牛奶中三聚氰胺的测定报告

牛奶中的三聚氰胺含量的快速测定三聚氰胺(melamine)即蜜胺,又称氰尿酰胺,是一种白色晶体，其分子中含氮量高达66. 7% 。

在生鲜乳及乳制品中添加三聚氰胺，可以提高含氮量，冒充成高蛋白食品，从而大幅度降低成本.。

2008年“奶粉中非法添加三聚氰胺”事件的出现对乳制品中三聚氰胺的检测方法提出了迫切需求。

2008年10月7日，国家质检总局、国家标准委员会批准了GB /T22388—2008《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》和GB /T22400—2008《原料乳中三聚氰胺快速检测2液相色谱法》。

该国标法是目前奶制品生产企业和各个实验室所用的主要方法。

上述检测方法，都需要对样品进行前处理，而且还需要多种化学药品和较为昂贵的仪器设备，虽然检测精度较高，但不便于现场的快速检测。

近红外技术(N IR)是20世纪70年代后发展起来的一种新的快速定性定量分析技术,近红外光谱包含丰富的物质信息，其谱图与物质本身的组成密切相关，通过对光谱特征的分析，可以获得有关物质结构与组成的信息。

其主要特点是无需复杂的前处理即可通过对光谱信息的分析提取出物质的特征信息，因此特别适合用于快速鉴别物质的品质，已广泛地应用于农业、化工和食品行业中。

本实验用近红外光谱法快速定量检测纯牛奶中三聚氰胺。

实验分别配制了两组不同三聚氰胺含量的纯牛奶样品，用于定量分析。

结果表明，近红外光谱分析是一种快速、方便和环保有效的测定乳制品中三聚氰胺含量的新方法。

样品制备所需主要材料和仪器:三聚氰胺分析纯500g，同一批次的超市购买某品牌纸袋纯牛奶4L，感量为0. 1mg的电子天平，水浴锅，容量瓶，移液管等。

样品用于定量分析：共配制三聚氰胺含量范围为0. 9754～19. 5672mg/kg的牛奶样品共20个(样品标号为01～20) ，制样时,用电子天平称取一定质量的三聚氰胺加入到牛奶样品中来得到不同含量的样品,摇匀, 在40℃水浴锅中加热10min。

乳、乳制品及饲料中三聚氰胺的测定一．名词简介1. 三聚氰胺理化性质三聚氰胺：英文名“melamine”，简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺。

分子式：C3N6H6、C3N3(NH2)3；分子量：126.12；物理性能：白色结晶粉末，无毒，无味；相对密度：1570kg/m³；熔点：在常压下，354℃分解；升华温度：300℃；溶解性：能溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶；微溶于水、乙醇；不溶于乙醚、苯和四氯化碳，水溶液呈弱碱性。

化学性能：三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，用于生产塑料、地板砖，厨房用具，防火纤维，商业滤膜，胶水和阻燃剂。

2. 乳制品是指以生鲜牛（羊）乳及其制品为主要原料，经加工而制成的各种食品。

本标准所指的乳制品包括液体乳类（杀菌乳、灭菌乳、酸牛乳、配方乳）、乳粉类（全脂乳粉、脱脂乳粉、全脂加糖乳粉和调味乳粉、婴幼儿乳粉、其他配方乳粉）、含乳饮料类、炼乳类（全脂无糖炼乳、全脂加糖炼乳、调味炼乳；配方炼乳）、乳脂肪类（稀奶油、奶油、无水奶油）、干酪类（原干酪；再制干酪）、乳冰淇淋类（乳冰淇淋、乳冰）和其他乳制品类（干酪素、乳糖、乳清粉、浓缩乳清蛋白）等。

二．高效液相色谱法测定1. 原理试样经溶解、超声提取、沉淀蛋白、过滤得到测试液，经高效液相色谱测定，根据保留时间和紫外吸收光谱定性，根据峰面积进行定量。

2 试剂方法中所用试剂，除另有规定外，均为分析纯试剂，水为GB/T 6682-2008中一级用水，溶液为水溶液。

2.1磺基水杨酸。

2.2柠檬酸。

2.3 辛烷磺酸钠：高效液相色谱离子对试剂。

高效液相色谱法检测奶制品中的三聚氰胺一、实验目的1、掌握反相离子对色谱法测定奶制品中三聚氰胺的原理和方法。

2、了解复杂样品进行色谱分析时前处理的方法和必要性。

二、实验原理三聚氰胺是一种常见的化工原料，有毒，若人体大量摄入，将引起泌尿系统结石等疾病。

2008年9月，三鹿奶粉事件发生后，三聚氰胺的危害被深入广泛的认识，同时食品安全问题也更加受到重视与关注。

反相高效液相色谱（RP-HPLC ）具有分离效率高，分析速度快，灵敏度高等优点，而且仪器较简单、工作条件要求较低，在有机物的分离与测定中有极为广泛的应用。

但三聚氰胺是强极性物质，在反相色谱柱上保留能力很弱，难以达到分离的目的。

三聚氰胺具有弱碱性，在酸性溶液中能形成阳离子。

若在流动相中加入与具有两亲作用的阴离子，则可与三聚氰胺形成具有疏水作用的离子对，从而使保留能力明显增强，达到与干扰组分分离的目的，这就称作离子对色谱。

测定阳离子一般采用烷基磺酸盐作为离子对试剂，测定阴离子一般采用烷基胺类作为离子对试剂。

奶制品的组成较复杂，一般含有大量的蛋白质和脂肪类物质，若不经过预先的分离处理，不仅干扰三聚氰胺的检出，还会对色谱柱造成一定的损伤，因此对待测样进行分离，纯化等预处理是十分重要的。

加入重金属离子可使蛋白质变性、凝聚，从而沉淀分离。

脂类和高级脂肪酸可在酸性条件下通过乙酸乙酯、乙醚、氯仿等的萃取除去。

反相离子对色谱测定三聚氰胺的定量下限约为0.1mg·L -1。

对于更低浓度的试样，需要使用灵敏度更高的色谱-质谱联用技术。

但由于仪器昂贵，维护较复杂，色谱-质谱联用技术的应用受到了限制。

通过阳离子交换树脂可使溶液中的三聚氰胺得到富集，从而有效的改善检出限。

近年来发展的固相微萃取技术将净化除杂和分离富集等步骤简化合并，使色谱分析试样前处理的效率有了显著的提高。

三、试剂与仪器试剂：PbAc （AR ） 0.2 mol·L -1（乙酸酸化），乙酸乙酯（AR ），乙酸（AR ），甲醇（AR ），氨水（AR ），732型强酸性离子交换树脂（40~60日）色谱流动相：A 、乙腈（色谱纯）；B 、KH 2PO 4（GR ） 0.05 mol·L -1；C 、H 3PO 4（GR ） 0.5 mol·L -1；D 、十二烷基磺酸钠（AR ） 0.2 mol·L -1仪器：P230型高效液相色谱仪，配UV 检测器；ODS C-18 色谱柱标样：三聚氰胺（纯度大于99.5%），用水配制成1.001g L -⋅标准储备液，4℃保存。

乳中三聚氰胺的测定概述三聚氰胺是一种有机化合物，常用于工业生产中的胶粘剂和树脂制造等。

然而，由于其毒性和致癌性，三聚氰胺被禁止在食品和饲料中使用。

因此，对于乳制品中三聚氰胺的测定显得尤为重要。

本文将介绍乳中三聚氰胺的测定方法及其应用。

一、乳中三聚氰胺的来源和危害乳制品是人们日常生活中常见的食品之一，而乳中三聚氰胺是一种常见的污染物。

三聚氰胺通常来自于牲畜饲料中的添加剂，当牲畜摄入三聚氰胺过多时，其代谢产物会通过牛奶等分泌物进入乳制品中。

三聚氰胺对人体健康有严重危害，可能导致泌尿系统疾病、肾结石甚至导致肾衰竭。

二、乳中三聚氰胺的测定方法1. 红外光谱法红外光谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。

该方法基于三聚氰胺在特定红外光波长下吸收的特性，通过测量样品中红外光的吸收强度来确定三聚氰胺的含量。

红外光谱法具有快速、准确的优点，但需要专业的仪器设备和操作技术。

2. 气相色谱法气相色谱法也是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。

该方法通过将样品中的三聚氰胺蒸发并分离，然后通过气相色谱仪进行定量分析。

气相色谱法具有灵敏度高、分离效果好的优点，但需要较长的操作时间和较高的设备要求。

3. 液相色谱法液相色谱法是一种常用的乳中三聚氰胺测定方法。

该方法通过将样品中的三聚氰胺溶解并分离，然后通过液相色谱仪进行定量分析。

液相色谱法具有准确度高、操作简便的优点，但需要一定的样品前处理步骤。

三、乳中三聚氰胺的应用1. 食品安全检测乳中三聚氰胺的测定在食品安全检测中具有重要意义。

通过对乳制品中三聚氰胺的测定，可以保障消费者的健康和权益，防止不合格产品上市和流入市场。

2. 生产控制与质量保障乳制品生产过程中对三聚氰胺的测定也非常重要。

通过对原料和成品中三聚氰胺的监测，可以及时发现和控制潜在的污染源，确保产品质量和生产工艺的稳定性。

3. 法律监管与标准制定乳中三聚氰胺的测定在法律监管和标准制定中起着重要的作用。

通过对乳制品中三聚氰胺含量的限制和监测，可以制定相应的法律法规和标准，保障乳制品行业的健康发展。

原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法实验报告应化0901 4103090137 金立峰一、实验目的1.了解用液相色谱法快速检测原料中三聚氰胺的方法。

2.了解和掌握高效液相色谱的使用方法。

3.学习使用液相色谱的软件分析数据。

二、实验原理用乙腈作为原料乳中的蛋白质沉淀剂和三聚氰胺提取剂，强阳离子交换色谱柱分离，高效液相色谱-紫外检测器，加标回收率。

三、实验器材1.实验试剂除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

乙腈（CH3CN）：色谱纯磷酸（H3PO4）磷酸二氢钾（KH2PO4）三聚氰胺标准物质（C3H6N6）：纯度大于或等于99%标准溶液A：2.00×102mg/L2.实验器材一次性注射器滤膜：水相，0.45μm 针式过滤器：0.45μm具塞刻度试管：50mL 液相色谱仪分析天平：感量0.01gPH计：测量精度±0.02 溶剂过滤器四、实验步骤1.流动相的配制配制磷酸盐缓冲液：0.05mol/L.称取6.8g磷酸二氢钾（准确至0.01g），加水800ml完全溶解后，用磷酸调节PH至3.0，用水稀释至1L，用滤膜过滤后备用.②将磷酸缓冲液350mL与乙腈150mL（体积比）超声波震荡混匀.2.标准溶液的配制按下表移取不同体积的标准溶液A，置于100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。

3.试样的制备①分别称取光明纯牛奶、光明高钙奶、伊利舒化奶三种样品15g，置于50mL具塞刻度试管中并做标记为1,2,3，加入30mL乙腈，剧烈震荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。

②称取光明纯牛奶15g于三支50mL具塞刻度试管中并标为4,5,6;分别加入20mL、40mL、60mL的三聚氰胺标准溶液（1mg/L),加入30mL 乙腈，剧烈震荡6min，加水定容至满刻度，充分混匀后静置3min，用一次性注射器吸取上清液用针式过滤器过滤后，作为高效液相色谱分析用试样。

“离子色谱法快速测定牛奶中三聚氰胺”筒报青岛普仁仪器有限公司杜小磊侯倩慧青岛266024青岛大学化学与环境学院于继京崔玉倩青岛 266071摘要用国产离子色谱仪(PR-10)阳离子交换离子色谱法，快速测定牛奶中的三聚氰胺。

实测下限为0.01µg/mL，计算检测限为0.003µg/mL。

在含量1.0µg/mL时，8次分析结果重现性范围为0.8-1.9％，加标含量范围在0.1-5.0µg/mL时，对应回收率为87-105％。

分析结果满足国标要求。

关键词：离子色谱，三聚氰胺，加标英文摘要 Ion chromatograph (PR-10) with cation exchanging method was applied to analyze melamine in milk. Actual test limit in the experiment is 0.01µg/mL, Detection Minimum Limit (DML) equals 0.003µg/mL. Repeativity range is 0.8-1.9％ for concentration 1.0µg/mL in 8 time analyzation. Recovery range is 87-105％ when melamine standard adding range is 0.1-5.0µg/mL.Key word Ion chromatograph melamine standard adding三聚氰胺（Melamine），别名又称蜜胺,一种低毒性的氮杂环有机化合物。

为纯白色单斜晶体，分子式为C3N6H6。

能溶于甲醛、乙酸、热乙二醇、甘吡啶，微溶于水及醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成盐。

它被广泛用于塑料和阻燃等行业。

2010级化学教育仪器化学综合性与设计性实验—高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量——2012-06-03一、实验题目：乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法）二、摘要、关键词：[摘要]三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。

它是白色单斜晶体,为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取,离心, 结合高效液相色谱进行样品测定。

A液：0.9508 g辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。

色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 µm）,检测波长：240nm。

[关键词] 高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品三、引言1、对三聚氰胺的概述：三聚氰胺(Melamine) (化学式:C3H6N6 ) ,俗称密胺、蛋白精,国际纯粹与应用化学联合会命名为「1 ,3 ,5 - 三嗪- 2 ,4 ,6 - 三氨基」,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。

它是白色单斜晶体,几乎无味,微溶于水(311g/PL常温) ,可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等,对身体有害,不可用于食品加工或食品添加物。

三聚氰胺的结构式如下：三聚氰胺最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂(MF) 的原料。

三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。

该树脂硬度比脲醛树脂高, 不易燃,耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀,有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度,广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。

蛋白质主要由氨基酸组成。

蛋白质平均含氮量为16 %左右,而三聚氰胺的含氮量为66 %左右。

通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过检测含氮量来估算蛋白质含量,因此,添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高,从而使劣质食品通过食品检验机构的测试。

乳制品中三聚氰胺检测方案乳制品中三聚氰胺检测方案一、标准品及标准品及溶液配制溶液配制溶液配制：：1. 三聚氰胺标准储备液：准确称取100 mg （精确到0.1 mg ）标准品于100 mL 容量瓶中，用50：50甲醇：水（体积比）溶解并定容至刻度，配制成浓度为1 mg/mL 的标准储备液，于4℃避光保存。

【使用时间为三个月】 2. 流动相配制：a) 准确称取2.10 g 柠檬酸（不含结晶水）和2.16 g 辛烷磺酸钠（不含结晶水），加入约980 mL 水溶解，然后定容至1L ，【说明：如果柠檬酸或辛烷磺酸钠中含有结晶水，需要进行换算】，用0.45um 水性滤膜过滤b) 将a ）和乙腈按照90：10的体积比进行混合，作为流动相（可以根据三聚氰胺出峰时间以及和杂质的分离情况对体积比进行调节）3. 标准工作液配制：用流动相将标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.5，1，2，5，10 µg/mL 的标准工作溶液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度做图，得到标准曲线回归方程。

4．5％氨水甲醇溶液： 将氨水（分析纯，浓度25％）和甲醇以5：95的体积比混合。

二、样品前处理样品前处理步骤步骤步骤：：（SPE 净化过程） 取样品2g ，加入15mL 1％三氯乙酸和5mL 乙腈，蜗旋,超声提取10min ，1％三氯乙酸定容至25mL ，以4000转/min 速离心10min ，移取上清液5毫升进行SPE 。

将Oasis MCX 小柱 （3 cc ，60 mg ）依次用3 mL 甲醇和5 mL 水进行活化，将5mL 上清液上样，然后依次用3 mL 水和3 mL 甲醇进行淋洗，抽干10s ；最后用6 mL 5％氨水甲醇溶液进行洗脱；50℃氮气吹干，用流动相2 .b ）定容至 1 mL 。

三、液相色谱液相色谱条件条件I. HPLC 方法仪器配置：Alliance 2695 ＋ 2489 紫外检测器色谱柱： Symmetry C8, 4.6x 250mm, 5µm （订货号：W AT054270） 流动相： 2，b ） 流 速： 1.0 mL/min 柱 温： 40℃ 进样量： 20µL 检测波长：240nm样 品： 巧克力早餐奶，香草冰淇凌固相提取小柱: Waters Oasis® MCX 3cc(60mg ） P/N:186000254两类样品分别进行基质空白加标处理（添加水平2 mg/kg ，此水平下重复3次，考察方法准确度和精密度）。