冬虫夏草对COPD模型大鼠肺功能及Th_1_Th_2的影响
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・论 著・冬虫夏草对COP D模型大鼠肺功能及Th1/Th2的影响管彩虹 杭州市中医院 杭州310009刘 进 浙江大学医学院附属第二医院摘 要 目的:探讨冬虫夏草对大鼠慢性阻塞性肺病(COP D)模型的肺功能及Th1/Th2的影响。
方法:42只大鼠随机分为模型、治疗和对照三组,各14只。
前两组采用S D大鼠反复被动吸烟和气道内注入脂多糖的方法建立COP D模型。
8周后每组随机取7只做肺功能测定,观察肺组织病理变化。
每组剩下的7只行支气管肺泡灌洗。
取支气管肺泡灌洗液(BALF)做细胞计数及分类;用E L I S A法测定BALF中的I L22、I L24及Th1/Th2的水平。
结果:光镜下,对照组大鼠肺组织结构正常;模型组大鼠的肺组织支气管壁柱状纤毛倒伏、粘连,杯状细胞增生,支气管壁及周围组织有大量炎症细胞浸润,部分肺泡间隔破坏,肺泡孔扩大;治疗组大鼠的肺组织支气管及其周围组织损伤明显减轻。
与对照组比较,模型组大鼠BALF中的炎症细胞数明显升高,气道阻力增加,肺顺应性下降;BALF中I L22水平和I L22/I L24比值显著降低;与模型组比较,治疗组BALF中的炎症细胞数明显降低,气道阻力下降,而肺顺应性上升,BALF中I L22/I L24比值升高。
结论:冬虫夏草有抑制COP D气道炎症反应、改善肺功能及纠正气道Th1/Th2比例失衡的作用。
关键词 大 鼠 慢性阻塞性肺病 冬虫夏草 Th1/Th2 肺功能Effect of D ongchong X i a chao on Pul m onary Functi on and Th1/Th2of Ra tM odel w ith Chron i c O bstructi ve Pul m o2 nary D isea se G UAM Caihong,et al.The Traditional Chinese M edicine Hospital ofHangzhou C ity,Hangzhou(310009), ChinaAbstract O bjecti ve:T o investigate the effect of Dongchong Xiachao on pul m onary functi on and Th1/Th2of rat model with chr onic obstructive pul m onary disease(COP D).M ethods:The S D rat mode with COP D was established by f orcing rats t o s moke ti m e and ti m e and injecting LPS in trachea.42cases of rat models were random ly divided int o the model gr oup(14 cases),the treat m ent gr oup(14cases)and the contrast gr oup(14cases).After8weeks,7rats were chosen random ly in each gr oup.Their pul m onary functi on was measured and the pathol ogic changes of lung tissue observed.The rest7rats in each gr oup were for br onchial alveolar lavage.The infla mmati on cells were counted and classified in the br onchial alveolar lavage fluid(BALF).The level of I L22,I L24and Th1/Th2in HALF were measured by E L I S A.Results:I n the contrast gr oup,structure of lung tissue was nor mal in the light m icr oscope.I n the model gr oup,s ome p illar cilia were fallen over and conglutinated.Calycular cells were hyper p lastic.Plentiful infla mmati on cells came f orth on the br onchia walls and ar ound.Some intervals of alveolus rup tured,and s ome alveolar pores expanded.I n the treat m ent gr oup,the har mful patho2 l ogic changes of lung tissue,br onchial tube and surr ounding tissue decreased obvi pared with those in the con2 trast gr oup,the amounts of infla mmati on cells in BALF in the model gr oup increased evidently.The air way resistance increased and the lung comp liance decreased.The level of I L22and the rati o of I L22t o I L24in BALF als o decreased pared with those in the model gr oup,the a mounts of infla mmati on cells in BALF in the treat m ent gr oup decreased evidently.The air way resistance decreased and the lung comp liance increased.The rati o of I L22t o I L24in BALF als o increased.Conclusi on:Dongchong Xiachao can resistant the air way infla mmati on of chr onic obstructive pul m onary disease,i m p r ove pul m onary functi on and rectify the unbalance rati o of Th1t o Th2effectively.Key words Rat chr onic obstructive pul m onary disease Dongchong Xiachao Th1/Th2 pul m onary functi on 慢性阻塞性肺病(COP D)是发病率、死亡率较高的慢性疾病。
据统计,我国40岁以上人群COP D 的发病率约8.2%,居当前死亡原因的第四位。
吸烟和呼吸道感染是慢性阻塞性肺病发生、加剧的重要因素[1]。
中医学认为,肺肾两虚是COP D的主要发病机制,并且记载了冬虫夏草为滋补壮阳药,具有补肺益肾、止咳化痰等作用,但具体机制尚不明。
近年来研究认为,Th2细胞在哮喘发病机制中起关键作用,但对Th细胞在COP D发病机制中的作用研究较少。
本研究采用大鼠被动熏烟和气道内滴入脂多糖(LPS)的方法建立COP D模型。
通过人工培育的冬虫夏草喂养COP D大鼠,并观察动物肺组织形态、肺功能、支气管肺泡灌洗液(BALF)的炎症细胞和Th细胞因子I L22、I L24及Th1/Th2水平。
探索Th细胞在COP D大鼠肺局部的免疫作用,并观察冬虫夏草对其的影响。
1 材料和方法1.1 动物分组 清洁级雄性S D大鼠42只,体重(200±20)g,鼠龄12周。
将S D大鼠随机分为模型、治疗、对照三组,各14只。
①模型组:置于自制染毒箱中,每次被动吸烟20支(焦油量17mg,烟气烟碱量1.4mg),1次持续1小时,1天3次,共8周(第1、14天除外);第1、14天气道内注入脂多糖(LPS)200μg/200μl(购自美国sig ma公司);②治疗组:在按模型组制备模型的基础上胃饲5m l的冬虫夏草溶液(5g/kg)(杭州中美制药公司提供);③对照组:不吸烟,每天呼吸正常的空气。
模型组和对照组每天胃饲等量无菌的蒸馏水。
1.2 肺功能测定和肺病理标本制作 8周末从各组中随机取7只大鼠,用25%乌拉坦(4m l/kg)腹腔注射麻醉,然后将大鼠仰卧固定在操作台上,纵行切开颈部皮肤,机械钝性分离皮下组织暴露气管,在环状软骨下切一个倒“T”型切口,进行气管插管。
用肺功能仪和Medlab医学软件分析系统测出并记录大鼠潮气量、气道流速和跨肺压,然后换算成气道阻力和肺顺应性。
大鼠测定肺功能后,将其股动脉放血处死,取右肺中叶(大小约1c m×1c m)肺组织连同部分支气管,用10%甲醛固定1周以上,然后进行HE染色,石蜡制片。
1.3 咳嗽反射测定和BALF细胞计数及细胞分类 每组剩余的7只大鼠先放入一密闭容器中雾化吸入5%柠檬酸完成咳嗽反射测定。
采用Medlab医学软件分析系统记录10m in的咳嗽次数,然后将其股动脉放血处死并行双侧支气管肺泡灌洗,用6m l 生理盐水反复抽吸3次,以较慢速度回收BALF,总回收率约70%～80%。
将200μl BALF加入200μl 白细胞计数液中,3～5m in后摇匀且取一滴置于血细胞计数板上,在显微镜下计白细胞总数。
将余下的BALF液4℃1500r pm离心15m in,收集上清液储存于-70℃待测细胞因子。
离心后取沉淀物涂片,制作3张涂片,用W right2Gie m sa法进行染色计数,每个标本计数200个有核细胞,并进行细胞分类。
1.4 BALF细胞因子的测定 采用双抗体夹心ABC2EL I S A法测定I L22、I L24(B i os ource公司进口,上海森雄公司分装提供),按试剂盒操作说明书进行测定。
统计分析:数据以( x±s)表示,采用t检验判断均数差异显著性,P<0.05有统计学意义,全部资料采用SPSS11.0统计软件操作。
