表达及其活性的影响 [J], 陈承祯;张嘉保;任文陟;徐闯;刘国文;张永宏;王哲3.神经内分泌因子对新生犊牛肝细胞MTP mRNA丰度的影响 [J], 陈仕均;唐海蓉;刘兴友;刘开永4.神经肽Y对犊牛肝细胞PC mRNA丰度及其活性的影响 [J], 陈承祯;谢光洪;刘国文;徐闯;张嘉保;文力正;王哲5.神经肽Y对犊牛肝细胞PEPCK mRNA丰度及其活性的影响 [J], 陈承祯;李小兵;谢光洪;徐闯;刘国文;张永宏;王哲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

丙酮酸羧化酶（PC）活性检测试剂盒说明书微量法货号: BC0735规格: 100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×2瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体5 mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶-20℃保存试剂四粉剂×1瓶-20℃保存试剂五液体2 mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体5 μL×1支2-8℃保存试剂六稀释液液体5 mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入3 mL蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；2、试剂四：临用前加入2 mL蒸馏水溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；3、试剂六：液体置于试剂瓶内EP管中。

临用前按试剂六：试剂六稀释液=1:428（V:V）的比例稀释试剂六备用，现用现配；4、工作液的配制：按照试剂二：试剂三：试剂四=2:1:1的体积比例充分混匀，现用现配。

产品说明：丙酮酸羧化酶(pyruvate carboxylase，PC，EC 6.4.1.1)广泛存在于动物、霉菌和酵母的线粒体中，但在植物体和大部分细菌中却不含此酶。

是供给草酰乙酸的主要补充反应，是糖异生过程的第一个限速酶。

PC不可逆的催化丙酮酸、ATP、CO2和水生成草酰乙酸、ADP和Pi，苹果酸脱氢酶进一步催化草酰乙酸和NADH生成苹果酸和NAD+，在340nm下测定NADH氧化速率，即可反映PC活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤;一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2肝细胞癌中糖异生代谢异常的研究进展罗赛芳，马向明，曹立瀛华北理工大学附属开滦总医院肝胆外科，河北唐山０６３０００摘要：肿瘤在有氧环境中仍然进行糖酵解以加速对肿瘤微环境中的葡萄糖摄取和产生大量乳酸，为肿瘤细胞增殖提供所需的核苷酸、脂质和蛋白质的生物分子前体，以及可抑制免疫细胞的功能而促进肿瘤细胞的转移。

糖异生代谢作为糖酵解的逆反应在肝细胞癌中处于抑制状态，尤其是丙酮酸羧化酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶、果糖－１，６－二磷酸酶１和葡萄糖－６－磷酸酶４个关键限速酶的表达下调，通过促进有氧糖酵解及其分支途径而促进肝细胞癌的生长和增殖，同时也与肝细胞癌患者的总生存期和预后相关，被认为是肝细胞癌的抑制因子。

基于此，本文总结了糖异生代谢关键酶在肝细胞癌发生发展中的变化及其作用机制，并分析了其在肝细胞癌中相关研究的不足和未来方向，期望为肝细胞癌的治疗提供新思路。

关键词：癌，肝细胞；糖原异生；代谢基金项目：河北省２０２０年度医学科学研究课题计划（２０２０１２８５）ＲｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｉｎａｂｎｏｒｍａｌｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａＬＵＯＳａｉｆａｎｇ，ＭＡＸｉａｎｇｍｉｎｇ，ＣＡＯＬｉｙｉｎｇ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙＳｕｒｇｅｒｙ，ＫａｉｌｕａｎＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＮｏｒｔｈＣｈｉｎａＵｎｉ ｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｔａｎｇｓｈａｎ，Ｈｅｂｅｉ０６３０００，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＣＡＯＬｉｙｉｎｇ，ｃａｏｌｉｙｉｎｇ１５３＠１２６．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００３－３６６２－５９６１）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｕｍｏｒｓｓｔｉｌｌｐｅｒｆｏｒｍｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓｉｎｔｈｅａｅｒｏｂｉｃｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｔｏａｃｃｅｌｅｒａｔｅｔｈｅｕｐｔａｋｅｏｆｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｐｒｏｄｕｃｅａｌａｒｇｅａｍｏｕｎｔｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｉｎｔｕｍｏｒｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ，ｐｒｏｖｉｄｅｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒｐｒｅｃｕｒｓｏｒｓｏｆｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ｌｉｐｉｄｓ，ａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｆｏｒｔｕｍｏｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓｉｎａｃｉｄｉｃｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ．Ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ，ａｓｔｈｅｒｅｖｅｒｓｅｒｅａｃｔｉｏｎｏｆｇｌｙ ｃｏｌｙｓｉｓ，ｉｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙｔｈｅｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｆｏｕｒｋｅｙｒａｔｅ－ｌｉｍｉｔｉｎｇｅｎｚｙｍｅｓｐｙｒｕｖａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ，ｐｈｏｓｐｈｏｅｎｏｌｐｙｒｕｖａｔｅｃａｒｂｏｘｙｋｉｎａｓｅ，ｆｒｕｃｔｏｓｅ－１，６－ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ１，ａｎｄｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ４，ｗｈｉｃｈｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｂｙｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｅｒｏｂｉｃｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓａｎｄｉｔｓｂｒａｎｃｈｅｄｐａｔｈｗａｙｓ，ａｎｄｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｉｔｉｓａｌｓｏａｓ ｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｏｖｅｒａｌｌｓｕｒｖｉｖａｌｔｉｍｅａｎｄｐｒｏｇｎｏｓｉｓｏｆｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｉｓｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｎｉｎｈｉｂｉｔｏｒｆｏｒｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ，ｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｃｈａｎｇｅｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓｏｆｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄａｎａｌｙｚｅｓｔｈｅｓｈｏｒｔｃｏｍｉｎｇｓａｎｄｆｕｔｕｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｏｆｒｅｌａｔｅｄｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ，ｓｏａｓｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｉｄｅａｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｃａｒｃｉｎｏｍａ，Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ；Ｇｌｕｃｏｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓ；ＭｅｔａｂｏｌｉｓｍＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：２０２０ＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｊｅｃｔＰｌａｎｏｆＨｅｂｅｉＰｒｏｖｉｎｃｅ（２０２０１２８５）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０９．０４２收稿日期：２０２２－０２－２３；录用日期：２０２２－０４－０５通信作者：曹立瀛，ｃａｏｌｉｙｉｎｇ１５３＠１２６．ｃｏｍ 据２０２０年全球癌症数据统计，肝癌是世界上第三大致死性癌症，占癌症死亡总数的８．３％，也是我国第二大致死性癌症，死亡率为１３％［１］。

货号：MS3500 规格：100管/96样磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：PEPCK（EC 4.1.1.32）广泛存在于动物、植物、微生物和细胞中，催化草酰乙酸转化为磷酸烯醇式丙酮酸，是调节糖异生途径的关键酶。

测定原理：，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化PEPCK催化草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸和CO2NADH氧化生成NAD+，在340nm下测定NADH下降速率，即可反映PEPCK活性。

自备实验用品及仪器：分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体18 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体16.5uL×1支，4℃保存；试剂三：粉剂×1支， -20℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；样本的前处理：1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、试剂四的配制：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)提取液简介：磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvate carboxylase,PEPC)是C4植物和CAM 植物固定CO 2的关键酶，为催化磷酸烯醇式丙酮酸与二氧化碳反应生成草酰乙酸呈不可逆反应的酶，在植物和细菌中广泛存在，在动物及丝状霉菌中缺乏此酶。

大肠杆菌中的酶分子量约36万的四聚体，可受很多因素的影响，例如可为乙酰辅酶A 活化，可受天门冬氨酸抑制。

此酶是变构酶，主要功能为供给三羧酸循环以草酰乙酸，另外也与C4植物光合二氧化碳固定反应(C4二羧酸循环)及景天科植物的苹果酸形成(景天酸代谢)等有关。

Leagene 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶。

该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、离心管或试管3、匀浆器或研钵4、低温离心机操作步骤(仅供参考)：1、取植物组织清洗干净，切碎。

2、加入预冷的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液，冰浴情况下充分匀浆或研磨。

3、经纱布或滤纸过滤，留取滤液待用。

3、离心，留取上清液。

4、冻存，用于磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的检测或其他用途。

计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%注意事项：编号名称CS0421Storage 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液500ml 4℃使用说明书1份1、待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶提取液稀释样品后重新测定。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。

相关：编号名称CC0007磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032Masson三色染色液DF0135多聚甲醛溶液(4%PFA)NR0001DEPC处理水(0.1%)PS0013RIPA裂解液(强)TC1167尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。

摘要：酶联免疫吸附法是畜产品质量安全检测常用的快检方法之一，能快速、准确、高效地对相关产品进行检测。

伴随着行业的高速发展，人们对畜产品的需求数量及质量要求也在逐步上升，畜产品的食品安全问题越来越受到重视。

但近年来，畜产品中存在着动物疫病、兽药残留及产品非法添加物等相关问题。

因此，使用快速、准确的检测方法筛查畜产品的质量安全至关重要。

本文以酶联免疫吸附法为主要技术导向，深入剖析其原理，同时对该技术在畜产品快检中的应用情况分层介绍，以期为行业相关研究人员提供依据。

关键词：酶联免疫吸附法；畜产品；检测技术；应用酶联免疫吸附法在畜产品快速检测中的应用程俊嘉，陈源，刘冬梅（昌吉州畜产品质量检测中心新疆昌吉831100）收稿日期：2023-06-29作者简介：程俊嘉（1990.06—），男，陕西人，畜牧师，硕士研究生，从事畜产品质量检测工作。

doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2024.05.056科研动态中国是畜产品的生产及消费大国，随着世界经济的全球化发展，标有“中国造”的畜产品对外出口比例逐年上升。

但近年来，随着禽流感病毒、非洲猪瘟病毒等疾病的不断肆虐，动物感染疫病的概率也不断增加，畜产品源头安全无法得到保障。

无独有偶，随着生活环境中外源性化学物质的日益增长，包括畜产品在内的日常消费食品也经常被查出含有违禁的化学药物，如瘦肉精、抗生素、雌雄激素类、抗病毒类药物等[1]，这些化学药物在食品中的滥用会导致兽药残留并引发严重的食品安全问题，对消费者的身心健康也具有较大的影响。

国家食品药品监督管理总局也多次发文要求严厉打击畜产品中滥用药物的问题，因此，对畜产品建立快检方法具有重要意义。

1快速检测技术概述畜产品安全快速检测技术是保障畜产品安全的重要技术，主要特点便是操作简易、速度快、成本低廉，能提高检测效率及工作效率，使得监管机构及相关人员能迅速处理突发事件。

同时，使安全的畜产品及时投入市场，使有害的畜产品中断市场流通并快速召回，以防止给人体和环境带来潜在危害。